方法論記事

回転運動の定量化システム (リクエスト) を用いたキイロショウジョウバエの運動レベルの測定

DOI：

10.3791/57751

⸱

2018年5月27日

 , 
1Department of Biology, University of Alabama at Birmingham

この記事について

サマリー

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回転運動の定量化システム (リクエスト) は、動物によって実行されるアクティビティの量を同時に測定しながら回転をショウジョウバエ運動を引き起こすことができます。今回、リクエストを使用して回転運動治療法を経験している動物の活動レベルを測定する方法を詳述したポイントによってプロトコル

要約

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キイロショウジョウバエは運動の生物学の研究の新しいモデル生物です。までに、2 つの主な運動システム力タワーと、されて記載されています。ただし、運動治療により誘起された動物の追加の活動の量を測定する方法を欠いてきた。回転運動を発生している動物のための動物の活動の測定を提供するこの必要性を回転運動の定量化システム (リクエスト) に塗りつぶします。このプロトコルは、回転運動中に動物の活動を評価するために、リクエストを使用する方法の詳細し、生成できるデータの種類を示しています。ここでは、運動誘発性活動性特異的ひずみと違いを測定するため、リクエストを使用する方法を示します。運動誘発性活動の年齢、食事、または人口のサイズなどさまざまな実験的パラメーターの影響を評価する、リクエストを使用もできます。さらに、それを使用して、さまざまな運動トレーニングのプロトコルの効果を比較できます。重要なは、必要な場合のグループ間の活動の同量を達成するために研究者を許可する系統間の運動治療を標準化する機会を提供します。したがって、リクエストは運動生物ショウジョウバエ モデル システムでの作業の注目すべき新しいリソースであり、運動の既存システムを補完します。

概要

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最近では、研究者は、運動生物を勉強するミバエショウジョウバエを使用し始めています。キイロショウジョウバエは、以上 100 年1,2遺伝子モデル システムをされています。しかし、ショウジョウバエの研究は遺伝学だけでなく、さまざまな神経生物学、行動生物学、生理学3など他の分野にも貢献をしました。2009 年、力のタワーでショウジョウバエの最初の運動マシン説明4であった。力タワーでは、動物の負走応答を活用します。時、妨げ、ショウジョウバエは、彼らのエンクロージャの上に移動する傾向にあります。この応答がよく確立され、登坂力やショウジョウバエの体力を推定する人気の「リング」(急速な反復負走5) アッセイの基礎であります。力タワー (Tinkerhess et al. 20126負走応答を誘導するメカニカル アーム インチいくつかによって彼らのエンクロージャ内の動物セットを繰り返し持ち上げるモーター ユニットに接続し、地面にそれらをバック ドロップを使用します。力タワーの使用を示すビデオを提供する)。力タワーで長期の治療量を増やします (実行中または飛行) に身体活動の動物は無処理動物....

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プロトコル

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リクエストがショウジョウバエのアクティビティ モニター ユニットで構成されています (ソースについては、資料の表をご覧下さい) モーター ユニット (図 1) によって制御される、回転するアームにマウントされています。利用状況モニターは、アッセイ チューブのミドルを解剖のレーザ光線の配列が中断される所定の時間スパンで頻度を指定します。詳細な図面と詳細な特性評価、私たちの前の出版物9を参照してください。当社のシステムは、LAM25H ユニットを使用している間、リクエストは同様に他のショウジョウバエのアクティビティ モニター ユニットに合わせて変更できます。

1、リクエストのセットアップのテスト

  1. ロード テストは、CO2や、処理のために、空のチューブにそれらを移動チューブをキャップその他の選択した方法で動物を麻酔によるガラス試料管に飛ぶ。
  2. 頂いたガラス試料管をアクティビティ モニター ユニットのスロットに挿入します。チューブのゴム O リング (17-18 ゲージ) を使用してセキュリティで保護されたおよび/またはチューブを確保するユニットの両側に輪ゴムを回転中に移動しないでください。
    1. 試料管を介して 1 つの o リングをスリップし、チューブの中間点近くに o ....

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結果

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リクエストと個々 の実行からの出力は、(使用例は補足のファイル 1) 既定でに"Monitor1.txt"をラベル付けする DAMSystem308 ソフトウェアによって生成されたデータ テーブルです。このような表からの抜粋は、表 1に示します。各列には、行に最後 (下) に実験 (上) の初めから各時間間隔で測定されるアクティビティが含まれている間、個々 のアッセイ チューブからのデータが含まれています。というケース、ケーブルを調整する必要があります (これらに見られるなど表 2)、データ切り抜き絵があります、最初の 3 つのデータ ポイントを監視する必要があります。

図 2は、4 つの遺伝的に異なるショウジョウバエ ライン (DGRP2 ライン 897、810、703 371

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ディスカッション

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代表の結果が示すよう、リクエストはショウジョウバエを運動の活動を正確に計測が可能です。リクエスト、柔軟なさまざまな運動の生物学や運動介入に関連する研究質問に対処するための研究者をことができます。強調表示するプロトコルの 2 つの重要な手順があります。まず、リクエスト、リクエストから、DAMSystem308 へのデータ送信が正常に機能していることを確保するためのセットアップをテストするのには不可欠です。されていない場合正しくセットアップ、データ ケーブルは回転中もつれになることができ、(とはいえ、我々 にあった、リクエストのほぼ毎日の使用で、リクエストと、DAMSystem308 間の接続が磨耗・損傷による回転接続で中断される時々コネクタを交換、2 年に一度)。交換部品を手で保持することをお勧めします。第二に、環境パラメーターの一貫性は、実験の成功に不可欠です。ショウジョウバエが音や振動に非常に敏感、したがって、実験、データ収集中に邪魔されないことが重要です。従って、理想的には、実験は、実験の実行中にアクセスできない専用インキュベーターで実行されます。これらの 2 つの重要な手順に注意が、リクエスト数から質の高いデータを収集することを確.......

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開示事項

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著者が明らかに何もありません。

謝辞

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仕事は、賞の数 P30DK056336 から、国立研究所の糖尿病と消化器系と腎臓病 NCR 栄養と肥満研究所アラバマ大学バーミンガムからパイロットをによって支えられました。

....

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
ショウジョウバエ活動モニター TrikineticsLAM25HREQSコンポーネント
電話コードデタングラーUvitaluv20170719REQSコンポーネント
バイアルクロージャー(flugs)Genesee Scientific49-102ウジョウバエ培養用品
バイアル ジェネシーサイエンティフィック32-120ショウジョウバエ培養用品
ショウジョウバエ培養ネットカロライナ生物供給173090ショウジョウバエ培養用品
コーンミールペプシコ43375ショウジョウバエメディア
糖蜜ゴールデンバレルBLA-GALショウジョウバエメディア
寒天アペックスバイオリサーチ66-103ショウジョウバエ培地
不活性ドライイーストジェネシー・サイエンティフィック62-106ショウジョウバエ培地
テゴセプト・エイペックス・バイオリサーチ20-258ショウジョウバエ培地
プロピオン酸ジェネシー・サイエンティフィック20-271ショウジョウバエ培地
ショ

参考文献

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  1. Rieder, L. E., Larschan, E. N. Wisdom from the fly. Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).
  2. Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. Drosophila tools and assays for the study of human diseases. Dis Model Mech. 9 (3), 235-244 (2016).
  3. Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M.

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