神経刺激誘導馬の左反回神経に近い自家幹細胞注入

サマリー

ここでは、神経電気刺激の助けを借りて反回神経への近さの自家筋由来幹細胞を注入するためのプロトコルを提案する.この手法は、馬再発喉頭神経障害の治療のために有用になるかもしれない。

要約

再発喉頭神経 (RLN) はよく馬に影響を与える、異常呼吸音と運動不耐性が特徴です。反回神経の脱髄病変を示しています。髄の神経幹細胞を適用することの利点は、様々 な動物モデルで実証されています。研究の目的は、神経電気刺激装置を使用して健康な馬の可能性と自己筋由来間葉系幹細胞が左反回喉頭神経の周囲神経注射の安全性をテストすることだった。

筋肉由来の茎セルは、三頭筋から半自動 14 G 生検針で筋肉組織の 20 mg をサンプリングすることによって 5 つの健康なスタンダードブレッドから取得されます。喉頭の動きが監視を介して上気ビデオ内視鏡です。左反回神経は絶縁神経ブロック針で近づかれます。神経刺激を適用すると、開始値は 2 mA、および左披裂の成功の拉致を監視します。刺激強度が徐々 に低下します。0.5 でモーター応答の損失を観察するとき mA、10⁷自家筋由来幹細胞を注入します。時間ポイントに盲目になる、2 つの審査 1 日目、7 日目、セルの注入後 28 日目、治療の前に馬の喉頭機能をスコアします。第 6 回馬 2% リドカイン 1 mL を注入して、さらに針の正しい位置を確認します。これ左披裂軟骨の一時的なまひ状態をもたらします。

本研究は、反回神経は神経電気刺激の助けを借りて、近づくことができる馬が容認神経の電気刺激はよくことを証明します。喉頭の機能の変更が認められなかった馬のいずれかの幹細胞の注入後。筋肉由来幹細胞 RLN に苦しんでの馬の周囲神経噴射の効果を記述するためにさらなる研究を実施しなければなりません。

概要

RLN は披裂軟骨麻痺の度合いによって特徴付けられる馬で上気道の一般的な病理です。喉頭の左側が最もよく影響を受けます。病気の有病率は、特定の馬の人口の 35% に達することができます。いくつかの仮説が病因とこの疾患の病因を説明しようとすると、RLN の正確な原因は不透明します。病理学は、脱髄がまたある程度検査の病変を有する反回神経の遠位索として記述されます。この索は、喉頭の内在筋と併用萎縮^1,2の神経に します。この病理学は、緩徐進行性よく、患側³の披裂外転の総損失につながる可能性があります。

影響を受けた馬は、運動中の異常呼吸音を発するし、時々 より深刻なケースで運動不耐容を示します。喉頭拉致の部分的または全体の損失が^1,2,4が観察される非鎮静の立っている馬に内視鏡検査によって確定診断をしました。現在、最も一般的な治療は、脳 cordectomy と関連付けられる時喉頭形成術 (として知られている「タッセル」)、です。これらの手術の成功率は優秀な⁵に良いと考えられるが、術後合併症が非常に多いです。最も一般的な合併症は、拉致の漸進的な損失です。バーネットら⁶は、馬の少なくとも 76% に術後最初の 6 週間以内拉致の少なくとも 1 つのグレードの損失を報告しました。義足の障害、咳、気道汚染などの他の合併症も報告されている⁵です。

実証済みの効率性に関する研究はまだ少ないが、間葉系幹細胞 (MSCs) は十年より多くのため馬医学の研究と実践の一部をされています。馬の成体の間葉系幹細胞の 2 つの最も一般的に悪用ソースは、骨髄や脂肪組織⁷です。両方のサンプリング手法は比較的侵襲性、十分な細胞数を常にもたらさない。最近、コースタースら⁷低侵襲 microbiopsy 技術によって得られる横紋筋組織由来幹細胞の培養をについて説明します。

MSCs は、自己複製、自己生成、率、および分化^7,8が可能です。脂肪、骨、筋、軟骨のすべての胚葉に分化する能力は今確立⁹です。ただし、特定の環境条件の下で、彼らは非間葉系細胞、アストロ サイト、末梢神経系や脊髄^9,10の髄の細胞などに区別できます。MSCs は、いくつか神経障害モデル^10,11で既に使用されています。退化した神経組織の領域に移行して神経細胞を再生する能力は、局所および全身管理¹¹後実証されています。また、MSCs から派生したシュワン細胞は細胞の残骸を削除し、軸索の成長と検査⁹促進神経栄養因子を分泌するマクロファージを採用できます。

本研究の目的は、健康な馬で左反回神経に近い筋自家幹細胞の神経刺激誘導注入のテクニックを説明します。通常、注射針に接続して神経刺激装置は、末梢神経電気局在化のためそのエリア¹²に局所麻酔薬を適用するために使用されます。弱い直流電流インパルスはモーター応答を誘導する神経への近さで提供されます。このモーターの応答を生成する能力は、針の導電性領域、針から神経までの距離、脈拍の持続期間、現在の適用、組織の任意のインピー ダンスなどのいくつかのパラメーターによって異なります。神経刺激針は、針の残りの部分を絶縁針の先端に非常に制限された導電性領域を持つ設計されています。このデザインは、正確に神経をローカライズするのに役立ちます。現代神経刺激はさまざまな組織インピー ダンスに適応し、コンピューターの設定定数のアンペア数を提供します。さらに、ほとんどのマシン使用パルス持続時間は 0.1 s、決定のパラメーターは現在の適用から針までの距離になるようです。針-神経の距離とモーター応答の生成に必要な流れとの関係は、クーロンの法則によって記述される: E = kQ/r;必要な刺激電荷、k はクーロンの定数、Q は最小限必要な刺激では、r は 2 つの電極間の距離。神経の電気ローカリゼーション、2 つの電極間の距離は、針を神経距離¹²と見なされます。電荷消散¹³針-神経の距離の逆二乗のルールを紹介。臨床実習はモーターが 0.5 mA 成功神経ブロックに相関の高い刺激を神経、低電流でモーターの信号の損失、偶発的な intraneuronal 注射の管理からユーザーがようにことを示しています。本研究の目的は、馬の限られた数の可能性とこの技術の安全性をテストすることです。可能性とこの技術の安全性を確認した場合は、影響を受ける馬に簡単に転送できます。さらに、馬 RLN は退行性ニューロパチーのためのモデルとして使用できます。

プロトコル

リエージュ大学の動物の倫理的な使用のための委員会は、研究プロトコルを承認しました。

1. 筋 Microbiopsy

1. 目視検査と触診、肘のポイントと肩のポイントの間の正中線約上腕三頭筋長頭でサンプル サイトを識別します。
2. 電気クリッパーと約 2 × 2 cm²のゾーンをクリップします。クリップされた領域上の 1 分の polyiodide 液体石鹸とアルコール湿布から成る手術時手洗いを適用します。クリップと消毒ゾーンの中心に 25 G 針 2% リドカイン液の 1 mL 皮下注入します。
3. 抗菌ハンドソープで手をスクラブします。滅菌手袋をつけます。生検針と、トロカールに置く滅菌表面として使い捨て滅菌ドレープを使用します。
4. 図 1 bと1 cに示すようにバネ機構を引いて、半自動の 14 G 生検針を腕します。そのメカニズムに精通して得るために生検針をリリースします。滅菌の面に武装した生検針を置きます。トロカールは、カニューレと図 1に示すようにの閉鎖から成っているに精通を取得します。

図 1: 生検針セット。生検針のセットで構成されています (、) カニューレとその閉鎖と生検針 (上から下)。他のパネルの (b) に生検針を表示、中立的な (c) 武装の位置。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

5. カニューレと、閉鎖を組み立てることによって、トロカールを準備し、ロックされた位置でそれらを保ちます。以前鈍感ゾーンを介して皮膚に垂直に、トロカールを紹介します。トロカールの先端が約 1.5 cm の位置に、トロカールを進める筋肉の奥深くに。トロカールを取り出して、その閉鎖からカニューレを切り離して考えるし、滅菌表面上、閉鎖を置きます。
6. カニューレを通じて武装生検針をご紹介します。針と筋肉に皮膚切開カニューレを紹介します。上腕三頭筋の長頭の真ん中に針の先端がある位置に針を進めます。
7. 生検針を解放し、カニューレと生検針を引き出します。カニューレから生検針を引き出します。滅菌の表面にカニューレを残します。
8. 片方の手でスプリングを引っ張ってくると他でそれを保持して生検針を開きます。
   注: 試料が生検針の先端に表示されます。
9. 2 番目の人の助けを借りて、サンプル中に含まれているサンプル チューブを開きます。19 G の注射針を使用して、生検針から小さな筋肉部分を削除します。サンプリング中に筋肉のサンプルを置きます。スクリュー キャップとチューブを閉じ、そっとそれを傾ける 2 x サンプルが中に浮いていることを確認します。
10. 生検針を腕します。滅菌の表面からカニューレと武装した生検針とカニューレを再構築します。武装の針と前述したように、皮膚切開カニューレを紹介します。筋肉組織の約 20 mg のサンプリングまでに 2-3 x サンプル手順を繰り返します。サンプリング チューブを閉じます。優しく回すチューブ 2 サンプリング媒体と筋肉部分をミックスする x。
11. 4 に 8 ° c の一定温度で研究室にサンプルを出荷します。
    注: 実験室は、サンプルを処理します。プロトコルはここで一時停止することができます。
12. プロシージャは忍し、サンプリング側に痛みは観測されていません。サンプリング サイトで観測された筋肉痛の万一の場合に、適切な鎮痛処置を管理します。

2. 細胞の治療

注: 本研究で使用されている幹細胞コースタースらによって記述されたメソッドによると準備されています。⁷. 自分の記事では、セルの特性についても説明します。

1. 熱不活化ウシ胎児血清、ペニシリン (1,000 IU/mL) の 5 mL の 20% を追加することによって特定の培養培地、DF20 の準備-ストレプトマイシン (10,000 μ G/ml)、市販の 500 mL のボトルにアムホテリシン B (250 μ g/mL) の 2.5 mLグルタミンとフェノールレッド培。
2. 24 マルチも皿の内側 16 井戸のそれぞれに DF20 培地の 150 μ L を注ぐ。残りのウェルにリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) [(200 mg/L) 塩化カリウム、カリウム リン酸単相性 (200 mg/L)、塩化ナトリウム (8,000 mg/L)、およびダイフェーズ リン酸カリウム (2,160 mg/L) 】 の 1 mL を注ぐ。
3. リンス小さな筋肉の部分 PBS で 2 倍。メスと鉗子の助けを借りて、非常に小さな断片に分割する、ウェルの皿の各内側 - 16 (メスの刃の先端のサイズ) の小片を置きます。
4. 次の条件で維持インキュベーター多よく皿を配置: 37 ° C、21% O₂、および 5% CO₂。井戸を倒立顕微鏡下で毎日監視し、セルが乾くを防ぐために必要に応じて DF20 の 50 μ L を追加します。
   注: 約 10 d 後十分な細胞を幹細胞の隔離を許可する外植体から成長があるでしょう。プロトコルはここで一時停止することができます。
5. 外植体細胞のハローが、筋肉の周り表示のとき、筋肉組織の外植体を破棄します。各ウェルにトリプシン EDTA を含むソリューションの 150 μ L を使用してセルを切断: 文化媒体を廃棄し、1 ml の PBS のセルを洗浄、破棄、PBS、37 ° C で最大 10 分のトリプシン溶液を追加トリプシンの作用を停止、細胞懸濁液を収穫し、37 ° c. で 10 分の 200 x gで細胞懸濁液を遠心し、培養培地を追加します。上澄みを廃棄し、バランスの取れた塩溶液でペレットを中断します。
6. 3 層 (15%、25%、35%) の不連続密度勾配の細胞懸濁液を転送します。細胞懸濁液および 25 ° C で 20 分間 1,250 x gで不連続密度勾配ソリューションを含むチューブを遠心分離します。遠心のブレーキを使用しないでください。遠心分離後不連続密度勾配液の異なる層の間に表示される密度の異なる細胞画分を観察します。
7. 15 と 25% の間の小数と文化を続行します。管に転送し、バランスの取れた塩溶液で洗ってください。37 ° c. で 10 分の 200 x gで細胞懸濁液を遠心分離します。上清を捨てます。DF20 の 1 mL にペレットを中断するのに進みます。DF20 の 6 mL で 25 cm²の表面で細胞培養用フラスコを自動設定します。事前の細胞培養用フラスコにセルを転送し、それらを以下の条件でインキュベーターで文化: 5% CO₂21% O₂、37 ° C。
   注: プロトコルはここで一時停止することができます。
8. 毎日倒立顕微鏡下で細胞を監視します。必要に応じて培養液を変更 (古い媒体を廃棄し、新しい培養液 6 mL を追加)。光学顕微鏡を使用して、定義済みの倍率で培養皿の細胞層を観察することによって細胞の合流を決定します。細胞で占められている皿の表面を推定します。合流点を評価できるようにすべての観察のための固定顕微鏡倍率で動作します。セルは、皿の表面の 85% を占め、細胞の通路を進みます。
9. セルが合流、ステップ 2.4 で説明されているように同じプロトコルでトリプシン EDTA を含むソリューションを使用して分離します。その後、37 ° c. で 10 分の 200 x gで細胞懸濁液を遠心分離します。上澄みを廃棄し、DF20 の 5 mL のセルの巻き上がりを続行します。DF20 の 25 mL が充填された 175 cm²の細胞培養用フラスコに入れます。以下の条件でインキュベーターでフラスコを配置: 37 ° C、21% O₂、および 5% CO₂。
   注: プロトコルはここで一時停止することができます。
10. 毎日倒立顕微鏡下で細胞を監視します。必要に応じて、メディアを変更 (古い媒体を廃棄し、新しい媒体の 30 mL を追加)。セルが合流、ステップ 2.4 で説明されているようにトリプシン-EDTA を使用して分離します。その後、37 ° c. で 10 分の 200 x gで細胞懸濁液を遠心分離します。上澄みを廃棄し、DF20 の 6 mL のセルを中断します。6 175 cm²フラスコに細胞懸濁液の場所 1 mL、DF20、25 mL が充填された、37 ° c (21% O₂と 5% CO₂) CO₂インキュベーターでそれらを文化します。
11. 毎日倒立顕微鏡下で細胞を監視します。必要に応じて、メディアを変更 (古い培地を除去し、各フラスコに新しい媒体の 30 mL を追加)。セルが合流、2.5 の手順で説明されているようにトリプシン-EDTA を使用して分離します。それらを遠心分離機で 37 ° C と各ステップで上清を捨て 10 分の 200 x gで 3 倍。
12. カウントと光学顕微鏡 Bürker の助けを借りてのセルをカウントします。特定の凍結保存中の 1000 万セル/mL の細胞懸濁液を準備します。
13. 1 x 10⁷細胞凍結保存培地 1 mL の用量を急速冷凍、液体窒素の気相での使用まで保管します。
    注: プロトコルはここで一時停止することができます。
14. 最終的な使用のドライアイスにバイアル内のセルを出荷します。

3. セルの注入

注: 幹細胞の注入を実行するには、2 人が必要。

1. 部屋の温度に徐々 に細胞懸濁液を温めます。懸濁液を 2 mL 注射器に吸引します。
2. 馬を頚静脈に 19 G の注射針のデトミジン 10 μ g/kg を注入することで落ち着いた。馬の特性のヘッドダウン位置によって見えるようになります鎮静の完全な効果をして 5 分待ちます。
3. 図 2に示すように、クリッパーで馬の左喉頭領域に 20 × 10 cm²のゾーンをクリップします。クリップされた領域に、手術時手洗い法 polyiodide 石鹸とアルコールを適用します。
4. 馬の左の鼻孔を通して柔軟な標準ビデオ内視鏡を置き、鼻咽頭に向かって進みます。披裂軟骨と喉頭蓋の両方の完全なビューを取得するまでは、内視鏡の位置を調整します。プロシージャの間にこの位置に内視鏡を保持し、演算子に対する内視鏡の画面を有効にします。
5. 神経刺激装置の否定的な電極に刺激/注射針を接続します。針の無菌状態を維持します。神経刺激装置の肯定的な電極を切り取られた皮膚の領域に立ち往生している電極パッチに接続します。
6. 注入ラインに細胞懸濁液の入った注射を接続し、システムの空気を追跡するチューブを自動設定します。システムの音量を覚えて、同じ滅菌生理食塩量の注射器を準備します。
7. この手法に慣れていない場合、は、関心領域の解剖学的構造を可視化する消毒 5 に 7 MHz リニア超音波探触子を使用します。滅菌された超音波ゲルを結合を使用して、画質を上げます。喉頭及び喉頭の背側領域で実行される容器を視覚化します。
8. 一度領域の解剖学に精通している、喉頭の背側面に向かって刺激/注射針をご紹介します。喉頭の背側面に近づくと、神経刺激装置 2 の電流で 1 Hz 刺激モードで起動 mA。
9. そっと観察内視鏡画面観ながら反回神経の位置へ針を移動します。左披裂軟骨の外転運動、ビデオ画面に表示されて、すぐに場所に針を保ちつつ、動きが消えるまで電流を低減します。
10. 針の理想的な位置を識別します。0.5 でモーター応答の損失と見なす神経から理想的な距離として mA。披裂軟骨の動きが 0.4 より低い電流で保持するとき mA、intraneuronal 注入が発生すると、セルを挿入しません。
11. 0.5 mA, モーター応答の損失 10⁷自家幹細胞を含む細胞懸濁液を注入し、準備生理食塩液を注入ラインをフラッシュで 3.6 はステップします。これは、注射筒に残った細胞の懸濁液の残りの部分を挿入します。
12. 細胞の投与、針と内視鏡を取る。
13. 馬の鎮静からの回復をしましょう。生検のためにそれ以上の治療は不要です。

結果

リエージュ大学の動物の倫理的な使用のための委員会は、研究プロトコルを承認しました。モン ・ ル Soie 馬研究センターで研究馬の群れから六つの馬は、この研究で含まれていた。最初の馬の反回神経は電気刺激によってローカライズされました。図 2は、喉頭神経刺激装置における馬の左背外側面に挿入刺激針で使用される設定を示します。0.5 で披裂軟骨の動きの損失を観察するとき mA、2% リドカイン 1 mL を注入します。これはより高い電流で運動の不在と左披裂の一時的なまひ状態で起因しました。コントロール内視鏡、24 h 後、披裂軟骨の機能の完全な回復を明らかにしました。完全なプロトコルは、5 頭の馬で正常に繰り返されました。筋 microbiopsy に否定的な反応を示した馬のどれも。すべての馬で十分な細胞数は集合時間に成長しました。ロビンソンらによるとすべての 5 つの馬とか II.1 の喉頭機能スコア上気内視鏡検査を行った¹⁴が決定しました。すべての馬は、非常によく反回神経の神経刺激を容認しました。中または刺激または幹細胞の注入後副作用が認められなかった。

すべての内視鏡検査は、記録され、2 つの盲目の臨床医によって得点します。Wilcoxon ランク分析¹⁵テストとして、喉頭機能のプレ噴射スコアと幹細胞の注入後 1、7、および 28 日に得られたスコアの違いはありませんでした。表 1は、幹細胞と披裂軟骨の動きを誘発電流の注入針の挿入からの時間と同様に、異なる時点で全ての馬の喉頭のスコアをまとめたものと細胞注入場所。

本研究で使用されている電池によると作製したプロトコルは以前⁷を公開します。すべての画分から細胞過形成分化することができた、CD90 と CD44 表現、CD45 と MHC II を表現しなかった、クローン能力を持っていた。15-25% の端数の細胞は、彼らは CD90 と最大増殖能力の最大の式を示したために、さらに処理を選択されています。

本研究の目的は破損した末梢神経を再生成する手順の実行可能性をテストするだけ、smal の反回喉頭神経幹細胞の注入の安全性を評価するために幹細胞アプリケーションの効率性をテストすることでした。l 健康馬の数です。5 で内視鏡の機能上の変更の不在馬注入後 28 日までと、4 つ 5 つの臨床的兆候のない馬の注射、可能性とプロシージャの安全性を確認した後、1 年間。1 頭の馬は、研究に関係のない理由のフォロー アップの期間に安楽死しなければならなかったと。馬の小さい数で安全であることを証明する技術が、本研究に含まれている馬の数は稀なでき事の不在を示すためには低すぎます。

	注射の前に	時間 (分) の注入	インジェクション (mA) の電流	1 日目にスコア ポスト噴射	7 日目にスコア ポスト噴射	28 日目にスコア ポスト噴射
馬 1 (スタンダードブレッド、マーレ、16 歳)	II.1	12	0.5	私	II.1	II.1
馬 2 (スタンダードブレッド、マーレ、22 歳)	私	3	0.7	私	私	私
馬 3 (スタンダードブレッド、マーレ、11 歳)	II.1	4	0.5	II.2	II.1	II.1
馬 4 (スタンダードブレッド、マーレ、12 歳)	私	7	0.5	私	II.1	私
馬 5 (スタンダードブレッド、マーレ、10 歳)	私	3	0.7	II.1	私

表 1: 炎の特徴と喉頭機能馬のスコア。この表は、1、7、および注入後 28 日自家筋由来間葉系幹細胞の注入と前に、と 5 つの健康馬の喉頭のスコアの前に任意の披裂軟骨の動きをさせられる最低の電流注入時左喉頭反回神経への近さ。本研究に関係のない理由のため注入後日 28 馬 #5 がコントロール可能でした。スコアは、ロビンソンらによって記述されたスコアを参照してください。¹⁴します。 ここでは、スコア両方の披裂軟骨の動きが同調し、左右対称、両方の披裂軟骨の完全な外転を取得・保有できることを意味します。スコア II.1 は、披裂軟骨の動きが非同期または特定の時間に非対称があることを意味ただし、両方の披裂軟骨の完全な外転を取得・保有できます。

図 2: 幹細胞の注入の間に設定します。神経刺激針を喉頭の左側に導入し、左反回神経の方に指示します。神経刺激装置は、0.8 に設定されて mA。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。

ディスカッション

このプロトコルでは、神経刺激装置導かれるアプローチを使用して馬の反回神経を筋肉由来の自家幹細胞の成功のアプリケーションについて説明します。末梢神経への近さのこれらのセルの注入は元、筋肉 microbiopsy の標本と同様、分離、カルチャ、および幹細胞の特性の収穫を前に、詳細に記載されています。神経電気刺激で神経の電気ローカリゼーション本研究とのすぐ近くに反回神経幹細胞を注入するために使用されました。運動反応は鼻咽頭を介してビデオ内視鏡検査によって監視されました。針の配置プロセス中に他の神経が刺激された場合、対応する動きだった内視鏡画面上に表示。反回神経の正常な刺激は披裂軟骨の典型的な誘拐によって特徴付けられました。1 頭の馬の披裂筋の一過性麻痺を誘発する局所麻酔薬を注入しました。本研究では特に神経に近接で細胞のインプラントの成功をテストされていませんが神経と低電流で注入電気ローカリゼーション幹細胞が、神経の近くに適用されたことを証明しました。局所麻酔薬の注入によって誘起される成功したモーター ブロックによってさらに神経に、注入液の近接を示した。

残りの 5 頭の馬の正常の幹細胞の注入は 3 から 12 分へ変わるまでの最初の刺激から時間馬が若干鎮静電気刺激の遵守を増加中。いつでも拒絶反応を示した馬のどれも刺激の持続期間を示す延長ができ良い針の位置を取得する必要に応じて。急な学習曲線は、かどうかオペレーターが使っているこのテクニック定期的より多くの馬のさまざまな解剖学を観察する予定です。

馬はよく RLN 異常呼吸音につながる左披裂軟骨の麻痺の度合いによって特徴付けられる苦しみ、運動不耐性。影響を受ける神経の組織学では、末梢神経障害¹⁶の典型的な病変を明らかにします。末梢神経障害はさまざまな種類の障害の感覚、動きや臓器の機能につながる末梢神経病変を記述する用語です。原因は非常に変数であり、糖尿病や栄養不足、特定の薬による治療、外傷、虚血、感染がありますか彼らは特発性することができます。原因にかかわらず、末梢神経障害は、ワーラー変性、遠位索、節性脱髄などの一般的な病理組織学的兆候を共有します。損傷、末梢神経の幹細胞の管理; 彼らの再生のために有益なことが示されています。ただし、基になるメカニズムはよく理解されていません。伝統的に、間葉系幹細胞、脂肪、筋肉、軟骨、骨組織の前駆細胞に分化のみが、特定の条件下で彼らは心筋¹⁷、アストロ サイト^{18 に区別するために示されていると考えてください。}、および髄細胞¹⁹末梢および中枢神経系¹⁹。体外培養中神経ペプチドへの露出は間葉系幹細胞の神経細胞マーカー^21,22を発現する細胞への分化を支持します。いくつかの生体内での研究は、神経再生および坐骨神経損傷^10,23のモデルラットの機能回復に間葉系幹細胞の効果を実証しています。組織固有のセル²⁴に幹細胞の分化に寄与する良好な環境があると考えられます。今後の研究もこの RLN の影響を受けた馬の事前分化細胞の管理手法を調べる必要があります。

我々 の知る限り、これはそれを特定の治療法を注入するために末梢神経をローカライズする神経刺激装置の使用を説明する最初のレポート。神経因性疼痛などの様々 な種の他の末梢神経疾患は神経^25,26への近さで幹細胞の投与によって扱うことができます。今後の研究は臨床患者のこの手法の効果をテストし、移行のリスクと注入された細胞の分化の可能性を調査します。

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
デトミジン(ドミジン)	薬局を通じて販売		デクラ
リドカイン(キシロカイン)	薬局を通じて販売	MoviantoTOF
ウォッチS(神経刺激装置)	アルセビア	79950161
TSKスターカット(生検針)	STSK実験室	SAG - 14090C
電気刺激針	Pajunk	001185-79
DMEM - F12 (培養液)	ロンザ	LO BE12-719F
熱不活性化 FBS	ライフテクノロジー	ズ 10500
ペニシリン-ストレプトマイシン	ロンザ	DE17-602E
アムホテリシン B (菌類ゾーン)	ロンザ	17-836E
リン酸緩衝生理食塩水	ロンザ	LO BE17-512F
24-マルチウェルディッシュ	コーニング	3524
トリプシン	ライフ テクノロジー	ズ 12604
HBSS	ロンザ	LO BE10-508F
Percoll PLUS	GE ヘルスケア	17544502
NaCl	シグマ	S8776
T-25 cm² フラスコ	Nunclon	136196
T-175 cm²フラスコ	Nunclon	178883
Cryostore CS5	Biolife ソリューション	205373

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