信頼性が高く、再現性のある方法で、pembrolizumab の治療のための肺癌症例の適格性を評価するために世界中の研究所の能力を展開し、我々 は広く使用可能な 22 3 抗体濃縮液を使用してアッセイを開発しました。生検と細胞診標本の免疫組織化学的オスミウム。
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この記事について
サマリー
要約
Pembrolizumab 単独療法は、PD-L1-を表現する高度な非小細胞肺癌 (NSCLC) 患者の最初とセカンド ライン治療に承認されています。PD L1 式 PD L1 免疫組織染色 (IHC) 22 3 コンパニオン診断アッセイのテスト、腫瘍の割合を与えるスコア (TP)、腫瘍組織で検証済み。最適化研究室開発 (LDT) を使用するテスト 22 3 抗体 (Ab) 集中広く利用可能な IHC オスミウムの生検と細胞診標本を開発しました。PD L1 TPS 120 ペア全体腫瘍切片と生検を行ったし、70 を組み合わせて、生検や細胞診のサンプル (気管支洗浄、 n = 40; 胸水, n = 30)。22 3 は濃縮ベース LDT を示した細胞診と生検 (~ 100%) との間の一致率が高い (~ 95%) 標本両方 TPS の PD L1 IHC 22 3 コンパニオン アッセイを用いて PD L1 IHC 式と比較した場合はポイント (≥ 1%: 50%) をカットします。今回紹介した最適化された LDT 22 3 Ab 集中を使用して両方の腫瘍、細胞診、PD L1 式を決定する治療の非小細胞肺癌患者の適格性を評価するために世界中の研究所の能力を拡大します。信頼性が高く、再現性のある方法で単独で pembrolizumab。
概要
最近の臨床試験は、ヒト化モノクローナル IgG4 カッパ アイソタイプの抗体 (PD 1) プログラムされた細胞死 1 間の相互作用をブロックする pembrolizumab とその有機配位子、PD L1 と L2-PD 患者の治療の有効性を実証しています。高度な非小細胞肺癌1,2,3,4。
50% や上皮成長因子受容体 (EGFR) や未分化リンパ腫キナーゼ (アルク) ゲノム腫瘍異常3 の PD L1 式 TPS 両方未治療患者の PD L1 表現する非小細胞肺癌の治療のための pembrolizumab の承認現在、以前の PD L1 TPS ≥ 11の患者を治療。
IHC によって検出された PD L1 蛋白質の表現は、アンチ-PD-1/PD-L1 治療予測バイオ マーカーのアッセイとして広く使用されています。Pembrolizumab 臨床試験で、ホルマリン固定パラフィン包埋 (FFPE) 組織サンプルで得られた PD L1 TPS は PD L1 IHC 22 ....
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プロトコル
すべての手順は、倫理委員会によって承認されている (人間研究倫理委員会、センター病院ユニヴェルシテール ・ デ ・ ニース/Tumorothèque BB-0033-00025)。
メモ: このプロトコルが腫瘍生検と細胞診サンプルの調整 (オスミウムここ、材料表を見ると) 市販の自動 IHC テナーの 22 3 抗体濃縮物の使用のため特に。
1. 腫瘍組織試料作製法
- 10% 中性緩衝ホルマリン (NBF) カセットでの腫瘍組織を修正します。
注: 近位肺腫瘍から腫瘍は通常の呼吸器科、または肺専門家によって適度な鎮静下で行った気管支鏡検査によって得られます。末梢病変、びまん性肺疾患、気管支鏡や針生検が示されます。これらの手順は、手術室や集中治療室で通常行われます。 - パラフィンにカセットを埋め込みます。
注: 固定灌流または浸漬直後、解剖によって達成することができますが、通常 8-10 h を必要とします。定着性のボリュームは、検体量より高い 15-20 x をする必要があります。Overfixation を抗原のマスキングを引き起こすので、10 時間以上のための生検組織を修正する勧めしますないです。固定速度は室温で約 1 mm/h です。 - ティッシュ プロセッサにワックスで固定ティッシュ サンプルに潜入 (
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結果
このグループの最近の出版物10、11、詳細に記載されているこのトピックの手順を使用して、最適化された LDT が臨床的に手術を受けた患者から 120 のアーカイブ FFPE 非小細胞肺癌の生検サンプルと検証されました。切除やパスツール大学病院で生検 2007 年 3 月、2016 年 3 月の間、ニース。また、細胞診サンプルの PD L1 の式の評価のため、TPS は、70 対組織生検、気管支洗浄から作製したセルのブロックで評価した (n = 40) または胸水 (n = 30) (、パスツールで収集大学病院、ニース、2014 年 7 月から 11 月の 2016 年までの間)。すべてのスライドは新たに切って、24 時間以内に染色します。
生検標本 PD L1 IHC 22 3 コンパニオン アッセイ.......
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ディスカッション
対応する臨床的に検証された商用試験10,11と比較して 22 3 PD L1 抗体濃縮を使用して最適化された LDT を検証しました。22 3 には、生検 (~ 100%) と (~ 95%) 細胞診 ≥ 1 %tps で: 50% カット ポイント TPS PD L1 IHC 22 3 アッセイを用いて PD L1 IHC 式に比べて高い一致率を示した抗体を用いた LDT が集中しています。最近肺がんの研究のための国際協会によって推奨どおり、PD L1 正例領域は約 10 PD L1 負サンプル、10 PD L1 の肯定的なサンプル、および 20 のサンプルの線形ダイナミック レンジをカバーのための同じをする必要があります、PD L1 IHC テスト、8 を臨床的に検証します。120 生検と細胞診サンプルを 70 に有効性の検証を行った。全体的にみて、コンコー ダンスが高い陽性、標本の腫瘍組織型のカットオフの TPS とは無関係。成果をここで発表は組織や細胞診標本
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開示事項
著者が明らかに何もありません。
謝辞
この研究は、米国ニュージャージー州ケニルワース ・株式会社メルク社によって主催されました。資金提供者は研究デザイン、データの収集と分析、意思決定を発行し、または原稿の準備で役割を果たしていません。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | 細胞診標本用防腐剤溶液 |
| Novaprep®HQ+ | B Novacyt | NA | 粘液溶解性溶液 |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 組織埋め込みコンソールシステム | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| 顕微鏡ガラススライド SuperFrost Plus | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 4951PLUS4 | |
| DL-ジチオスレイトール粉末 | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| ハイドルフ マルチ Reax ボルテックス シェーカー | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 13-889-410 | |
| シャンドン サイトブロック | サーモフィッシャーサイエンティフィック | 7401150 | |
| 22C3 抗PD-L1濃縮抗体 | アジレントダコ | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | アジレントダコ | SK006 | |
| オートステイナーリンク 48 | アジレントダコ | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView アンプ | Ventana | #760-099 | |
| OptiViewAmplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| ティッシュテックフィルムカバースリッパ | さくら | 4742 |
参考文献
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al.
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再版と許可
