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方法論記事

1, 2-ジチオランの合成とキャラクタリゼーション自己組織化ペプチド

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DOI:

10.3791/58135

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2018年8月20日

 ,  , 
1Department of Chemistry and Biochemistry, Fairfield University

この記事について

サマリー

1, 2-ジチオランの合成のためのプロトコルは、ペプチドやペプチドの自己集合結果超分子構造の評価に変更されました。

要約

本報告では N 末端の 1, 2-ジチオランの合成に焦点を当てて自己組織化ペプチドとその結果の評価を変更された自己組織化超分子構造。合成経路は、ジチオラン前駆体分子 3-(acetylthio)-2 の樹脂の結合の固相ペプチド合成の活用-(acetylthiomethyl) プロパン酸、およびマイクロ波を用いた thioacetate ペプチドの deprotection1, 2-ジチオランに屈する前に、ガレージから最終的な胸の谷間 N 末端ペプチドを変更しました。アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した、1, 2-ジチオラン ペプチドの高速液体クロマトグラフィー (HPLC) 精製後、ペプチドはクロス β アミロイド線維に自己組み立てるに表示されます。フーリエ変換赤外分光法 (FT-IR)、円二色性分光法 (CD) と透過型電子顕微鏡 (TEM) によるアミロイド繊維を特徴付けるためのプロトコルが表示されます。組立後変更戦略を開発し、動的共有結合化学を探索するモデル系として、よ特徴付けられた自己組織化ペプチドを 1, 2-ジチオラン構造 N 末端修飾の方法を検討今することができます。超分子のペプチド ナノファイバーの表面。

概要

固相ペプチド合成に関与する堅牢なペプチド結合の化学を形成し、シーケンスの長さと構成を制御する機能、超分子構造に重く研究フィールドをまとめる自己ペプチド。制御し、側鎖の立体を含むペプチドの自己組織化構造と静電相互作用、水素結合、疎水性効果1、安定の要因はデザイン ルールのセットとして機能します。これらの基本的な設計ルールに研究が進み、ペプチドの論理の次の手順では自己ペプチド ベースの構造と機能の多様性を拡大して含まれます。自己組織化ペプチドがペプチド シーケンスまたはアセンブリ条件2,3,4のための戦略の開発をチューニングすることによって多くの医用に使用されている汎用性の高い生体材料ペプチド ナノファイバー5,6,7,8,9組立後変更のまま比較的未踏の領域です。

動的ジスルフィド交換とチオール化学超分子構造体の表面では、機能的な新しい生体材料をもたらす可能性がある 1 つの領域です。1, 2-ジチオラン鎖 (一般的リポ酸 (la) やアスパラガス酸 (aa) の派生物) の設立がリポソーム システム10、11ブロック共重合体12,13と報告されています。表面14,15でアンカーを整理します。ここで、合成と 1, 2-ジチオラン機能グループ16、N 末端修飾アルツハイマー病に関連付けられている a β ペプチドの核のコアから派生した自己組織化ペプチドの特性を報告します。 17。結果として得られる分子繊維は今アミロイド繊維18の超分子表面にチオール、ジスルフィド交換反応性を研究する実験的プラットフォームとして機能します。

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プロトコル

1. 1, 2-ジチオランの合成・精製ペプチドを変更

  1. ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 の合成-(acetylthiomethyl) プロパン酸19。
    1. 3 の 1 グラムを追加-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 (1 当量) 最小限の 55 ° C で攪拌しながら 25 mL 丸底反応フラスコに 1 M 水酸化ナトリウム (約 4 mL) に溶解隔壁を有する反応フラスコを密封し、窒素雰囲気下で配置します。
    2. 1.49 カリウム thioacetate g を含むソリューションを準備 (3.2 当量) 4 ml の脱イオン水と 2 M 硫酸 3 mL (H2SO4) 酸場チオを作成します。
    3. プラスチック製の使い捨て 10 mL 注射器にチオ酢酸溶液を引き、注射器に針を配置します。セプテムを針で突き刺すことにより、反応フラスコに滴下し混合物を追加します。55 ° C で一晩反応を続ける
    4. メタノール及びジクロロ メタン (1:9) の混合物を用いたシリカゲル 60 F254板の薄層クロマトグラフィー (TLC) による反応を監視します。ブロモ クレゾール グリーン染色で反応の進行を視覚化します。製品は Rf = 0.57。
    5. 反応が完了したら部屋の温度に冷却後、だから 2 M H2pH 1 に混合物を酸性化4。黄色の油をソリューションから分離します。
    6. 冷たいクロロホルム (40 mL x 3) 製品を抽出します。有機層を結合し、硫酸マグネシウムで乾燥します。減圧下でクロロホルムを削除します。
    7. 図 1 bとCに示すように、核磁気共鳴 (NMR) 分光法による分離製品 ( 1) の id を確認します。次の結果を期待する: 1H NMR、CDCl3, 300 MHz: d = (s、6 H) 2.4 2.9 (m, 1 H)、3.2 (m, 4 H) 10.1 (b、1 H)13C NMR、CDCl3、75 MHz: d = 195.1 (CH3COS-)、177.6 (-COOH)、45.1 (CH2S-)、30.5 (CH)、29.2 (-SCOCH3)。
      注: 製品は黄色の油、83% の全体的な利回り。さらに精製することがなく製品を使用します。
  2. SPP とジチオラン前駆体の樹脂に結合
    注: 自動化されたペプチッド シンセサイザー、推奨メーカーのプロトコルを次に下記固相ペプチド合成を行った。設定と試薬は、特殊なアミノ酸を使用する場合またはその他の商業器械のため適応かもしれません。
    1. 0.156 g リンク アミド 4-methylbenzhydrylamine (MBHA) 樹脂 (0.1 モル) の重量を量り、反応容器の場所します。合成の開始前に少なくとも 15 分のジメチルホルムアミド (DMF) に樹脂をうねり。
    2. 各 fluorenylmethyloxycarbonyl (fmoc 保護) の 4 の同等物を重量を量る保護アミノ酸 (0.4 モル) シーケンスと 0.152 g N、N、N'、N'- テトラメチル-O-(1H- benotriazol-1-イル) ウラン ヘキサフルオロリン酸 (0.4 モル、HBTU) のシーケンスの各アミノ酸。各カートリッジには、fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU の両方が含まれています。
    3. すべて事前合成シンセサイザーのチェックを実行した後 (補充試薬、試薬の行をフラッシュされ、すべての試薬瓶を加圧)、C のカルーセルにアミノ酸カートリッジを配置 'n' 末端方向。N 末端 fmoc 保護脱保護の最後の手順の最終的なアミノ酸位置の後、空のカートリッジを配置します。
    4. 標準の推奨設定を使用するペプチドを合成します。
      1. DMF (5 分 × 2) で 20% ピペリジンの樹脂 5 mL を fmoc 保護グループを deprotect します。
      2. カップリング ステップの前に DMF (6 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。
      3. 単一ステップの fmoc 保護保護アミノ酸と HBTU DMF で 0.4 M N-メチルモルホリン 4 mL を追加します。30 アミノ酸 fmoc 保護で保護されたソリューションをアクティブ ソリューションを反応容器に転送する前に s。
        注: 自動ペプチド合成装置ミックス樹脂とソリューション N2ガスをバブリングによってあらゆる 30 のカップリング反応しながら 20 分間は場所を取ります。手動ペプチッド統合、低速で軌道シェーカーでカップリング段階の間反応容器を配置します。
      4. ソリューションをドレインし、DMF (3 x 5 mL) と樹脂を洗浄します。
      5. 1.2.4.4 を通じて 1.2.4.1 手順各 fmoc 保護保護アミノ酸の c 'n'-末端方向興味のペプチドを合成します。
    5. 最後の N ターミナル脱保護手順後ガラスフリット シリンジに樹脂を転送します。DMF (3 x 5 mL)、ジクロロ メタン (DCM、3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。
      メモ: 樹脂は DCM 真空デシケータで洗浄後保存可能性があります。樹脂は、結合前に保存されていた、DMF でカップリング反応前に、の樹脂を膨張するを確認します。
    6. HBTU 4 相当 10 及び n, N-diisopropylethylamine (DIPEA) 1、dmf、5 mL の 4 の同等物を追加することによって樹脂のペプチドの N 末端にジチオラン前駆体 (1) のカップルします。ガラスフリットの注射器を含む樹脂を追加する前に 10 分間結合混合物を前活動化させます。
    7. 2 h のカップリング反応を振る。2 時間後に DMF (3 x 5 mL) 樹脂を洗浄し、一晩振動カップリング反応を繰り返します。
    8. 2 番目の結合後 DMF (3 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。
      注: 樹脂は真空下でこの時点で胸の谷間まで格納できます。
  3. Thioacetate および樹脂からペプチド胸の谷間
    1. N 末端ジチオラン前駆体から thioacetate グループを deprotect、乾燥した樹脂を 10 mL マイクロ波反応管に転送し、DMF の 2 mL を追加します。樹脂を膨潤する容器に小さな電磁攪拌棒を追加して、15 分間電磁攪拌の低速で再停止を許可します。
    2. 濃アンモニア水 2 mL を加えてシリコーン隔壁を有する反応容器のキャップ 45 分攪拌の 75 ° C の電子レンジ設定を使用してマイクロ波リアクター反応容器に配置。
    3. マイクロ波反応の完了後は、ガラスフリットきれいなシリンジに樹脂を転送します。DMF (2 x 5 mL)、メタノール (メタノール、2 x 5 mL) で洗浄します。
    4. 量 5 mL のメタノール (1:4)、濃水酸化アンモニウムのソリューションを追加します。ジチオラン環ジスルフィド結合の分子内酸化を増加するために一晩を振ることを残します。
    5. メタノール (2 x 5 mL)、DCM (3 x 5 mL) に樹脂を洗浄します。
      注意: 乾燥した樹脂が格納する真空デシケータでこの時点で。
    6. 胸の谷間のカクテルを優しく 1.5 時間振とうしながら注射器を含む樹脂に追加します。95% トリフルオロ酢酸 (TFA)、2.5 %triisopropylsilane (ヒント)、2.5% 水 5 mL の容量であり、使用されるカクテルの谷間。
      注意: にのみ化学発煙のフードの下で動作します。TFA は、揮発性および腐食性です。
      注記: ペプチド配列とアミノ酸側鎖の保護基の大半は、上記の胸の谷間カクテル ソリューションは十分です。ただし、代替胸の谷間のカクテルは、特定のアミノ酸の側鎖 (システイン、メチオニン、Trp、Arg を含む特定のペプチド) のグループまたは他の樹脂化学20の保護のため必要かもしれない。
    7. ガラスフリットの注射器から滴下することで 50 mL の円錐管に冷たいジエチル エーテル 25 mL に原油のペプチドを沈殿させます。ペプチドは、白色固体として析出します。ペレットで 1300 x g で 10 分間の遠心分離によってペプチドは慎重に廃棄物収集のための別の容器にジエチル エーテルをデカントします。
    8. 円錐管にジエチル エーテルの別の 25 mL を追加し、再ボルテックスで沈殿を中断します。10 分間 1300 × g で遠心分離を繰り返し、ジエチル エーテルを再度デカントします。真空下でペレットを乾燥させます。
  4. 1, 2-ジチオランの精製は、ペプチドを変更
    注: は、逆相高速液体クロマトグラフィーによる原油のペプチドを浄化します。収集しペプチド ピーク、MALDI-TOF 質量分析法による質量を確認します。
    1. 0.1% アセトニ トリルの最小限の量で粗ペプチド ペレットを溶解 TFA。ペプチドの疎水性と集約傾向のため優しく溶解度を支援する 40 の ° C のサンプルを加熱します。
      注: は、潜在的なジスルフィド交換反応21,22,23を防ぐために高い温度およびペプチドの超音波処理を避けてください。
    2. HPLC 精製の粗ペプチドの 1 mL を準備をするには、400 μ L を追加集中ペプチド株式のアセトニ トリルで 600 μ L H2O 0.1 %tfa とフィルターに 22 μ m シリンジ フィルターを通して HPLC バイアルに。追加の 5% イソプロパノールは、ペプチドの凝集を防ぐために追加できます。
    3. 浄化の 20 分セット 15-55% アセトニ トリルの線形グラデーションを 3 mL/min の流速で C-18 セミ分取カラムを用いたペプチド 222 に UV 検出器 nm (アミド バックボーン) と 330 nm (ジスルフィド結合)。収集し、(図 2 a) の関心のピークを組み合わせます。
    4. リフレクトロン モード (図 2 b) で MALDI-TOF 質量分析計でペプチド製品質量を確認します。0.5 μ L 2, 5-ジヒドロキシ安息香酸 (DHB) 行列の解析、ミックス MALDI プレートに収集されたピークの 0.5 μ L (10 mg/mL DHB アセトニ トリル 50%、0.1 %tfa)。
      注: 一般的な MALDI-TOF における付加体の質量分析法は、ナトリウムとカリウム塩の付加物 ([M+na]+ [M + k]+) のピーク。推奨は、分析の前にサンプルの脱塩塩付加ピーク [M + H]+主峰の信号を抑制する場合。さらに、[M + O]+の酸化ピークも 1, 2-ジチオラン変更ペプチドの検出します。DHB 行列を用いた MALDI イオンからのレーザー誘起酸化に関する報告書では、MALDI 誘起酸化アーティファクト24を制限するため、サンプル濃度、溶媒、レーザー強度などの要因を変更できることを示唆しています。
    5. MALDI-TOF 正しい質量の確認の後に、フラッシュの凍結後ペプチドを凍結乾燥します。アセンブリまで真空下で凍結乾燥させたペプチド粉末を保ちます。

2 分子の特性は自己組織化構造します。

  1. アミロイド線維の形成
    1. 自己集合ソリューションを準備するには、分析用天秤を用いたペプチド粉末の 1 mg を重量を量る。20% アセトニ トリルと 10 mM (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 酸 (HEPES) 1 mg/mL ペプチド アセンブリ混合物の最終的な集中に、1.5 mL 遠心チューブの混合物 (pH 7.5) に溶解します。渦アセンブリ ソリューションと室温でアセンブルする残す。
  2. アミロイド線維の分光学的キャラクタリゼーション
    1. 数日おきフーリエ変換の赤外線 (FTIR) 分光法によるペプチド アセンブリ プロセスに従います。1670 cm-1を中心とした広範なピークは、サンプル17の組み立てのペプチドから生じる IR 署名です。ペプチド アセンブリ サンプルは通常消えて、成熟に達する広い組み立てピークの 1 〜 2 週間を取る。
      1. ATR のダイヤモンド結晶の薄膜としてアセンブリ ソリューションの 8-10 μ L の因数を乾燥します。ドライ フィルム フォームとして 1630 cm-1に 1640 年から大きく、広い水のピークの消失を監視します。
      2. 1500-1800 cm-1 2 cm-1解像度 50 のスキャンの平均から IR スペクトルを取得します。取得し、各サンプル スキャン前にバック グラウンド ・ スキャンを減算します。Β シート アセンブリの赤外線署名は、1625 と 1635 cm-1 (図 3 a)25,26の間鋭いピークです。
    2. 円二色性 (CD) による β シート豊富な超分子構造にペプチド組み立てを特徴付けます。ペルチェ温度コントロール システムで CD 性分光を使用してスペクトルを記録します。
      1. 0.1 mm のパス長さ microcuvette でアセンブリ ソリューションの 30 μ L をピペットします。
        注: 電池ホルダーはクランプし、楽器の短いパスの長さセルを配置する必要です。
      2. 各スペクトル CD 楽器を次のパラメーターに設定: 300 の波長をスキャン nm、180 nm、100/分のスキャン率 1 海里、25 ° C、3 つのスキャンの平均帯域幅。
      3. バッファー (20% アセトニ トリル/10 mM HEPES、pH 7.5) のスペクトルを収集し、コントロールとして各サンプル スキャンから減算します。Β シートの CD 署名は、楕円率、最小中心約 220 nm (図 3 b)27です。
  3. アミロイド繊維の顕微鏡観察
    1. Β シート豊富な超分子構造に成熟するペプチド試料の 2 〜 3 週間かかります。
      注: アセンブリは、同様のアセンブリ プロセスの初期の段階で透過型電子顕微鏡 (TEM) を使用してイメージすることができます。
      1. カーボンの TEM グリッドの表面上にペプチド アセンブリ ソリューションの 10 μ L をピペットします。
        注: グリッド表面にピペット チップに触れないように注意してください。高精度、自動閉鎖準備中に TEM グリッドを保持するためにピンセットを使用します。
      2. 1-2 分グリッド表面に吸着するアセンブリを許可するを待ちます。余分なサンプルを削除するには、グリッドの端にフィルター ペーパーに触れます。
      3. 市販のウラニル 4% 酢酸溶液を 100 μ L の脱イオン水を追加することによって 2% ウラニル アセテート染色を準備します。グリッド サーフェス上に 2% ウラニル アセテート染色の 10 μ L をピペットし、2-3 分間インキュベートします。、孵化後、グリッドの端にろ紙を触れることにより、余分な汚れを削除します。
      4. 一晩真空デシケータに TEM グリッドを配置します。イメージングまで真空下で保存します。
      5. TEM (図 3) で作製した試料をイメージします。顕微鏡検査のための一般的なパラメーターは次のとおりです: に至る 9,300 X 23、倍率で画像 000 X 120 の加速電圧を持つタングステン フィラメント kV。
        注: 取得した TEM 画像28の超分子構造体の平均繊維の幅を測定する ImageJ を使用できます。
        注意: 使用する前にすべての関連する安全性データ シート (SDS) を参照してください。いくつかの化学物質は、合成、精製で使用されると説明 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの解析、腐食性や毒性と化学の発煙のフードの下でのみ使用する必要があります。常に適切な個人用保護具 (安全眼鏡、白衣、フルの長さのズボン、閉じてつま先の靴を含む) を使用して、研究室で作業するとき。

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結果

ジチオラン前駆体分子の初期段階合成、脇から 1, 2-ジチオラン変更ペプチド合成の残りの部分は、固体支持体 (図 1 a) で発生します。3 の変換-ブロモ - 2-(ブロモメチル) プロピオン酸 3-(acetylthio)-2- 1H (acetylthiomethyl) プロパン酸、ジチオラン前駆体を確認し、 13C の NMR (図 1 bとC) それの前に自由に結合まだガレージにペプチドの N 末端アミン。マイクロ波リアクターを用いた水酸化アンモニウムとチオールに thioacetate の脱保護を実行し、1, 2-ジチオラン変更ペプチドは樹脂から切断前に 1, 2-ジチオランはメタノールの酸化一晩。逆相高速液体クロマトグラフィー (図 2 a) による原油のペプチドを精製し、MALDI-TOF 質量分析法 ...

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ディスカッション

この記事では、両方の合成の詳細は、N ターミナル 1, 2-ジチオラン修正の自己組織化ペプチドの精製と結果の超分子構造の性質をについて説明します。ここで報告される 1, 2-ジチオラン ペプチドの合成ジチオラン前駆体、3-(acetylthio)-2 を生成するワンステップ合成を含む利点があります-(acetylthiomethyl) プロパン酸と樹脂の電子レンジの脱保護反応、有毒なヒドラジンの脱保護する安全な代替案は既報29水酸化アンモニウムを利用しながら酸化 1, 2-ジチオラン構造を生成するためのグループを保護する前駆体 thioacetate。シーケンスの長さと合わせて fmoc 保護で保護された不自然なアミノ酸および C ターミナル樹脂化学を使用するなど、組成を変更することによって (図 1 a) 1, 2-ジチオラン ペプチドの全体的な固相ペプチド合成を簡単に変更することができます。多くの異なる研究アプリケーション。

求側鎖を有するアミノ酸またはグループを保護する...

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開示事項

著者が明らかに何もありません。

謝辞

著者博士 B. エレン Scanley をありがとう彼女の技術的なトレーニングと彼女の CD にアクセスするためのナノテク ・ ウェスリアン大学で博士中川ムカージについてコネチカット州立大学および大学 (CSCU) センターで TEM を使用してヘルプをしたいです。分光光度計。報告される作業は、フェア フィールド大学、NASA コネチカット宇宙グラント コンソーシアムの科学研究所、国立科学財団助成番号チェ-1624774 の下に一部サポートされていました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
リンクアミドMBHA樹脂、高負荷ジャイロスプロテインテクノロジーRAM-5-HL皮膚や目との接触を避け、
N,N-ジメチルホルムアミドフィッシャーサイエンティフィD119-4可燃性の液体と蒸気; 目や皮膚に刺激を与える;個人用保護具を使用してください。裸火から遠ざける
Fmoc-L-Val-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-V個人用保護具を着用し、
Fmoc-L-Leu-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-L個人用保護具を着用し、
Fmoc-L-Lys(Boc)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-KBC個人用保護具を着用し、吸入しないでください
Fmoc-L-Phe-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-F個人用保護具を着用し、
Fmoc-L-Ala-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-A個人用保護具を着用し、
Fmoc-L-Gln(Trt)-OHGyros Protein TechnologiesFLA-25-QT個人用保護具を着用し、吸入しないでください
N,N,N′,N′-テトラメチル-O-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)ウロニウムヘキサフルオロリン酸ジャイロスプロテインテクノロジー26432皮膚、目、呼吸器の刺激を引き起こします。吸入しないでください; フードの下または換気の良い場所で使用
DMFジャイロスプロテインテクノロジーPS3-MM-L非常に可燃性;個人用保護具を着用してください。熱から遠ざけ、容器をしっかりと閉じてください。吸い込んだり飲み込んだりしないでください。
ジャイロスプロテインテクノロジーPS3-PPR-Lで20%ピペリジン目と皮膚の火傷を引き起こします。可燃性の液体および蒸気;
ジクロロメタンフィッシャーサイエンティフィD37-4癌を引き起こす可能性があります。吸い込まないでください。個人用保護具を着用してください。ボンネットの下でのみ使用してください。接触した場合は、少なくとも15分間水で上昇させ、医師の診察を受けてください
アセトニトリルフィッシャーサイエンティフィックA998-4可燃性; 目に刺激を与えます。個人用保護具を使用してください。ドラフトの下でのみ使用してください。裸火や高温の表面から遠ざけてください。接触した場合は、少なくとも15分間水ですすぎ、医師の診察を受けてください
トリフルオロ酢酸フィッシャーサイエンティフィA116-50重度の火傷を引き起こします。吸い込まないでください;水生生物に有害です。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触した場合は、少なくとも15分間水ですすぎ、直ちに医師の診察を受けてください
4%酢酸ウラニル電子顕微鏡科学22400-4吸い込まないでください。水生生物に有害
4-(2-ヒドロキシエチル)ピペラジン-1-エタンスルホン酸アクロス 有機物AC172571000吸入しないでください。 屋外または換気の良い場所で使用
窒素 ガスTechAir圧力下では、加熱すると爆発する可能性があります
3-ブロモ-2-(ブロモメチル)プロピオン酸アルファ アエサルAAA1963014吸入しないでください。
水酸化ナトリウムフィッシャー・サイエンティフィS318-100個人用保護具を使用し、ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける
チオ酢酸カリウムアクロス・オーガニクスAC221300250皮膚や目の炎症を引き起こします。吸い込まないでください。個人用保護具
硫酸フィッシャー・サイエンティフィSA213を使用してください火傷を引き起こします。水から遠ざけてください。可燃物から遠ざけてください。吸い込まないでください。個人用保護具を使用する。接触した場合 少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける
クロロホルム-dアクロスオーガニックAC320690075がんの危険性の可能性; 皮膚や目に刺激を与える; 吸入しないでください。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間領域をすすぎ、医師の診察を受ける
クロロホルム フィッシャーサイエンティフィックC298-4がんの危険性の可能性;皮膚や目に刺激を与える;吸入しないでください。個人用保護具を使用してください。ヒュームフードの下でのみ使用してください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎ、医師の診察を受ける場合
N,N-ジイソプロピルエチルアミンアクロス有機物AC367841000 非常に可燃性; 水生生物に有害; 個人用保護具を着用し、
水酸化アンモニウムフィッシャーサイエンティフィックA669S-500吸い込まないでください
ッシャーサイエンティフィックA452-4可燃性の液体と蒸気。個人用保護具を使用する。吸い込まないでください。接触する場合は、少なくとも15分間すすぎエリアをすすぎ、医師の診察を受ける
トリイソプロピルシランシグマアルドリッチ233781可燃性; 個人用の肛門保護安全装置を使用してください; 容器をしっかりと閉じたままにしてください
ジエチルエーテルフィッシャーサイエンティフィE138-1非常に可燃性;皮膚や目に刺激を与える。個人用保護具
2,5-ジヒドロキシ安息香酸Sigma Aldrich39319-10x10MG-F吸入しないでください; 皮膚や目に刺激を与える
α-シアノ-4-ヒドロキシ桂皮酸Alfa AesarAAJ67635EXK
c18 ジップチップミリポアZTC18S096
トリス(2-カルボキシエチル) フォスパイン 塩酸塩Thermo ScientificPI20490
シリカゲル60 F254はアルミニウム裏打ちTLCシートEMDミリポア1.05549.0001
壁精密NMRチューブBel-Art663000585 5mm O.D.
全プラスチック製のNorm-JectシリンジAir TiteAL10
使い捨て針BD PrecisionGlideBD 305185使用済みの針は鋭利物に廃棄されます
廃棄物容器 使い捨てフリットシリンジTorviqSF1000LL10mL フリットシリンジがレポートで使用されましたが、大規模な合成に必要な場合は、より大きなシリンジが利用可能です。
カーボングリッドTed Pella, Inc.CF200-CUの光沢のある銅側ではなく、カーボングリッド側でサンプルと染色を準備し
電子顕微鏡科学78318-3X非常に鋭い先端、長さ:120 mm
0.1 mm 短経路長セルStarna Cells, Inc.20/C-Q-0.1壊れやすい
10mL 容器キャップCEM909210
10mL 圧力容器CEM908035
Aeris Semi-Prep HPLC カラムPhenomenex00F-4632-N0150 x 10mm
セルホルダーStarna Cells, Inc.CH-2049光路長の短い細胞を使用する場合に必要
PS3ペプチド合成装置Gyros Protein Technologies
DiscoverSP Microwave ReactorCEM
遠心分離機HERMLEZ 206 A固定 6x50 mL ローター
HPLC島津製作所 UV 検出器
核磁気共鳴分光器Avance, Bruker300 MHz
MALDI-TOF質量分析計Axima Confidence、島津
製作所の凍結乾燥機Millrock TechnologyBT85A
フーリエ変換赤外分光計Alpha Tensor、Bruker
型電子顕微鏡Tecnai Spirit、FEIタンオリウス光ファイバーCCDデジタルカメラと併用。CSCUナノテクノロジーセンターでアクセス
円二色性分光偏光計J-810, JASCO6セルペルチェ温度コントローラーと併用。ウェズリアン大学でアクセス。
を吸い込まないでください ックDMFを扱った後、皮膚を徹底的に洗ってください 重度のを吸い込まないでください ックックック ック を飲み込まないでください 腐食性; メタノールを フィック薄い グリッド自己閉鎖ピンセットてください を使用 透過ガ可能

参考文献

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