交感神経と心血管中枢神経系 (CNS) の操作レスポンスを測定する方法、神経科学を進めるために重要です。このプロトコルは、測定と腎交感神経活動 (RSNA) 麻酔下ラット (非生存) の急性変化の定量科学者を支援するために開発されました。
このコンテンツを表示するには、JoVEへの購読が必要です。 または、無料トライアルをお申し込みください。
交感神経と心血管中枢神経系 (CNS) の操作レスポンスを測定する方法、神経科学を進めるために重要です。このプロトコルは、測定と腎交感神経活動 (RSNA) 麻酔下ラット (非生存) の急性変化の定量科学者を支援するために開発されました。
腎交感神経活動 (RSNA) および平均動脈圧は、心血管疾患や自律神経研究の重要なパラメーターしかし、限られた資源の科学者を測定し、これらの変数を分析するための技法で演出があります。このプロトコルは、RSNA と麻酔下ラットにおける平均動脈圧を測定する方法を説明します。プロトコルには、中枢神経系 (CNS) を操作する RSNA 録音中に脳にアクセスする方法も含まれています。RSNA 録音テクニックは、光遺伝学的、薬理学的、または中枢神経系の電気的刺激。アプローチは、捜査官は中枢神経核と解剖学的相関する非生存実験で短期 (h 分) 自律神経応答を測定する場合に役立ちます。アプローチは、RSNA のラットの慢性 (サバイバル) 録音を取得するためのものではありません。RSNA、平均放電整流、RSNA と平均動脈圧は、定量化を行い, さらにパラメトリック検定を用いたします。静脈アクセス、telemetrically、平均動脈圧を記録、将来の組織学的解析のための脳の固定を取得する方法は、資料に記載も。
心血管系の自律神経の制御に関する前臨床発見は、高血圧、心不全、慢性腎臓病などの疾患を管理するための作戦を知らせます。高血圧 (BP)1に貢献する交感神経と減少の迷走神経心臓の緊張の過活動。慢性的な高架腎交感神経カテコールアミン分泌を強化し、心血管・腎システム2,3有害な結果と、腎血流量を減少させます。自律神経機能障害につながる神経生物学の経路を定義するには、齧歯動物の研究、中枢神経系 (CNS) ニューロンが交感神経のパラメーターを調整する方法を決定するため重要です。このプロトコルの目的は腎交感神経活動 (RSNA) 測定に関する技術情報を提供するためと BP と麻酔下ラットの中枢神経系の操作への応答に急性の交感神経変化の定量化手法を概説します。
科学者がプローブ中枢神経系の薬理学的、電気的、または麻酔ラットの特定の核関数を決定するに生じる急性 (非生存) RSNA 測定 (h に永続的な分) が便利です。これらのメソッドは、孤束核、中脳中心灰などの構造を使用して脚蓋と腹吻側の延髄を行った交感神経パラメーター4を調節する神経生物学の経路を定義するには 5,6,7。このアプローチは調査する中枢神経系のターゲットを識別するために重要な自律神経機能障害8,9慢性モデルでさらに。これらの実験を完了するには、研究室には、はんだごて、手術顕微鏡、脳定位固定装置フレーム、電極アンプ、オーディオ モニターが必要です。電気的なノイズに寄与する要因研究室で現在、によって手術/記録領域は RSNA 記録における電気ノイズを低減するファラデーおり/接地ストラップを必要があります。脳解析がティッシュの固定を必要とする場合、灌流ポンプとヒューム フードが必要です。データがデジタル化することができを使用して複数生理ソフトウェア/データ集録 (アナログ デジタル コンバーター) 単位4,5、異なる解析オプションとテレメトリ信号を組み込むための互換性を記録.
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
記載されているすべてのメソッドは、イリノイ大学シカゴ校制度の動物ケア委員会によって承認されました。
1. バイポーラ RSNA 電極を作成します。
2. 麻酔の管理し、手術のサイトの準備
3. (静脈アクセス) の大腿静脈を cannulate します。
4. 平均動脈圧を監視するため、大腿動脈の cannulate します。
5. 脳にアクセスする定位手術フレームの位置、ラット
6. 腎交感神経を分離します。
7. レコード データ
8. 安楽死 (Transcardiac 潅流)
9. データを分析します。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
図 1は、ネンブタール麻酔下のラットからサンプルの RSNA および BP の録音を示しています。平均動脈圧が増加し、圧受容器反射と過渡の sympathoinhibition4,6を呼び起こすフェニレフリンの静脈注射が使用されました。RSNA を定量化するには、生の RSNA だった整流および非重複 10 s セグメントの平均ノイズ推定された各セグメントから差し引かれます。

図 1: RSNA およびフェニレフリン注入 IV への応答に BP 。(A
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
RSNA を測定するための重要な手順が含まれます: (1) 傍脊柱筋から腎臓を分離するときに腎動脈と神経のストレッチと腎神経線維 (2) 慎重に解剖記録電極の神経セグメントを配置するときの回避周囲の組織/船から (3) 電極ワイヤーを確保する、組織、血液、またはリンパ液、および腎神経と神経電極ユニットをシリカゲルに鉱物油を適用することによって完全に乾くことから神経を防止 (4) 無料です。トラブルシューティングは、記録システムが適切に接地されていることを確認することが重要です。RSNA の明確なシグナルを得るためには、電極の位置を可視化とシリカゲルに埋め込む前に、生の RSNA 聴取しながら慎重に調整できます。いくつかの時間を持続させる実験のための中枢神経系の操作によって変調することができます RSNA 信号で手術結果が正常に完了します。
結果を解釈する際、調査官は平均動脈圧と RSNA に麻酔の影響を検討してください。このプロトコルは、バルビツ レート麻酔 (ペントバルビ タール ナトリウム)、平均動脈圧を減らすことができます自律応答21
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
アン M. Fink データ科学国際顧客諮問委員会のメンバーであります。
本研究は、看護研究 (K99/R00NR014369) の国立研究所によって支えられました。
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| ステンレス鋼線 | AMシステム;スクイム、WA | 791000 | RSNA電極 |
| ポリエチレン(PE-50)チューブ | VWR;Radnor, PA | 63019-048 | RSNA 電極; 容器カニューレ挿入 |
| ミニチュア ピン コネクタ | A-M Systems;スクイム、WA | 520200 | RSNA電極 |
| 圧着工具 | ダニエルズマニュファクチャリングコーポレーション;フロリダ州オーランド | M22520 | RSNA 電極 |
| コネクタ ストリップ | アンフェノール;クリントンタウンシップ、ミシガン州 | 221-2653 | RSNA電極 |
| JB Kwikエポキシ | JB溶接、硫黄スプリングス、テキサス州 | 8270 | RSNA電極 |
| シリコーン | Permatex;ハートフォード、コネチカット州 | 2222 | RSNA電極 |
| ヘパリンナトリウム;注射用(10 mLバイアル、1000 U / mL) | KV獣医用供給;デビッドシティ、NE | P03466静脈 | 線開存性 |
| フェニレフリンHCl;注射剤(1 mLバイアル; 10 mg / mL) | ACE Surgical Supply;マサチューセッツ州ブロックトン | 950-6312 | 腎交感神経抑制のテスト |
| シングルフック弾性外科用ステー | ハーバード装置;マサチューセッツ州ホリスト | 72-2595 | 切開 |
| シルク手術用テープ | 3M, ミネアポリス, | MN 1538-0 | 安全な手術用ステー |
| 針, 20 G | Sigma-Aldrich; ミズーリ州セントルイス | Z192554-100EA | 血管カニューレ挿入 |
| デュモン #7 湾曲した鉗子 | ファインサイエンスツール;カリフォルニア州フォスターシティ | 11274-20 | 血管カニューレ挿入 |
| 5-0 シルク縫合糸 Braintree | Scientific;マサチューセッツ州ブレインツリー | SUT-S 106 | 血管カニューレ挿入 |
| 繊細な止血鉗子 | Roboz Surgical Instrument Co.;メリーランド州ゲイサーズバーグ | RS-7117 | 血管カニューレ挿入およびRSNA手術 |
| Crile止血鉗子 | ファインサイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州 | 13004-14 | 針曲げ |
| テレメトリ送信機 | データサイエンスインターナショナル。ミネソタ州ミネアポリス | PA-10 | 平均動脈圧モニタリング (テレメトリー) |
| Re-gel syringe | Data Sciences International;ミネソタ州ミネアポリス | 276-0038-001 | 送信機の再利用 (テレメトリー) |
| 使い捨て圧力トランスデューサ | Transpac;カリフォルニア州サンクレメンテ | MI-1224 | 平均動脈圧モニタリング |
| Clear-Cuff 圧力注入器 | MILA International Inc.;ケンタッキー州フローレンス | 2281339 | 平均動脈圧モニタリング |
| 血管カニューレ挿入鉗子 | Fine Science Tools;フォスターシティ、カリフォルニア州 | 00574-11 | カテーテル挿入 |
| ブラックモノフィラメントナイロン4-0逆切断針の縫合 | McKesson Medical-Surgical;カリフォルニア州サンフランシスコ | S661GX | セキュアテレメトリー送信機 |
| テレメトリー受信機 | Data Sciences International;ミネソタ州ミネアポリス | RPC-1 | 平均動脈圧モニタリング (テレメトリー) |
| LabChart Pro (ソフトウェア)、PowerLab (取得ハードウェア) | AD Instruments;コロラドスプリングス、コロラド州 | ML846、MX2マトリックス2.0(Data Science Internationalテレメトリーと互換性あり) | ソフトウェア/取得ハードウェアの3つのオプション |
| SciWorks(ソフトウェア)、DataWave(取得ハードウェア) | DataWave Technologies、Loveland、CO | N / A | |
| Spike 2(ソフトウェア)、Micro1401-3 | Cambridge Electronic Design Ltd.、ロンドン、英国 | 1401-3 | |
| マイクロドリル | ロボズ外科用器具株式会社;メリーランド州ゲイサーズバーグ | RS-6300 | CNS手術 |
| 脳定位固定装置手術フレーム | Stoelting;ウッドデール、イリノイ州 | 51600 | CNS手術 |
| 微小電極アンプ、10倍プリアンプ | AMシステム付き。スクイム、WA | 1800-2 | RSNAレコーディング |
| リトラクターファイン | サイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州 | 17009-07 | RSNA手術 |
| マイクロ解剖ピンセットファイン | サイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州 | 11251-10 | RSNA手術 |
| マイクロフック | ファインサイエンスツール;フォスターシティ、カリフォルニア州 | 10064-14 | RSNA手術 |
| 鉱油 | フィッシャーサイエンティフィック;マサチューセッツ州ウォルサム | 8042-47-5 | RSNA 手術 |
| オーディオ モニター | AMシステム;スクイム、WA | 3300 | RSNA手術 |
| シリカゲル | ワッカー、ミュンヘン;ドイツ | RT601A-B | RSNA手術 |
| クリップ | タイコエレクトロニクス;スイス、シャフハウゼン | EB0283-000 | 灌流針の接地または固定 |
| ボンはさみ、ストレート/シャープポイント | Roboz Surgical Instrument Co;メリーランド州ゲイサーズバーグ | RS-5840 | 灌流 |
| 強制針 | ハーバード装置;マサチューセッツ州ホリストン | 75-0286 | 灌流 |
| マスターフレックス灌流ポンプ | コールパーマー;イリノイ州バーノンヒルズ | 7524-10 | 灌流 |
| マスターフレックスプラチナ硬化シリコーンチューブ | コールパーマー。Vernon Hills, IL | 96410-15 | Perfusion |
| Formalin (10% buffered solution; 4 L) | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | HT501128 | Perfusion |
| Sucrose | Sigma-Aldrich; St. Louis, MO | S0389 | Cryoprotection |
アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。