方法論記事

切削とフローティング区分のための組織のパラフィン包埋法

DOI：

10.3791/58288

⸱

2018年9月5日

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Life Science, Nanchang University, 2Queen Mary School, Medical Department, Nanchang University, 3School of Life Science, Nanchang University

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

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ここでは、パラフィン切片を改善するためのプロトコルを提案する.このメソッドは、切断と従来の方法に必要な転送処理を避けるために簡単な恒温室を使用して浮動小数点を兼ね備えています。その結果、そのままパラフィン切片数と効率が大幅に向上。

要約

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組織学や病理学のパラフィン包埋組織の断面が使用されています。ただし、それは面倒です。この方法を改善するためにいくつかの民間企業は、液体の水を使用して複雑な部分転送システムを考案しています。この技術を簡素化し、我々 はカットとシンプルな恒温室; 内フローティングを組み合わせた自家製の機器を使用して単純なメソッドを作成したがって、セクションは自動的に水表面における水の風呂を入力します。アダルト ゼブラフィッシュ目マウス萌芽期の脳、成体マウス腎臓成体マウス脳海馬は、比較のため従来のパラフィン切片と提案手法の両方を使用して切られました。統計分析は、我々 の改良法時間を保存したし、高い品質のセクションを示しています。さらに、短時間で全体の標本のパラフィン切片ジュニア演算子の簡単です。

概要

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形態学的研究は、生物学の研究が重要です。新技術は、全体の組織または生物1,2,3、薄い部分に試料を切断から直接彼らの目標は続いて染色を観察する研究者を許可しているが、プライマリのまま法者は唯一組織形態も組織に直接ターゲット蛋白質。光学顕微鏡を使用して、3 つのセクション タイプ: パラフィン、冷凍、およびグリコールメタクリル。セクショニングは共通組織抗原性を保護するため、試料の準備は簡単です、保有組織形態が悪いと薄い断面4,5には不向き。パラフィン切片は、保存状態の良い形態を展示するため最もよく使用される方法です。標本は完全に脱水し、ワックスに埋め込まれた、パラフィン ブロックに無期限に格納できます。また、パラフィン切片さらに実験の生物学的プローブ アクセスを改善し、Z 方向に細胞層オーバーレイを削減する薄いセクションを生成します。

しかし、従来のパラフィン切片がかかり、オペレーターのスキルを要求します。パラフィン切片を固定、脱水、埋め込み、切り取り、およびフローティング受けます。重要なは、風呂の水にナイフ ホルダーからセクション リボンを転送するは、ジュニアのオペレーターの....

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プロトコル

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ここで説明したすべてのメソッドは、動物のケアと使用南昌大学委員会によって承認されています。

1. 機器をアセンブルし、ミクロトームを接続

  1. 要件 (補助図 1) あたりパラメーターを設計します。
  2. アクリル板を製造するローカル工場にパラメーターを送信します。
  3. シーケンスのすべての部品を組み立てる: クロロホルムを使用してタンクに 7 商業アクリル板を組み合わせてセクション チャネルと水お風呂 (図 1)。
    注意: 光と酸素を満たしているとき、クロロホルムは有毒物質を生成します。ヒューム フードの装置を組み立てます。
  4. アクリル板 #1 (図 2 a,矢印) に穴を介して管状電気加熱要素をインストールします。
  5. 温度コント ローラーをインストールするのには、電気ドリルを使用して #2 アクリル板に小さな穴を作成し、温度検出器 (図 2 a,矢印) をインストールします。タンク (図 2 a

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結果

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改善方法は、そのままパラフィン セクションの数を高めた。成体マウス海馬組織、成体マウス腎臓、マウス萌芽期の脳、ゼブラフィッシュの目のこの新しいメソッドをテストしました。タンクに水を追加し、40.0 ° c. に 38.0 ° C 水の温度に維持されました。準備した後、順次組織サンプル、切断され、従来区分と比較しています。新しいメソッドは、断面欠損を回避し、成体マウス海馬、成体マウス腎臓、E15.5 マウスの脳は、成人ゼブラフィッシュ目 (図 4 a、4 C、4 e、4 G) でそのままセクションの割合を増加します。結論として、本手法は断面欠損を回避しよりそのままセクションごとに試料を採取して断面を改善しました。

法の改善には、1 試料当りの時間が減少しました。従来法と私たちの改良法の間に撮影時間を比較すると、全シリーズが成体マウス海馬、成体マウス腎臓、E15........

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ディスカッション

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パラフィン セクション形態を改善し、従来のパラフィン切片中の無駄な時間の問題を解決するには、改良されたパラフィン切片作製法切削と展開を組み合わせたを作成しました。この改良法は、セクション チャネル、水浴と温度検出スイッチとヒーターで構成されるシンプルな機器に依存します。セクション リボン セクション チャネルを介して水の風呂に入るし、自動的に切削しながら展開します。したがって、このメソッドは、パラフィン切片作製の品質と効率性は、成体マウス海馬、成体マウス腎臓、E15.5 マウスの脳は、大人のゼブラフィッシュ目のパラフィン切片によって確認されたを向上します。

従来のパラフィン切片作製中にカーリングのセクションを避けるためには、多くの調整を行った組織表面を潤し、ワックスのブロックを冷却、湿度を増やすこと、セクショニング6,7を組み合わせることなど 8;ただし、これらの調整、パラフィン切片より退屈です。.......

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開示事項

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著者は、このデバイスの特許を持っているし、競争の興味を宣言しません。

謝辞

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この作品は中国の国家自然科学基金 (許可番号 31400936、31460260) によって支えられた、自然科学財団の江西省の中国 (20171BAB215020)。我々 はまた、この作業を支援する南昌大学とクイーン クイーンメアリー、ロンドン大学との共同プログラムを感謝します。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
インキュベーターBoekel Scientific133000-2
エタノール Sinopharm Chemical Reagent Co.、蓋64-17-5
キシレン Sinopharmの化学試薬Co.、ふた1330-20-7
パラプラストLeica39601006
熱されたパラフィンの埋め込みモジュールLeica
商業アクリル板
TrichloromethaneSinopharmの化学試薬Co.、ふた67-66-3
管状の電気発熱体(12 V 200 W)
温度調節器(12V 120 W)MingsuoXH-W3002
ロータリーミクロトーム ライカ
ニュートラルシリコーンシーラント水路をミクロトームナイフホルダーとリンク
電圧変圧器DearllS-250-12
使い捨てブレードAccu-Edge4689
HematoxylinBaso Diagnostics Inc.BA-4025
エオシン バソ・ダイアグノスティックス(株)BA-4025
マイクロスライドセイルブランド7105
ニュートラルバルサムSinopharm化学試薬株式会社、蓋10004160
カバースリップ Citoglas10212424C
顕微鏡カール ツァイス
塩酸Xilong Chemical7647-01-0
パラフィン切片用ウォーターバスライカ
HistoCore アルカディア C - コールドプレートライカ
パラフィン撥水スプレー Thermo Scientific9990420

参考文献

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  1. Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nature Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
  2. Fujita, S. Analysis of neuron differentiation in the central nervous system by tritiated thymidine autoradiography. Journal of Comparative Neurology. 122 (3), 311-327 (1964).
  3. Mironov, V., Boland, ....

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