培養 3 D 回転楕円体モデルでのマウス前立腺の葉の解剖組織学的特性及び

Summary

遺伝子改変マウスは、前立腺癌のメカニズムを調査するための有用なモデルです。識別とマウス泌尿生殖器から前立腺の丸い突出部を解剖、組織学に基づく区別と分離および下流解析の回転楕円体として体外主な前立腺細胞文化プロトコルをご紹介します。

Abstract

遺伝子組み換えマウス モデル (GEMMs) は、前立腺癌 (PCa) を含む、人間のがんのほとんどの種類を調査するため効果的な前臨床モデルとして機能します。マウス前立腺の解剖学を理解することは、効率的な利用と適切な特性そのような動物のモデルにとって重要です。マウス前立腺にはそれぞれ独自の特性を持つ葉の 4 つの別個のペア。この記事は、適切な郭清法および疾患解析にマウス前立腺の丸い突出部の同定を示します。後郭清術、前立腺細胞さらに培養できる体外機構の理解のためです。マウスから前立腺細胞は、彼らの通常の特性を失う傾向があるとき培養体外、我々 概要ここでセルを隔離し、生理学を維持するため有効である 3 D 回転楕円体文化としてそれらの成長法セルの特性。これらの 3 D の文化は細胞の形態と調査、近く生理の状態で動作が変更レベルとの主要なタンパク質と開発に関与する経路のローカライズと、病気の進行を分析し見て使用できます。薬物治療への応答。

Introduction

科学的なコミュニティを何十年も人間の癌の開発の複雑なメカニズムの解明を続けています。潜在的なキープレーヤーと創薬ターゲットの同定から始まる患者細胞・組織研究、前臨床動物モデルの使用多くの場合このような結果の並進アプリケーション必要があります。モデル (GEMMs) モデルの人間のがんにはマウス モデルの人間癌コンソーシアム (NCI MMHCC)、について説明し、マウスの癌の特性を統一しようとする委員会の設立以来着実に上昇している遺伝子改変マウスの使用科学者世界中^1,の²モデル。マウス モデルは、ほとんどの種類のがんは、開発の進行、治療への応答を理解するための前臨床研究で解明の必要性を満たすし、抵抗³を取得します。

前立腺がんは男性、毎年⁴160,000 以上の男性に影響を与える最も一般的に発生するがんです。病気の積極的な形態は、毎年の生活の数万人を主張します。しかし、病気の進行のメカニズムはまだよくわかっていません。進行性前立腺癌患者⁴で高死亡率からも明らかな転移・再発前立腺癌の効果的な治療オプションの深刻な不足でこの結果します。したがって、前立腺がんを研究する前臨床モデルの成長している必要性があります。しかし、おか....

Protocol

ここで説明したすべてのマウスの実験は、SUNY アップステート医学大学で機関 IACUC 承認プロトコルで説明したガイドラインに従って行われました。

1、泌尿・生殖器 (UGS) 郭清

メモ: 回路図は、図 1に提示されます。

1. CO₂吸入安楽死法または別の承認手法を使用して 3 ヶ月歳の男性 c57bl/6 マウスを安楽死させます。
   注: マウス 3、12 ヶ月の年齢の間は、実験のため正常に使用できます。古いマウス (> 6 ヶ月) はほとんどクリアする必要がありますの UGS の周りより多くの脂肪をあります。葉の分離・同定マウス 3 ヶ月未満では困難です。他の系統は、実験では、同様に使用できます。
2. その裏にマウスを置き、動物の腹部の側面を露出するようにピンを使用して足を保護します。
3. マウスの腹部に 70% エタノールをスプレーし、拭きとってください。
   注: は、郭清は必須ではありません前に、腹部毛を剃る。
4. 中の鈍い鉗子のペアで筋層と共に、腹部から皮膚を持ち上げ、はさみを使用して腹部に逆 Y 字切開を行います。
   1. 直線切開をおきます (図 2 a) 胸骨に陰茎のすぐ上からはさみ....

Results

マウス前立腺の丸い突出部は識別でき、精嚢、尿道に関して彼らの場所を使用して解剖しました。マウス前立腺 4 対葉背側に位置するのと腹精嚢、尿道で構成されます。図 4 aおよび4 b (上) そのまま前立腺、精嚢、尿道の背側と腹側のビューを表示します。最下部のパネル (図 4 cおよび4 d) は、身分証明書に記載されている異なる葉を表示します。葉は、3 ヶ月ほど若いマウスから分離できます。

別の前立腺の丸い突出部は組織学 (図 5) で大幅に異なります。すべてマウス前立腺葉に囲まれて分泌上皮細胞内腔から成る複数の腺プロファイルで構成されます。しかし、葉の形、細胞、組織、分泌物の性質変わる葉から葉へ。H &.......

Discussion

本稿は、マウス前立腺の解剖および個々 の葉の識別方法を紹介します。また説明マウスの in vitro解析のための 3次元培養における前立腺細胞を培養するためのプロトコルです。

解剖のプロトコルの重要なステップは、(1) マウスから全体の UGS を収穫と解剖顕微鏡の下で個々 の器官の分離です。前立腺の組織は非常に小さく、UGS; の残りの部分に囲まれてしたがって、そのまま葉のすべての 4 つのペアを調達しながら体内から直接臓器を収穫する実質的に不可能です。したがって、マウスから全体の UGS を収穫し、前立腺の抽出を続行することが重要です。また (2) このプロトコルに重要です適切なタイミングでの手順に従いますが、細心のまま。時間は解剖時に組織の劣化を最小限に抑えるための本質です。ここに記載したマウスから、UGS を抽出、特定の技術の選択肢に比べて高速と強くお勧め。全体の解離と葉の隔離プロシージャ通常分 35-40、もっと練習 25 分を下げることができます。解剖の最も困難な部分は、総解剖の時間の大部分を占める UGS を囲む脂肪を掃除です。脂肪は、前立腺はそれの.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
マウス手術器具(マウス解剖キット)	ワールド精密機器	MOUSEKIT
解剖顕微鏡
RPMI培地	サーモフィッシャーサイエンティフィック	11875093
解剖培地(DMEM + 10%FBS)	サーモフィッシャーサイエンティフィック	11965-084
シ胎児血清	サーモフィッシャーサイエンティフィック
PBS(リン酸緩衝生理食塩水)	サーモフィッシャーサイエンティ	10010031
コラゲナーゼ	サーモフィッシャーサイエンティフィック	17018029	RPMIで10倍ストック(10mg / ml)を作り、ろ過滅菌し、分注し、-20°Cで保存します。C
トリプシン-EDTA (0.05%)	サーモフィッシャー・サイエンティフィック	サイエン
DNase I	Sigma-Aldrich	10104159001 ロシュ
シリンジ&ニードル	フィッシャー・サイエンティフィ
・フィッシャーブラン 滅菌セルストレーナー、40μm	フィッシャーサイエンティフィック	22-363-547
PrEGM BulletKit	ロンザ	CC-3166	コンポーネントを追加し、アリコートし、-20°Cで保存します。
マトリゲル膜マトリックス	サーモフィッシャーサイエンティフィック	CB-40234
ディスパーゼ II パウダー	サーモフィッシャー サイエンティフィ	17105041	PrEGM に 10 倍のストック (10mg/ml) を入れ、フィルター滅菌、分注、-20 °C で保存します。ハ