RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
ja
Menu
Menu
Menu
Menu
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
ここでは、モーションキューなどの代替視覚特徴が魚類の方向性決定にどのように影響するかを定量化する行動アッセイを示すプロトコルを提示する。代表的なデータは、ゴールデンシャイナー(Notemigonus crysoleucas)が仮想魚の動きに従う速度と正確さで提示されます。
集団動物の行動は、個々のフィットネスに不可欠な個々の動機や社会的相互作用から生じます。魚は長い間、集団的運動、特に環境と社会情報を生態学的な文脈にまたがって統合する能力に関する調査に影響を与してきました。このデモンストレーションでは、魚の行動応答を定量化するために使用される技術を示します, この場合, ゴールデンシャイナー (ノエミゴヌスクライソロルカス),コンピュータの視覚化とデジタル画像分析を使用して視覚刺激に.コンピュータビジュアライゼーションの最近の進歩により、視覚的な特徴を制御し、社会的相互作用のメカニズムを分離するために細かく操作できるラボでの実証的なテストが可能になります。この方法の目的は、孤独かグループかにかかわらず、個人の方向性の決定に影響を与えることができる視覚的特徴を分離することです。このプロトコルは、物理Y迷路ドメイン、記録装置、プロジェクターとアニメーションの設定とキャリブレーション、実験的なステップとデータ分析に関する詳細を提供します。これらの技術は、コンピュータアニメーションが生物学的に有意な応答を引き出すことができることを示している。さらに、この技術は、幅広い実験用途に対する代替仮説、ドメイン、および種のテストに容易に適応可能です。仮想刺激の使用は必要な生きている動物の数の減少そして取り替えを可能にし、結果として実験室のオーバーヘッドを減らす。
このデモンストレーションでは、仮想コンセ異性の移動速度(2体の長さ/秒)の小さな相対的な差が、仮想によって提供される方向の手がかりに従う速度と精度を向上させるという仮説をテストします。シルエット。結果は、背景雑音(67%の画像の一貫性)が存在する場合でも、視覚的な手がかりの速度の増加によって輝く方向決定が大きく影響を受けることを示しています。モーションキューがない場合、被験者はランダムに方向を選択しました。意思決定速度とキュー速度の関係は可変であり、キュー速度の増加は方向精度に対してやや不均衡な影響を及ぼしました。
動物は、他の人と対話し、騒々しい環境をナビゲートする際に、情報に基づいた意思決定を行うために、継続的に生息地を感知し、解釈します。個人は、ソーシャル情報を行動に組み込むことで、状況認識や意思決定を強化することができます。しかし、社会的情報は、主に、特定のメッセージを伝えるために進化した直接信号(例えば、ワグル)を介して進化した直接信号を介してではなく、信頼できない可能性がある意図しない手がかり(すなわち、捕食者を避けるために突然の操縦)を介して推論に起因する。ミツバチで踊る)1.特に個人がグループで旅行する場合、個人がソーシャル キューや感覚情報の価値を迅速に評価する方法を特定することは、調査者にとって困難な作業です。ビジョンは、社会的相互作用2、3、4を支配する上で重要な役割を果たし、研究は、各個人の視野に基づいて魚学校で発生する可能性のある相互作用ネットワークを推測している5、 6.しかし、魚学校は動的なシステムであり、グループメンバー間の相互作用から生じる固有の共線性と交絡要因のために、特定の特徴や近隣の行動に対する個々の応答を分離することは困難です。このプロトコルの目的は、代替視覚機能が単独またはグループ内を移動する個人の方向性の決定にどのように影響するかを分離することによって、現在の作業を補完することです。
現在のプロトコルの利点は、操作実験とコンピュータの視覚化技術を組み合わせて、個人が自然界で経験する可能性のある基本的な視覚機能を分離することです。具体的には、Y-maze(図1)を用いて、バイナリ応答に向きの選択を折りたたみ、仮想隣人の水泳行動を模倣するように設計されたコンピュータアニメーション画像を紹介する。これらの画像は迷路の下から投影され、1つ以上の被験者の下で泳ぐコンセ異性のシルエットを模倣します。形態、速度、一貫性、水泳行動などのこれらのシルエットの視覚的特徴は、代替仮説7をテストするために容易に調整される。
本論文は、モデルの社会的魚種であるゴールデン・シャイナー(ノテミゴヌス・クライソルーカス)の個体が仮想隣人の相対的な速度にどのように反応するかを分離することによって、このアプローチの有用性を示す。プロトコルの焦点は、ここで、仮想近傍の方向的影響がその速度によって変化するかどうか、およびそうであれば、観察された関係の形態を定量化することにある。特に、シルエットの固定された割合がリーダーとして機能し、弾道的に片方の腕または別の腕に向かって移動することによって、方向キューが生成されます。残りのシルエットは、リーダー/ディストラクタ比を調整して調整できるバックグラウンドノイズを提供するためにランダムに動きまくることによって、ディストラクタとして機能します。ディストラクタに対するリーダーの比率は、方向の手がかりの一貫性をキャプチャし、それに応じて調整することができます。ディストラクタシルエットは、シルエットを境界から反射させることにより、決定領域(「DA」、図1A)に限定されたままです。ただし、リーダーのシルエットは、DA 領域を離れ、指定されたアームに入ってから、シルエットが腕の長さの 1/3 を通過するとゆっくりとフェードアウトします。リーダーがDAを離れると、新しいリーダーのシルエットが代わりを務め、正確な経路をたどり、実験を通じてリーダー/ディストラクタ比がDAで一定であることを確認します。
仮想魚の使用は、視覚感覚情報の制御を可能にしながら、被験者の方向応答を監視しながら、グループ内のソーシャルナビゲーション、動き、または意思決定の新しい特徴を明らかにする可能性があります。ここで使用されるアプローチは、コンピュータ アニメーションを操作して複雑さの変化する行動パターンを生成することにより、致命的なストレスや捕食が社会的相互作用に及ぼす影響など、幅広い質問に適用できます。
すべての実験プロトコルは、環境研究所、米国陸軍エンジニアと研究開発センター、ビックスバーグ、MS、米国(IACUC# 2013-3284-01)の機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されました。
1.感覚迷路の設計
2. 記録機器
3. 照明、プロジェクター、カメラの設定を校正する
4.視覚投影プログラムのキャリブレーション:背景
を使用してガウスのグラデーションを作成します。5.視覚投影プログラムを校正:視覚刺激
注: 視覚的な刺激のレンダリングとアニメーションは、プラットフォームのチュートリアルと共に以下の手順をガイドとして使用して処理を行うこともできます。現在のプログラムのロジックの概略図 (図3) に記載されており、追加の詳細については、Lemasson et al. (2018)7.次の手順は、現在の実験で行われたキャリブレーション手順の例を示しています。
6. 動物の準備
7. 実験手順
8. データ分析
仮説とデザイン
この実験システムの有用性を実証するために、ゴールデンシャイナーが視覚的な合図に従う精度は、そのキューの速度で向上するという仮説をテストしました。野生型ゴールデンシャイナーを使用した(N=16、体長、BL、および湿式重量、WW、63.4±3.5mmおよび1.8±0.3g、敬意を払って)。視覚刺激(リーダー/ディストラクタ比)の一貫性は0.67に固定され、モーションキュー(リーダー)がディストラクタに対して移動する速度を操作しました。指向性の手がかりを提供するリーダーシルエットの速度レベルは、0-10 BL/s(2の増分)の範囲で、魚12における活動の持続的、長期、またはバーストスイミングモードを反映すると一般的に考えられる速度の範囲に及ぶ。コントロールレベル0では、リーダーのシルエットはランダムに指向されたディストラクタの間で目的地の腕に向けられましたが、シルエットは動きませんでした。プログラムによってトライアルごとにランダムに行き先アームが選ばれました。距離単位は、被験者の平均標準長さによって定義された体長で、時間は秒単位です。現在の代表的な分析では、一次応答変数(意思決定速度と精度)の測定に重点を置いていますが、実験の設計により、研究者は被験者の動きを追跡し、その動きを分析することで、追加情報を抽出することができます。キネマティック。
我々の魚の被験者は、プロトコルのセクション6に続いて収容された。各被験者は、1日あたり1レベルの治療にさらされた。我々は、日をまたがって被験者の治療レベル(キュー速度)内で、被験者が毎日テストされた順序の両方を無作為化した。線形および一般化された線形混合効果モデル(LMMおよびGLMM、それぞれ)を用いて、被験者が視覚刺激に従った速度および精度に対するリーダーのシルエット速度の影響をテストした。被験者IDは、両方のモデルでランダム効果として含まれていました。
データと調査結果
モーションキューがない場合、ゴールデンシャイナーは期待どおりに動作し、ランダムにその方向を選択しました(刺激速度= 0、二項検定、n左= 33、n右= 40、= 0.45、P = 0.483)。 ほとんどの被験者は、ドメイン内でストレスの多い行動の兆候を示さなかったし、割り当てられた時間(5分)以内に決定的な決定を行ったが、被験者の22%は、保持領域を離れるか、または決定領域に入ることを嫌がった。これらの優柔不断な魚からのデータは分析に含まれていなかった。我々の被験者の残りの78%は、それらの刺激の速度が増加するにつれて方向刺激に従う精度の有意な改善を示した(GLMM,z = 1.937, P = 0.053)。図5Aは、刺激速度レベルの増加ごとに方向精度が1.2倍増加するこの関係の性質を示しています。この関係は控えめに不均衡であり、それ自体はキュー速度の変化に対するしきい値応答を示唆するものではありません。刺激速度の増加はまた決定速度の有意な増加をもたらした(LMM、F 1,56= 4.774、P = 0.033)。 しかし、図5Bに明らかなように、意思決定速度の傾向は、刺激速度レベルにわたって一貫性がなく、非常に変動していました。これらの意思決定速度データで明らかなのは、刺激が動いていないときよりも5~20倍長い被験者を平均して、どこでも取ったということです(刺激に対する意思決定速度は4.6 ±2.3sと81.4 ±74.7s) それぞれ0と8の速度、±標準偏差、SD)。実際、制御レベルがなければ、刺激速度の関数としての意思決定速度に大きな変化は見つかりませんでした。

図 1.Y-Maze ドメイン。A.意思決定試験用Y迷路装置の画像アヌーテーションは、保持領域(HA、緑)、意思決定領域(DA、青)、左意思決定アーム(LDA)、および右意思決定アーム(RDA)を表します。B.オーバーヘッド調整可能なトラック照明とGigEカメラの配置を備えたY迷路と部屋の画像(4つのオーバーヘッドライトストリップのうちの1つだけが表示されます)。C.試用中、または試行中の動きを排除するために、スライドキャリッジによってロックされたプロジェクター配置を含むY迷路(サイドビュー)の画像。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

図 2.背景および刺激の口径測定。A.保持領域と決定領域 DA (平均ピクセル強度 112 ± 1278) の間に均一な背景色とピクセル強度トランジェクト (緑色の線) を持つ照射された Y 迷路の画像。プロジェクターの電球(ホットスポット)によって生成される光勾配がはっきりと見えます。B.投影と DA の位置合わせを示す画像。C.フィルタリングされた背景と、キャリブレーション(サイズ、速度)のためにDAの中央に投影された孤独なシルエットを持つ迷路の画像。(C) にカウンターグラデーションの背景を追加すると、背景が暗くなり(平均ピクセル強度 143.1 ± 5.5)、空間変動度が大幅に低下します(変動係数は 11.4 (A.) から 0.03 (C.) になります。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

図 3.実験で使用されるビジュアライゼーションプログラムにおける一般的な操作フローの概略図。その他の手続きの詳細については、7 を参照してください。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

図 4.本物と仮想の両方の魚のシルエットを持つ実験的な試み。A.ホールディングエリア(緑色の円)を残してゴールデンシャイナーをイメージします。B.仮想魚のシルエットの中の決定領域(緑の円)における(ライブ)ゴールデンシャイナーの画像。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

図 5.モーション キューの相対的な速度の変化に対する方向応答の精度と速度。A.ゴールデンシャイナーが刺激速度(BL/s)に対してプロットされた「リーダー」のシルエットに従った魚の決定精度のグラフ。B.刺激速度(BL/s)に対してプロットされた魚の決定速度のグラフ。データは±標準誤差を意味し、SE.15仮想シルエットのグループは、67%の一貫性レベル(15のシルエットのうち10はリーダーとして機能し、残りの5つのシルエットはディストラクタとして機能した)で決定ゾーン全体にランダムに分布し、0-10 BL/sからのリーダーの速度は、シルエットのどれも動かしていないコントロールを除いて、すべての速度レベルで1 BL/sで固定されたままでした。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。
すべての著者は、実験設計、分析、論文の執筆に貢献しました。A.C.U. と C.M.W. のセットアップとデータの収集。著者は何も開示していない。
ここでは、モーションキューなどの代替視覚特徴が魚類の方向性決定にどのように影響するかを定量化する行動アッセイを示すプロトコルを提示する。代表的なデータは、ゴールデンシャイナー(Notemigonus crysoleucas)が仮想魚の動きに従う速度と正確さで提示されます。
セットアップアシスタンスを提供してくださったブライトン・ヒクソンに感謝します。このプログラムは、基礎研究プログラム、環境品質と設置(EQI;米国陸軍エンジニア研究開発センター テクニカルディレクター、エリザベス・ファーガソン博士。
| 黒と白のIPカメラ | ノルダス、バージニア州リーズバーグ、米国 | ||
| https://www.noldus.com/ 押し出しアルミニウム | 80/20 Inc.、コロンビアシティ、インディアナ | 州、米国 3030-S | https://www.8020.net 3.00" X 3.00" スムース T-スロット プロファイル、8 つのオープン T スロット |
| ナガス スターター Vpak、1.5 mm 押し出しペレット | Zeigler Bros. Inc.、Gardners、PA、USA | http://www.zeiglerfeed.com/ | |
| ゴールデンシャイナーズ | ソールミノーファーム、アーカンソー | 州、米国http://saulminnow.com/ | |
| ImageJ(v 1.52h)フリーウェア | 国立衛生研究所(NIH)、米国 | ||
| https://imagej.nih.gov/ij/ LEDトラック照明 | Lithonia Lightening、Conyers、GA、USA | BR20MW-M4 | |
| https://lithonia.acuitybrands.com/residential-track Oracle 651ホワイトカットビニール | 651Vinyl、ルイビル、ケンタッキー州、米国 | 651-010M-12:5フィート | http://www.651vinyl.com。様々なサイズを注文できます。 |
| PowerLite 570 オーバーヘッドプロジェクタ | Epson, Long Beach, CA, USA | V11H605020 | https://epson.com/For-Work/Projectors/Classroom/PowerLite-570-XGA-3LCD-Projector/p/V11H605020 |
| Processing (v 3) フリーウェア | Processing Foundation | ||
| https://processing.org/ R (3.5.1) フリーウェア | The R Project for Statistical Computing | https://www.r-project.org/ | |
| Ultra-white360シアタースクリーン | 代替スクリーンソリューション、クリントン、ミシガン州、米国 | 1950 https://www.gooscreen.com | 。特別なカットサイズの |
| Z-HABシステム | Pentair Aquatic Ecosystems、アポプカ、フロリダ州、米国 | https://pentairaes.com/ を呼び出す必要があります。詳細とサイズについてはお問い合わせください。 |