フルーツハエを扱うシンプルな自家製ツール -ショウジョウバエメラノガスター

サマリー

ここでは、大人のショウジョウバエを移動、冷やし、殺すためにいくつかの自家製ツールを使用するだけでなく、ガラス培養バイアルをきれいにし、卵を収集します。これらの用具は作りやすく、ショウジョウバエの取り扱いにかなり効率的である。

要約

フルーツフライ、ショウジョウバエメラノガスターは、生物学の研究と生物学教育の両方で広く使用されています。大人のハエを扱うのは一般的ですが、実際には難しいです。ここでは、ショウジョウバエの取り扱いにおける困難な問題に対処するためのシンプルで費用対効果の高いツールを作成する方法を示します。泡のストッパーの穴が作られ、ピペットの先端か漏斗が穴に挿入される。ハエは、ピペット先端/漏斗アセンブリに一方向にのみ移動し、バイアルに出入りする成人のショウジョウバエの移動を効率的に制御することができます。既存のプロトコルは、砕いた氷で冷やし、冷たく硬い氷パック表面に移すことによって、ハエを冷やすために変更されました。アイスパックは、立体顕微鏡下で調べたときに凝縮された水から固定されたハエを保つ医療ガーゼの一部で覆われています。ハエは最終的にカウントとソートのために安楽死させられ、マイクロウェービングによって廃棄されます。卵を採取するためのボトル状のケージや、省力化装置、ガラス培養バイアルの洗浄プロトコルも開発されています。

概要

フルーツフライは、ショウジョウバエメラノガスター、幅広いトピック1、2を研究するために生物研究および生物学教育で広く使用されているモデル生物である。ショウジョウバエを扱う基本的な問題は、すべての大人(一部の変異体3、4を除く)が飛ぶことができるので、彼らが扱いやすいように、バイアルからバイアルへの大人の移動とハエの固定化です。

従来、研究者は、2つのバイアルを口から口に持ち、ハエをタップして別のバイアルに飛ばすことを許可し、その後、両方のバイアル4を分離し、再接続することによって、1つのバイアルから別のバイアルにハエを移動します。明らかに、これは同じ直径を持つ2つのバイアルの開口部を必要とし、転送されるハエの量を制御することは困難です。一方、これは仕事を得るために迅速な手を必要とし、迷子のハエを逃げると、研究室や教室に問題が発生する可能性があります。すでに準備された十字架に余分な処女ハエや雄ハエを追加することは、ショウジョウバエ実験の別のルーチンタスクです。従来、ハエは余分なハエを添加する前に十字バイアルに固定されなければならない。

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プロトコル

1. ツールとアクセサリの準備

1. 先端/漏斗ストッパー
   1. 2つのスポンジプラグを取得します(プラグの直径は、ハエを転送するために使用されるバイアルの内部直径よりもわずかに大きくなければなりません)。加熱された電気はんだ付け鉄でスポンジプラグの中心に穴を開けます。
   2. 2つの1 mLピペットの先端を取得し、鋭いナイフで横方向に1つを半分にカットし、尖った端を捨てます。次に、2番目のピペット先端から尖った端の1.5cmを切ります。2つのピペットチップの残りを万能接着剤と一緒に接着し、細長いピペットチップを作ります(図1A)。
   3. 漏斗と細長いピペットチップをスポンジプラグに挿入し、先端と漏斗ストッパー(以下、TストッパーおよびFストッパーと呼ばれる)を作り、100 μLマイクロセントリフュージチューブ(図1A)でピペット先端をキャップします。
      注:じょうごの茎の長さは、プラグの高さよりも大きくなければなりません。プラグの高さ以上の短さである場合、ハエは茎の開口部から脱出します。じょうごの茎の端部は、培養培地の表面または空のバイアルの底の上に少なくとも2cm上に配置する必要があります。小さい内部茎の開口直径(<5 mm)が好ましい小さいじょうご(例えば、ディスク直径<60 m....

結果

T-およびFストッパーはあらゆる飛行の転移活動で合わせ、使用することができる簡単な用具のセットとして開発された。古い文化からいくつかの新鮮な文化にハエを移すには、新鮮なバイアルのプラグを取り外し、Fストッパーに交換し、古いバイアルのハエをタップし、すぐにプラグを取り外し、Tストッパーに置き換えます。古い食品がコンパクトである場合は、古いバイアルを反転し、Fストッパーの開口部にTストッパーの先端を挿入し、新鮮なバイアルにハエをタップすることが重要です。次に、TストッパーとFストッパーを交換し、バイアルを再プラグするが行われる。古い食品があまりコンパクトになる場合は、新鮮なバイアルを裏返し、FストッパーをTストッパーに取り付け、ハエが新鮮なバイアルに這い上がることをお勧めします。

既に準備された十字架に余分なハエを追加するには、クロスバイアルダウンでハエをタップし、そのプラグをFストッパーに交換することが重要です。次に、実験者は、立体顕微鏡下で冷やしたハエ.......

ディスカッション

本稿では、ショウジョウバエの飼育や実験に関わる基本的な活動を処理するための自家製ツールをいくつか解説する。これらのツールはシンプルですが、かなり効果的です。事実上、どのラボでもこれらのツールを簡単に作成でき、研究や教育ラボは、おそらくローカルでは利用できない既製の代替手段を見つける必要はありません。

フライトランスファーは、ショウジョウバエの実験で最も一般的な習慣と困難な作業です。残念ながら、今まで、転写ツール3、4、12、17ここに記載されていない、T-およびFストッパーが記載されている。これらの簡単なツールは、近年遺伝学のクラスで見つかった迷子のハエが少ないことにより証明されるように、ハエをはるかに簡単かつ制御可能にし、移動中に脱出するハエを少なくします。スポンジプラグは弾性なので、バイア.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ペンチ
コードレスドリルドライバー			最高速度:500 rpm
電気はんだごて
ファイル
漏斗			直径<60mm
アイスボックス
昆虫ピン
赤外線温度計			HCIYET HT-830
カフゴム手袋
ペンシル医療用
ガーゼ
マイクロ遠心チューブ			100ul
電子レンジ
パラフィルム
ペリディッシュ			内径60mm
ピペットチップ			1ml
プラスチックフィルム
プラスチックペリディッシュ			Φ空のバイアルを覆うために使用される36 mm
ピンセット
保護作業手袋
再凍結可能な硬質アイスパック			26.5×14.5回;2.5cm以上
ゴム製送風機
スナップカッター
ソフトドリンクボトル			500ml、内径約65mm
スポンジストッパー
ステンレス製スポンジ
チューブブラシ
バイアル			&ファイ;34 mm ×90ミリメートル

のペアディスクのロングメカニカルポイント