ドリオレッタゲゲンバウリ種を含むドリオリッドは、世界中の生産的な亜大陸棚システムに見られる生態学的意義の小さなゼラチン状の海洋動物プランクトンです。これらの繊細な生物を培養することの難しさは、彼らの調査を制限します。本研究では、ドリオリッド・ドリオレッタ・ゲゲンバウリを収集、飼育、維持するための栽培アプローチについて述べた。
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この記事について
サマリー
要約
ゼラチン状の動物プランクトンは、海洋生態系において重要な役割を果たしています。しかし、一般的に、生理学、成長、性感、栄養相互作用を調べることは、主に培養能力を含む方法論的な課題に起因する。これは特にドリオリッド、ドリオレッタゲゲンバウリに当てはまります。D. ゲゲンバウリは、一般的に世界中の生産的な亜熱帯大陸棚システムで発生し、多くの場合、毎日の一次生産の大部分を消費することができるブルーム濃度で発生します。本研究では、実験室ベースの研究を行う目的で、D.ゲゲンバウリを収集、飼育、維持するための栽培アプローチについて述べた。D.ゲゲンバウリおよび他のドリオリッド種は、漂流船から斜めに牽引された円錐形202μmメッシュプランクトンネットを使用して生きて捕獲することができる。水温が21°Cを下回り、未熟なゴノズーイド、成熟したハロゾイド、および大きな看護師から始まる培養物は、最も確実に確立されます。培養は、ゆっくりと回転するプランクトンホイール上の丸みを帯びた培養船で維持され、何世代にもわたって天然海水で培養藻類の食事に維持することができます。D.ゲゲンバウリの実験室培養を確立する能力に加えて、我々は、採取条件、藻類濃度、温度、および自然条件付き海水への暴露がすべて文化にとって重要であることを実証する。D.ゲゲンバウリの確立、成長、生存、および再生。
概要
海洋で最大の動物バイオマスを占める動物プランクトンは、海洋食物網の重要な構成要素であり、海洋生物地球化学サイクル1、2において重要な役割を果たしている。動物プランクトンは、生物の巨大な多様性で構成されているが、ゼラチン状と非ゼラチン性の2つのカテゴリーに大きく区別することができる:少数の中間タキサ3、4とゼラチン状。非ゼラチン性動物プランクトンと比較して、ゼラチン状の動物プランクトンは、その複雑な生命史5のために研究することは特に困難であり、その繊細な組織は捕獲および取り扱いの間に容易に損傷を受ける。ゼラチン性動物プランクトン種は、したがって、実験室で培養することが悪名高く、一般的に非ゼラチン種6と比較して研究が少ない。
ゼラチン状の動物プランクトン群の中で、世界の海洋における生態学的重要性の1つがタリア人である。サリアセアンは、サルピダ、ピロソミダ、およびドリオリダ7の命令を含むペラジックチュニケートのクラスです。ドリオリダは、総称してドリオリッドと呼ばれ、亜熱帯海洋の生産的な神経領域で高い豊富に達す....
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プロトコル
1. D.ゲゲンバウリの養殖施設の整備
注:必要なすべての材料と機器は、材料の表に記載されています。
- 1M水酸化ナトリウム(NaOH)、0.06 Mペルマンガン酸カリウム(KMnO4)溶液を調出します。この溶液を調剤するには、NaOHの400gを10L脱イオン水に溶解する。NaOH溶液にKMnO4の100gを追加し、よく混ぜます。
- NaHSO3の100gを10L脱イオン水に溶解し、よく混ぜ合わせ、0.1Mの二硫酸ナトリウム(NaHSO3)溶液を調作します。
注意:これらの試薬は、吸入した場合に呼吸器系の問題を引き起こす可能性のある刺激物です。ヒュームフードなどの換気の良い場所に置きます。皮膚との接触を避けてください。取り扱い時は、保護手袋、防護服、目の保護、フェイスプロテクションを着用してください。 - 実験室でドリオリッド培養を確立し、飼育する前に、培養瓶をきれいにし、殺菌する。
- 脱イオン水で少なくとも3回、1.9Lおよび3.8L培養瓶をすすいでください。次のクリーニング手順にキャップが含まれていないため、スクリューキャップを乾燥させてください。
- NaOH/KMnO4溶液に浸漬することにより、1.9Lおよび3.8Lガ....
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結果
ドリオリッドを収集および培養するための記載された手順に従って、図3に概説されたD.ゲゲンバウリは、その複雑な生涯の歴史を通じてD.ゲゲンバウリの培養を維持することができる(図1)。何世代にもわたってそれを維持する。D.ゲゲンバウリの栽培はここで説明するが、これらの手順は、他のドリオリッド種の栽培にも関連する必要がある。
健康で損傷のないドリオリッド動物園を捕獲するには、特殊なネットと牽引手順を適用する必要があります(図4)。硬い構造を持たない繊細な動物として、身体的損傷を引き起こす可能性のある手順を最小限に抑えるために注意が必要です。これらの要因には、乱流、圧力、およびネット、空気、気泡などのサーフェスとの相互作用が含まれます。しかし、その繊細な性質にもかかわらず、損傷を受けていないドリオリッド動物園は、開口部直径と長さ比1:5の円錐状プランクトンネッ.......
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ディスカッション
ドリオリッドを培養する能力は、過去数十年にわたって確立され、いくつかの分野での研究を支援するために使用されています。私たちの研究室での実験的研究は、摂食と成長に焦点を当てた少なくとも15の科学的研究の出版をサポートしています18,26, 生殖18,28, 食事6, 29, 生理学30, 生態学31, および生態モデリング27.
これらの繊細な動物の文化は現在、労働集約的で時間がかかりますが、ドリオリッドの栽培は可能であり、より広範なコミュニティによって引き受ければ、この生態学的理解の進歩を促進.......
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開示事項
著者は宣言するものが何もありません。
謝辞
G.Aを含め、長年にわたりこのプロジェクトに蓄積された知識を提供してくださった多くの方々に感謝しています。もともとこれらのプロトコルを開発したパフェンホーファーとD.デイベル。M.ケスターとL.ランボリーはまた、これらの手順の開発に大きく貢献しています。 N.B.ロペス・フィゲロアとロドリゲス・サンティアゴは、表1に提供されるドリオリッドの豊富さの推定値を生成しました。この研究は、米国国立科学財団賞OCE 082599、MEFへの1031263、MEFとOCE 14595010の共同プロジェクト、およびMEFとDMGへの米国海洋大気庁賞NA16SEC4810007によって一部支持されました。私たちは、R/Vサバンナの勤勉で専門的な乗組員に感謝しています。リー・アン・デレオがフィギュアを用意し、チャールズ・Y・ロバートソンが原稿を校正し、ジェームズ(ジミー)ウィリアムズがプランクトンホイールを製作
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 藻類培養チューブ(55mL滅菌使い捨てガラス培養チューブ) | 任意の | NA | 藻類培養用 |
| オートクレーブ | 任意の | NA | 藻類培養用の滅菌装置および海水用 |
| ビーカー(2Lガラス) | 任意の | NA | 希釈プランクトンネット牽引内容物の選別用 |
| バケツ(5ガロン、~20L) | 任意の | NA | プラントンネット牽引の内容物を希釈するために - 最初にカー |
| ボーイ(20 L) | Any | NA | 海水保存用 |
| ドリオリッドガラス培養ジャー(1.9L狭口ガラスジャーキャップ付) | Qorpak | GLC-01882 | 培養用容器 |
| ドリオリッドガラス培養ジャー(3.8L狭口ガラスジャーキャップ付) | Qorpak | GLC-01858 | 培養用容器 |
| 環境チャンバー(温度制御環境チャンバー) | Any | NA | プランクトンホイールと培養メンテナンスに対応するため |
| 47mmフィルター用ろ過装置 | 任意の | NA | 培養用海水ろ過用 |
| ガラスマイクロファイバーフィルター、47mm | Whatman | 1825-047 | 培養用海水ろ過用 |
| ガラスピペット(ホウケイ酸ガラスピペット(ガラス管)、OD10mm、内径8mm、壁厚1mm) | サイエンスカンパニー | NC-10894 | カスタムカット&エッジ磨かれた |
| ホースクランプ、ステンレス鋼、#104 (178 mm) | 任意の | NA | プランクトンホイール |
| Isochrysis galbana株 | CCMP1323 国立海洋藻類・微生物叢センター(NCMA) | 株 CCMP1323 | ドリオリド培養物の給餌用 |
| L1 メディアキット、50 L | 国立海洋藻類・微生物叢センター(NCMA) | MKL150L | 藻類の培養用 |
| ランプ(調整可能なアーム付き蛍光灯テーブルランプ) | 任意の | NA | 瓶やビーカーのドリオリッドを照らすため |
| 照明付き温度制御インキュベーター | 任意の | NA | 藻類培養用 |
| マイクロピペットと滅菌チップ(0-20 µL、20-200 µl, 200-1000 &マイクロ;l) | 藻 | 類培養プラン | |
| クトンネット(202&マイクロ;m 0.5 m、長さ5:1)とタラエンドリングと 4 L水族館タラ端 | Sea-Gear Corporation | 90-50x5-200-4A / BB | 生きているdoliolidsを収集するため(図4を参照) |
| プランクトンホイール | NA | NAカスタムビルド(図2を参照) | |
| プラスチックラップ | 任意の | NA | ドリオリッド培養瓶の蓋の内側を覆うために |
| 過マンガン酸カリウム | フィッシャーサイエンティフィック | P279-500 | やガラス製品を |
| 洗浄するための試薬Rhodomonas sp. strain CCMP740 | National Center for Marine Algae and Microbiota (NCMA) | strain CCMP740 | ドリオリド培養物の給餌用 |
| ゴムチューブ | NA | NA | プランクトンホイールに培養瓶を保持するため(タイゴンチューブから作ることができます) |
| 亜硫酸水素ナトリウム | Fisher Scientific | S654-500 | 瓶やガラス器具の洗浄用試薬 |
| 水酸化ナトリウム | ッシャー科学的な | BP359-212 | 洗浄瓶やガラス器具用の試薬 |
| 滅菌血清ピペット (1 mL、5 mL、10 mL、25 mL) | 任意の | NA | 藻類培養用 |
| Thalassiosira weissflogii株 CCMP1051 | 国立海洋藻類微生物叢センター(NCMA) | 株 CCMP1051 | ドリオリド培養の給餌用 |
| 組織培養フラスコ(250 mL) | 任意の | NA | 藻類培養用 |
参考文献
- Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
- Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northe....
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