インビタル顕微鏡で評価されたマウスにおけるクレマスター筋の白血球浸潤

Simon Alexander Kranig; Trim Lajqi; Raphaela Tschada; Maylis Braun; Navina Kuss; Johannes Pöschl; Hannes Hudalla

doi:10.3791/60509

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方法論記事

インビタル顕微鏡で評価されたマウスにおけるクレマスター筋の白血球浸潤

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DOI:

10.3791/60509

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2020年4月15日

Simon Alexander Kranig^*¹ , Trim Lajqi^*¹ , Raphaela Tschada¹ , Maylis Braun¹ , Navina Kuss¹ , Johannes Pöschl¹ , Hannes Hudalla¹

¹Department of Neonatology, Heidelberg University Children's Hospital

^* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

ここでは、マウスクレマスター筋の毛細管後小胞に対して生体内顕微鏡を行う方法を示す。炎症および敗血症の異なるモデル、特にケモカインおよびサイトカインによって誘発されるものに一般的に適用され、我々は誇張された筋白血球浸潤を伴うムスコロパシーの研究におけるその関連性を強調する。

要約

インビボでの白血球採用カスケード内の生理学的および病態生理学的プロセスを監視するために、生体内顕微鏡(IVM)が広く使用されています。現在のプロトコルは、マウスの無傷の生物内の骨格筋由来組織における白血球のリクルートに至る白血球内皮相互作用を可視化する実用的で再現可能な方法を表す。このモデルは、顆粒球活性化と疾患におけるその役割に焦点を当てた研究のすべての分野に適用可能です。

私たちは、メソッドをガイドし、潜在的な落とし穴や技術的な困難を強調するために、ステップバイステッププロトコルを提供します。このプロトコルは、実験設定および必要な材料、マウスの麻酔、クレマスター筋の解剖、気管および頸動脈のカヌレーション、IVM記録およびオフライン分析をカバーする。接着白血球、転がりフラックス(RF)および転がりフラックス分率(RFF)のようなデータフォーマットは詳細に説明され、適切な適用が議論される。ジストロフィン欠損mdxマウスの代表的な結果は、結果セクションに提供される。

IVMは、インビボの設定で白血球の採用を評価するための強力なツールです。しかしながら、例えば内皮および白血球機能を解いて、流れチャンバ実験のようなex vivoのセットアップとの組み合わせを必要とするかもしれない。さらに、対象となる動物の遺伝的背景は、ベースラインの採用に大きな影響を与え、提供されるプロトコルの個々の微調整を必要とする。その制限にもかかわらず、IVMは、インビトロ所見を生きている脊椎動物生物に容易に翻訳するためのプラットフォームとして機能する可能性があります。

概要

インビタル顕微鏡(IVM)は、白血球生物学の分野で一般的に適用されるツールです。白血球のリクルートは、白血球の捕獲、圧延および接着によって開始された明確に定義された事象のカスケードに続き、最後に白血球の炎症部位へのトランスマイグレーションおよび飛散^1.各ステップは、様々なケモカイン(例えば、IL-8/CXCL8)、受容体(例えば、LFA-1、Mac-1)および対応する内皮細胞接着分子(例えば、ICAM-1、VCAM-1およびE-Selectin)2、3によって媒介および制御される。²^,³異なる調節部位の相互作用により、進行糖化末端製品の受容体様に白血球採用カスケードの制御因子およびメディエーター(RAGE)、細胞間接着分子1(ICAM-1)、C-X-Cモチーフリガンド(CXCL)1/2およびそれらの受容体CXCR2をIVM4、5、6、7、8、9を用いて発見した。⁴^,⁵^,⁶^,⁷^,⁸^,⁹