マウスの不感性リンパ管を縫合することによりリンパ流を遮断する

サマリー

尿管性リンパ管の外科的縫合によってリンパの流れを遮断するプロトコルが提示される。

要約

リンパ管は、組織液バランスを維持し、抗原、サイトカイン、細胞をリンパ節(LNs)に輸送することで免疫保護を最適化する上で重要です。リンパ管の機能を研究する際のリンパ流の中断は重要な方法である。マウスフットパッドからポピトリリンパ節(pRN)までの不浸透性リンパ管は、リンパがpRNに排出される唯一の経路として明確に定義されている。これらの不透過性リンパ管を縫合すると、リンパのリンパ流を選択的に防ぐことができます。この方法は、排水pLN、気泡性リンパ管、ならびに領域の周りの他のリンパ管におけるリンパ内皮細胞への損傷を最小限に抑えてリンパ流の干渉を可能にする。この方法は、LNにおける高内皮小胞(HEV)およびケモカイン発現にリンパ管がどのように影響し、機能的なリンパ管がない場合にLNを取り巻く脂肪組織をリンパがどのように流れるかを研究するために使用されてきた。リンパ機能の重要性の認識が高まる中、この方法は、LN微小環境および免疫応答を調節するリンパ管の機能をさらに解明するためのより広範な応用を有するであろう。

概要

リンパ系の空間組織は、細胞外液を効率的に除去し、抗原および抗原提示細胞(APC)を排出するLNsに輸送するための構造的および機能的なサポートを提供する。初期リンパ管(リンパ管管とも呼ばれる)は、細胞間の不連続な接合により透過性が高く、周囲の細胞外空間から液体、細胞、および他の物質を効果的に収集しやすくする^1。最初のリンパ管は、細胞間の接合が緊密で、連続的な基盤膜、リンパ筋のカバレッジを有するリンパ管を採取する。リンパ管の採取は、採取したリンパを排水中のLUNに輸送し、最終的にリンパを循環^2,3に戻す役割を担^う。リンパを排水LNに推進する集水性リンパ管は、不発泡リンパ管^{4、5、6、7}である。発泡性リンパ管の閉塞は、リンパ流の機能を研究する際に有用な技術であるLNsへのリンパ流を遮断する可能性がある。

これまでの研究では、リンパ流は抗原およびAPCを輸送するだけでなく、LN恒常性を維持する上で重要な役割を果たしていることを示している。組織由来のAPCは、典型的には....

プロトコル

すべての動物の仕事は、制度的および政府の倫理と動物の取り扱い委員会によって承認される必要があります。 これは非生存手術です。

1. 材料の準備

1. 70mLのエタノール70mLを30mLの無菌水と混合して、70%エタノールの100mLを調製します。手術前にすべての手術ツールをオートクレーブし、殺菌を維持するために手術前と手術中に70%エタノールでツールを維持します。
2. 注射装置を準備します。
   1. ポリエチレンチューブ(直径0.28mm)を30cmカット。30 G x 1/2 針の先端 (針 A) をポリエチレンチューブの一端に接続します。慎重に別の30 G x 1/2針(針B)を取り外し、壊れた側をポリエチレンチューブのもう一方の端に接続します。
   2. 1 mL 結核シリンに針Aを取り付けます。
      注:このポリエチレンチューブの場合、チューブ内の1.6 cmの流体は1 μL²⁰に相当します。
3. 10:1ケタミン/キシラジン混合物(10 mg/mLケタミンと1mg/mLキシラジン)を塩分(静菌0.9%[w/v]塩化ナトリウム)で調製します。使用前にソリューションを新たに準備してください。

2. 手術のための動物の準備

結果

リンパ管縫合は、リンパ管の分子生物学が理解される前にリンパ流の機能を研究する重要なツールとして役立った以前の研究15、16、17、19で使用されてきた。リンパ流を遮断するとLN恒常性が遮断され、これは^{、LN15、16、17}への最適なリンパ球ホーミングに必要な臨界遺伝子発現を失うことにつながる。それ以来、リンパを持って移動するDCがLN¹³にホーミングHEV遺伝子発現プロファイルおよびリンパ球を維持する上で重要であることを実証するのにさらに20年かかりました。リンパ流によって提供されるせん断応力は、LNにおけるケモカイン発現を刺激するために重要である。リ.......

ディスカッション

リンパ流を遮断することは、健康で病気の状態でLNへの抗原送達を操作する広範な用途を有するであろう。この方法を用い、連続リンパ流がリンゲンの流出における免疫応答を調節する方法を研究するために、抗原送達のタイミングを制御することができる。リンパ流中断のこの方法は、リンパがLNにおける細胞区画化、細胞活性化、細胞移動、および細胞間相互作用に与える影響を研究するためにも使用することができる。

ヒトジフテリア毒素受容体(DTR)をリンパ管内皮細胞(Flt4-cre-dtr)で特異的に発現するマウスが開発されている。これらは、リンパ管を特異的に枯渇させるためにリンパ管を枯渇させるためにリンパ管機能²²を研究するために使用することができる。DTの投与は、リンパ管に沿って、LNでリンパ内皮細胞を殺す。リンパ性内皮細胞の枯渇は、リンパ機能を研究するために、局所的または全身的にリンパ流を完全に消耗させることができる。この方法は、組織に重要な流体蓄積を引き起こし、リンパ浮腫およびリンパ機能を研究するための素晴らしいモデルとして機能します。.......

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.9%塩化ナトリウム生理食塩水	Baxter	JB1323
100%エタノール	グリーンフィールドグローバル	カルガリーのカルガリー大学流通
脱毛クリーム	Nair		Nairセンシティブフォーミュラ脱毛crèスウィートアーモンドオイルとベビーオイル、200mlで私。または同様の製品。
エバンスブルー染料	Sigma Life Science	E2129-10G	エバンスブルー染料1mlに対して、0.1gのエバンスブルーを10mlPBSに加えます。Evens Blue 溶液は 0.22 mm フィルターでろ過され、1 ml アリコートで滅菌保たれます。
<ストロング>フルオレセインイソチオシアネート異性体I.(FITC)	シグマライフサイエンス	F7250-1G
<ストロング>プス・フォーセプス・デュモン #3		500337
5/ストロング>	WPI	500233
<ストロング>インジェクション装置			ポリエチレンチューブの一端を30G×に接続します。½針。1mlのTB注射器を針に取り付けます。針軸を別の30Gから外します。½針。30Gの鈍い端を挿入します×½ニードルシャフトをチューブのもう一方の端に差し込みます。このチューブの内径は0.28mmです。したがって、チューブ内の1.6cmの流体は1μlです。
インスリン注射器	Becton Dickinson and Company(BD)	329461
IRIS鉗子ストレート	>WPI	15914
IRISはさみ	WPI	14218-G
Ketamine	Narketan	DIN 02374994	ケタミンとキシラジンの供給者は、通常、制度的および政府の規制下にあります。
<強い>針(26Gx3/8)	ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー(BD)	305110
<強い>針(30Gx1/2)	ベクトン・ディッキンソン・アンド・カンパニー(BD)	305106
<強い>パトン・ニードルホルダー	ROBOZ	RS6403	ストレート、ロックなし;鋸歯状
<強>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)	シグマライフサイエンス	P4417-100TAB
<強力>ポリエチレンチューブ	ベクトンディキンソンアンドカンパニー(BD)	427401
<強力>サージカルテープ(1.25cmx9.1m)	トランスポア	1527-0
<強力>サージカルテープ(2.5cmx9.1m)	トランスポア	1527-1
<ストロング>縫合糸	デイビス&ゲック シアナミド カナダ	11/04	0.7 メートル モノフィラメント ポリプロピレン
<ストロング>シリンジ (1ml)	ベクトン ディキンソン アンド カンパニー (BD)	309659
<ストロング>バンナス ハサミ	ワールド プレシジョンズ (WPI)	14122-G
キシラジン	Rompun	DIN02169606	ケタミンおよびキシラジンの供給者は、通常、制度的および政府の規制下にあります。
<強力>装置
<強力>解剖顕微鏡	オリンパス		リンパスS261(522-STS OH141791)光源付き:オリンパスハイライト3100
<強力>共焦点顕微鏡	ライカ		SP8

サービスUN1170。プス・デュモン <#5プセプス・デュモン #オ