アスティアナックスメキシカンスにおける最大繁殖と産卵の昇温温度変化

Summary

この記事では、発達および進化研究の新たなモデルであるメキシコの四元 アスティアナックス・メキシカンスで最大産卵を刺激するための、インクリメンタル温度体制の基本的な実験室条件とプロトコルを概説する。

Abstract

メキシコのテトラ、 アスティアナックス・メキシカンスは、開発と進化の研究のための新興モデルシステムです。この種における目の表面(表面魚)と盲目の洞窟(洞窟魚)のモーフの存在は、形態学的および行動進化の根底にあるメカニズムを尋問する機会を提供する。洞窟の魚は、新しい建設的で回帰的な形質を進化させてきた。建設的な変化には、味覚芽と顎、横線感覚器官、体脂肪の増加が含まれる。回帰的な変化には、目の喪失または減少が含まれる。メラニン色素沈着,学校教育行動,攻撃性,睡眠これらの変化を実験的に尋問するには、大量の産卵胚を得ることが重要である。元の A.メキシカンス 表面魚と洞窟魚が1990年代にテキサス州とメキシコで収集されて以来、その子孫はジェフリー研究所で毎月2回多くの胚を繁殖させ、産卵するように日常的に刺激されてきました。繁殖は食物の豊富さと品質、明暗サイクル、温度によって制御されていますが、増分温度変化が最大産卵を刺激する上で重要な役割を果たしていることが分かっています。繁殖週の最初の3日間の温度が72°Fから78 °Fに徐々に上昇すると、2〜3回連続で産卵日が最大の高品質胚を提供し、その後、産卵週の最後の3日間に78°Fから72°Fに徐々に温度が低下します。このビデオに示す手順は、増分温度刺激産卵のための実験室の繁殖週の前および間のワークフローを概説する。

Introduction

テレオスト・アスティアナックス・メキシカンスは、目の表面住居(表面魚)の形をしており、多くの異なる盲目の洞窟住居(洞窟魚)が^1、2を形成しています。洞窟の魚は永遠の暗闇の中で進化し、食品の限界の下で、新しい建設的で回帰的な形質^{の出現をもたらしました 3}.建設的な特徴は、味覚芽と顎のサイズの増加、横線の感覚器官、および脂肪の埋蔵量を含む。回帰的な特徴には、メラニンの色素沈着、目、睡眠、学校教育、攻撃性などの行動の喪失または減少が含まれます。アスティヤナックス系の属性は、2つの形態間の完全な生殖能力であり、定量的形質遺伝子座(QTL)マッピングを使用して、建設的かつ回帰的な進化^{4、5、6、7}に関連するゲノム領域を決定することを可能に^する。A. メキシカンスは、実験室で頻繁に産卵するように誘導することができるので、開発を研究するための有利なシステムを提供しています。A.メキシカンスの胚は半透明で、ゼブラフィッシュよりもわずかに大きく、大量に産生され、....

Protocol

この手順は、メリーランド大学の施設動物ケアガイドラインによって承認されています, カレッジパーク (現在 IACUC 469 #R-NOV-18-59;プロジェクト 1241065-1)。

図 1.繁殖週と非繁殖週の間のカレンダー。この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

1. 月曜日

1. 午前9時から午前10時に、水のテストと手順1.1.1-4を以下に実行します。
   1. 温度計を使用して、部屋、タンク、およびリザーバの温度を記録します。
   2. アンモニア、硝酸塩、硝酸塩のレベルを、比色テストキットで記録します。
   3. モニター・システムからのpHと、色測定テスト・キットを記録します。

Results

私たちは一般的に、サンルイスポトシのナシミエント・デル・リオ・チョイでもともと収集された表面魚の子孫を繁殖させ、産卵します。 メキシコ(リオチョイ表面魚)とサンソロモンスプリングスのバルモラ州立公園、テキサス州(テキサス州表面魚)、メキシコのタマウリパス州のクエバ・デ・エル・パチョン(パチョン洞窟魚)、クエバ・デ・ロス・サビノス(ロス・サビノス洞窟魚)とソタノ・デ・ラ・ティナハ(ティナハ洞窟魚)メキシコ。

繁殖週を通して、様々なタンクのデータが収集されます。各タンクで産卵した胚は、量と品質のために観察される。数量は、高、中、または低として記録されます。ドロップされた胚の数が500を超える場合は高い量が記録され、投下された胚の数が200~500の間であれば培地の量が記録され、減少した胚の数が200未満の場合は低い量が記録される。品質は、同様に高、中、または低として記録されます。ボウル内の胚の75%以上が生きている場合は高い品質が記録され、ボウル内の胚の約25%から75%が生きている場合は培地の品質が記録され、胚の25%未満が生きている場合は低い品質が記録される。次に、数量と品質のこれ.......

Discussion

アスティアナックスメキシカンスは、頻繁に発生し^{、実験室1、2}で容易に飼育することができる新しい生物学的モデルです。私たちは、A.メキシカン洞窟魚の進化的変化の根源となる発達メカニズムに興味を持っているので、胚の生産と使用は、私たちの研究目標に不可欠です。魚の成虫ストックを維持する主な目的は、発達実験や成虫飼育ストックの補充のために使用する胚と若い稚魚の生産です。時折、成人は生理学、行動、または遺伝子実験にも使用される。遺伝子実験では、ペアの交配または体外受精¹⁸が必要です。産卵行動¹⁹を示す体外受精動物については、タンクから除去され、温度誘発性繁殖体制の間に十字架に使用され得る。

研究のための胚の質と量を最大化するために、繁殖週の前に注意を必要とする運用上の詳細があります。タンク内の魚を操作するときは、指定された手持ちネットのみを使用し.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Blackworms	Eastern Aquatics、ペンシルバニア州ランカスター	なし
繁殖ネット	カスタムメイド
ブラインシュリンプの卵	AquaCave Lake Forest、イリノイ州。	なし
比色試験キット	Petco	SKU:11916	API 淡水pH試験キット
卵黄フレーク	ペンテア、ミネソタ州ミネアポリス	なし
フィンガーボウル	カロライナ 生物学的供給	741004	培養皿、4.5 インチ、250 mL
ハンドヘルドネット	ペットショップ
インキュベーター	ッシャーサイエンティフィ	51-029-321HPM	405 L
インスタント オーシャン シー ソルト	スペクトラム ブランド、バージニア州ブラックスバーグ	なし
メチレン ブルー	シグマ - アルドリッチ、セントルイス、ミズーリ	M9140
パスツールピペット	フィッシャー サイエンティフィ	13-678-20	5.75 インチ
ネットソーキングソリューション	任意のペットショップ
Nutrafin Cycle	Amazon	なし	バクテリアブースト
ライブフィード用冷蔵庫	任意のソース
実体顕微鏡	任意のソース
温度計	任意のソース
テトラトロピカルクリスプ	スペクトラムブランド、バージニア州ブラックスバーグ	なし