高解像度超音波は、妊娠、妊娠年齢、妊娠喪失の状態を決定することによって、時限妊娠マウスを必要とする実験を合理化するのに役立ちます。ここで提示されるは、マウスの妊娠だけでなく、妊娠を模倣する可能性のある潜在的な落とし穴(画像アーティファクト)を評価する方法を説明するためのプロトコルです。
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この記事について
サマリー
要約
マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセスに適した哺乳類動物モデルである。発生生物学では、多くの場合、様々な時点で進化するプロセスを決定するために、段階的な妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効率的な繁殖には、時効妊娠の評価が必要です。最も一般的には、マウスは一晩で交配され、膣プラグの存在が決定される。しかし、この技術の正の予測値は最適ではなく、マウスが本当に妊娠しているかどうかを知るのを待つ必要があります。高解像度超音波バイオ顕微鏡は、イメージングのための効果的かつ効率的なツールです: 1) マウスが妊娠しているかどうか;2)マウスが到達した妊娠段階。3)子宮内損失があるかどうか。胚および胎児に加えて、研究者はまた、これらを重力子宮と間違えないように、腹腔内の一般的な人工物を認識しなければならない。この記事では、例示の例と共に、イメージング用のプロトコルを提供します。
概要
マウスは、多くのヒト疾患および生物学的プロセス1、2、3、4に好ましい哺乳類モデルである。発生生物学の研究では、多くの場合、様々な時点点5、6、7、8で進化するプロセスを決定するために、段階的妊娠マウスが必要です。さらに、モデルマウスの最適かつ効果的な繁殖は、特に研究者が遺伝子変異が発症に及ぼす影響を研究している場合に、時限妊娠の評価を必要とする。典型的には、研究者は一晩ヘテロ接合マウスを交尾し、翌朝早く膣プラグを探し、妊娠が9を続けることを望む。子宮内損失の決定は、通常、遺伝子型のメンデリア比の新生児ごみをチェックし、様々な妊娠段階で妊娠中のマウスを犠牲にして後方に働き、胚を回復させることから始まります。研究者は、体重増加を陽性妊娠10、11の指標として決定す....
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プロトコル
このプロトコルのすべての手順は、国立衛生研究所が発行し、ニューヨーク大学グロスマン医学部の施設動物ケアと使用委員会によって承認された実験動物のケアと使用のためのガイドに従います。
1. 時を取った妊娠のためのマウスの交配
- ケージ内の適切なメスマウス(通常はヘテロジゴテ)と適切な雄マウス(通常はヘテロジゴテ)を一晩の交配に対してペアリングする。
- 翌朝マウスを分離します。あるいは、メスマウスと雄マウスを継続的に交尾させ、妊娠の可能性を高める。
注:しかし、正確にタイミングの高い妊娠は代替手段では保証できず、特に疾患プロセスが子宮内成長遅滞をもたらす場合には、超音波によるマウス胚のステージングは明らかではない。遺伝子変異体を運ぶ胚が小さいと仮定される場合は、より大きな野生型のリッターメイトを探して妊娠年齢を測定します。- オプション: 膣プラグを探します。膣プラグがない場合、メスのマウスは嵌合されていません。膣プラグがある場合、女性のマウスが妊娠していない可能性が依然として高い。
- E0.5として一晩の交配の翌日の時間。
- E6.5~E.8.5でイメージングを行い、妊娠を確認し、マウスが妊娠していない場合はマウスを再嵌合します(ステップ1.1を参照)。
注:この段階では、メスのダムは明らかに目に妊娠していません。したがって、超音波画像は早期の決定および再交....
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結果
このプロトコルは、研究者がマウスが妊娠しているかどうかを自信を持って判断することを可能にします, 初期段階を含みます, 妊娠ダムを犠牲にすることなく、明らかな出生前胚または胎児の損失があるかどうかを判断します.このプロトコルは、遺伝子操作されたマウスを繁殖させるときに特に有用である。典型的には、ホモ接合子孫を生み出すためにヘテロ接合xヘテロ接合は、出生前致死性を引き起こす適切な発達の失敗につながる。図1は、胚が徐々に死んでから、妊娠中期まで再形成される代表的な状況を示している。図2は、分岐を通して膣を追って左右の子宮角を見つける方法を示しています。図3、図4、図5、図6、図7、ビデオ3、およびビデオ3
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ディスカッション
画像化における最も重要な最初のステップは、膣を識別し、次に左右に子宮角の分岐を決定することです。各子宮ホーンに従うことによって、イメージャーは子宮として腸のループを誤って識別する可能性が低い。さらに、腸の外観の変化を理解することは重要です(便の有無にかかわらず)これらは子宮と区別する必要があります。時折、腸ループの便「ボール」は、グラビッド(妊娠)子宮を模倣する可能性があります。他の著者は、マウス胚発生の妊娠診断とステージングの診断を説明しているが、再ソード胚20の検出を含む19、この研究は、グラビッドマウス子宮をイメージングするステップと潜在的な落とし穴を概説する最初のものである。
画像は、妊娠初期またはグラビド子宮を模倣する可能性のある人工物、または子宮および胚のイメージングを妨げる可能性のある人工物を認識しなければならない。子宮の角に横向きに続.......
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開示事項
著者らは開示するものは何もない。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 脱毛クリーム | |||
| 、エタノール、70% | |||
| ファークリッパー、 | |||
| ガーゼまたはキムワイプ、 | |||
| イソフルラン | |||
| 、医療用酸素(オプション)、 | |||
| 医療用テープ | |||
| マウスイメージングシステム(麻酔セットアップとイメージングプラットフォームを含む) | Fujifilm Visual Sonics | Various | 40 MHz中心周波数超音波トランスデューサープローブを備えた任意のシステム |
| カミソリブレード(安全カミソリではありません) | |||
| スケール(マウスの体重を量る) | |||
| 超音波ジェル |
参考文献
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M.
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再版と許可
