私たちは、2つの登山繊維依存連想学習タスク中の動物の行動を追跡するための単一のプラットフォームを開発しました。低コストの設計により、繊維関連小脳活動の登山に向けられた光遺伝学的またはイメージング実験との統合が可能になります。
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私たちは、2つの登山繊維依存連想学習タスク中の動物の行動を追跡するための単一のプラットフォームを開発しました。低コストの設計により、繊維関連小脳活動の登山に向けられた光遺伝学的またはイメージング実験との統合が可能になります。
プルキンエ細胞への上昇線維入力は、小脳依存性連想学習に不可欠な有益なシグナルを提供する。頭部固定マウスでこれらのシグナルを研究することは、イメージング、電気生理学的、および光遺伝学的方法の使用を容易にする。ここでは、ランニングホイール上で自由に位置決めする頭部固定マウスの連想学習を追跡できる低コストの行動プラットフォーム(〜$ 1000)が開発されました。このプラットフォームには、まばたきコンディショニングと遅延触覚驚愕条件付けの2つの一般的な連想学習パラダイムが組み込まれています。動作はカメラと検出器によるホイールの動きを使用して追跡されます。コンポーネントとセットアップについて説明し、トレーニングとデータ分析のための詳細なプロトコルを提供します。このプラットフォームは、光遺伝学的刺激および蛍光イメージングの組み込みを可能にする。この設計により、単一のホストコンピュータが複数のプラットフォームを制御して、複数の動物を同時に訓練することができます。
パブロフ的条件付けは、条件付け応答を惹起する刺激間の1秒未満の関連を、小脳依存性学習をプローブするために長い間使用されてきた。例えば、古典的な遅延アイブリンクコンディショニング(DEC)では、動物は、常に反射的なまばたきを誘発する無条件刺激(米国;例えば、角膜に適用される空気のパフ)と繰り返し対になったときに、中立的な条件刺激(CS;例えば、光の閃光または聴覚的トーン)に応答して、タイミングよく保護点滅することを学び、 CSの終わりまたはその近くに来る。学習された応答は条件付き応答 (CR) と呼ばれ、反射応答は無条件応答 (UR) と呼ばれます。ウサギでは、小脳特異的病変がこの形態の学習を混乱させる1,2,3,4。さらに、Purkinje細胞複合体スパイクは、それらのクライミングファイバー入力5によって駆動され、適切なタイミングのCRの獲得に必要な6,7および十分な8,9信号を提供する。
より最近では、登山繊維依存性連想学習パラダイムが頭部固定マウスのために開発されている。DECは、この構成10,11に適合した最初の連想学習パラダイムであった。頭部固定マウスにおけるDECは、小脳領域11、12、13、14、15、16、17および回路素子11、12、13、14、15、18、19を同定するために用いられてきた タスクの獲得と消滅に必要です。このアプローチはまた、タスクパラメータの細胞レベルの生理学的表現が学習とともにどのように進化するかを実証するためにも使用されている13,15,16。
まばたきに加えて、遅延驚愕触覚条件付け(DTSC)パラダイムは、頭部固定マウス20のための新規連想学習タスクとして最近開発された。概念的にはDECと同様に、DTSCは、米国、URとして驚愕反射21,22に従事するのに十分な強度で顔へのタップを伴う中立的なCSの提示を含む。DTSCパラダイムでは、URとCRの両方が車輪上の後方移動として読み取られます。DTSCは現在、連想学習が小脳活動と遺伝子発現のパターンをどのように変えるかを明らかにするために使用されています20。
本研究では、DECやDTSCを1つのプラットフォームで柔軟に適用する手法を開発した。刺激属性とプラットフォーム属性を図 1に図式化します。この設計には、カメラで動物の行動を追跡する機能と、ホイール上のマウスの動きを追跡するロータリーエンコーダーが組み込まれています。データロギングとトライアル構造のすべての側面は、ペアのマイクロコントローラ(Arduino)とシングルボードコンピュータ(SBC;ラズベリーパイ)。これらのデバイスは、提供されたグラフィカルユーザーインターフェイスを介してアクセスできます。ここでは、セットアップ、実験の準備と実行のためのワークフローと、データ視覚化のためのカスタマイズされた分析パイプラインを紹介します。
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ここで説明する動物のプロトコルは、プリンストン大学の動物ケアおよび使用委員会によって承認されています。
1. SBC のセットアップ
2. 刺激金具の配線と組立ステージ
3. 動作実験の準備と実行
4. データのエクスポートと分析
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DEC実験・解析のワークフロー
適切な実験パラメータ選択は、遅延アイブリンクコンディショニング(DEC)トレーニングを成功させるために重要です。ここで示すデータでは、GUI を使用して 350 ミリ秒の CS 期間と 50 ミリ秒の US 期間を選択しました。このペアリングは、300msの刺激間間隔をもたらす:低振幅CR産生10 を防止するのに十分な長さと、不十分な学習またはトレース条件付けの体制に入ることを避けるのに十分な短い、追加の脳領域11に関与するプロセス。試行間隔は、ITIの低フィールドと高フィールドを使用して、5〜15秒の範囲から均一にランダムに選択されるように設定しました。試験間間隔のランダム化により、動物被験者はCSと米国以外のタイミングの手がかりをタスクのパフォーマンスに使用することが不可能になります。
CSまたはUSのいずれかを省略した試験を含めることで、訓練された動物においてもCRおよびUR運動学の評価が可能になる。ユーザは、...
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ここで概説する関連プロトコルを備えたプラットフォームは、2つの感覚連想学習タスクにおける動物の行動を確実に追跡するために使用することができる。各タスクは、クライミングファイバー経路を通る無傷の通信に依存します。ここで説明する設計では、小脳応答の学習と記録/摂動を容易にする要素を組み込んでいます。これらには、自由な移動11、18 、ならびに頭部固定を可能にするホイールが含まれる。このホイールは、マウス被験者が自由に位置決めすることを可能にし、これはDEC取得18にとって重要であることが観察されている。マウスの頭部固定により、研究者は、他のモデル種や自由に動く条件下での使用がより困難な遺伝的、電気生理学的、イメージング的、および光遺伝学的アプローチを利用することができます12。これらの各アプリケーションに設計を使用しました。マイクロコントローラ上で実行されるソフトウェアは、多光子取得または光遺伝学的刺激との同期のためのタイミング信...
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著者らは、開示する利益相反はありません。
この研究は、国立精神衛生研究所NRSA F32 MH120887-03(G.J.B.へ)およびR01 NS045193およびR01 MH115750(S.S-H.W.へ)からの助成金によって支援されています。DECセットアップの最適化に役立つ議論をしてくれたBas Koekkoek博士とHenk-Jan Boele博士、DTSCセットアップの最適化に役立つ議論をしてくれたYue Wang博士とXiaoying Chen博士に感謝します。
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