眼表面疾患の治療のための多血小板血漿ライセート

サマリー

血小板溶解物は、眼の表面疾患の治療のための新たなツールを表しています。ここでは、血小板ドナーから採取した血小板溶解液の調製、分注、保存、および特性評価の方法を提案する。

要約

さまざまな眼の表面疾患は、血液由来の点眼薬で治療されます。それらの使用は、眼の表面再生を促進する代謝産物および成長因子含有量のために臨床診療において導入されている。血液ベースの点眼薬は、さまざまな供給源(すなわち、全血または血小板アフェレーシスの寄付)から、および異なるプロトコル(例えば、異なる希釈および凍結/解凍サイクル)で調製することができる。この変動性は、臨床プロトコルの標準化を妨げ、その結果、臨床効果の評価を妨げます。方法論的手順を詳述し、共有することは、共通のガイドラインの定義に貢献する可能性がある。過去数年間、同種異系製品は、より高い有効性基準を保証するため、自家治療の代替として普及しています。その中で、多血小板血漿溶解物(PRP-L)点眼剤は簡単な製造手順で調製されます。イタリアのAUSL-IRCCSディレッジョエミリアの輸血医学ユニットでは、PRP-Lは血小板アフェレーシスの提供から得られます。この製品は、最初に0.9%NaClで0.3 x 10⁹ 血小板/ mL(1 x 10⁹ 血小板/ mLの平均濃度から開始)に希釈されます。希釈された血小板は凍結/解凍され、その後、破片を除去するために遠心分離されます。最終容量を1.45 mLアリコートに分割し、-80°Cで保存します。 患者に調剤される前に、点眼薬は無菌性についてテストされます。患者は血小板溶解物を-15°Cで最大1か月間保存できます。成長因子組成も無作為に選択されたアリコートから評価され、平均値がここで報告されます。

概要

血液由来製品は、創傷ケア¹、顎顔面および整形外科手術、およびドライアイ疾患(DED)³などのさまざまな眼表面疾患²の治療に広く使用されています。DEDでは、涙液膜の恒常性は、涙液の生成および眼の表面の完全性に関与するさまざまな要因の異常な機能の結果として損なわれます^4,5。

DEDは、原因と重症度の不均一性を特徴とします^6,7,8 そして、老化、性別9、コンタクトレンズ、局所または全身薬10、またはシェーグレン症候群¹⁰のような既存の状態などのさまざまな要因の結果である可能性があります。軽度の症状にもかかわらず、DEDは世界中の何百万人もの人々に影響を及ぼし、生活の質と医療システムにも影響を及ぼします⁶....

プロトコル

成長因子の定量的評価に使用されるPRP-Lは、AUSL-IRCCSディレッジョエミリアで実施され、2019年1月10日にエリアヴァスタエミリアノルド倫理委員会によって承認された、再生目的のPRP製品の特性評価に関するより広範な研究内で収集されました(プロトコル番号2019/0003319)。ドナーは、ヘルシンキ宣言に従ってインフォームドコンセントを行いました。ドライアイ症候群の症状を監視するために臨床医によって日常的に使用されている眼表面疾患指数(OSDI)質問票の集計された匿名データを収集するために倫理的承認は必要ありませんでした。図 1A は、従ったプロトコルの概要を示し、 図1B の写真は、手順の主なステップを示しています。

1.多血小板血漿(PRP)収集

1. PRPアフェレーシス
   1. このプロトコルでは、イタリアの法律に従って血小板ドナーを選択します:血小板ドナーは18〜65歳で、正常圧と血球数のパラメーターと血小板数が180 x 10⁹ 血小板/ L²³以上である必要があります。適格なドナーは、寄付前1週間以内に抗血小板薬または抗凝固薬を服用することはできません。
   2. 製造業者の指示および国内法

結果

血清由来の点眼薬(眼表面疾患の治療に最も頻繁に使用される血液ベースの製品)を使用する理論的根拠は、循環血小板にほぼ完全に由来するGFの含有量にあります。PRPには、末梢血血清と比較して有意に多くの血小板(およびその結果として血小板由来GF)が含まれており、0.15 x 10 9-0.45 x^{10 9} PLT / mLの範囲です。.イタリアの法律によると、PRP単位の血小板数は少なくとも0.9 x 10 9-1^{x 10 9} PLT / mLである必要があります。したがって、血清点眼薬の有効性をシミュレートする製品を得るには、ライセート調製前にPRPを生理的血小板含有量に希釈する必要があります。

それにもかかわらず、組織修復は主に血小板由来GFによって引き起こされるため、PLTカウントだけでは眼表面疾患の効果的な治療に誤解を招く可能性があります。血液由来の点眼薬で最も一般的に治療される眼疾患であるDEDでは、涙液膜の生成と恒常性が損なわれます。したがって、DEDの治療のための血小板ベースの製品も、涙.......

ディスカッション

近年、眼の表面病理に対する血小板ベースの製品の臨床使用が増加しているが、それらの普及は科学的堅牢性の欠如によって妨げられている。これは主に、ドナーソースと調製プロトコルの幅広い異質性によって引き起こされ、それらはしばしば完全に開示されていないか、それらが調剤される目的のために特別に設計されていません。特に、アフェレーシスによって収集された血小板ベースの製品に関する情報はまだ不足しています。したがって、本研究の目的は、DEDの治療のためのアフェレーシスによって得られた多血小板血漿溶解物(PRP-L)の段階的な処理を説明することでした。

PRP-Lは、他の血液ベースの製品よりも多くのGFを含むため、点眼剤の製造に最適な供給源^であり22、血清またはPRPと比較した場合、その製造または保管は安価で簡単です。PRP-Lを得るために、血小板を溶解(通常は1回以上の凍結および融解サイクルを経て)して、その内容物を放出する。このプロセスは、組織再生を刺激する活性分子に富む溶液を保証する^22,26

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
Equipments
Seal Mobilea II	Fresenius Kabi(ドイツ		バッグシーラー
HeraSafeフード	ヘレウス・インスツルメンツ(ドイツ		Class II バイオハザードフード
MCS+ 9000 Mobile Platelet Collection System	Haemonetics(イタリア)		血小板、赤血球、血漿、または混合血液成分を提供するための自動血漿および多成分収集装置
血小板シェーカー、PF396i	ヘルマー、米国		血小板シェーカー
Raycell X線血液照射器	MDS ノルディオン、カナダ		X線血液照射器
ROTIXA 50RS	Hettich Zentrifugen、ドイツ		高速酸素分離機
シスメックス XS-1000i	シスメックス ヨーロッパ GMBH ドイツ		血小板数計算計算計
温浴 WB-M15	Falc Instruments(イタリア		) 温浴
<ストロング>素材
ACD-A 抗凝固剤 A	Fenwal Inc., USA	DIN 00788139	血小板アフェレーシス (1000 ml)
BD BACTEC Peds Plus/F 培養バイアル	BDBiosciences, USA	BD 442020	無菌アッセイ
BD BACTEC Peds Plus/F 培養バイアル	BD Biosciences, USA	442020	無菌アッセイ用バイアル2
BD Luer Lok Syringe	BD Plastipack, USA	300865	少なくとも4本の滅菌シリンジ(50ml)
Bio-Plex Human Cancer Panel 1	BioRad Laboratories, USA	171AC500M	PDGFアイソフォーム評価
用標準パネルBio-Plex Human Cancer Panel 2	BioRad Laboratories, USA	171AC600M	EGF評価用標準パネル
Bio-Plex MAGPIX Multiplex Reader	BioRad Laboratories, USA	Magpix	この装置は、機能化された磁気ビーズを使用した複数のイムノアッセイを可能にします。
Bio-Plex Pro TGF-b Assay	BioRad Laboratories, USA	10024984	TGFb アイソフォーム評価のためのセットとスタンダード
BioRet	ARIES s.r.l., Italy	A2DH0020	血液バッグ用のピアススパイクが少なくとも4本
血チューブ	BD Vacutainer, USA	367835	血小板カウントを行うために必要チューブ1
本目薬キット。col medical device for application and preservation of eye drops from haemocomponents	Biomed Device s.r.l., Italy	COLC50	Eye drops kit.各PRPユニットに少なくとも2つのキットを採取
ヒトがん PDGF-AB/BB セット 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC511	PDGFアイソフォーム評価用セット
Human Cancer2 EGF Set 1x96well	BioRad Laboratories, USA	171BC603M	EGF評価用セット
NaCl 0.9% 滅菌溶液	Baxter S.p.A., Italy	B05BB01	1000 ml
OSDI Questionnaire	Allergan Inc., USA	OSDI	Ocular Surface Disease Index Questionnaire
Piercing spike	BioRet ARIES s.r.l., Italy	BS051004	Spike Platelet
Additive Solution A+ T-PAS+	TERUMO BCT Inc., Italy	40842	濃縮血小板用防腐剤溶液 (1000ml)
Software Excel	Microsoft, USA	Excel	Data analysis software
Teruflex Transfer bag 1000 ml	TERUMO BCT Inc., Italy	BB*T100BM	1 for PRP dilution
Teruflex Transfer bag 300 ml	TERUMO BCT Inc., Italy	BB*030CM	PRPユニットごとに少なくとも6

) ) 本以上 採個 回収