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方法論記事

筋肉損傷のリスクを低減したマウスにおける用量調整されたレジスタンストレーニング

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DOI:

10.3791/64000

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2022年8月31日

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この記事について

サマリー

本プロトコルは、マウスなどの小動物で行われる精密リハビリテーション研究に組み込むことができる、用量調整レジスタンストレーニング(DART)と呼ばれる独自の技術について説明しています。

要約

漸進的レジスタンストレーニング(PRT)は、徐々に大きな外部負荷に対して筋肉収縮を行うことを含み、健康な個人および患者集団の筋肉量と筋力を増加させる可能性があります。小動物および大型動物のモデルに関する前臨床試験では、筋肉量と筋力を維持および/または回復するためのPRTの安全性と有効性をテストするための精密リハビリテーションツールが必要です。この記事で説明されているPRT方法論とデバイスを使用して、投与量調整レジスタンストレーニング(DART)を実行できます。DARTデバイスは、マウスの足首背屈筋によって生成される同心円収縮トルクを客観的に評価するためのスタンドアロンダイナモメータとして使用することも、既存の等速性ダイナモメトリーシステムに追加することもできます。DARTデバイスは、この作業で提供される指示とオープンソースの3Dプリントファイルに基づいて、標準の3Dプリンターで製造できます。この記事では、四肢帯筋ジストロフィー2B/R2型(BLAJマウス)のマウスモデルにおいて、DARTの1回の発作によって引き起こされる収縮誘発性筋肉損傷と、同等の等尺性収縮(ISOM)によって引き起こされる筋肉損傷を比較する研究のワークフローについても説明します。8匹のBLAJマウス(各条件に4匹)のデータから、前脛骨筋(TA)の10%未満がDARTまたはISOMの1回の発作で損傷を受け、DARTはISOMよりも損傷が少ないことが示唆されています。

概要

運動は骨格筋に多くの健康上の利点をもたらします(Vina et al.1でレビューされています)。具体的には、漸進的に大きな外部負荷(バーベル、ダンベル、ケーブルプーリーウェイト回路など)に対して筋肉収縮を行うことを含むプログレッシブレジスタンストレーニング(PRT)は、健康な個人と患者集団の両方で筋肉量と筋力を増加させるのに役立つことが知られています(以前の出版物でレビュー2,3).PRTは過負荷原理に基づいており、筋肉が徐々に大きな外部負荷に対して収縮すると、生理学的断面積と力を生み出す能力を増やすことによって適応すると述べています4。げっ歯類におけるPRTの既存のモデルには、尾に抵抗を加えたはしご登り、アンタゴニストからの抵抗に対するアゴニスト筋の共収縮、加重ハーネスでの走行、電気ショックによって引き起こされるしゃがむ運動、および抵抗された車輪走行が含まれます5,6,7,8,9,10(以前の出版物でレビュー11,12

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プロトコル

この記事に記載されている実験は、実験動物の世話と使用のためのガイド(1996年、National Academy Press、2101 Constitution Ave. NW、Washington、DC 20055、USA)に従って、米国ミシガン州デトロイトのウェイン州立大学の施設動物管理使用委員会(IACUC)によって承認されました。B6.LGMD2B/R2をモデルとしたA-Dysfprmd/GeneJマウス(別名BLAJマウス、雄、~1.5歳)を本研究に用いた。マウスは市販の供給源から入手した( 材料表参照)。

1.研究デザイン

  1. 研究の質問に関連するマウス系統を選択します—例:研究B6。A-Dysfprmd/GeneJマウス(BLAJマウス)は、同心円状に偏ったDARTがLGMD2B/R2をモデル化するマウスに広範な筋肉損傷を誘発するかどうかという質問に答えようとする場合。
  2. 研究デザインに基づいてマウスを研究グループに割り当てます-たとえば、マウスを用量調整されたレジスタンストレーニング(DART)グループまたは等尺性トレーニンググループ(ISOM)にランダムに割り当て、同腹仔および/または年齢によるマッチングに基づいて、グループのバランスを可能な限り試みます(例: 表....

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結果

BLAJの雄マウス(1~1.5歳)を研究した。BLAJマウスは、ヒトの筋肉疾患LGMD2B / R2をモデル化しています。これらのマウスは、偏心筋収縮の単回発作からの遅発性筋肉損傷に特に感受性である22、29。したがって、BLAJマウスは、TA筋が同心円状に偏った方法で働かなければならない抵抗を正確に調整することによって、DARTが無害な方法で実行できるかどうかを知るためにこれらの研究に選ばれました。DARTがBLAJマウスに有害ではないことが判明した場合、DARTは非傷害性レジスタンストレーニングの一形態として有用であり、単独で、または再生医療、遺伝学的、薬理学的、およびその他の介入の補助として適用できます。

BLAJマウスの年齢および体重は、DART群とISOM群の間で密接に一致した(表1)。3日目(~72時間)に、1回のトレーニングの後、運動したTA筋はDART群とISOM群の両方で低レベルの損傷(<10%損傷領域)を示.......

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ディスカッション

この記事では、投与量調整レジスタンストレーニング(DART)と呼ばれる一種の精密リハビリテーショントレーニングを実行するためのデバイスを構築する方法について、段階的な手順を説明します。この研究では、DARTの1回の発作の3日後の筋肉損傷(DARTグループ)と同等の等尺性トレーニングの3日後の損傷(ISOMグループ)を比較するためのトレーニング研究におけるDARTデバイスと方法論の適用についても説明しています。

プロトコルの重要なステップは、DARTデバイス34,35の適切な構築、DARTまたはISOMトレーニングの実行に伴う正確なステップ、筋肉組織の適切な採取と凍結保存、クライオスタットによる筋肉組織の適切な切片化、およびヘマトキシリンとエオシンによる筋肉断面の適切な染色22,36です。.具体的には、DARTデバイスを構築するには、部品を正確な寸法と.......

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開示事項

著者は競合する金銭的利益を持っていません。

謝辞

この研究は、Jain Foundation Inc.からの助成金、NICHDからのR03HD091648、NIH P2CHD086843に基づくAR3Tからのパイロット助成金、ウェイン州立大学のEACPHSからのFRAP賞、ウェイン州立大学の教員スタートアップパッケージ、および1R01AR079884-01(Peter L. Jones PI)からJARへの下請け契約によって資金提供されました。この研究は、JMB、MEP、およびJARに対する米国理学療法士協会-ミシガン(APTA-MI)の研究助成金からも資金提供されました。著者らは、レヌカ・ローチ博士(ミシガン州イースタンミシガン大学准教授)が原稿を批判的に読み、フィードバックを提供してくれたことを認めています。著者らは、3Dプリンティングに関するアドバイスを提供してくれたAnselm D. Motha氏を認めています。著者らは、https://www.jain-foundation.org/patient-physician-resources/patient-stories ジャイナ教財団のウェブサイトでストーリーを共有してくれたジスフェリノパチーの患者、特に運動の経験に感謝します。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
AnMiao Star 608 セラミックボールベアリングAnmiao Star (N/A)AMS127高精度、低摩擦ホイールベアリング。 メーカーとモデルが市販されていない場合は、608低摩擦ホイールベアリングの代替バージョン、ボア径8 mm、 外径22mm、420ステンレス鋼ハウジングに窒化ケイ素セラミックボールを入れるだけで十分です。ホイールベアリングの過剰な摩擦は、DARTデバイスの性能に悪影響を及ぼし、筋肉の収縮に対する全体的な抵抗を増加させます。
Axio Scope.A1カールツァイス(ピーボディ、マサチューセッツ州)製品 #Axio Scope.A1光と蛍光の顕微鏡
B6。A-Dysfprmd/GeneJ (別名 BLAJ マウス)ジャクソン研究所 (メイン州バーハーバー)ジャイナ教財団がジスフェリンを研究する協力者のために維持している特別なコロニー。ストック#012767ヒトの四肢ガードル筋ジストロフィー2B/R2型をモデル化するジスフェリン欠損マウス。
バイポーラ、経皮的、神経筋電気刺激(NMES)電極ハーバード装置、ホリストン、マサチューセッツ州 BS4 50–6824NMES用電極 この電極が市販されていない場合は、代替品について責任著者にお問い合わせください。
Coplin 染色皿ThermoFisher (マサチューセッツ州ウォルサム)カタログ番号 S17495ヘマトキシリンおよびエオシン用皿/瓶の染色皿/瓶 (H&E)セクション
Cura4.4.1の染色。SoftwareUltimaker、ユトレヒト、オランダUltimaker Cura 4.4.1.光造形ファイルをG-CODEファイルに変換するスライシングソフト
Deltaphase 等温ゲル加熱パッドBraintree Scientific (Braintree, MA)Item #39DPHeating pad to provide thermal support to animals while under annesthesion
Eosin YMillipore Sigma (Burlington, MA)HT110132-1LPink cytoplasmic stain
Gorilla Super GlueCompany (Cincinnati, OH)Gorilla Super Glue Micro PrecisionCyanoacrylate adhesive to bond PLA components
ヘマトキシリン溶液、Gill No.3Millipore Sigma (マサチューセッツ州バーリントン)GHS332-1L核用ダークブルーステイン
HM525NX クライオスタットThermoFisher (マサチューセッツ州ウォルサム)Catalogue #HM525NXCryostat to make frozen sections of muscle
Lab Wipes. Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-PlyThermoFisher (Waltham, MA)カタログNo. 06-666. メーカー#34120用ワイプは、スナップ凍結やその他の目的のために筋肉組織から鉱物油を吸い取ります。
Labview 2014National Instruments, Austin, Texas, USALabview 2014ダイナモメータを操作し、NMESスティミュレータをトリガするカスタムメイドのプログラム/ルーチン用のソフトウェアです。
液体窒素HDPEデュワーフラスコThermoFisher(マサチューセッツ州ウォルサム)S34074B. Thermo Scientific 41502000/EMDスナップ凍結筋肉または他の組織のための液体窒素を保持するフラスコ
マジック脱毛クリームSoftsheen カーソン (ニューヨーク州ニューヨーク)N/Aカミソリレス脱毛クリーム
金属ワニ口クリップJINSHANGTOPK (ウェブベースのビジネス)24個 51mm 金属ワニ口クリップ スプリングクランプ脛骨ピンを保持するスプリングクランプ
マイクスコープスライドグローブサイエンティフィック (ニュージャージー州マーワー)1354W. Diamond White Glass SlidesCharged microscope slides
Mineral OilThermoFisher (Waltham, MA)BP26291Mineral oil to cryoprotect muscle tissue before snap freezezing
Monoprice Premium 3D Printer Filament PLAMonoprice (Rancho Cucamonga, CA)#11778Premium 3D Printer Filament PLA 1.75mm 1 kg/spool, Gray. これは、デバイスのコンポーネントを3Dプリントするために使用される材料です。
Monoprice Select Mini V2 3DプリンターMonoprice(カリフォルニア州ランチョクカモンガ)デバイスコンポーネントのコンピューター支援製造用のMini V2 3D
NIH画像ソフトウェアNational Instritues of Health (NIH, Bethesda, MD)NIH Image for Windows損傷の面積を定量化するための画像処理および分析ソフトウェア。 NIH ImageはImage Jとしても知られています。
Photoshop CS4Adobe (カリフォルニア州サンノゼ)Creative Suite (CS4). Windows用64ビット版画像処理・解析ソフトウェアで、個々の重なり合うフィールドの画像から筋肉断面全体のタイル化/スティッチ画像を生成するために使用される
PSIU6刺激アイソレーションユニット GrassInstruments(ロードアイランド州ウェストワーウィック)PSIU6アイソレーションユニットNMES用アイソレーションユニット AMのモデル4100などの刺激装置には、刺激アイソロエーションユニット
Roboz 4-0シルクブラック編組縫合材料Roboz Surgical(メリーランド州ゲーサーズバーグ)Roboz Surgical SUT152縫合材料を使用して、DARTデバイスのフットプレートをダイナモメーターフットプレートまたは抵抗トレーニング用の抵抗
S48矩形パルス刺激装置グラスインスツルメンツ(ロードアイランド州ウェストワーウィック)S48刺激装置NMES用の実験室用電気刺激装置. この刺激装置が市販されていない場合は、AMシステムのモデル4100絶縁型高出力刺激装置が代替品になる可能性があります。詳細については、共著者のJonesにお問い合わせください。
スコット6697-32ヘマトキシリン核染色を強化するブルーイング溶液
SigmaStatバージョン3.5Systatソフトウェア(カリフォルニア州サンノゼ)SigmaStatバージョン3.5統計分析用統計ソフトウェアパッケージ
卓上イソフルラン気化器VetEquip(カリフォルニア州リバモア)アイテム#901801吸入卓上麻酔システム
トリプル抗生物質応急処置軟膏グローバルヘルスプロダクツ(水ベースのビジネス)グローブトリプル抗生物質応急処置軟膏、1オンス(2パック)応急処置抗生物質膏 処置後のケアの一部として脛骨ピンに適用される抗生物質軟膏
顕微鏡 実験室 3Dプリンター。筋肉に接続します軟

参考文献

  1. Vina, J., Sanchis-Gomar, F., Martinez-Bello, V., Gomez-Cabrera, M. C. Exercise acts as a drug; The pharmacological benefits of exercise. British Journal of Pharmacology. 167 (1), 1-12 (2012).
  2. Murton, A. J., Greenhaff, P. L.

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再版と許可

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