$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
過去 10 年間で、診断および予後のバイオマーカー、治療標的、ドラッグデリバリーベクターとして、さらには多数の疾患における修復医療や再生医療の候補としての細胞外小胞 (EV) の役割について集中的な研究が行われてきました。EVは、直径30〜5000nmの範囲の不均一なリン脂質二重層で囲まれた粒子、すなわちエクソソーム、微小胞、およびアポトーシス小体の複合体であり、生理活性分子(脂質、タンパク質、RNA、代謝産物など)の選択的パッケージングのおかげで、細胞間コミュニケーションのメディエーターの特異なクラスターに準拠しています。ほとんどすべての細胞(原核生物および真核生物)はEVを放出するため、事実上すべての疾患の病態生理学に関与している可能性があります。実際、特定の刺激の後に放出されるEVの分子貨物は、その作用機序を決定し、その親細胞の状態を反映します。
あらゆる科学的努力と技術的進歩にもかかわらず、EV の特性、構造、組成、病態生理学的活性、および代謝/クリアランスに関する研究は、EV の抽出および精製方法論によって依然として技術的に挑戦されています。これに関連して、このメソッドコレクションは、さらなる下流アプリケーションのために、EVの単離および精製の方法を報告することを目的としています。
今号では、El Itawiら1が、 Porphyromonas gingivalisによる感染のマウスモデルにおける脾細胞由来EVの単離について説明している。著者らは、脾細胞懸濁液から分画遠心分離によってEVを単離し、その後EVを採取して そのin vivo 効果を研究します。しかし、著者らは、彼らの方法は接着細胞に適応させる必要があると述べています。
Jonesと共著者2は、サイズ排除クロマトグラフィー(SEC)と3-KDa限外ろ過を組み合わせて培養オリゴデンドロサイトに由来するEVを単離し、抽出物中のタンパク質汚染を最小限に抑えながら適切なEV純度を確保します。この半自動法は、機能アッセイ、EVの分子特性評価、EVイメージングなど、事実上すべての下流アプリケーションに使用できます。
SECもRyan らによって提案されています。3、細菌の生理学、宿主との相互作用、およびEV分子貨物を理解するために、 結核菌からEVを分離します。この方法論原稿では、著者らは密度勾配超遠心分離とSECの性能を比較し、SECを実行するとEVの回収率とEVの純度が改善されると結論付けています。著者らはまた、記載されている方法論を他のマイコバクテリア由来のEVに適用できることを示唆しています。
ヴァッレ・タマヨ 他。4、磁性マイクロビーズに結合したアストロサイト細胞表面抗原-1(ACSA-1)抗体によるポリマーベースの沈殿および免疫捕捉によってアストロサイト由来EVを得るための簡単な2段階の方法について説明します。著者らは、免疫捕捉を高分子沈殿の代わりにSECと組み合わせることができ、磁性マイクロビーズを他の抗体に結合させて他の細胞型からEVを単離できることを示唆している。ヒト血漿または他の体液からのこれらのEVの回収は、神経疾患または関連疾患の分野で非常に価値がある可能性があります。
この号の最後の原稿で、Kohと同僚5 は、培養されたヒト間葉系幹細胞から小さなEV(sEV)を単離する限外ろ過法を提案しています。著者らは、限外濾過で単離されたEV抽出物は、治療用途やその他の下流分析に使用できると述べています。これは、他の生体液や起源の異なる細胞型に適用できるシンプルで迅速な方法ですが、著者らは、大規模には産業用途には適していない可能性があることを認めています。
全体として、この特集号では、細菌、動物臓器、ヒト細胞などのさまざまなサイズから、さまざまな検体からEVを分離するための、比較的簡単で簡単なさまざまな実験方法を提供します。抽出収率と純度は方法によって異なるため、単離されたEVの最終用途に応じて、最も費用対効果と時間効率の高い方法を選択することを検討する必要があります。
最後に、すべての著者と査読者の貢献、そしてそのようなプロセスにおける貴重な支援をしてくれたジャーナルのVisualized Experimentsの編集スタッフに感謝して終わりたいと思います。この特集号が、今後のEV研究者の研究のお役に立てば幸いです。