この論文では、実験マウスの強直性脊椎炎の治療におけるDu-hoxisulation中に取るべき手術手順と注意事項について詳しく説明します。
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この論文では、実験マウスの強直性脊椎炎の治療におけるDu-hoxisulation中に取るべき手術手順と注意事項について詳しく説明します。
強直性脊椎炎(AS)は、主に軸骨格に影響を与える関節炎の漸進的に悪化し、障害となる形態です。この病気は主に脊椎と仙腸関節に関係しています。病気の後期には脊椎と仙腸関節の癒合が起こり、脊椎のこわばりや後弯症、歩行困難などを引き起こし、仕事や日常生活の質に深刻な影響を与え、患者や家族、社会に大きな負担をかけています。ASの代替療法として、非薬物療法への注目が高まっています。お灸は、伝統的な中国医学(TCM)で使用される古代の治療法です。Du-moxibustion Therapyは、通常のお灸をベースに開発されたユニークで革新的な外用療法であり、ASに対して明確な治療効果があります。Du-hoxibustionは、TCMの互換性のある技術を巧みに組み合わせて、経絡、ツボ、漢方薬、およびお灸を統合します。本稿では、AS治療におけるDu-灸のメカニズムを研究するための実験的基礎を提供するために、実験マウスにおけるDu-hoxibustionの操作手順と注意事項を詳細に記述する。
強直性脊椎炎(AS)は、主に軸骨格に影響を与える関節炎の漸進的に悪化し、障害となる形態です。最新の疫学調査によると、世界の人々の~0.01%-1.8%がこの症状に苦しんでおり1、そのほとんどが若い男性です(男女比は~2-3:1)2。中国人人口におけるASの発生率は0.2%〜0.4%です。この病気は主に脊椎と仙腸関節に関係しています。病気の後期には脊椎と仙腸関節の癒合が起こり、脊椎のこわばりや後弯症、歩行困難などを引き起こし、仕事や日常生活の質に深刻な影響を与え、患者や家族、社会に大きな負担をかけています1。現在、ASに対する決定的な解決策はなく、提供される治療法は、薬理学的および非薬理学的の両方で、主に痛みの緩和、疾患の進行の遅延、および生活の質の向上に焦点を当てています。近年、薬物療法の選択肢は非常に限られているため3、ASの代替療法である非薬物療法への注目が高まっています。中国では、患者はしばしば伝統的な漢方薬(TCM)からなる外用療法を好むが、これは副作用が軽く、治療中の利便性が高い。
灸は、中医学で使用される古代の治療技術です。杜灸は、杜経絡の脊椎部分に「泡を使った薬用灸」からなる外用治療技術です。主にASの治療に使用され、安全性と有効性が示されています。杜灸は、通常の灸と比較して、灸面積が広く、灸錐が大きく、火力が強く、高温であるという特徴があります4。システマティックレビューとメタアナリシスは、灸がAS5の効果的な補完療法であることを示唆しています。最近の研究では、AS患者の臨床症状といくつかの炎症因子が灸によって改善されたことが確認されました6。研究によると、Du-hoxibustionはβエンドルフィンの脳内含有量を増加させ、中枢鎮痛効果を発揮し7、HLA-B27遺伝子8の発現をダウンレギュレートし、ASの再発率を遅らせることができることが明らかになっています。また、Du-hoxibustionは、炎症性指数ESR(ESR)とC反応性タンパク質(CRP)、I型コラーゲンのC末端ペプチド(CTX-I)、およびDickkopf1タンパク質(DKK1)のレベルを低下させることにより、ASの進行を改善する効果があります9,10。
別の臨床研究では、Du-hoxibustionが、免疫機構のバランスをとるために、無秩序なT細胞サブセットであるIgと補体C3をさらに調整できることが示されました11。骨代謝に関しては、灸は血清アルカリホスファターゼ(ALP)と血清リン(S-P)の上昇を抑制し、血清カルシウム(S-Ca)、骨密度(BMD)、骨強度を増加させることができます12。さらに、Du-hoxibustionは、AS患者の倦怠感症状を和らげるために、複数のポイントで脊椎機能を修復することができます13。いくつかの動物実験では、ASの治療におけるお灸の潜在的なメカニズムが明らかになっています。ある研究では、灸が全体的な健康状態を有意に改善し、足の厚さのレベルを下げ、脊椎の靭帯組織サンプル中のIL-1β、PGE2、IL-6、およびTNF-αのレベルを低下させることが示されました。代謝経路分析により、同定された代謝物は、脂質、アミノ酸、腸内細菌叢、プリン代謝と同様にTCAサイクルに関連づけられました14。別の研究では、灸が炎症誘発性サイトカイン、IL-1β、TNF-α、IL-17、およびIL-6の発現を抑制することが示されました。 RANKL、RANK、ALP、および OCNのmRNAレベルを低下させました。ASマウスの病理組織学的特徴を改善した15。
これらの研究は、お灸がASの治療に有効である可能性を示唆しているが、これらの知見を確認し、AS患者の灸に対する最適な治療プロトコルを決定するには、さらなる研究が必要である。私たちのチームは、35年以上にわたって中国の臨床現場で広く実施され、適用されてきた伝統的な中国のお灸の基礎理論と実践的な操作に基づいて、灸療法を作成および修正しました。Du-hoxibustionによるASの治療に関する質の高い研究はほとんどありませんが、ASの治療における適応症は証拠によって裏付けられています。しかし、Du-duxibustionでASを治療するメカニズムは、さらなる研究に値します。動物実験は、ASの治療におけるDu-hoxibustionのメカニズムを探るための重要な方法です。Du-hoxibustionの臨床操作は比較的成熟していますが、動物実験でのメカニズムの研究に使用されることはめったにありません。本稿では、AS実験マウスの治療におけるDu-moxibustionの操作と注意点について詳細に述べる。
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すべての動物実験は、山東中医薬大学の実験動物福祉倫理審査委員会(No.SDUTCM20230831301)です。
1.動物の調製
2. ASマウスモデルの確立
注:ASモデルは、古典的なモデリング方法である軟骨プロテオグリカン(PG)で誘導されました16、17、18、19、20、21。BALB/c系統マウスにPGを繰り返し免疫し、腱炎と脊椎炎を誘発した。このプロトコルで使用される材料、試薬、および機器の詳細については、 材料表 を参照してください。
3.デュお灸
注:Du-moxibustionの最も重要な3つの原材料を事前に準備します(図1)。
4.関節炎指数(AI)の評価
5. Rotarodテスト
注:ロータロッドテストは、マウスが回転ドラムに費やす時間を記録することにより、運動の協調とバランスを評価するために使用されます。この実験は、20分間隔で区切られた3つの試行で構成されていました。公式の試験データは3回目の試験で記録され、最初の2回は訓練用として使われた。
6. オープンフィールドテスト(OFT)
注:OFTは、自律神経運動の状態を評価するために使用され、病理学的行動を特定することを目的としています。4つの正方形のオープンフィールドアリーナ(50 cm x 50 cm x 40 cm)を一緒に配置して装置を形成しました。箱の底は9つの等しい正方形に分割されました。
7. 安楽死と検体採取
8.組織学的分析
9. 酵素結合免疫吸着法(ELISA)
10. 統計解析
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PG誘発モデルマウスは、四肢や足の指の発赤や腫れを特徴とする末梢関節炎の症状を呈し、早くも14週目には徐々に軸性関節炎を発症したが、これはASの症状と非常によく似ていた。したがって、ASマウスモデルは、最後の注射から14週間後に関節炎指数(AI)が3ポイントを超えていれば成功したと見なされました22。マウスの足が腫れているように見えたら、週に1回、合計3回、Du-hoxibustion治療を行いました。治療後、マウスをイソフルラン深部麻酔下で子宮頸部脱臼により安楽死させ、採血し、足首を切除した。
Du-hoxibustionが運動協調と自律神経運動に及ぼす影響
ウシPG誘発ASをモデルとして採用し、Du経絡におけるDu-hoxibustionが運動協調に及ぼす影響を観察した。まず、関節の腫脹スコアを用いてモデルが成功したかどうかを評価し、運動協調運動と自律神経運動をロータロッドテストとOFTを用いて評価しました。
AIの評価により、末梢関節...
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ASは、背中、腰椎、関節の腫れの痛みとして臨床的に現れ、重症の場合、脊椎の変形と関節の硬直が発生することがあります26。早期の診断と治療により、AS患者の生活の質が向上し、障害率が低下し、予後が改善されます。中国伝統医学(TCM)によると、ASは腎臓と杜経絡の陽の欠乏、および内部に冷え性の蓄積によって引き起こされると考えられています。TCMは、経絡の概念に基づいて、体の表面を温める気を生成することができるという見解を持っています。この気は、経絡とツボに沿って下向きに移動します。 黄帝の内経典 (非常に古典的で重要なTCMの傑作)には、「病気の杜経が治療される」と記録されています。ASは杜経にあるため、杜経絡を刺激することが治療ポイントとして利用されます。杜子午線は、陽気がピークに達する陽チャネルの海であると考えられています。杜経絡のお灸は、楊気を補い、杜経絡の効果を活性化し、腎臓陽の温暖化効果を調整し、西洋医学の免疫調節機能を高めることができます。
西洋医学の観点から見ると、脊髄は神経情報の伝達に重要な役割を果たして...
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著者は、宣言すべき利益相反を持っていません。
この研究は、中国国家自然科学基金会の一般プログラム(No.82174491)とQilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project(No.Lu Weihan [2020]132)。実験条件を提供してくれた山東中医薬大学実験動物センターに感謝します。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 10% EDTA | 上海マックリン生化学株式会社、上海、中国 | ||
| アルコールパッド | HYNAUT、青島海ヌオ生物工学有限公司、青島、中国 | ||
| 麻酔器 | 医療用品サービス株式会社、キースリー、英国 | ||
| 遠心分離管 | Axygen、コーニング、ニューヨーク、UAS | ||
| コンプリートFrechのアジュバント(CFA) | アラジン、上海、中国 | F393378 | |
| 綿球 | 河南RUIKE医療機器有限公司、新郷、中国 | ||
| 綿ガーゼ | 河南RUIKE医療機器有限公司、新郷、中国 | ||
| ウシ関節軟骨シ | グマアルドリッチ、ミズーリ州、米国 | D8428 | |
| 脱毛クリーム | Veet、Reckitt Benckiser(中国)投資有限公司、上海、中国 | ||
| 電子スケール | 上海Yajin電子技術有限公司、上海、中国 | ||
| エッペンドルフチューブ | Axygen、コーニング、ニューヨーク、UAS | ||
| アイ潤滑剤 | 北京双鶏製薬有限公司、北京、中国 | ||
| 生姜 | 自己調製 | ||
| GraphPad Prism 7ソフトウェア | GraphPadソフトウェア、ボストン、米国 | ||
| バリカン | Super human Group CO LTD、金華、中国 | ||
| 加熱パッド | 深センLeshuo Tech Co.、Ltd.、深セン、中国 | ||
| 未完成フロイントアジュバント(IFA) | aladdin,Shanghai, China | F393371 | |
| injection シリンジ | 山東新華社アンデ医療用品有限公司、淄博、中国 | ||
| イソフルラン | センレイワードライフテクノロジー株式会社、深セン | 中国R510-22-10 | |
| ジョススティック | 石家荘Lidu香り産業有限公司、石家荘、中国 | ||
| ジューサー | ブラウン(上海)有限公司、上海、中国 | ||
| ナイフ | 自己準備 | ||
| ライター | 浙江タイガーライター株式会社モル | ||
| タル | 洛陽Yinaiセラミック技術有限公司、洛陽、中国 | ||
| マウスIL-17 ELISAキット | アブシン、上海、中国 | abs520009-96T | |
| マウス TNF-&アルファ;ELISAキット | 武漢 三英、武漢、中国 | KE10002 | |
| 桑紙 | 宜水県 Mulinsang paper Co., LTD, 臨沂, 中国 | ||
| OFT | Xinruan, 上海, 中国 | XR-XZ301 | |
| 紙コップ | 自己調製 | ||
| ピペット | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC., オックスフォード, 英国 | ||
| 精製 灸 ベルベット | 自己調製 | ||
| rotarod | Xinruan、上海、中国 | XR-6C | |
| scientz-48L 極低温ハイスループットティッシュグラインダー | 寧波新志バイオテクノロジー株式会社、LTD | ||
| はさみ | 東嘉仁医療用品有限公司、淄博、中国 | ||
| 半自動パラフィン切片作成機 | ライカカメラAG、ヴァツナッハ、ドイツ | ||
| SPSS25.0ソフトウェア | International Business Machines Corporation、ニューヨーク、UAS | ||
| TCM粉末 | 自己調製 | ||
| のヒント | Biosharp、Labgic、北京、中国 | ||
| 筆筆 | Yishui郡Mulinsang紙有限公司、臨沂、中国 |
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