本プロトコルは、Illuminaベースの16S rRNA遺伝子配列決定を使用して腸内細菌叢を分析する方法を説明し、ハーブ煎じ薬の有効性を評価するためのフレームワークを提供します。
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方法論記事
胃炎ラットの消化管ホルモンおよび腸内細菌叢に対する Desmodium caudatum の影響
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
ラットの胃炎および腸内細菌叢に対する Desmodium caudatum の影響を予備的に調査するために、古典的なサリチル酸ナトリウム法を使用して慢性胃炎ラットモデルが確立されました。18匹のSPFラットを、対照群(C群)、モデル群(M群)、治療群(T群)の3群に分けた。胃壁の病理学的切片は、各グループのラットから採取されました。さらに、各群のラットの血清中のガストリンおよびマロンジアルデヒドの濃度をELISAにより測定した。さらに、胃炎のラットの腸内細菌叢に対する D. caudatum の影響は、Illuminaベースの16S rRNA遺伝子配列決定を用いて、3つのグループの腸内細菌群集の詳細な比較を通じて調査されました。結果は、 D. caudatum 煎じ薬がマロンジアルデヒド含有量を減少させ、ガストリン含有量を増加させる可能性があることを示しました。さらに、 D. caudatum 煎じ薬は、腸内細菌叢の多様性と豊富さを高め、腸内細菌叢を調節および回復させることにより、胃炎の治療にプラスの影響を与えることがわかっています。
概要
最も一般的な臨床疾患の1つである慢性胃炎(CG)は、胃粘膜上皮の慢性的かつ持続的な炎症性変化を特徴とし、さまざまな病原性因子によって頻繁かつ繰り返し攻撃されます1。胃疾患の罹患率は胃疾患の中で第1位であり、消化器内科2の外来受診率の40%から60%を占めています。さらに、発生率は一般的に年齢とともに増加し、特に中高年の個人では3。間違いなく、CGは人々の生活の質を著しく低下させ、新しい治療薬を発見する必要性を強調しています。
CGの発生と発症は、ガストリン(GAS)などの消化管ホルモンの分泌に関連していることが多くの研究で報告されています4,5。消化管によく見られる消化管ペプチドホルモンであるガスは、好酸球からのヒスタミンの放出を促進することにより、細胞を刺激して胃酸を分泌させます。さらに、胃粘膜の栄養と血液供給を改善し、胃粘膜と頭頂細胞の増殖を促進します6。したがって、ガストリンはCGの発達レベルを評価する指標として利用することができます。さらに、反応性酸化物によって引き起こされる脂質過酸化生成物は、炎症細胞を活性化し、CGにつながる可能性があります。脂質過酸化マーカー....
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プロトコル
動物の世話と使用の手順は綿陽師範大学の倫理委員会によって承認され、動物の倫理的使用に関するすべての関連する機関および政府の規制が厳格に守られました。本研究では、SPFラット(昆明種、雄、雌、体重180-220g)を利用した。動物は市販の供給源から入手した( 資料表参照)。すべての動物は病原体のない環境で飼育され、食物への 自由アクセス が提供されました。
1. 試薬の調製
- 電子スケールで2.5gのサリチル酸ナトリウム粉末( 材料表を参照)を秤量して、5%サリチル酸ナトリウム溶液を調製します。粉末を少量の蒸留水に溶かし、総量50mLに希釈します。
- D. caudatum(12.8 g / kg)の煎じ薬を準備します。128 gのD.caudatum(材料表を参照)を秤量し、1000 mLの実験室用蒸留水を含む丸底フラスコに入れ、最終容量100 mLになるまで濃縮します。
2. グループ化と管理
- ラットを異なるグループに分け、必要な溶液を胃内投与します。
注:本研究では、18匹のラット(雄9匹、雌9匹)を対照群(グループC)、モ....
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結果
胃壁の病理学的切片の結果を 図1に示します。グループCと比較して、グループMは軽度の胃壁萎縮と軽度の炎症を示しました。しかし、グループMと比較すると、グループTは明らかな炎症、腸上皮化生、または萎縮を示さなかった。これは、 D. caudatum 煎じ薬が胃炎を効果的に改善できることを示唆しています。
血清消化管ホルモンアッセイの結果を 図2に示します。マロンジアルデヒド(MDA)の含有量は、グループCよりもグループMで有意に高かった。 D. caudatum 煎じ薬で処理した後、それは有意に減少しました。ガストリン(GAS)の含有量については、グループMはグループCよりも有意に低いレベルを示しましたが、グループTは有意な増加を示しました。これらの結果は、 D. caudatum 煎じ薬が胃炎を治療するための消化管ホルモンのレベルを調節する可能性があることを示しています。
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ディスカッション
D. caudatumは、Qiang nationality12で一般的に使用されている民間療法であり、胃腸疾患の治療に大きな有効性を示しています。現代の薬理学的研究の進歩に伴い、胃腸の微小生態学の不均衡に起因する細菌叢の不均衡は、急性および慢性の胃腸疾患の重要な要因として特定されています22,23。腸管内の特定の微生物は、体内の動的バランスを維持する上で重要な役割を果たし、血清中のホルモンは体の生理学的および病理学的状態を反映しています。したがって、この研究は腸内細菌叢と消化管ホルモンに焦点を当てています。
16S rRNAハイスループット遺伝子シーケンシングは、腸内微生物を検出するための主要な方法です。採取した検体中の微生物の種類や機能を検出することができ、腸内微生物の種類ごとに正確かつ定量的な分析が可能です。近年、16S rRNAハイスループット遺伝子シーケンシングは急速に発展し、さまざまな生態.......
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開示事項
著者は何も開示していません。
謝辞
この研究は、四川省科学技術局の重点研究開発プロジェクト(2020YFS0539)から資金提供を受けました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| アルファダイバーシティ分析 | Mothur 1.30.2 | ||
| AxyPrep デオキシリボ核酸 (DNA) ゲル抽出キット | アクシゲン・バイオサイエンス | AP-GX-50 | |
| ベータ多様性分析 | Qiime 1.9.1 | ||
| 極低温冷蔵庫 | Forma-86C ULT 冷凍庫 | ||
| Desmodium caudatum | 北川チアン自治県 | ||
| E.Z.N.A. ソイルキット | オメガバイオテック | D5625-01 | |
| イルミナ MiSeq プラットフォーム | イルミナMiseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
| Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
| OTU クラスタリング | Uparse 7.0.1090 | ||
| OTU 統計 | Usearch 7.0 | ||
| PCR 装置 | TransGen AP221-02 | ||
| PCR 装置 | ABI GeneAmp 9700 | ||
| QuantiFluor-ST 二本鎖DNA(dsDNA)システム | プロメガ株式会社 | ||
| 配列分類 annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
| Salicylate ナトリウム | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
| SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
| SPSS 18.0 | IBM |
参考文献
- Marginean, C. M., et al. The importance of accurate early diagnosis and eradication in Helicobacter pylori infection: pictorial summary review in children and adults. Antibiotics (Basel). 12 (1), 60(2022).
- Sipponen, P., Maaroos, H. I.
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再版と許可
