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方法論記事

骨粗鬆症モデルラットにおけるLingnanファイヤーニードル療法の手術手順と注意事項

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DOI:

10.3791/65970

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2024年4月26日

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Acupuncture and Orthopedics, Hubei University of Chinese Medicine, 2Department of Rehabilitation Medicine, General Hospital of Central Theater Command, 3Hubei Shizhen Laboratory, 4Hubei International Science and Technology Cooperation Base of Preventive Treatment by Acupuncture and Moxibustion

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

ここでは、骨粗鬆症モデルラットの介入におけるLingnan Fire-Needle療法の適用のためのプロトコルを紹介します。

要約

糸状針治療と比較して、ファイヤーニードル療法は針の刺激と熱の温め効果の両方があるため、一部の慢性疾患や難病に予期しない効果をもたらします。骨粗鬆症(OP)は、閉経後の女性や中高年男性に多く発症し、治療サイクルが長いです。伝統的な中国医学(TCM)によると、嶺南の火針療法は骨粗鬆症の治療に可能性を示しています。しかし、広く使えるようになるまでには、まだ長い道のりがあります。この記事では、ラットのOPの介入におけるLingnanファイヤーニードル療法の適用に焦点を当てています。鍼道具の選択、ツボの選択、ラットの体の位置決め、固定方法をカバーしています。また、ファイヤーニードルによるニードリング中およびニードリング後に取るべき手順と注意事項についても概説します。実験は、正常グループ、モデルグループ、火針グループの3つのグループで行われ、それぞれに10匹のラットが含まれていました。火針群のラットは、6セッションにわたって火針介入で治療されました。介入期間終了後、大腿骨標本を採取し、マイクロCTスキャンを実施しました。この結果は、ファイヤーニードリングがOPラットの骨の形態とミネラル密度を増強できることを示唆しています。この情報は、火針療法に関する基礎研究を行うための方法論的基礎として役立ちます。

概要

漢方薬では、気候や環境などの要因が人の体格に影響を与え、それが病気の発生や発症に影響を与えると考えています。中国の嶺南地域は、主に広東省、広西チワン族自治区、海南島を含み、熱帯モンスーン気候地域に位置しています。その結果、この地域に長期間住んでいる人々は、一種の脾臓欠乏症になりがちです。場合によっては、腎臓や肝臓に広がり、骨粗鬆症の有病率につながります1。脾臓と胃は、気と血液の生化学の源である水と穀物を輸送および吸収する機能を果たし、肝臓は骨髄の維持を助けます。したがって、骨の栄養は脾臓、胃、肝臓の供給に依存しています。漢方薬では、腎臓は骨髄を生成して骨を強化することができ、その活力は骨の強度と機能に直接影響します。したがって、腎臓欠損症は骨粗鬆症に直接関係しています。TCMによると、肝臓(Gan)-腎臓(Shen)の欠乏とエッセンス(Jing)の欠如が根本的な原因です。場合によっては、脾臓(Pi)と胃(Wei)の欠乏、または2つのバランスの乱れが原因で栄養失調が発生することがあります。つまり、肝臓(Gan)、腎臓(Shen)、脾臓(Pi)、胃(Wei)の欠乏が根本的な原因であり、外部の気(Xie qi)が経絡を塞ぎ、骨や筋肉に損傷を与えます。世界保健機関(WHO)によると、OPは骨量が少なく、組織の劣化2を特徴とする病状であり、高齢者にとって深刻な懸念事項となっています。適切な介入の選択は、骨粗鬆症の予防と治療にとって非常に重要です。

現代の鍼灸師は、嶺南の気候と嶺南の人々の身体的特徴を組み合わせることにより、火の針治療のユニークな嶺南の特徴を開発しました3。ファイヤーニードルセラピーは、特殊な針を赤く焼いて、人体の特定の部分やツボにすばやく突き刺してさまざまな病気を治療する治療法の一種です。この方法は、皮膚疾患、筋骨格系および関節疾患、神経疾患、およびその他の全身性疾患に広く使用されており、良好な有効性を示しています4。火の針による骨粗鬆症の治療は、長い間診療所で使用されており、単純な鍼治療や伝統的な漢方薬の経口投与よりも優れた治療効果があります5,6,7。Lingnanの火の針療法は、鍼治療、三刃の鍼、瘢痕化灸を統合しています。腎臓を温めながら、経絡の気と血液循環を改善することができます。この治療法は、TCMにおけるOPの病因に寄与するうっ血と腎臓(シェン)欠乏症の両方に対処することができます。さらに、低コストで、効果が早く、治療期間が短く、安全であるという利点があります。しかし、そのメカニズムについては研究が不足しています。この論文では、骨粗鬆症モデルラットにおけるLingnan Fire-Needleの具体的な手順を紹介し、関連する基礎研究を実施するための方法論的基礎を提供します。

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プロトコル

すべての実験は、国立衛生研究所の実験動物の世話と使用に関するガイドに従って実施され、湖北大学TCMの施設動物管理および使用委員会によって承認されました。試験には、体重220±20gの成体の雌Sprague-Dawley(SD)ラットを使用しました。すべてのラットは、23±1°C、湿度40%〜50%で12時間の明暗サイクルで維持され、餌と水に自由にアクセスできました。

1. 術前準備

  1. グループ設計
    1. 30、3ヶ月齢の雌ラットをジェノタイピングした後、それらを3つのグループ(各グループでn=10)にランダムに分けます:正常グループ、モデルグループ、および火針グループ。火針グループのラットを火針介入で治療します 1 日 1 回 6 セッション、セッション間に 1 日の休息を挟む。
      注:正常群とモデル群は、火針グループと同じ頻度と同じ期間で安全なコートで縛られたラットを吊り下げましたが、火針治療は行わなかった。
  2. ラット骨粗鬆症モデルの作製
    1. モデル群と火針群のラットについては、8,9,10で説明されているように、卵巣を外科的に切除して骨粗鬆症モデルを確立します。
      1. 卵巣摘出術では、手術前に2%ペントバルビタールナトリウム(0.2mL/100g)の腹腔内注射による麻酔を行い、つま先のつま先つまみ試験による反応の欠如に基づいて、動物が麻酔の手術面で反応しない場合は麻酔が成功したと考えてください。麻酔下での乾燥を防ぐために、目に獣医軟膏を使用してください。手術前に鎮痛剤としてブプレノルフィン(0.05 mg / kg)を皮下注射します。.手術中は無菌状態を維持します。
        注:手術が完了しておらず、ラットが ?? 生の兆候を示している場合は、2%ペントバルビタールナトリウム溶液の腹腔内注射を一時的かつ適切に補充することができます。各補足用量は、注射された総量の20%を超えません。.
      2. 手術後、ラットを小動物の加熱パッドに置き、温度を32°Cに設定します。 ネズミが意識を取り戻し、自由に這えるようになるまで、ネズミを放置しないでください。完全に回復するまで、他の動物と一緒に戻さないでください。
      3. ラットが蘇生したら、縫合糸の完全性を確認し、ラットをケージに戻します。すべてのラットにペニシリンナトリウム(1日あたり50,000U、3日間)を筋肉内注射し、0.1mLの0.05%ジクロフェナクナトリウム溶液(1日あたり、3日間)を腹腔内注射して、感染を防ぎ、治癒を促進します9,10。
    2. 11で説明されているように、雌ラットの膣剥離細胞塗抹標本に従って発情周期を観察します。.サイクルが乱れている場合、モデルは正常に確立されます11。
      注:卵巣摘出術後、ラットが骨粗鬆症を発症するまでには約8〜12週間かかります。
  3. ニードルツールの選択
    1. 医療機器メーカーから火針を購入します。針工具がタングステン-マンガン合金でできており、耐熱性があり、展性がなく、変形しにくく、均一に加熱されることを確認してください。火の針はフィラメント針のような形をしています。針が太く、先端が鋭くてまっすぐで、ハンドルが断熱性があり、手を火傷しない銅線で包まれていることを確認してください。
    2. ネズミは小さいので0.40mm×13mmのサイズのシングルヘッドの火針を選びましょう。火の針にとげやひび割れがないか確認してください。
      注:臨床診療では、使用される火の針のほとんどは、国家の医療マスターであるHe Purenによって開発されたものです12。これに基づいて、林国華は嶺南長頭火針と嶺南三頭火針13を作成しました。実験の必要性に基づいて、さまざまなサイズの火針を選択してください。
  4. ツボの選択と位置決め
    1. 関連するデータと文献に従って、閉経後骨粗鬆症の治療のためのツボを選択してください。
      注:最も頻繁に使用されるツボは、頻度の順に、神樹(BL 23)、Zusanli(ST 36)、Pishu(BL 20)、Xuanzhong(GB 39)、およびDazhu(BL 11)14,15です。排卵解除モデルラットの骨粗鬆症に対する鍼治療介入に関する基礎研究では、最も使用された鍼治療ポイントは神舟(BL 23)、三陰角(SP 6)、関元(CV 4)、および祖三里(ST 36)16,17,18です。
    2. この実験で選択したツボを決定します。先行研究14,15,16,17,18で選択された経穴と骨粗鬆症の病因を参照して、本研究では神舟(BL 23)、ピシュ(BL 20)、祖里(ST 36)、三陰角(SP 6)の4つの経穴を選定する。これらは、膀胱子午線、杜子午線、脾臓子午線、および腎臓子午線に対応します。
      注:大きな血管や神経幹のある部分に火針を使用することは禁止されています。
    3. ペットの電動クリッパーで鍼灸部位を剃ってから、ツボを露出させます。
    4. 経穴の位置とは、19でよく使われる経穴の名前と位置を指します。次のようにツボを見つけます:神舟(BL 23)は、中央背側線から6 mmの第2腰椎の下部2つの側面にあります。ピシュ(BL 20)は、第12胸椎 の下部と両側の肋骨の間、背側中央線から6 mmの位置にあります。Zusanli(ST 36)は、膝の後側と外側、腓骨の小さな頭の約3mm下にあります。Sanyinjiao(SP 6)は、後肢の内側の足首の先端から約10mmまっすぐ上にあります。
    5. ポイントを特定したら、油性マーカーでマークを付けます。
  5. ラット拘束法
    注:ラットの固定化および治療中のストレスを軽減するために、固定化方法として、固定コート20,21で結合された懸濁ラットが選択されました。ラットコートサスペンション法には、次の利点があります:まず、暗い環境を好むラットの習性を最大限に活用し、固定中のラットのストレス反応を軽減します。第二に、浮遊したラットは、手足やつま先に力点がないため、ファイヤーニードリング治療の全過程でより静かで協力的です。第三に、ラットの背中と手足のツボは、治療を容易にするために十分に露出していました。1回の治療では、ラットを5〜10分間拘束する必要があります。コートに固定されているとき、ラットは拘束に苦労せず、落ち着いています。
    1. ラットコートを準備します。きれいにした生地を縫い合わせ、50cm×13cmのチューブ状のラットコートにします。ラットコートの4本の手足と背中のそれぞれに穴を開け、4つの角でネクタイを縫います。
    2. 手袋をはめ、滑りにくいテーブルの上にネズミを置き、左手でネズミの尻尾を持ち、ゆっくりと引き戻します。右手でラットコートのポートを開きます。ネズミの暗闇と穴を掘る習慣を利用して、ネズミのコートの口に置くと、ネズミは自分で穴を掘ります。
    3. ネズミがネズミのコートの中央に潜り込んだら、左手でネズミの肩甲骨の両側を持ち、右手でネズミの2つの前肢を引き抜きます。
    4. コートの前面にあるロープを締め、ロープを交差させてネズミの背中に巻き付けます。ロープの弾力性を調整し、ネズミの背中に結び目を結びます。最後に、ラットの体の後端を同様の方法で固定して、両側の後肢がラットのコートの外側にくるようにします。
    5. スイングタイプのサスペンションは、Sフックを2つ取り、ラットコートの裏側の結び目に引っ掛けて、フックを鉄フレームに引っ掛けます。この時点で、ラットはわずかに揺れた状態で、布のストリップから吊り下げられます(図1)。
      注:地面からの布のストリップの高さは約70cmで、スツールに座っている実験者が快適かつ楽に操作できます。動物が滑った場合の予防措置として、ラットの下の平らな面に厚いパッドを置きます。

2.鍼治療

  1. 消毒
    1. 鍼灸をする前に、5%ヨードフォア消毒液で局所を3回滅菌します。各ヨードフォアスクラブの後にアルコールラブを追加します。
  2. 燃える針
    注意: 火傷や怪我を防ぐために、安全対策を講じる必要があります。
    1. 止血鉗子を使って、95%アルコールに浸したコットンボールを左手で拾い上げ、ライターで火をつけます。
    2. 右手の親指、人差し指、中指で針の柄を少し湾曲した位置に持ち、ペンを持つようにします。
    3. 針先と針本体をアルコールコットンボールにのせて加熱します。最初に針本体を加熱し、次に針先を加熱します。治療の目的に応じて、針が明るい白または赤になるまで針を燃やします(図2)。
      注:針本体は、完全に明るい白または赤で焼く必要があります、さもなければそれは鍼治療の有効性に影響を与えたり、術後感染や他の問題を引き起こします。
  3. 鍼
    注:速度、深さ、範囲、針の保持時間、治療目的に応じて、Lingnan Fire-Needleは、ポイント鍼治療、散乱鍼治療、密鍼治療、高速鍼治療、低速鍼治療22などのさまざまな操作技術に分けることができます。Lingnan Fire-Needleで操作するための鍵は、赤、正確、そして速いです。
    1. 針が赤く燃えるまで待ち、針を炎から離してツボの上に保持します。
    2. 針先をツボに垂直に向け、すばやく穴を開けて引き出します。プロセス全体が1秒以内に完了することを確認してください。
    3. ツボの浸透の深さは約1〜2 mmで、赤熱した針の先端のみを突き刺します。
      注:鍼治療の深さは、状態、体質、年齢、ツボの筋肉の厚さ、血管の深さ、神経の分布に応じて決定する必要があります。
    4. 各ツボを3回から5回穿刺します。これをすべてのツボで繰り返します(図3)。
      注意: 操作を実行するときは、完全に集中して機敏にしてください。ラットの同じ手順では、同じ火の針を使用し、針を2回の穿刺ごとに炎で再滅菌する必要があります。針を下に置いたり、滅菌を解除したりしないでください。

3. 鍼灸後の管理

  1. 火針を皮膚から離し、滅菌済みの乾燥した綿球を持って針穴を押して出血を防ぎます。火針療法後、ラットは運動障害がなく、検出可能な合併症も示さなかった。
    注:ファイヤーニードリング後に出血が発生した場合は、出血を止める必要はなく、自然に止まった後に乾いた綿球で拭くだけです。

4. データの収集と分析

  1. 6コースのファイヤーニードリング介入の後、ペントバルビタールナトリウム(150-200 mg / kg)の高用量腹腔内注射によりラットを安楽死させます。.大腿骨標本を採取し、マイクロCTスキャンを行う23.
  2. 解析ソフトウェアを使用して、データを統計的に分析します。測定値を平均として表示し、一元配置分散分析を使用して分析し、p <0.05 を統計的に有意と見なします。

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結果

表1のデータは、正常群と比較して、モデル群の海綿骨の厚さ(Tb.Th)、海綿骨の数(Tb.N)、および海綿骨の静的パラメータ骨体積率(BV / TV)がすべて有意に減少し(p <0.05)、海綿骨の分離(Tb.Sp)が上昇した(p <0.05)ことを示しています。ラットの大腿骨端の海綿骨が豊富な領域の海綿骨の骨構造が脱骨粗鬆症後に有意に破壊されたことを示しており、明らかな損傷を示しています。

モデル群と比較して、火鍼治療群では大腿骨の海綿骨厚、海綿数、および大腿骨の静的パラメータ骨量分率が有意に増加(p <0.05)、海綿分離が減少(p <0.05)した。このことから、骨除去によって誘発された骨粗鬆症モデルラットにおいて、火針治療が大腿骨の海綿骨構造の損傷を改善できることが示唆された。

図4 は、各グループのラット骨海綿基の3次元構造画像を示しています。 図 4A

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ディスカッション

嶺南の火針療法には深い歴史的背景があります。火の針と針の方法に関する記録は、黄帝内京にまでさかのぼることができます。現代の鍼灸師であるSitu BellとZhang Jiaweiは、嶺南の気候と人々の身体的特性を組み合わせて、嶺南の火針療法を作成しました3。林国華は、嶺南ファイヤーニードル療法を、温める、浚渫する、調子を整える、クリアにする、除去する、温めることをエッセンスとしてまとめました24。

火の針を使用するための最初のステップは、適切な種類の針を選択することです。ファイヤーニードルは、シングルヘッド、マルチヘッド、フラットヘッドの3つの主要なカテゴリに分類できます。シングルヘッドの火針は、臨床現場で広く使用されており、多系統疾患に一般的に使用されています。マルチヘッドの火針は、主に皮膚疾患の治療に使用される、3つの細いまたは3つの中粗い火針を三角形に組み合わせています。フラットヘッドの火の針は、皮膚

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開示事項

著者は、開示することは何もないと宣言します。

謝辞

この研究は、中国国家自然科学基金会(NSFC)第82374564号(YJDへ)およびNo.82074566(YJDへ)、および中国武漢の世界鍼灸学会連盟の漢方鍼灸灸のための孫国傑継承基地(世界鍼灸学会連盟[2019]第26号)からYJDおよび国家中医薬管理局の全国有名TCM継承スタジオ建設プロジェクトへの資金提供を受けて行われました。 中国(国家中医薬総局[2022]第5号)からYJD.

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
75% アルコール山東 Lircon medicaltechnology co., ltd消毒
95% アルコールShandong Lircon medicaltechnology co., ltd火傷針
成虫 女性 Sprague-Dawley (SD) ラット遼寧省 Changsheng バイオテクノロジー co., ltd.SCXK 2020-0001骨粗鬆症のモデリング
デラックス サーモスタット ヒートマットZhenhua Instrumentsラットの体温を維持するため。
ジクロフェナクナトリウム注射山東省Jianmuバイオ医薬品株式会社150182913解熱剤および鎮痛剤
高架固定ラック台州市愛科学および教育機器株式会社ネズミの
火の針北京Luoya Shanchuan医療機器有限公司20190240を針で刺すツール
島シュルツバイオテクノロジー株式会社ネズミ
Liguter上海町貿易有限公司を修正H5Ignite アルコール
Lodophor 消毒液青島海の Hainuo Inovation 消毒技術有限公司2016-0604消毒
医療用コットンボール江蘇三沢医療用品有限公司20172142357消毒
ペントバルビタールナトリウム北京Jiehuiバイオテクノロジー株式会社P3761麻酔
ペット電動クリッパーFenghua Xikou Lubaoナイフ&はさみ電化製品工場ズミの毛を剃る自
作のラットコート固定ネズミピン
セット島シュルツバイオテクノロジー株式会社ピンチコットンボール
を固定する止血鉗子青ネ青

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