ここでは、骨粗鬆症モデルラットの介入におけるLingnan Fire-Needle療法の適用のためのプロトコルを紹介します。
方法論記事
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ここでは、骨粗鬆症モデルラットの介入におけるLingnan Fire-Needle療法の適用のためのプロトコルを紹介します。
糸状針治療と比較して、ファイヤーニードル療法は針の刺激と熱の温め効果の両方があるため、一部の慢性疾患や難病に予期しない効果をもたらします。骨粗鬆症(OP)は、閉経後の女性や中高年男性に多く発症し、治療サイクルが長いです。伝統的な中国医学(TCM)によると、嶺南の火針療法は骨粗鬆症の治療に可能性を示しています。しかし、広く使えるようになるまでには、まだ長い道のりがあります。この記事では、ラットのOPの介入におけるLingnanファイヤーニードル療法の適用に焦点を当てています。鍼道具の選択、ツボの選択、ラットの体の位置決め、固定方法をカバーしています。また、ファイヤーニードルによるニードリング中およびニードリング後に取るべき手順と注意事項についても概説します。実験は、正常グループ、モデルグループ、火針グループの3つのグループで行われ、それぞれに10匹のラットが含まれていました。火針群のラットは、6セッションにわたって火針介入で治療されました。介入期間終了後、大腿骨標本を採取し、マイクロCTスキャンを実施しました。この結果は、ファイヤーニードリングがOPラットの骨の形態とミネラル密度を増強できることを示唆しています。この情報は、火針療法に関する基礎研究を行うための方法論的基礎として役立ちます。
漢方薬では、気候や環境などの要因が人の体格に影響を与え、それが病気の発生や発症に影響を与えると考えています。中国の嶺南地域は、主に広東省、広西チワン族自治区、海南島を含み、熱帯モンスーン気候地域に位置しています。その結果、この地域に長期間住んでいる人々は、一種の脾臓欠乏症になりがちです。場合によっては、腎臓や肝臓に広がり、骨粗鬆症の有病率につながります1。脾臓と胃は、気と血液の生化学の源である水と穀物を輸送および吸収する機能を果たし、肝臓は骨髄の維持を助けます。したがって、骨の栄養は脾臓、胃、肝臓の供給に依存しています。漢方薬では、腎臓は骨髄を生成して骨を強化することができ、その活力は骨の強度と機能に直接影響します。したがって、腎臓欠損症は骨粗鬆症に直接関係しています。TCMによると、肝臓(Gan)-腎臓(Shen)の欠乏とエッセンス(Jing)の欠如が根本的な原因です。場合によっては、脾臓(Pi)と胃(Wei)の欠乏、または2つのバランスの乱れが原因で栄養失調が発生することがあります。つまり、肝臓(Gan)、腎臓(Shen)、脾臓(Pi)、胃(Wei)の欠乏が根本的な原因であり、外部の気(Xie qi)が経絡を塞ぎ、骨や筋肉に損傷を与えます。世界保健機関(WHO)によると、OPは骨量が少なく、組織の劣化2を特徴とする病状であり、高齢者にとって深刻な懸念事項となっています。適切な介入の選択は、骨粗鬆症の予防と治療にとって非常に重要です。
現代の鍼灸師は、嶺南の気候と嶺南の人々の身体的特徴を組み合わせることにより、火の針治療のユニークな嶺南の特徴を開発しました3。ファイヤーニードルセラピーは、特殊な針を赤く焼いて、人体の特定の部分やツボにすばやく突き刺してさまざまな病気を治療する治療法の一種です。この方法は、皮膚疾患、筋骨格系および関節疾患、神経疾患、およびその他の全身性疾患に広く使用されており、良好な有効性を示しています4。火の針による骨粗鬆症の治療は、長い間診療所で使用されており、単純な鍼治療や伝統的な漢方薬の経口投与よりも優れた治療効果があります5,6,7。Lingnanの火の針療法は、鍼治療、三刃の鍼、瘢痕化灸を統合しています。腎臓を温めながら、経絡の気と血液循環を改善することができます。この治療法は、TCMにおけるOPの病因に寄与するうっ血と腎臓(シェン)欠乏症の両方に対処することができます。さらに、低コストで、効果が早く、治療期間が短く、安全であるという利点があります。しかし、そのメカニズムについては研究が不足しています。この論文では、骨粗鬆症モデルラットにおけるLingnan Fire-Needleの具体的な手順を紹介し、関連する基礎研究を実施するための方法論的基礎を提供します。
すべての実験は、国立衛生研究所の実験動物の世話と使用に関するガイドに従って実施され、湖北大学TCMの施設動物管理および使用委員会によって承認されました。試験には、体重220±20gの成体の雌Sprague-Dawley(SD)ラットを使用しました。すべてのラットは、23±1°C、湿度40%〜50%で12時間の明暗サイクルで維持され、餌と水に自由にアクセスできました。
1. 術前準備
2.鍼治療
3. 鍼灸後の管理
4. データの収集と分析
表1のデータは、正常群と比較して、モデル群の海綿骨の厚さ(Tb.Th)、海綿骨の数(Tb.N)、および海綿骨の静的パラメータ骨体積率(BV / TV)がすべて有意に減少し(p <0.05)、海綿骨の分離(Tb.Sp)が上昇した(p <0.05)ことを示しています。ラットの大腿骨端の海綿骨が豊富な領域の海綿骨の骨構造が脱骨粗鬆症後に有意に破壊されたことを示しており、明らかな損傷を示しています。
モデル群と比較して、火鍼治療群では大腿骨の海綿骨厚、海綿数、および大腿骨の静的パラメータ骨量分率が有意に増加(p <0.05)、海綿分離が減少(p <0.05)した。このことから、骨除去によって誘発された骨粗鬆症モデルラットにおいて、火針治療が大腿骨の海綿骨構造の損傷を改善できることが示唆された。
図4 は、各グループのラット骨海綿基の3次元構造画像を示しています。 図 4A は正常グループ、 図 4B はモデル グループ、 図 4C は火針グループです。図からもわかるように、正常群と比べると、モデル群では大腿骨海綿基部の中心や周辺にまで多数の小柱が失われ、下部に多数の空洞が出現しました。骨構造の全体的な連続性が損傷を受け、遊離骨小柱の一部が出現しました。モデル群と比較して、ファイヤーニードル群では大腿骨海綿骨の中央と周辺部の小柱の厚さが大幅に増加し、骨全体の構造の連続性が向上した。このことは、卵巣摘出術誘発性骨粗鬆症のラットモデルにおいて、ファイヤーニードルが大腿骨の海綿骨の海綿骨構造を保護できることを示唆している。

図1:ラットの固定方法:コートで縛られたスイングラット。ラットにラットコートを着せた後、ラットを2つのSフックで引っ掛けることにより、ラットを固定し、空中に吊り下げます。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2:嶺南の火針(A)針工具0.40 mm x 13 mmのサイズの細い火針を選択します。アルコールを染み込ませたコットンボールに針先と針本体をのせて加熱します。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

(A)ピシュ(BL 20):第12胸椎の下部2つの側面の肋骨の間、中背線から6 mmの位置 (B) 神舟(BL 23):第2腰椎の下部2辺、中央背側から6 mmの位置 (C)ズサンリ(ST 36): 膝の後側と外側、腓骨の小さな頭の約3mm下にあります。(D)三陰角(SP 6):後肢の内側の足首の先端から約10mmまっすぐ上にあります。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4:ラットの大腿骨遠位端の海綿骨の3次元構造の様々なグループの比較。(B) モデルグループ。(C)火針グループ。スケールバー:500μmこの図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
| 群 | Tb.N(mm) | Tb.Sp(mm) | Tb.Th(mm) | BV/テレビ |
| ノーマルグループ | 3.29±0.47 | 0.23±0.06 | 0.12±0.03 | 0.39±0.14 |
| モデルグループ | 0.96±0.78* | 0.66±0.44* | 0.09±0.01* | 0.17±0.11* |
| 火針グループ | 2.73±0.76Δ | 0.33±0.20Δ | 0.12±0.02Δ | 0.33±0.16Δ |
表1: 大腿骨粗鬆症の微細構造指数に対するファイヤーニードリング効果。データは平均±SDを示し、n = 10です。正常群との比較では、*p<0.05;モデルグループΔp<0.05で比較しました。
嶺南の火針療法には深い歴史的背景があります。火の針と針の方法に関する記録は、黄帝内京にまでさかのぼることができます。現代の鍼灸師であるSitu BellとZhang Jiaweiは、嶺南の気候と人々の身体的特性を組み合わせて、嶺南の火針療法を作成しました3。林国華は、嶺南ファイヤーニードル療法を、温める、浚渫する、調子を整える、クリアにする、除去する、温めることをエッセンスとしてまとめました24。
火の針を使用するための最初のステップは、適切な種類の針を選択することです。ファイヤーニードルは、シングルヘッド、マルチヘッド、フラットヘッドの3つの主要なカテゴリに分類できます。シングルヘッドの火針は、臨床現場で広く使用されており、多系統疾患に一般的に使用されています。マルチヘッドの火針は、主に皮膚疾患の治療に使用される、3つの細いまたは3つの中粗い火針を三角形に組み合わせています。フラットヘッドの火の針は、皮膚25,26のさまざまな種類のほくろ、いぼ、およびその他の過剰な生物を除去するために一般的に使用されます。この研究では、シングルヘッド針を選択したのは、より広い用途とより多くの機能を備えているため、ラットのサイズに適した細い針を簡単に入手できるためです。
第二に、火針療法の適切な使用には、針を焼灼するための重要な基準が必要です。研究者27 は、針を特定の温度まで焼灼することがその効果のために必要であることを発見しました。温度が十分に高くない場合、刺激は関連する病理学的変化を緩和しない可能性があります。したがって、所望の治療効果を達成するためには、火針療法で使用される針を赤みがかったまたは明るい白色に燃焼させ、次に選択したツボまたは部品に迅速に挿入する必要があります。さらに、ファイヤーニードルによるニードルの燃焼基準は、ファイヤーニードルの器具、ニードリング部位、および治療する疾患によって異なるため、 表2を参照できるファイヤーニードルによるニードルの燃焼基準をまとめました。本研究では、マルチヘッドの火針の代わりに、シングルヘッドの火針をマルチポイント刺激に使用しました。これは、複数の針が近すぎると、各針が均一に焼灼されることを保証できなかったためです。
| ニードルツール | 針の燃焼の程度 | 徴候 |
| シングルヘッドファイヤーニードル | 赤みがかった赤。 | 骨と関節の病気と痛みを伴う病気 |
| マルチヘッドファイアニードル | 針の先端が少し熱いです。 | にきびなどの皮膚病 |
| フラットヘッドファイヤーニードル | 明るい白。針の持ち手は少し熱いです。 | 糸状疣贅などの新生物 |
表2: 針を燃やすための基準。
ファイヤーニードルの挿入角度については、通常は垂直です。針をどこまで深く挿入するかについては、まだ確立された基準はありません。ただし、一般的には、筋肉が多く皮膚が厚い領域には深い挿入が適しており、皮膚や筋肉が薄い領域には浅い挿入がより適切であると示唆されています。さらに、この分野の多くの専門家は、ニードリングの火の深さは糸状ニードルニード28の深さのようであるべきだと信じています。ある研究によると、火の針の深さは、ツボを針で刺すときは糸状針よりも浅く、痛みのポイントを針で刺すときは糸状針よりもわずかに深くなければならないことが示唆されています22。そのため、実際にファイヤーニードルを装着するにあたっては、まずフィリフォームニードルの規格を参考にした上で、臨床経験に基づいてニードリングの深さを決定することが望ましいです。
嶺南の 192 人の専門家の集合的な意見に基づくと、高リスク グループでの OP の主な原因は腎臓 (シェン) 欠乏症であり、二次的なうっ血につながります。したがって、OPの治療には、腎臓(Shen)欠損症とうっ血の両方を同時に処理することが含まれます29。現在、鍼灸はOPの治療法として広く使用されています。鍼治療には、糸状針治療、灸、温鍼、電気鍼(EA)、糸埋め込み療法、ツボ注射、鍼灸と薬の併用、鍼灸と鍸の併用などがあります。これらのうち、臨床診療で最も使用されている治療法は、糸埋め込み療法、灸、および鍼治療と医学の組み合わせです30。臨床的には、ファイヤーニードル療法は、運動器系、神経系、内分泌系、消化器系、産科、婦人科など、いくつかの臓器系を対象とした137の異なる疾患に広く使用されており、その中で最も適用されているのは運動疾患である31。嶺南ファイヤーニードルセラピーは、鍼治療、三刃鍼、瘢痕化灸の利点を組み合わせた治療法です。経絡の気と血液循環を改善し、腎臓(シェン)を温めることができます。この治療法は、TCMにおけるOPの病因に寄与するうっ血と腎臓(シェン)欠乏症の両方に対処することができます。また、低コストで効果が早く、治療期間が短い、安全性が高いなどのメリットもあります。臨床試験では、火鍼療法と鍼治療の組み合わせが、単純な鍼治療や薬物療法よりもOPの治療に効果的であることも示されています5,6。関節痛はOPの代表的な症状の一つであり、関節痛の治療においては、ファイヤーニードル療法の有効性が糸状ニードル療法よりも有意に優れていることが確認されている32。
骨の強度は、骨の密度、つまり単位体積あたりの骨の量に依存します。骨量の構成要素である骨梁の数と分布は、骨量、ひいては骨密度に大きく影響します。骨量分率は、組織体積の単位当たりの骨量の割合を示し、骨量23の重要な参考値である。骨格系の一部として、海綿骨の主な機能は動きをサポートし、促進することです。ただし、サイズを大きくすると骨密度が低下し、骨強度が低下する可能性があります。海綿骨の骨格構造は海綿状で、小柱で構成されています。したがって、海綿骨の構造は小柱によって決定されます。海綿骨の強度を維持するためには、骨組みとして十分な小柱が存在することを確認することが重要です。第二に、骨33の構造的安定性を確保するために、小柱間の接続部を比較的適切な数に保つことが必要である。小柱がある程度の荷重を運ぶことができるようにするには、その厚さを維持する必要があります。海綿骨の構造は、存在する小柱の数、それらの接続性、およびそれらの厚さ34に基づいて評価されます。海綿骨の構造パラメータを比較した結果(表1)、ラットのモデル群と正常群との間に有意な差があることが明らかになりました。モデル群では、大腿骨の小柱の数、小柱の厚さ、および骨容積分率が減少しましたが、小柱の分離は増加しました。これらの知見は、海綿骨の構造がモデル群を変化させ、骨粗鬆症などの骨疾患を引き起こす可能性を示唆しています。海綿骨の立体構造画像から、中央部には小柱が欠損しており、周辺部上部の小柱の半分以上が欠損していることが観察されました。これは、卵巣摘出術後のラットの大腿骨の骨構造の完全性が損なわれたことを示しています。モデル群と比較して、ファイヤーニードル群の大腿骨は、小柱、小柱の厚さ、骨容積分率の増加、および小柱分離の減少を示しました。また、海綿骨の3次元構造図を考えると、火針群の中央空洞が縮小し、末梢骨小柱が完成することが観察されました(図4)。この研究は、ファイヤーニードル療法が効果的に予防し、制御することを示しています 卵巣摘出術を受けたラットの大腿骨の海綿骨構造への損傷。
この研究のために選択された卵巣摘出モデルラットの限界は次のとおりです。エストロゲンの減少は、一次OP35のリスク要因の1つです。このため、卵巣摘出術は、OPラットモデル8,9,10を確立するための信頼できる方法です。さらに、SDラットは簡単にアクセスできるだけでなく、おとなしく、摂食条件がリラックスしています。そこで、私たちはまずこのモデルを検討し、ツボを刺激するために細い火の針を使うことを推奨しました。私たちの長期的な計画は、高齢ラットなどの他のモデルでのOPの緩和におけるファイヤーニードリング療法の有効性をさらに検証することにより、研究範囲を拡大することです。最後に、表3は、骨粗鬆症モデルラットに対する鍼治療単独の有効性とその作用機序をまとめたものである。私たちは、今後の36,37,38,39,40,41,42で可能なメカニズムについて、より詳細な調査を行う予定です。
| 結果インジケーター | 作用機序 | 参考 | ||||
| 骨吸収 | 鍼治療は、骨吸収を抑制することにより、骨量の減少と構造変化を防ぎます。 | 36 | ||||
| 骨の強度 | 鍼治療は、海綿骨の体積と厚さを増加させ、脛骨の小柱分離を下げ、リンとDpdの排泄を制限しながら、血清オステオカルシンの濃度を促進しました。 | 37 | ||||
| 骨代謝 | 鍼治療は、OVXラットの血清ALP、BGP、およびTRAPレベルを大幅にダウンレギュレートできます。 | 38 | ||||
| シグナル伝達経路 | 鍼治療は、Wntシグナル伝達経路を調節することにより、ラットの骨塩密度を改善し、in vivoの炎症反応を弱め、骨形成に影響を与える因子レベルを増加させます。 | 39,40 | ||||
| 内分泌調節効果 | 鍼治療は、エストラジオール、コルチコトロピン放出ホルモン(CRH)、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)、およびコルチコステロン(CORT)の血清レベルを調節しました。 | 41 | ||||
| 体重 | 鍼治療は、レプチンレベルの変化を調節して体重増加を抑制します。 | 36,41 | ||||
| 脳由来神経栄養因子 | 鍼治療は、BDNFおよびTrkBの発現レベルを上昇させ、骨粗鬆症後の骨折治癒のプロセスを加速することができます。 | 42 | ||||
表3: 骨粗鬆症モデルラットの有効性に対する単純鍼治療の効果。
著者は、開示することは何もないと宣言します。
この研究は、中国国家自然科学基金会(NSFC)第82374564号(YJDへ)およびNo.82074566(YJDへ)、および中国武漢の世界鍼灸学会連盟の漢方鍼灸灸のための孫国傑継承基地(世界鍼灸学会連盟[2019]第26号)からYJDおよび国家中医薬管理局の全国有名TCM継承スタジオ建設プロジェクトへの資金提供を受けて行われました。 中国(国家中医薬総局[2022]第5号)からYJD.
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 75% アルコール | 山東 Lircon medicaltechnology co., ltd | 消毒 | |
| 95% アルコール | Shandong Lircon medicaltechnology co., ltd | 火傷針 | |
| 成虫 女性 Sprague-Dawley (SD) ラット | 遼寧省 Changsheng バイオテクノロジー co., ltd. | SCXK 2020-0001 | 骨粗鬆症のモデリング |
| デラックス サーモスタット ヒートマット | Zhenhua Instruments | ラットの体温を維持するため。 | |
| ジクロフェナクナトリウム注射 | 山東省Jianmuバイオ医薬品株式会社 | 150182913 | 解熱剤および鎮痛剤 |
| 高架固定ラック | 台州市愛科学および教育機器株式会社 | ネズミの | |
| 火の針 | 北京Luoya Shanchuan医療機器有限公司 | 20190240 | を針で刺すツール |
| 島シュルツバイオテクノロジー株式会社 | ネズミ | ||
| Liguter | 上海町貿易有限公司を修正 | H5 | Ignite アルコール |
| Lodophor 消毒液 | 青島海の Hainuo Inovation 消毒技術有限公司 | 2016-0604 | 消毒 |
| 医療用コットンボール | 江蘇三沢医療用品有限公司 | 20172142357 | 消毒 |
| ペントバルビタールナトリウム | 北京Jiehuiバイオテクノロジー株式会社 | P3761 | 麻酔 |
| ペット電動クリ | ッパーFenghua Xikou Lubaoナイフ&はさみ電化製品工場 | ズミの毛を剃る自 | |
| 作のラットコート | 固定ネズミピン | ||
| セット | 島シュルツバイオテクノロジー株式会社 | ピンチコットンボール |
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