<ol><li>ビデオに示すように、フローチャンバーを構築します。パラフィルムでシールがタイトであることを確認して、洗浄カバースリップを使用してください。 </li><li> 50〜10&#39;のチャンバー内でインキュベートするアクチン結合剤。 </li><li>ブロッキング蛋白質のガラスカバースリップ上の非特異的結合部位をブロックする。 </li><li>バッファを重合でG -アクチンに流れることによりチャンバー内のアクチンを重合する。 </li><li>過剰なバッファに流れることによってウォッシュ未重合のアクチン。 </li></ol>

タイムラプス顕微鏡で分解アクチンの監視

さて、今日は、直立顕微鏡でイメージングするための融合チャンバーであるフローチャンバーの作り方をお見せしたいと思います。その後、フィルムを使って2つの空間を作ります。だから、パラフィルムを小さなストリップにカットします。次に、これは基本的に壁のチャネルを形成し、傾いた空気でそれらを乾燥させます。パラの上にカバースリップを乗せて、出来上がったのがこちらです。次に、ヒートブロックで加熱してパラメータを溶かし、基本的にシールを作成します。これが何であるかというと、ここのカバーガラスで、カバーガラスの上には、ここにあるようにフィムが2層になっています。そして、これに加えて、再び、22×2の2ミルメートルのカバースリップがあります。これはまさにここにあり、シールを落とすためにパラメータを押し付けました。さて、液体はここで一方向に入り、ここの濾紙でこの方向に吸い出すことができます。そして、その方法を少しお見せします。ですから、私が好きなのは、加湿されたチャンバーに入れるのが好きで、これは非常に簡単です。2種類の高架ストリップを取り、その下に紙のフィルターがあります。そして、それをうるさくしないように、フローチャンバーにカバー、カバースリップを付けます。さて、チャンバーに解決策を導入する方法は、ピペットの先端をチャンバーの入り口に置くだけで、分割するだけです。今、私がしていることは、蓋を閉めた状態でチャンバーを10分間インキュベートすることです。私が通常、反対側から液体を吸い出すために行うことは、それを使用して、ろ紙を手に入れ、このように細いストリップにカットすることです。そして、この細いストリップの1つを取り、同時に溶液を入り口に塗布すると同時に、出口に濾紙を置いて交換液である溶液を吸い込みます。そのため、溶液を液体が流れているのがわかります。そして、ミッドクローズまで5分待ちます。今、私がやるべきことは、アクチンとアクチンを実際に置くことです、私は実際に重合する必要があります、私はフローチャンバー内で重合します、そしてそれは以前とまったく同じ手順です。このように、作用が重合するようになったので、大量のジャストバッファーを使用して、余分な未重合作用をすべて洗い流します。ここには約100マイクロリットルがあり、反応チャンバーの容量が数個分のバッファーです。ただ、濾紙が飽和状態になると、方向を変えなければなりません。大丈夫です。そして、これでイメージングを行う準備が整いました。つまり、アクチンが付着した灌流チャンバーです。次に、スライドを顕微鏡の下に取り付け、オイル対物レンズでイメージングしているので、カバーの上面に浸漬オイルを塗り、草に触れるようにして、溶液やタンパク質など、内部で作用するものを評価します。だから、私がやっているのは、タイムラプスイメージングをしながら、実際にソリューション側を交換することができるということです。そのように。

タイムラプス顕微鏡で分解アクチンの監視

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