段階的肝切除術 (ALPPS) のための肝臓分割と門脈結紮を関連付けると、第 1 段階の手術後数週間後に顕著な肝臓再生がもたらされることが示されています。ALPPSを受けた動物モデルは、潜在的な肝臓再生能力を探求し、良好な臨床結果を達成するために開発されました。
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この記事について
サマリー
要約
肝切除術は、肝悪性腫瘍の主要な治療法と広く見なされています。それでも、術後肝不全は依然として周術期死亡の主な原因であり、患者の転帰に深刻な影響を及ぼしています。堅牢な肝臓環境では、将来の肝残存物(FLR)は25%を超える必要があり、肝硬変の場合、この要件は40%以上に増加します。FLRの不十分さは、現在、肝臓手術の進行における大きな障害となっています。
FLR肥大を強化する従来の方法は、主に門脈塞栓術(PVE)に焦点を当てていますが、その有効性はかなり限られています。近年、肝臓分割と門脈結紮の関連付けとして知られる、肝分割と門脈結紮を伴う新しい二相性肝切除術法に関する多数の報告があります ステージ肝切除術 (ALPPS)。ALPPSは、効率的かつ大幅にFLR肥大を誘導する点でPVEを上回っています。しかし、ALPPSが促進する肝再生を駆動する詳細なメカニズムは十分には解明されていません。したがって、ALPPSを動物モデルで再現することは、肝臓再生の分子メカニズムを徹底的に調査するために重要であり、貴重な理論的および実践的な洞察を提供します。
概要
肝臓は恐ろしい再生能力を秘めており、さまざまな肝疾患の切除後わずか3か月で代謝要求を急速に増殖および回復します1。しかし、腫瘍の縁の完全性を確認する必要性は、広範な肝切除の必然性を必要とします。したがって、将来の肝残骸(FLR)として知られる参加型肝環境の十分な量を確保することは、最も重要性を帯びています2。ALPPSは、過去数十年にわたる肝臓手術における画期的な技術であり、特に腫瘍切除後の残存肝量が不十分な患者向けに調整されており、肝臓腫瘍手術の領域で最も縁起の良いブレークスルーの1つとして歓迎されています3。
ALPPS動物モデルの開発は目覚ましい進歩を遂げています。理想的なモデルでは、典型的には、保存された肝葉における独立した血液流入(門脈と肝動脈)と流出(肝静脈)が必要であり、側副循環を防ぐために保存された肝葉と切除される肝葉との間に明確な分離が必要である4。ALPPSは、残存する肝臓組織における肝臓の急速な再生を促しますが、その具体的なメカニズムはまだ解明されていません。
現在、ALPPSモデルは、大型動物モデル(豚や羊など)、中型モデル(ウサギやげっ歯類....
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プロトコル
このプロトコルのすべての実験は、江西省人民病院の獣医当局によって承認されました(番号70/2022)。さらに、すべての実験ステップは、施設動物管理および使用委員会に厳密に準拠して実施されました。
1. 手術開始
注:体重20〜22gの雄C57BL/6マウスを換気の良いケージに収容し、標準的な病原体のない環境で12時間/12時間の明暗サイクルで維持しました。動物たちは、22°Cから1°Cに制御された周囲温度で、餌と水 を自由に摂取± ことができました。 手術は、専用の顕微手術室で手術用顕微鏡を用いて行いました(図1)。偽群のマウスは開腹術のみで手術されましたが、肝臓の手術は行われませんでした。PVL群では門脈枝の一部を結紮し、ALPPS群では門脈結紮術(PVL)に基づいて中肝葉を切除した。
- マウスを術前4〜6時間の絶食期間にさらします。
注:食事はマウスの胃の膨らみを引き起こし、手術野が悪くなり、胃壁に偶発的な損傷を受けやすいため、絶食が必要です。 - マイクロ鉗子、はさみ、腹部開創器、および事前に準備された8-0を含む滅菌手術器具を手配しますサイドテーブル上の門脈結紮糸縫合糸。滅菌ガーゼとコットンボール....
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結果
PVL(プロトコルステップ2、3、4、および5)とは対照的に、ALPPS(ステップ2、3、4、5、および6)の外科的介入を受けたマウスは、細胞増殖に対する高い傾向を示しました。図2は、門脈結紮後の中肝葉の虚血性境界と、ALPPSとPVLの重要な違いを表す肝切断中の視野を示しています。特に、肝組織内の炎症性メディエーター(TNF-α(TNF-α)、インターロイキン、肝成長因子(HGF)のレベルは、PVLグループで観察されたレベルを上回っています。これは、ALPPSグループがPVLグループよりもIL-6レベルが高かった図4Cに見られ、炎症が急速な肝臓再生に関与している可能性があることを示唆しています。これらの知見をさらに実証するために、肝臓と体重の比率と、広く認識されている細胞増殖のマーカーであるki67の発現レベルの比較分析が、術後2日目に肝臓組織内で行われました。図4A、B、および図5.......
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ディスカッション
この研究では、マウスのALPPS手術の初期段階のプロトコルを提示します。これには、門脈の部分的な結紮と正中肝葉の分割が含まれます。この方法は、ヒトのALPPS手順を密接に模倣しており、マウス肝臓のユニークな小葉構造と正中葉への二重門脈供給により、手術後の明確な血流が確保されます11。ALPPSの手術は、2つの異なる手術段階で構成されていることは注目に値します。この研究では、門脈分岐結紮術と肝切断を含む初期段階 (PVL+T として示されます) のみを提示します。説明の統一性を維持するために、ALPPSはPVL + Tと同等であると考えています。これまでの研究は主にラットモデルに焦点を当ててきましたが、チューリッヒ大学のチームは、マウス特異的なALPPSプロトコル12について独自に報告しました。しかし、マウスの標準化された操作手順は、まだとらえどころのないままです。ラットと比較して、マウスは遺伝子操作が容易で、肝臓再生における幅広い研究の機会を提供しているため、マウス特異的なA.......
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開示事項
著者は、宣言する利益相反を持っていません。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 5%グルコース注射(500mL) | Shapuaisiファーマ(http://www.zjspas.com/) | H20003666 | 効率的、安価、アクセスしやすい |
| 麻酔器 | RWD(www.rwdls.com) | R500 | と貴重な品質。初心者との操作に適しています |
| C57 BL/6 | ジャクソンラボ | 22349-2023 | 菌株の安定性 |
| KCSW (kcsw.szqisoubao.com) | H19980141 | 耐久性、費用対効果の高い | |
| メロキシカム | ベーリンガー・インゲルハイム | H20020217 | 耐久性と効率性に優れた |
| マイクロ鉗子 | 60018920 | 耐久性と効率性 | |
| マイクロインスツルメント | CHマイクロサージュリーインスツルメントファクトリー | HC-A804-1 | 耐久性があり、費用対効果の高い |
| 乳酸ナトリウムリンガー | Shapuaisi pharma (http://www.zjspas.com/) | H20193277 | 効率的で安価、アクセスしやすい |
| 縫合ライン | CHマイクロサージェクティブインスツルメントファクトリー | 6-0/8-0 | 高性能価格比 |
| 局所抗体 | chenxin pharmacology (www.cisen-pharma.com) | H20020217 | 切開感染を効果的に回避します |
参考文献
- Michalopoulos, G. K., Bhushan, B. Liver regeneration: Biological and pathological mechanisms and implications. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 18 (1), 40-55 (2021).
- Chapelle, T., et al.
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再版と許可
