このプロトコルは、マウス同所性肝移植におけるカフ技術を使用した血管再建のための技術情報を提供します。
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この記事について
サマリー
要約
マウス同所性肝移植は、肝虚血や再灌流障害の根底にあるメカニズムを調べるための有効な方法論です。しかし、技術的な課題は、この貴重な実験モデルを活用し、これらのスキルを次世代に継承する上での障壁となっています。この手順の最も困難な側面は、門脈 (PV)、下肝下大静脈 (IHIVC)、および下大静脈上を含む血管再建です。縫合糸ではなくプラスチック製のカフを使用することで、PVやIHIVCの再建をよりスムーズに行うことができます。静脈カテーテルで作ったカフを移植血管の先端に取り付け、カフをレシピエント血管に介在させることで血管を再構築します。最も重要な2つの側面は、血管の内腔を適切に視覚化することと、過度の力の使用を避けることです。私たちの目的は、レシピエント手術におけるカフ技術を使用した血管再建の技術的概要を提供することです。カフ技術に関するこれらの技術的ヒントは、顕微外科医が血管再建を容易にし、研究を前進させるのに役立つと期待されています。
概要
マウス同所性肝移植(MOLT)は、1991年に最初に報告された効果的な実験方法です1。遺伝子改変マウスや各種研究用試薬を用いたこの実験モデルは、温冷虚血や再灌流障害の研究に重要な役割を果たしてきました。しかし、このモデルの高い技術的複雑さは、肝移植のための基礎医学の開発を妨げてきました2。MOLTは、(1)ドナーマウスからの肝臓の回収、(2)バックテーブル手術、(3)レシピエントへの肝臓移植の3つの主要なステップから成ります。これらのレシピエント手順の中で、血管吻合は最大の課題をもたらします。下大静脈上吻合は通常、手縫い2で完了しますが、下肝下大静脈(IHIVC)と門脈(PV)は、手縫いの縫合の代わりにプラスチック製の袖口を使用してより効率的に再建できます。
無肝期は、レシピエントの天然肝臓の除去と移植片の移植片の移植の間の間隔を意味します。一貫した結果を得るには、無肝時間を20分未満に制限することが不可欠です。その結果、このモデルを採用した研究は、特定の機関に限定されている3,4,5,6,7,8,9。....
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プロトコル
この実験計画書は、京都大学の動物実験委員会で承認されました。この研究では、市販の供給源から入手した、10週間齢以上、体重25gから30gのC57BL/6マウスを利用しました( 「材料の表」を参照)。すべての動物に2.5%イソフルランを麻酔し(施設で承認されたプロトコルに従って)、特定の病原体を含まない条件下で維持し、すべての実験手順は京都大学の動物実験規則に準拠して実施されました。研究に使用された適切な機器は、 材料表 にリストされ、 図1 と 図2に示されています。
1.動物の選択
- 体重25〜30 gのマウスを使用してください。
注: マウス肝臓同種移植片2 は、主要な組織適合遺伝子複合体障壁を越えて一般に受け入れられていますが、この研究では、寒冷虚血再灌流障害10 の詳細なメカニズムに焦点を当てるために、同系 MOLT モデルを選択しました。体重が25g未満のマウスは、薄い胆管にインナーステントを挿入できないため、推奨されません。同様に、体重が30 gを超えるマウスは、血管の周囲に大量の腹腔内脂肪が存在するため、推奨されません。
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結果
PV再建は、門脈のクランプを外したときに曲がりくねった状態がなく、肝臓が均一に灌流されている場合に成功します。無肝時間が25分を超えるとマウスの死亡リスクが高まるため、無肝時間は20分未満にする必要があります。IHIVCの再建は、移植片からの血液逆流がない場合、成功したと見なされます。
臓器保存溶液を使用して移植片を低温で1時間保存すると、再灌流後6時間で血清アラニンアミノトランスフェラーゼレベルが約2,000 U / Lになります(図7A)。移植後7日での生存率は100%です(図7B)。ただし、肝動脈吻合のないモデルでは、レシピエントマウスは移植後約30日で肝内結葉腫関連の問題に屈する可能性があります
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ディスカッション
血管再建を学ぶことは、MOLTを成功させるための最も困難な側面です。カフの品質は、マウスのサイズが小さいことを考えると、再建の難しさに大きく影響します5。この記事では、カフの準備、取り付け、および再建の詳細なプロトコルを提供します。
カフの準備と接続に関する以前のレポートと大きな違いはありませんが、いくつかのマイナーな点を考慮する必要があります2,5。まず、袖口のハンドルの厚さは、全周の約1/6に制限する必要があります。薄すぎると、ハンドルが曲がりやすく、つかみにくくなります。厚すぎると、レシピエントの腹部での取り扱いが難しい場合があります。早い段階で自分の好みを特定することが不可欠です。
第二に、バックテーブルの内腔の視認性が重要です。10-0ナイロン糸が使用され、PVルーメンを確認するためのランドマークとしてドナーの脾臓静脈に取り付けられています。ナイロン糸を.......
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開示事項
開示すべき利益相反のある著者はいません。
謝辞
本研究は、2022年度JST基礎研究(日本移植学会)の支援を受けて行われました。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 16G静脈カテーテル | テルモ | SR-FF2032 | IHIVCカフ |
| 20G静脈カテーテル | テルモ | SR-FF1651 | PVカフ |
| 8-0 三つ編 | 目製作所 | CR9-80B2 | 8-0 シルク |
| ベルツァー UW冷蔵液 | アステラス | 臓器保存液 | |
| ブルドッグクランプ | B BRAUN | FB329R | ブルドッグクランプ |
| C57BL/6マウス | オリエンタルバイオサービス | ||
| イソフルラン吸入液 | ビアトリス | 麻酔 | |
| マイクロ鈍いチップ0.1 mm x 0.06 mm | F.S.T | 11253-20 | ロック付きストレートマイクロ鉗子 |
| マイクロセリファインクランプアプリケーター | F.S.T | 18056-14 | ベッセルクリップアプリケー |
| ター マイクロセリファイス | F.S.T | 18055-4 | ベッセルクリップ |
| No.11 替刃 | フェザー安全カミソ | 11 | 枚刃 |
| 眼用ハサミ 丸ハンドル | B ブラウン | FD103R | マイクロハサミ |
| プラスチック長方形容器 | ダイソー | 長さ10cm、幅15cm、高さ6cm | |
| SuperGripチップ | F.S.T | 00649-11 | 湾曲したマイクロ鉗子 |
| SZX7 | オリンパス | SZX7 | マイクロスコープ |
| バイス | 新潟精機 | 00505351 | ペアン鉗子をテーブルに固定するための機械工具 |
参考文献
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
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再版と許可
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