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方法論記事

ルーチン臨床使用のための[68Ga]Ga-FAPI-46の自動放射性合成

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DOI:

10.3791/66708

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2024年5月24日

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Radiopharmaceutical Production and Development Centre (RAPID), Medical Technology and Physics Department, Sir Charles Gairdner Hospital, 2National Imaging Facility, Centre for Microscopy, Characterisation and Analysis, University of Western Australia, 3Department of Nuclear Medicine, Sir Charles Gairdner Hospital, 4Medical School, University of Western Australia

この記事について

サマリー

この研究は、線維芽細胞活性化タンパク質のPETイメージングのためのiPHASE MultiSynシンセサイザー上で最大1.7GBqの[68Ga]Ga-FAPI-46の自動生成について説明しています。

要約

[68Ga]Ga-FAPI-46は、陽電子放出断層撮影法(PET)による線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)のイメージングのための有望な新しいトレーサーです。標識FAP阻害剤(FAPI)は、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、結腸直腸がんなど、さまざまな種類のがんへの取り込みが実証されています。FAPI-PETは、絶食や休息が不要なため、FDG-PETよりも実用的な利点もあります。[68ガ]Ga-FAPI-46は、以前に提示された[68Ga]Ga-FAPI-02および[68Ga]Ga-FAPI-04よりも強化された薬物動態特性、改善された腫瘍保持、およびより高いコントラスト画像を示します。[68Ga]Ga-FAPI-46の手動合成プロトコルが最初に記載されましたが、近年、さまざまな商用シンセサイザーを使用した自動化方法が報告されています。

この作業では、臨床応用のためのiPHASE MultiSynシンセサイザーを使用した[68Ga]Ga-FAPI-46の自動合成の開発について説明します。最初に、反応時間の最適化と、最終製品精製のための 4 つの異なる固相抽出(SPE)カートリッジの性能の比較を調査しました。次に、これらの最適化されたパラメータを用いて、0.6-1.7 GBqの[68Ga]Ga-FAPI-46の作製の開発と検証を行った。生成物は89.8±4.8%の崩壊補正収率(n = 6)で25分間で合成されました。最終製品は、推奨されるすべての品質管理仕様を満たし、合成後3時間まで安定していました。

概要

線維芽細胞活性化タンパク質(FAP)は、がんのイメージングと治療の有力な標的となっています1,2.FAPは、固形がんの微小環境の多くを構成する間質細胞型であるがん関連線維芽細胞(CAF)の特異的マーカーです。CAFは、腫瘍の成長、浸潤、および転移において重要な役割を果たします3.それらは、乳がん、前立腺がん、膵臓がんなど、ほとんどの固形腫瘍に見られます1。診断用または治療用放射性核種で標識された低分子阻害剤でFAPを標的とすることにより、これらのがんの選択的な非侵襲的イメージングと治療が達成される可能性があります4,5,6.FAPI-02、FAPI-04、FAPI-46、FAPI-74 などの FAP阻害剤 (FAPI) 分子は、68 Gaおよび 18F で標識されたキノリンベースの FAP 標的薬のクラスを表しており、ハイデルベルク大学病院およびドイツのドイツがん研究センター (DKFZ) のチームによって開発されました7,8,9,10,11、FAP阻害のための非常に有望なN-(4-キノリノイル)-グリシル-(2-シアノピロリジン)足場を特定した以前の研究を利用しています12,13。最近では、FAP-228614 や 3BP-394015 などの環状ペプチド FAP 阻害剤が、イメージングと治療の両方で開発されました。

[68Ga]Ga-FAPI-04は、乳がん、肺がん、前立腺がん、膵臓がん、結腸直腸がんを含む28種類のがんへの取り込みを示しています16.FAPI-PETは、空腹時や安静><時を必要としないという実用的な利点に加えて、消化器がん、乳がん、卵巣がん、肝臓がん、肺がんの脳転移17、FDG所見が決定的でない場合にFDG-PETよりも診断上の利点(または補完的な役割)を示しています18。68名Ga標識MAPIは、線維症や関節リウマチなどの免疫関連炎症性疾患におけるいくつかの興味深い非腫瘍学的応用も示しています19,20。最近発表された[68Ga]Ga-FAPI-46は、[68Ga]Ga-FAPI-04の変種で、修飾ドデカン四酢酸(DOTA)結合を持ち、[68Ga]Ga-FAPI-02または[68Ga]Ga-FAPI-046,10を使用して得られたものよりも高コントラストの画像を示します。.診断および治療のための標識FAP阻害剤の使用は国際特許の下で行われています21および[68Ga]Ga-FAPI-46の使用は現在ライセンスされています22。

68Ge/68Ga発生器から溶出するサイクロトロン生成68Gaまたは68Gaを使用した[68Ga]Ga-FAPI-46の調製には、手動プロトコルと自動シンセサイザーの両方の使用が含まれます。[68Ga]Ga-FAPI-02 および [68Ga]Ga-FAPI-0423,24 の方法に基づいて、[68Ga]Ga-FAPI-46 の手動ラベリング プロトコルが説明されています。手動ラベリングには特別な機器は必要ありませんが、このアプローチは、オペレーターの放射線量の増加と、production25 内の潜在的な変動につながる可能性があります。そのため、日常的な臨床アプリケーションの生産を自動化する必要があります。また、オートマチックシンセサイザーの使用は、国際的なGMP規制により準拠しています。[68Ga]Ga-FAPI-46 の準備は、さまざまなジェネレータの 68Gaを使用して、さまざまな商用シンセサイザーで開発されました26,27,28,29,30,31,32,33 またはサイクロトロンで製造68Ga34.これらの自動化メソッドの詳細は、補足表S1(補足ファイル1)にまとめられています。近年、他の68Ga標識および177Lu標識FAP阻害剤の自動合成法も発表されています35,36。

Sir Charles Gairdner Hospital RAPID Centreでは、iPHASE MultiSynシンセサイザー(以下、MSシンセサイザーと呼ぶ)での[68Ga]Ga-FAPI-46の準備を開発し、検証しました。このシンセサイザーは、私たちの研究室だけでなく、オーストラリアの他の生産施設でも、68Ga、177Lu、および89Zr標識放射性医薬品の調製に日常的に使用されています37,38,39。MSシンセサイザは、Excelのシーケンスステップリストを内部メモリにダウンロードして操作します。このシーケンスステップリストはユーザーフレンドリーで、簡単に変更できます。さらに、シンセサイザーは、ステップの繰り返し、前のステップに戻る、ステップをスキップする、必要に応じてプロダクションを一時停止するなど、プロダクションの途中での介入を可能にします。戦略的な場所に配置された放射線検出器が装備されているため、ユーザーはリアルタイムで生産プロセスを監視できます。MSシンセサイザーは、すべての市販の68Gaジェネレーターと互換性があり、シングルまたはダブルジェネレーターの溶出が可能です。この作業で説明する手順では、1つまたは2つの68Ge/68Gaジェネレーターから68Gaを使用し、68Gaの前精製と最終製品の後精製の両方を行います。この研究の一環として、3種類の精製後固相抽出(SPE)カートリッジの最適な反応時間と、サプライヤーのカセットに付属しているカートリッジとのパフォーマンスの比較も評価されました。

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プロトコル

注意：このプロトコルでは放射性物質を取り扱います。本作業を行うすべての人員は、開封された放射性同位元素の取り扱いに関する適切なトレーニングを受け、所属機関の放射線安全管理者の承認を得ている必要があります。自動合成装置は、専用の遮蔽ホットセル内に設置してください。手動での実験は、遮蔽ホットセル内または放射線遮蔽物の背後で実施してください。反応時間の最適化および各種SPEカートリッジの検討に関する予備実験は、補足セクション1（補足ファイル1）に記載されています。

1. MSシンセサイザーの準備

  1. ホットセルの圧縮空気、窒素ガス供給、換気、照明、およびノートパソコンとプログラマブルロジックコントローラ（PLC）の電源をオンにする。モジュール廃棄ボトル内の液量を確認し、3/4まで溜まっている場合は空のボトルと交換する。
  2. コンピュータを起動し、シンセサイザーソフトウェアにログインする。ユーザー名とパスワードを入力する。
  3. シンセサイザーソフトウェアでDownload recipeを押し、[68Ga]Ga-FAPI-46製造用のExcelsequence fileを選択してOpenを押す。シーケンスのダウンロードが正常に完了した後、OKを押す。
  4. Startを押し、ポップアップウィンドウにバッチ番号、試薬キットのロット番号、およびコメントを入力してOKを押す。
    注：ここから、ユーザーインターフェースにステップ操作の内容を示すメッセージが表示されるか、またはオペレーターに操作を促す指示が表示される。
  5. ユーザーインターフェースのステップメッセージに従い、古いハードウェアキットを取り除く。ユーザーインターフェースでNEXTを押す。
  6. ユーザーインターフェースのステップメッセージに従い、ジェネレーター溶出シリンジ（HCl Syringe 1）の親指掛け部分をシリンジドライバーのスロットから引き出し、シリンジをジェネレーター入口ラインからねじって外し、シンセサイザーから取り除く。ユーザーインターフェースでNEXTを押す。

2. 試薬の調製

注：［の自動製造に必要な試薬は68[⁶⁸Ga]Ga-FAPI-46（参照 表1）は、製造直前にクリーンルーム環境で調製されました。

  1. 試薬キットおよび付属品セット、微量濃度の金属を含む5 mL以上の水が入った50 mL遠心チューブ、0.1 M HClバッグ、アスコルビン酸7 mgバイアル（バイアルA）、アスコルビン酸ナトリウムバイアル（5 mg）（バイアルB）、ラテックス、PVC、シリコンオイルを含まない2 x 5 mLポリプロピレン（PP）/ポリエチレン（PE）シリンジ（デュアルジェネレーター溶出を使用する場合は3本）、および 50 µg FAPI-46ガラスバイアル（バイアルC；参照 付随図 S1A,B-付随ファイル 1).
  2. 50 mLチューブのキャップに約2 mLの水を注ぎます。5 mLシリンジ（シリンジAと表記）で1 mLの水を吸い上げます。針でキャップを閉じます。ピペットで抽出します。 400 µL 水を加え、7 mgのアスコルビン酸が入ったバイアル（バイアルA）に投入し、静かに振って溶解させる。
  3. 提供された0.25 M 酢酸ナトリウム緩衝液バイアル（試薬キットに含まれる）を開け、 50 µg FAPI-46のガラスバイアル。バッファー0.9 mLをピペットで吸い、以下に加える。 50 µg FAPI-46ガラスバイアル（バイアルB）；緩やかに混ぜ合わせる。
  4. バイアルAおよびバイアルBの内容物をシリンジAに吸引し、緩やかに混ぜ合わせる。
  5. 付属品セットに含まれる5 mLシリンジに「シリンジB」とラベルを貼付します。シリンジBを用いて、0.1 M HClバッグから0.1 M HClを5 mL採取し、付属のディスペンシングピンでキャップします。
    注：二重ジェネレーター溶出を用いて製造する場合、0.1 M HClを5 mL充填したシリンジ2本が必要です。
  6. 付属品セットに含まれている3 mLシリンジに「シリンジC」とラベルを貼ります。酸性化した5 M塩化ナトリウム溶液（試薬キット入り）のバイアルを開き、1 mLをピペットで量り取ってシリンジCに移し、付属の分注ピンで蓋をします。
  7. 0.9%生理食塩水を1 mL、5 mLシリンジ（シリンジD）で吸引し、バイアルCに加えます。シリンジDは空のままにしておきます。

3. 合成カセットの調製およびカセットの装着

  1. 専用の滅菌済み[68Ga]Gaカセットを用意する。
  2. 以下の手順に従ってカセットを組み立てる。
    1. カセットの封筒を開封し、損傷がないか確認し、各ルアー接続部を締め付ける。カセット上の各ストップコックを回して調整し、固着がなくモジュールに適合することを確認する。すべてのスパイクキャップを取り外す。
    2. 強力陽イオン交換前精製SPEカートリッジを次のようにコンディショニングする。
      1. マニホールド3（M3）バルブ7に配置されているカートリッジをカセットから取り出す。
      2. 開放した専用のガラス製廃棄ボトルをベンチ上に置く。
      3. 3 M HCl（試薬キットに同梱）を2 mL含むシリンジをSPEカートリッジに取り付け、ガラス製廃棄ボトルへゆっくりと滴下して溶出させる。シリンジを取り外し、5 mLの空気を吸引し、SPEを5 mLの空気でフラッシュする。
        注意：手順3.2.2.3では強酸（3 M 塩酸）を取り扱う。適切な保護具（手袋、保護眼鏡、白衣）を着用すること。
      4. 水（試薬キットより）を5 mL含むシリンジをSPEに取り付け、ガラス製廃棄ボトルへゆっくりと滴下して溶出させる。シリンジを取り外し、5 mLの空気を吸引し、SPEを5 mLの空気でフラッシュする。
      5. SPEをマニホールドのM3バルブ7の位置に戻す。
    3. ユーザーインターフェースのNEXTを押す。
    4. 試薬を入れない状態で、ユーザーインターフェースの表示に従い（デュアル溶出を使用する場合は図1A、Bを参照）、図1Cに記載された接続に従って新しいカセットを組み立てて設置する。
      1. 10 mLシリンジ（アクセサリセットより）をM2バルブ6に接続する。
      2. 4つのマニホールドを取り付け、シンセサイザーのマグネットロックを使用してカセットを固定する。
      3. リアクターをオーブン内に配置する。
      4. G1、W2、W1、R、およびG2ポートにチューブを接続する。
      5. M1バルブ3の右側チューブを、M3バルブ7の陽イオン交換カートリッジに接続する。
      6. M2バルブ4にSPE後精製カートリッジを設置する。
        注：合成のための最終的なセットアップ写真は付録図S1C（付録ファイル1）に示されている。
  3. ユーザーインターフェースのNEXTを押し、以下の順序でテストを開始する。
    1. M4への不活性ガス接続の圧力テスト。
    2. M3とM4間の接続の圧力テスト。
    3. リアクターの圧力テスト。
    4. M3への廃棄接続の圧力テスト。
    5. M3とM2間の後精製SPEカートリッジの圧力テスト。
    6. M2バルブ6のシリンジ接続の圧力テスト。
    7. M2への廃棄接続の圧力テスト。
    8. M1への不活性ガス接続の圧力テスト。
    9. M1とM3間の前精製SPEカートリッジの圧力テスト。
    10. 不活性ガスによるバルブ10、11、および12のスパイクのフラッシング。
    11. 不活性ガスによるM3およびM4のフラッシング。
    12. 不活性ガスによる前精製および後精製の両SPEカートリッジのフラッシング。

4. 試薬、ジェネレーターライン、および最終産物バイアルの設置（デュアルジェネレーター溶出を使用する場合は、 Figure 1A、Cおよび Figure 1B、Cを参照）

  1. 試薬キットからエタノール（100%）、生理食塩水、および注射用水のバイアルを取り出し、キャップを外して、各セプタムをアルコール綿で拭いてください。
  2. シンセサイザーの指示に従い、バイアルをキットのポジションM4 valve 10、M4 valve 11、およびM4 valve 12にセットし、「click」をクリックします。 次へ ユーザーインターフェース上で。
  3. シリンジAから針を取り外し、プランジャーを5 mLまで引きます。
  4. リアクターの中央ポートに接続されているラインを取り外し、シリンジAの内容物を中央ポート経由でリアクターバイアル内に転送します。
  5. ラインをリアクターの中央ポートに再接続します。クリック。 次へ ユーザーインターフェース上で。
  6. カセットのポジションM1バルブ2（二重ジェネレーター溶出の場合はM1バルブ1も）に、ジェネレーター出口ラインを取り付けます。クリック音がするまで押し込みます。 次へ ユーザーインターフェース上で。
  7. シリンジCから分注針を取り外し、ポジションM1のバルブ3に取り付けます。カチッと音がするまで押し込んでください。 次へ ユーザーインターフェース上で。
  8. シリンジBから分注針を取り外し、シリンジBのルアーロックをジェネレーター入口ラインのフィッティングに接続します。シリンジBを押し込み、プランジャーの親指掛け部分をシリンジドライバーのスロットにスライドさせて固定します（カチッと音がします）。 次へ ユーザーインターフェース上で。
  9. 以下の手順に従い、クラスII生物学的安全キャビネットまたはそれに準ずる設備内で、最終製品バイアルを準備します。
    1. ラベルを貼った25 mLの滅菌バイアルを、タングステンのポット（または適切な遮蔽ポット）に入れる。
    2. バイアルのセプタムをアルコール綿で拭き、ポットに蓋をして、フィルター付きベントニードルを挿入します。
    3. 低タンパク質吸着性の滅菌用フィルターの出口を接続し、 0.22 µm ポリフッ化ビニリデン（PVDF）製ベントフィルターを、滅菌済みの20G下皮針に装着します。フィルターに製品のバッチ番号を記載してください。
    4. ベント付きの25 mL最終製品バイアルに針を挿入します。
    5. バイアルCの内容物を採取します（表1を空のシリンジD（ステップ2.7参照）に入れ、4 mLの空気を加える。
    6. シリンジDを～の入口に接続します。 0.22 µm 通気性フィルター。シリンジの内容物をフィルターを通して押し出します。 0.22 µm フィルターと針を用いて最終製品バイアルへ移送する。
    7. フィルターを5 mLの空気で2回フラッシュする。フィルターからシリンジを取り除き、 0.22 µm 通気性フィルター
      注意：フィルターメンブレンの破損を防ぐため、フラッシングはゆっくりと行ってください。
  10. 最終製品バイアルが入ったポットをホットセルに移し、ポジションM2のバルブ5からのエンドチューブを製品バイアルフィルターに接続し、クリックします。 次へ ユーザーインターフェース上で。

5. ラジオラベル化前のシンセサイザー予備工程

  1. シンセサイザーによる以下の準備ステップが完了するまで待機してください：エタノールバイアルの加圧（M4、バルブ10）、生理食塩水バイアルの加圧（M4、バルブ11）、水バイアルの加圧（M4、バルブ12）、酸性化塩化ナトリウムシリンジの加圧（M1、バルブ3）、エタノールによる後精製用SPEカートリッジのコンディショニング、水による後精製用SPEのコンディショニング、水バイアルの再加圧（M4、バルブ12）。
  2. プレス 次へ シンセサイザーからの指示が表示されたら、ユーザーインターフェース上で製造を開始します。 溶出準備完了 68Gaジェネレーター.

6. [68Ga]Ga-FAPI-46を調製するための自動放射性標識

注：自動合成はステップ5.2を実行することで開始されます。図1Dに、[68Ga]Ga-FAPI-46を生成するための放射性標識反応を示します。シンセサイザーのインターフェースの代表的なスクリーンショットと典型的な放射能プロファイルを、それぞれ図1A,Bおよび図2に示します。デュアルジェネレーター溶出を用いて製造する場合、最初のジェネレーターの溶出後に、シンセサイザーの指示に従って空のシリンジBを取り外し、2番目のジェネレーターの溶出用に5 mL HCl 0.1 Mを含む別のシリンジをシリンジドライバーに装着してください。

  1. 合成終了時（EOS）に、シンセサイザーに表示されるsynthesis completeというメッセージを確認します。最終製品バイアルから滅菌済み0.22 µmベントフィルターとフィルター付きベントニードルを取り外し、ホットセルからタングステンポットを回収します。

表1：[68Ga]Ga-FAPI-46製造のための試薬調製。 こちらのリンクからこの表をダウンロードしてください。

マニホールド構成と反応プロセスを示す放射標識ダイアグラム。クロマトグラフィー工程を含む。
図 1: 合成装置ユーザーインターフェースの概略図。[68Ga]Ga-FAPI-46の自動放射合成のためのカセットおよび試薬のセットアップ。 (A) シングルジェネレーター製造セットアップ。 (B) デュアルジェネレーター製造セットアップ。 (C) MS放射合成装置を用いた[68Ga]Ga-FAPI-46の自動製造における試薬配置。 (D) [68Ga]Ga-FAPI-46の放射標識スキーム。略語：FAPI = 線維芽細胞活性化タンパク質阻害剤、Mn = マニホールドn、Wn = 廃棄物出口n、Vn = バルブn、R = リアクター真空、Gn = ガス入口n。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

放射性標識プロセスのグラフ：[68Ga]Ga3+の溶出、SPEでのトラップ、放射能対時間の分析。
図 2: [68Ga]Ga-FAPI-46の自動合成におけるシンセサイザーの典型的な放射能プロファイル。略語：FAPI = 線維芽細胞活性化タンパク質阻害剤、SPE = 固相抽出。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

7. 品質管理および出荷のための[68Ga]Ga-FAPI-46の分注

  1. 製品バイアルを適切に遮蔽された分注システムに移し、バイアルを反転させて製品を均質化する。
  2. 無菌操作および放射線防護技術を用い、製品バイアルから1 mLのサンプルを採取し、以下を行う：
    1. 出荷前品質管理試験および残留溶媒分析用として、150 µLを低タンパク結合1.5 mLチューブ（チューブ1）に分注する。
    2. エンドトキシン試験用として、50 µLを低タンパク結合1.5 mLチューブ（チューブ2）に分注する。
    3. 無菌試験用として、300 µLを10 mL滅菌真空ガラスバイアルに分注する（サンプルが許容レベル［10半減期］まで減衰した後、外部委託先に送付する）。
    4. 保存用として、500 µLを10 mL滅菌真空ガラスバイアルに分注する。
    5. 残りの製品を患者投与用のバイアル（〜10 mL）に分注する。

8. [68Ga]Ga-FAPI-46の品質管理

注：以下に述べる品質管理試験は、欧州薬局方40に記載された手順に従って実施した。

  1. 目視検査により外観を確認する。
  2. 指示薬試験紙を用いてpHを確認する。
  3. 電離箱を用い、50 µLのサンプルについて3回放射能測定を行い、放射性核種の半減期を決定する。
  4. マルチチャネルアナライザ（MCA）搭載のNaI(Tl)ガンマスペクトロメータを用いて、放射性核種の同定および放射核種純度を確認する。
  5. 分析用ラジオHPLCを用い、[68Ga]Ga-FAPI-46サンプルと非放射性の[natGa]Ga-FAPI-46参照標準の保持時間が類似していることを検証し（放射能検出器とUV検出器の間のわずかな遅延容量を考慮する）、放射化学的同定を行う。
  6. 式(1)を用い、分析用ラジオHPLCで放射化学的純度（%）を定量する。
    放射化学的純度の算出；式；放射能検出器クロマトグラムにおける放射性ピークのAUC 
  7. 式(2)を用い、分析用ラジオTLCで放射化学的純度（%）を定量する。
    放射化学的純度の算出式；クロマトグラフ法；[68Ga]Ga-FAPI-46ピークのAUC；溶媒前線 
    注：ステップ8.8、8.9、および8.10は、地域の規制要件に基づいて出荷前または出荷後に実施することができる。ステップ8.11および8.12は、出荷後に実施することができる。出荷後の試験はすべて、サンプルの放射能が減衰した後、可能な限り速やかに実施する必要がある。
  8. ガスクロマトグラフィーを用いて、製剤中の残留溶媒量（エタノール）を定量する。
  9. カートリッジ式エンドトキシン試験システム（キネティック発色法 LAL法）を用いて、バクテリアエンドトキシン量を評価する。
  10. バブルテストを実施し、0.22 µmフィルタの完全性を確認する。
  11. ガンマスペクトロメータまたはガンマカウンターを用いて、放射核種純度（ゲルマニウム-68の漏出）を確認する。不純物の検出が可能なレベルまでガリウム-68が減衰するよう、検査対象の溶液を少なくとも48 h保持する。
  12. 製品の無菌性を確認する。

9. 安定性試験

  1. 安定性解析のため、EOS直後、およびその後3時間後まで1時間間隔で、最終製品バイアルから[68Ga]Ga-FAPI-46を50 µL分注する。
  2. 各タイムポイントにおいて、radio-HPLCを用いて放射化学的純度（%）を定量する。
  3. 各タイムポイントにおいて、radio-TLCを用いて放射化学的純度（%）を定量する。

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結果

95 °Cで5分から20分の反応時間における放射標識効率を表2に示す。精製後のSPEカートリッジとしてHLB 30 mg、Strata X 60 mg、およびSep-Pak C18 Plus Short 360 mgを用いたところ、非常に類似した回収率（崩壊補正後 [DC] で94.3 ± 0.5%）であった（表3）。なお、HLB 225 mgを用いた場合の回収率は、それよりも大幅に低い値（63.8 ± 3.5% DC）であった。

表2：反応時間を5、10、15、および20分とした場合の、TLCにより測定した粗反応物の放射化学的変換率のまとめ（n = 3）。略語：TLC = 薄層クロマトグラフィー、Exp. = 実験。こちらのリン...

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ディスカッション

この研究では、臨床応用用の MS シンセサイザーでの [68Ga]Ga-FAPI-46 の信頼性が高く収率の高い生産について説明します。このプロトコルの予備的な精密検査では、同じ一連の実験で、[68Ga]Ga-FAPI-46 の合成のための異なる反応時間と、最終生成物の精製のための 4 つの異なる SPE カートリッジをテストしました。(i)オペレーターへの放射線量を減らし、(ii)[68Ga]Ga-FAPI-46の日常的な生産が開発される条件を再現するために、これらの予備実験も可能な限りMS合成装置を使用して実施されました。[68Ga]Ga-PSMA-11および[68 Ga]Ga-DOTA-TATEの製造に使用された同様のパラメータを使用して、[68Ga]Ga-FAPI-46配列を作成しました。このシーケンスは、Excelスプレッドシートでの単純な段階的なプログラミングに基づいており、簡単に編集できます。キットと試薬は、[68Ga]Ga-FAPI-46合成の最初の部分(68...

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開示事項

著者には、開示すべきこの研究に関連する実際のまたは認識された利益相反をもたらすような商業的パートナーシップや資金源はありません。

謝辞

著者は、FAPI-46化学前駆体と[natGa]Ga-FAPI-46規格を提供してくれたSOFIE Biosciences Inc.、財政的支援を提供してくれたCharlies Foundation for Research、iPHASE Pty LtdのStan Poniger、そしてSir Charles Gairdner HospitalのMedical Technology and Physics DepartmentのRadiopharmaceuticals Production Team(RAPID)に、科学的および技術的支援に感謝し、感謝しています。また、著者たちは、西オーストラリア州政府とオーストラリア連邦政府とのパートナーシップによるインフラ資金提供により、National Collaborative Research Infrastructure Strategy(NCRIS)機能を通じて支援を受けているWA National Imaging Facility Nodeの支援も認めている。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
0.1 M 塩酸 (HCl) 超高純度ABX 先端生化学化合物 (ドイツ、ラドベルク)HCl-103-Gジェネレーター溶出に使用
酸アンモニウムSigma Aldrich Pty Ltd (ニューサウスウェールズ州、オーストラリア)A1542-250GiTLC 移動相
C18 SepPak Plus ショート (360 mg)WatersWAT020515精製後シリカ SPE
クロモリスパフォーマンスRP-18エンドキャップ100-4.6モノリシックMerck Pty Ltd(ビクトリア州(オーストラリア)1021290001HPLC RP-18エンドキャップカラム、HPLC品質管理に使用
用量校正器CapintecCRC-15PET68Ga活性の校正と測定に使用
デュアルスキャンRAM LabLogic Limited(VA、米国)SR-1ARadio-TLCスキャナーでiTLC紙
FAPI-46前駆体(GMP)ABX高度な生化学化合物(ラドバーグ、ドイツ)3601.0000.050前駆体
充填容易性滅菌真空バイアル(10mL)HUAYIヨーソトープSVV-10C無菌性および保持サンプルに使用
滅菌真空バイアル(25mL)HUAYIヨーソトープSVV-25A
ジェネレーターによる最終製品のGa68ペプチド放射性標識iPHASE Technologies (オーストラリア、メルボルン)MSR-120G-(RK-3296)試薬セット 
発電機の事前精製によるGa68放射性標識iPHASE Technologies (オーストラリア、メルボルン)MSH-120ハードウェアカセット+補助セット 
ガスクロマトグラフィー(GC)システムAgilent technologies(ビクトリア州、オーストラリア)G2630A残留溶媒
GS標準ソース(Ba133)Global Medical Solutions Pty Ltd(オーストラリア)D-102-19マ分光計GS
標準ソース(Co60)Global Medical Solutions Pty Ltd(オーストラリア)1559-84ガンマ分光計
のキャリブレーションに使用高速液体クロマトグラフィー(HPLC)システム島津製作所 サイエンティフィック・インスツルメンツ社(オーストラリア、ニューサウスウェールズ州)LC-20HPLC機器
疎水性通気孔ニードルボールドウィン・メディカル社(オーストラリア、ビクトリア州)1088最終製品バイアルに使用
 IGG100 エッカート&Zieglerアイソトープ製品 (ドイツ・ベルリン)IGG100-65M-NT68Ge/68Ga generator
5 mL syringe (Injekt luer lock solo syringe)B Braun (Melsungen, Germany)4606710Vポリプロピレン (PP)/ポリエチレン (PE) シリンジ、ラテックス、PVC、シリコーンオイル不使用 試薬に使用
iTLC-SG paperAgilent technologies (Vic, Australia)SGI0001iTLC analysis
LabLogic software (LAURA)LabLogic Limited (VA, USA)LAURAソフトウェアバージョン6.1ラジオTLC分析に使用
L-アスコルビン酸 トレース選択フルカシグマ05878-100G反応混合物のラジカルスカベンジャーとして使用
Lichrosolv アセトニトリル(ACN)Sigma Aldrich Pty Ltd (ニューサウスウェールズ州、オーストラリア)1.00030.2500HPLC有機移動相の製造に使用
Lichrosolv WaterSigma Aldrich Pty Ltd (ニューサウスウェールズ州、オーストラリア)1.15333.2500HPLC水系移動相
メタノール(MeOH)Sigma Aldrich Pty Ltd(ニューサウスウェールズ州、オーストラリア)1060182500iTLC移動相
Na+I-検出器LabLogic Limited(VA、USA)1"NaI / PMTラジオHPLC
オアシスHLB(30 mg)Waters(マサチューセッツ州ミルフォード、 米国)WAT094225精製後共重合体 SPE
オアシス HLB プラス ショート (225 mg)Waters (米国マサチューセッツ州ミルフォード)186000132精製後共重合体 SPE
pH ストリップサーモフィッシャーサイエンティフィック オーストラリア Tty Ltd90424製品の
pH PS  検出器LabLogic Limited (VA, USA)PS プラスチック/PMTラジオ TLC
に使用されるラジオ検出器 Safe Lock tube (1.5 mL)Eppendorf0030 120.086品質管理サンプルに使用
(+)-ナトリウム L-アスコルビン酸Merck Pty Ltd (ビクトリア州 (オーストラリア)11140-250G最終製品の安定剤
塩化ナトリウム(NaCl)溶液(生理食塩水)ザーPS1110.9%、注射用、USPグレード
ステリカン 100B ブラウン(メルズンゲン、ドイツ)4667093に使用最終製品
滅菌シリンジフィルター(0.22 & micro;m)Millipore Sigma (米国マサチューセッツ州バーリントン)SLGSV255FMillex-GV
Strata SCX (ハードウェアカセットキット内)Phenomenex in hardware kit from iPHASE Technologies (Melbourne, Australia)MSH-120Prepurification silica SPE inside Hardware Cassette
Strata X (in Hardware cassette kit)Phenomenex inside hardware kit from iPHASE Technologies (Melbourne, Australia)MSH-120精製後シリカSPE ハードウェアカセット
トレースセレクトウォーター 微量分析用Honeywell Riedel-de-Haen95305-2.5L反応混合物および精製前SPEカートリッジのプレコンディショニングに使用
トリフルオロ酢酸(TFA)Sigma Aldrich Pty Ltd (NSW, Australia)302031-10X1mLHPLC水系移動相
超微細インスリンシリンジ(0.5 mL)BD326769の製造に使用品質管理サンプルの分注に使用
ベントフィルター Cathivex-GV 0.22 & micro;m、低タンパク質結合性デュラポアPVDF膜Merk Millipore(アイルランド、コーク)SLGV02505最終製品のろ過に使用されます
酢ペプチドに使用 ガンの製造に使用の製造に使用 ファイ針

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