この研究は、ラットの開腹術による腹腔上大動脈クロスクランプ中の内臓虚血再灌流後の急性肺損傷のモデルについて説明しています。これにより、大動脈クランプの臨床的および生物学的影響、および虚血再灌流が基礎となる臓器や遠隔肺損傷に及ぼす影響の両方を調査することができます。
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この記事について
サマリー
要約
腹部大動脈瘤の開腹手術では、血液循環の一時的な中断が必要であり、下流臓器の虚血再灌流を引き起こします。腎動脈、腸間膜動脈、および内臓動脈が関与している可能性があります。セリアック上大動脈クランプ後の虚血再灌流によって引き起こされる遠隔肺損傷の予防に有効であることが証明されている治療法はありません。急性肺損傷の病態生理学的経路と薬理学的治療を研究するために、ラットで大動脈クランプの実験モデルが開発されました。
ブプレノルフィン (0.05 mg/kg) による皮下鎮痛は、処置前に投与されます。自発換気を伴う全身麻酔は、マスクを介してハロゲンガス (イソフルラン 2.5%) を使用して導入されます。陰骨開腹術は、加熱されたテーブル上で行われます(直腸内で温度を監視します)。胃脾臓ブロックと腸は右脇腹に引っ込められ、肝臓は上腹部に動員されます。横隔膜とその柱は、横隔膜内通路からセリアック上大動脈を段階的に解放できるように特定されています。解剖は、横隔膜柱の間の大動脈の円周方向の制御を達成するために穏やかに行われます。下にある腹腔幹と上腸間膜動脈が注意深く特定されます。微小血管クランプは、内臓動脈の上の大動脈閉塞に使用できます。適切なクランプは、小腸の蒼白に関連する大動脈拍動性がないことによって検証されます。ラットは虚血期間中ずっと麻酔されたままです。虚血期間の終わりに、マイクロクランプが取り外され、大動脈の拍動性、および腸の再着色がチェックされます。腹壁は縫合糸で閉じられ、続いてラットの皮膚が閉じられます。再灌流期間の終わりに、動物は同じ方法で麻酔されます。採血中に放血によって安楽死させ、肺を採取することができます。肺損傷は、血液ガス分析、肺重量測定、および組織学的検査によって評価できます。肺サンプルは、RT-PCRおよびウェスタンブロット分析にも利用できます。
概要
大動脈瘤は、大動脈の限局的かつ永続的な拡張です1。動脈瘤の進行は破裂する傾向があり、大量出血を伴い、重大な死亡率をもたらします2。したがって、治療の焦点は、この劇的な合併症の予防にあります。大動脈瘤はほとんどの場合腎下であり、大動脈内人工装具で治療できます。大動脈両腸骨エンドグラフトは、経皮的アプローチを使用して大腿動脈から低侵襲に導入される、覆われた分岐ステントです。この技術は大動脈クランプを必要とせず、内臓虚血の引き起こしを回避します。局所麻酔下で行うことができます。対照的に、胸腹部動脈瘤や複雑な腹部大動脈瘤などのより広範な大動脈瘤は、血管内技術を使用して治療することがより困難です。これは、動脈瘤セグメント内の腎動脈、上腸間膜動脈、および腹腔幹の関与によるものです(図1)。これらの主要な内臓動脈は、大動脈自体に加えて再建する必要があります。したがって、血管内低侵襲アプローチでは、内臓動脈再建のための有窓および/または分岐エンドグラフトの使用を含む、より複雑な手順が必要です。これらのエンドグラフトの主な制限は、製造時間が長いこと(多くの場合数か月)であり、緊急治療には適していません。このような場合、従来の開腹外科的修復は依然として実行可能で信頼できる選択肢です。
開腹修復による治療には、開腹術と内臓上クランプ、つまり一時的な内臓虚血が必要です。これらの胸腹部動脈瘤の治療中の合併症率は高いです。死亡率は5〜15%の範囲です3。肺合併症は 60%、腎合併症は 40% で発生します4。全身性炎症反応に関連するこれらの合併症は、多内臓不全に進行する可能性があります5。この罹患死亡率は多因子性であり、外科的攻撃性、麻酔、鎮痛、血行動態の変動、出血性ショック、および虚血再灌流現象が関与します。外科的攻撃性は、アプローチに開胸術、横隔膜切開術、腰切開術、または開腹術が含まれるかどうかにかかわらず、換気力学、特に横隔膜機能の障害を変更することにより、合併症の発現に寄与します6。
一時的な内臓虚血再灌流は、消化管、内臓系、腎臓、下肢などの下流臓器に影響を及ぼします7。肺合併症は、胸腹部大動脈手術後に最も頻繁に起こる有害事象です。それらの起源は多因子です。Supraceliac大動脈クランプは、肺虚血再灌流を直接引き起こさない。しかし、下流の内臓の虚血再灌流は、主要な全身性炎症反応を引き起こします。内臓虚血再灌流と遠隔損傷、特に肺損傷の発生との間の因果関係の仮説は十分に支持されています。肺胞毛細血管膜の重要な構成要素である肺内皮機能障害は、急性肺損傷 (ALI) の発症の中心であるようです。大規模な全身性炎症反応と好中球の活性化は、このプロセスにおいて極めて重要な役割を果たします。
ALI は、多くの場合、臨床症状ではなく組織学的基準に基づいて定義されます。ALI とは、肺内皮および上皮の関門の破壊を特徴とする急性炎症性疾患を指します。肺の機能単位である肺胞毛細血管膜は、微小血管内皮、間質腔、肺胞上皮の3つの構成要素で構成されています。
ALI の特徴は、好中球浸潤と細胞傷害性炎症誘発性メディエーターの放出によって引き起こされる、このバリアの透過性の増加です。肺胞上皮損傷には、I型とII型の両方の肺細胞が関与します。肺胞表面の 95% を覆う I 型細胞は損傷を受けやすく、ガス交換において重要な役割を果たします。II型細胞は、数が多いがカバー面積が小さく、界面活性剤の生産、上皮修復、イオン輸送に不可欠です。損傷後、II型細胞は、再生能力とI型細胞への分化を通じて肺胞の完全性の回復に貢献します。
複数の細胞死経路がALI中の上皮損傷に関与しており、I型細胞は特に脆弱です。ALI は通常、内皮機能障害を反映するための微小血管透過性の測定の有無にかかわらず、肺水腫を評価することによって評価されます。
このモデルの目的は、 図 2 に示すように、代謝レベルと機構レベルの両方で、内臓虚血再灌流と遠隔肺損傷の発症との関連を調査することです。この特定の関係は部分的にしか理解されていません。私たちの大動脈クランプモデルは、ラットに腹部大動脈瘤を存在させない、健康な大動脈上の内臓虚血再灌流シナリオを表しています。腹腔の幹の上には、人間にもラットにも主要な枝はありません。このレベルより上の大動脈は、胸壁に供給する小さな頭頂枝のみを生じさせる上大動脈に対応します。したがって、このレベルでの主要血管の血管解剖学的構造には、ヒトとラットの間で有意差はありません。
このモデルを使用すると、広範な探索が可能になります。これは、遠隔組織損傷の発症における初期のバイオマーカーを特定するのに役立ちます。さらに、このモデルにより、循環メディエーターの阻害剤や特定の遠隔臓器損傷の阻害剤など、潜在的な阻害剤の研究が可能になります。
他の虚血再灌流モデルは、遠隔傷害の研究に使用されます。脳、腸、および腎虚血再灌流モデルが強く表されています8,9,10。上腸間膜動脈(SMA)の一過性閉塞による腸虚血再灌流後の肺損傷に関する広範な研究があります11,12,13。虚血および再灌流の持続時間は非常に多様であり、数分から数時間の範囲です 14,15。虚血の持続期間の理論的根拠は、遠隔傷害の発生につながる重大な反応を引き起こすのに十分な攻撃性を誘発することです。虚血の期間が短すぎると、研究された代謝経路に重大な変化が生じない可能性があります。再灌流期間に関しては、その理論的根拠は、遠隔損傷の早期発症と病態生理学的変化の潜在的に一時的な性質にあります。理想的な再灌流期間は、代謝障害を適切に特徴付けるのに早すぎたり遅すぎたりしてはなりません。
モデルは主にげっ歯類です。げっ歯類の利点には、サイズが小さい、メンテナンスが容易で、ライフサイクルが短いこと、および豊富な遺伝資源が含まれます16。豚、犬、霊長類などの大型動物の使用は、追加の利点がない場合には正当化されないようであり、これは改良に関する動物実験の倫理規則と一致しています。さらに、解剖学的、生理学的、遺伝的に人間と類似しているため、げっ歯類はトランスレーショナル研究を可能にします16。
SMA クランプ モデルの主な制限の 1 つは、臨床現場では腸虚血期間の開始を識別できないことです。これにより、人間の臨床状況への外挿がより不確実になります。対照的に、複雑な大動脈手術では、さまざまな臓器の虚血と再灌流期間が明確に識別されます。さらに、セリアック大動脈上クランプ中、下にあるすべての内臓(消化管、肝臓、脾臓、腎臓、骨盤内臓器、および下肢)は虚血期にあります。これらの臓器はすべて虚血再灌流現象を起こします。逆に、特定の臓器(腸、腎臓、肝臓など)に焦点を当てた虚血再灌流のモデル、大動脈クランプのモデル、したがって代謝病態生理学を伴う複数の臓器の虚血再灌流のモデルはあまり研究されていません。同様に、大動脈クランプ後の肺病変などの遠隔損傷は、代謝の観点から十分に研究されていません17,18。
既存の大動脈クランプ モデルは、主に腎動脈の下の腹部大動脈をクランプすることに焦点を当てています。このモデルの限界は、内臓虚血再灌流を誘発しないことです。したがって、内臓虚血再灌流と潜在的な遠隔損傷との関連性の実証はできません18,19。さらに、大動脈クランプによる虚血再灌流の研究を可能にする in vitro モデルがないため、in vivo モデルを使用した分析が依然として必要です。
したがって、ラットにおける腹腔上大動脈クランプのこの実験モデルは、遠隔肺損傷を標的とした病態生理学的メカニズムと薬理学的介入の包括的な調査を容易にします。
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プロトコル
このモデルの作成は、動物の世話と実験に関するガイドライン、ならびにフランスとヨーロッパの法律に準拠しています。このモデルは、フランスのルーアンにあるノルマンディーの地域大学倫理委員会によって承認された実験動物研究で検証されています (n°APAFIS: #18974)。
1. 動物モデルと順応
- 動物モデル適応期間
注:このモデルは、洗練の原則に準拠しています。- 手術前に適応できるように、過密ではない施設に動物を1週間収容します。
- ケージごとに2匹のネズミを収容し、水と餌を自由に利用し、経験豊富な担当者が毎日チェックします。
- 寝具(紙片)の清潔さを毎日チェックし、必要に応じて週に2回以上経験豊富な担当者が体系的に交換します。
- 実験者と毎日接触し、12 時間の照明サイクルにさらされる 1 週間の順応期間の後、手順は同じ実験者との別の静かな部屋で行われます。
- 動物モデル種
- オスのWistarまたはSprague Dawleyラットを使用して、認定および認定された繁殖施設からの内臓虚血再灌流生理病理学の分析におけるエストラジオールなどのホルモンの影響を回避します11,20。
- 実験グループとグループごとの動物数を事前に決定します。
- 年齢を選択し、6〜10週齢のラット(350 g)の使用をお勧めします。
2.麻酔と鎮痛
- 鎮痛
- 処置当日に各動物の体重を量ります。
- ブプレノルフィン(0.05 mg / kg)を、鎮痛目的の処置の1時間前に、25-G針と2 mL注射器を使用してラットの背中の皮膚の高さで皮下投与します。
- 塩酸リドカインゲル1%を将来の皮膚切開のレベルで腹部の皮膚に塗布します。ラットの痛みの顔の表情を評価するスケールを使用して、術後に定期的に(少なくとも1日2回)痛みを再評価します21。
- 最初の24時間の間に、ブプレノルフィン(0.01〜0.05 mg / kg)を8時間ごとに体系的に皮下注射します。.
- その後、国立研究動物の代替、改良、減少センターの顔面痛スケールに基づいてブプレノルフィン注射(0.01〜0.05 mg / kg)を投与し、必要に応じて8時間ごとに繰り返します21。
- 全身麻酔
- 全身麻酔にはハロゲン化ガス(イソフルラン)を使用します22。
- イソフルラン(5%)を含む換気チャンバーを2 L / minの気流速度で2分間誘導段階に使用します。
- 麻酔を維持するために、手術中、2 L / minの気流速度でイソフルラン(2〜2.5%)による自発換気のためにラットをカスタムフィットのマスクに切り替えます。
- 舌を口腔から外して上気道をきれいにし、マスクを介して換気できるようにします。
- 処置中は麻酔深度を継続的に監視し、必要に応じてイソフルラン濃度を調整します。
3.処置中のラットの配置
- ラットの生理学的関節可動域を尊重しながら、粘着テープを使用して前肢と後肢を固定した状態で、ラットを背側臥位に置きます。
- 直腸温度を監視しながら、37°Cに設定された加温パッドにラットを置きます。
- ダクリオゲルを塗布して目を保護します。腹部の毛皮を剃り、ポビドンヨード溶液で腹部を徹底的に消毒します。
4.外科的処置
- 外科的処置の状態
- 繊細な操作を容易にするために、顕微手術用ルーペの下で手順を実行しますが、必須ではありません。
- 切開
- 切開部の上縁にある剣状突起の触診に続いて、腹部の中心の皮膚を切開し、腹筋の白線を明らかにします。
- 腹筋からの出血を避けるために、白線の腹筋の中心切開。
- 腹腔内露出
- 自己保持リトラクターで両側の腹壁を維持します。
- 異常(腫瘍)がないことを確認し、内臓、胃、脾臓、肝臓を腹部の右側に動員してから、腹腔上大動脈を露出させます。
- 縦に折りたたまれた小さな湿布で、すべての内臓をできるだけ腹部内に保ち、温かい(37°C)生理食塩水に浸しました。
- 低体温症や脱水症状を防ぐために、37°Cに温めた生理食塩水に浸した湿布ですべての内臓を覆います。
- 主要な腹腔内血管の特定
- 腹腔上大動脈は、その脈動と横隔膜柱の間の位置によって識別されます。
- 横隔膜柱間の大動脈を制御し、先端が綿のアプリケーターと解剖鉗子を使用して穏やかかつ慎重に解剖し、大動脈を可能な限り非外傷的に解放します。
- 5-0モノフィラメント縫合糸と解剖および結紮鉗子を使用して、腹腔上大動脈を取り囲みます。
- 腹腔幹とその下にある腸間膜動脈の起源を確認します。この外科的処置の期間は、ラット1匹あたり10〜15分です。
- 腎下下大静脈の根底にある識別は、後腹膜の透明性により簡単です。
- 腎下下大静脈をその前面のみに放出し、これにより任意の薬理学的薬剤の直接静脈内投与が可能になります。
- 静脈注射
- この目的のために、注射に30-G針を使用し、止血を達成するために数ミリメートルの止血湿布を置きます。
- 薬理学的プレコンディショニングを行う場合は、大動脈クランプの前に注射を投与します。ポストコンディショニング治療の場合は、大動脈クランプ中またはクランプ後に投与します。
- このプロトコルは薬理学的プレコンディショニングを研究したため、大動脈クランプの 5 分前に投与します。
- 虚血期
- 腹腔大動脈を非外傷性微小血管クランプで 40 分間の虚血期間全体にわたってクランプします。クランプ中に下にある大動脈の脈動が消失し、内臓と手足が複数回変色することにより、クランプの有効性を検証します。
- 水分と熱の損失を制限するために、3 本の単純な 5-0 編組吸収性縫合糸で腹部を部分的に閉じます。虚血の全期間、温かい生理食塩水に浸した滅菌湿布で外科的切開部を覆います。
- 再灌流期間
- 虚血期の終わりに、腹部を再開し、前述と同じ方法で大動脈を露出させます。
- 血管クランプを取り外し、基礎となる大動脈拍動の再開と内臓と手足の再着色を確認します。再灌流期間は、マイクロクランプを取り外した直後に始まります。
- 腹部閉鎖
- 内臓を元の位置に戻し、白線に5-0編組吸収性縫合糸で腹部を閉じ、5-0モノフィラメント吸収性縫合糸で皮膚を閉じます。
- 動物の目覚め
- 内臓腫瘤と血液量減少の状況によって下大静脈が圧迫されないように、ラットを左側臥位に置きます。ラットをヒートランプ付きの個々のケージに入れて、約10分後に目覚めるまで温度を維持します。
- 2回目の全身麻酔
- 180分間の再灌流期間の終わりに、イソフルラン(5%)を含む換気チャンバーを通して同じガス麻酔を使用してラットを2 L /分の気流速度で2分間誘導期に麻酔します。
- 麻酔を維持するために、組織採取期間を通じて、イソフルラン(2〜2.5%)を2 L / minの気流速度で自発換気するために、ラットをカスタムフィットのマスクに切り替えます。
5. サンプリング
- 血液サンプル
- 23-G 針と 5 mL 注射器を使用して、腎静脈の下の下大静脈に直接穿刺して血液サンプルを採取します。
- 小さな止血湿布を適用することにより、穿刺後の止血を実現します。
- 総血液のごく一部(100 μL)を、1枚の室温検査カードでガスおよび標準血液分析に使用します。
- 残りの全血を4 mL EDTAチューブに集め、1,000 × g で+4°Cで10分間遠心分離します。
- 液体窒素中のクライオチューブ内の血漿を凍結し、分析まで-80°Cで保存します。
- 組織サンプル
- 組織サンプリング
- 動物の安楽死中に組織サンプル(肺、腸、腎臓、肝臓、心臓)を収集します。前述と同じプロトコルに従って、イソフルランによる全身麻酔後に失血につながる採血による安楽死を行います。
- 開いた腹部を通して、各組織50 mgを採取します:左腎臓の上極、左肝葉、盲腸の1 cm前の遠位小腸。
- 次に、胸骨正中切開術を迅速に実行して、心臓と肺を特定します。
- 左肺を靭帯から解放し、組織学的分析のために完全に除去します。右多葉肺を靭帯から解放します。核酸とタンパク質の分析のために前葉を分離し、残りを37°Cの生理血清を入れたカップに数分間保存して、その後重量測定を行います。
- 大動脈、肺動脈、および両方の大静脈のセクションを含むブロック全体として心臓を抽出します。核酸およびタンパク質分析のために左心室の一部をサンプリングし、残りを37°Cの生理血清を入れたカップに数分間保存して、その後重量測定を行います。
- 核酸分析
- 核酸分析の場合は、組織の50 gをすぐに採取します。液体窒素で凍結し、分析まで-80°Cで保存します。
- すぐに使用できる試薬でトータルRNAを抽出し、メーカーのプロトコルに従って高品質のトータルRNAを単離します。
- 分光光度計でRNA濃度と純度を測定します。2 μLのサンプルを使用してRNA濃度を測定し、2 μLのRNaseフリー水をブランク基準として使用します。260 nmの吸光度を使用してRNA濃度を測定します。
注:許容可能なRNA純度は、1.7〜2.0の範囲の260/280および260/230吸光度比として定義されました。 - 逆転写には各RNAサンプル1μgを使用します。
- 炎症誘発性サイトカイン(IL-1ベータ、TNF-α、IL-6)および内部参照(ベータ2-ミクログロブリン)のmRNAレベルを、すぐに使用できるホットスタート反応ミックスを使用したリアルタイムオンライン検出機能を統合した迅速なプレートベースのサーマルブロックサイクラーでリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)によって測定します(プライマーは 表1にリストされています)。
- 2-ΔΔCT 法を使用して相対的な mRNA レベルを計算します。
- タンパク質分析
- タンパク質分析の場合は、50 mgの組織を50個の2.8 mm酸化ジルコニウムセラミックビーズを含む2 mL溶解チューブに入れます。この溶解チューブには、プロテアーゼ阻害剤錠剤とホスファターゼ阻害剤錠剤を含む 1 mL の放射免疫沈降アッセイ (RIPA) 溶解バッファーが含まれています。
- 実験室のチューブミルで均質化し、5秒のチェックを3回繰り返し、その後10秒の休止期間を行ってサンプルからタンパク質を抽出します。
- サンプルを+4°Cで10,000 g で10分間遠心分離し、分析まで上清を-20°Cのクライオチューブに保存します。
- ブラッドフォードベースのメソッドプロテインアッセイでタンパク質濃度を測定し、サンプルを-80°Cに保ちます。
- SDS-PAGEを使用して、各サンプルから同量のタンパク質を分離します。
- 0.2μmのニトロセルロース膜上に分離した蛋白質を転写します。
- 5%TBS-Tween脱脂粉乳で1時間ブロッキングした後、選択した特定のタンパク質に対する一次抗体を使用してメンブレンをインキュベートします。たとえば、ヘパラナーゼを探索するには、ヒトヘパラナーゼに対するウサギポリクローナル一次抗体(希釈1:2000)とコントロールタンパク質をGAPDHとして使用し、GAPDHに対するヤギモノクローナル一次抗体(希釈1:5000)を4°Cで一晩使用します。
- ブロットをTBST-Tween 0.1%バッファーで3回洗浄します。
- 一次抗体に対するHRP結合二次抗体を室温(RT)でブロッキング溶液中で1時間インキュベートします。例えば、ヘパラナーゼを探索するには、ウサギに対する二次抗体(希釈1:5000)を使用し、GAPDHを探索するには、ウサギに対するヤギ二次抗体(希釈1:10000)を使用します。
- 強化された化学発光(ECL)検出システムを使用して免疫複合体を検出します。
- 専用ソフトウェアを使用してメンブレンを分析し、GAPDHを内部コントロールとして使用して、ターゲットバンドの密度測定値を決定します。ヘパラナーゼ(50 kDa)に対応するバンドの濃度分析を実行し、それをGAPDHタンパク質バンド(35 kDa)に正規化して、相対シグナル強度を決定します。
- 組織学的分析
- 組織学的分析のために、肺門で左単葉肺を採取し、16 Gカテーテルを使用して凍結保存液を左主気管支から注入します。液体窒素で凍結し、-80°Cで保存します。
- 重量測定分析
- 核酸およびタンパク質分析用のサンプルの後、心臓と右多小葉肺の残りの部分を重量測定法で分析し、70°Cのオーブンで乾燥させ、湿潤/乾燥重量比で組織浮腫の推定値を提供できるようにします。
- 組織サンプリング
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結果
このプロトコルは安全であり、麻酔および手術中の動物の損失が最小限に抑えられ (5% 未満)、急性肺損傷の誘発に効果的であることが判明しました。イソフルランによる麻酔は、ケタミンとキシラジン麻酔を組み合わせた麻酔よりも安全であり (損失約 15%)、覚醒が早く、ラットの回復が良好でした (データは示していません)。麻酔をかけたすべての動物は、この方法で安全で効果的な大動脈クランプを受けることができました。効果的な大動脈クランプを有するすべての動物(100%)は、それぞれ虚血と再灌流の期間を生存し、40分と3時間持続しました。
このプロトコルに従って、血液サンプルの分析は正常に実施されました。65匹のラットを対象としたこの研究では、採取された平均血液量は4.5±1.2mLでした。これにより、ELISAとMultiplexによるガスメトリー分析と生化学的プラズマ分析の両方が可能になりました。血液ガス分析の成功率は100%でした。回収された血漿の平均体積は750μLでした。血液ガス分析により、pH、PaO2、SpO2、およびHCO3-の減少が明らかになり、Supraceliac大動脈クラン...
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ディスカッション
大動脈クロスクランプのこの外科モデルは、内臓虚血再灌流後の急性肺損傷の組織ベースと血漿ベースの両方の包括的な分析を可能にするという利点を提供します。また、事前または事後のコンディショニングで腹腔内、経腸内、または静脈内投与で薬理学的分子をテストする機会も提供します。
重要なステップの 1 つは、手術中の大動脈上クランプのままです。マスターすると、このステップをすばやく実行できます。この技術の学習曲線は急勾配で、安全で効果的な外科的アプローチを習得するために必要な手順は通常 3 回未満です。細かく湾曲した器具(解剖鉗子や結紮鉗子など)を使用すると、手順が大幅に容易になります。さらに、モノフィラメント縫合糸を使用すると、周囲の組織への付着が防止され、外傷が少なくなります。
下大静脈への静脈内投与も、重大な出血リスクを伴う処置です。止血湿布の使用は真のゲームチェンジャーであり、下大静脈の直接縫合に伴う技術的な問題を回避するのに役立ちました。静脈壁は非常に壊れやすく、...
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開示事項
著者らは開示するものは何もない。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.2 & マイクロ;m ニトロセルロースメンブレン Trans-Blot Turbo Transfert Pack | バイオラッド | 1620150 | 0.2 & マイクロ;m ニトロセルロースメンブレン プレカット |
| 1ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) | テルモ | MDSS01SE | 1ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) |
| 2ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) | ベクトン・ディンキンソン | 2ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) | |
| 4 mL EDTAチューブ BD K3 13 mm x75 mm | BDバキュテイナー | BD368860 | 5 mL EDTAチューブBD K3 13 mm x 75 mm |
| 5-0編組縫合糸/ Vicryl 5-0(Ethicon)またはNovosyn(B.Braun) | Ethicon - ジョンソン・エンド・ジョンソン | V7970E | Vicryl 5-0 針テーパーポイント 1/2 円 13 mm 長さ 45 cm |
| 5-0モノフィラメント吸収性縫合糸 / モノクリルポリグレカプロン | Ethicon - ジョンソン・エンド・ジョンソン | Y493G | 針 3/8 円 長さ 18 インチ |
| 5ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) | テルモ | SS-05LE1 | 5ccルアースリップシリンジ(ニードルなし) |
| 非外傷性微小血管クランプ/静脈用ディスポーザブル血管クランプ | AROSurgical | TKF-1-20g | ラット大動脈をクランプするための静脈用非外傷性微小血管クランプ |
| BD マイクロランス 3 23 G x 1 0.6 x 25 mm | BDバキュテイナー | 300800 | BD マイクロランス 3 23 G x 1 0.6 x 25 mm |
| BD マイクロランス 3 25 G x 5/8 0.5 x 16 mm | BDバキュテイナー | 300600 | BD マイクロランス 3 25 G x 5/8 0.5 x 16 mm |
| BD マイクロランス 3 30 G x 1/2 0.3 x 13 mm | BDバキュテイナー | 304000 | BD マイクロランス 3 30 G x 1/2 0.3 x 13 mm |
| β-アクチン Invitrogen | カールスバッド、アメリカ | 15G5A11/E2 | |
| ブラッドフォードベースの方法タンパク質アッセイ | Biorad、Marnes-la-Coquette、フランス | 5000201 | |
| ブプレノルフィン | ブプレノルフィン | ||
| 遠心分離機 Sigma 3-30 | Sigma, ドイツ | 10375, 10376, 10377, 10378, 10379, 91276, 109014 | エッペンドルフ用遠心分離機 |
| cOmplete ミニ | ロシュ | 11836153001 | プロテアーゼ阻害剤カクテル 25錠 |
| 綿棒 | |||
| ダクリオゲル / 眼科ジェル Lubrithal 10 g | デクラ動物用製品 | コード ACL7376464 | 眼科ジェル Lubrithal 10 g |
| 使い捨てメス | パラマウント | PDSS11 | 使い捨てメスの刃n°11 |
| 電気焼灼 | デントRMed | EMB/87400 | 高温の止血ペン |
| 強化されたECL検出システム | Biorad、Hercules、カリフォルニア州、米国 | 1705060秒 | |
| フィッシャーブランドビーズミル24 | フィッシャーサイエンティフィック | 15515799 | 使用 分子抽出前の生体試料の粉砕、溶解、均質化 |
| ガーゼ綿棒 | ラフィン | .010106 | ガーゼ綿棒 |
| ImageLabTMソフトウェア | バイオラッド | USBドライブまたはライセンス | |
| イソフルラン 5% | イソフルラン 5% | ||
| リドカイン プリロカイン ゲル 5% | Aguettant, リヨン, フランス | リドカイン プリロカイン ゲル 5% | |
| LightCycler 480 機器 | ロシュ、Bâle, スイス | 5015243001 | サーマルサイクラー |
| 潤滑ゼリー滅菌K-Y82g | レキット・ベンキーザー | 潤滑ゼリー滅菌K-Y82g | |
| ナノドロップ2000 | TermoScientific、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国 | ND-2000型 | 分光 光度 計 |
| ペハピンス解剖学的 | ハルトマン | 991063 | 解剖学的ペンチ |
| フォスストップ | ロシュ | 4906837001 | ホスファターゼ阻害剤 20 錠 & nbsp; |
| 石膏/粘着テープ | アナポーア | 135320 | 手術用粘着テープ/絆創膏 |
| ポビオンヨード溶液/ Vétédineソリューション | Véトキノール | 外用消毒液 | |
| Precellys 溶解キットチューブ | 硬組織均質化CK28、ベルタン | CK28 | Precellys 溶解キットチューブ |
| Prolène プロリプロピレン縫合糸 | Ethicon - ジョンソン・エンド・ジョンソン | 7472H | Prolène 5-0 ニードル テーパーカット 3/8 サークル 13 mm 長さ 75 cm |
| セーフロックチューブ 1.5 mL | エッペンドルフ | .0030120086 | セーフロックチューブ 1.5cc ノーカラー 遠心分離用 1000 チューブ |
| セーフロックチューブ 2 mL | エッペンドルフ | .0030120094 | セーフロックチューブ 2.0cc ノーカラー 遠心分離用 1000 チューブ |
| セーフロックチューブ 5 mL | エッペンドルフ | .0030119401 | セーフロックチューブ 5.0cc ノーカラー 遠心分離用 200 チューブ |
| 生理食塩水NaCl 0.9% | Aguettant, リヨン, フランス | 600502 | 生理食塩水 0.9% 500 mL |
| SDS-ページ | シグマ・アルリッヒ | ||
| Surflash IVカテーテル 16 G | テルモ | SR*FF1651 | |
| サージセル | Ethicon - ジョンソン・エンド・ジョンソン | 止血吸収性スワブ | |
| 縫合糸セットn°12 | ハルトマン | 4701762 | 縫合糸無菌セット、アドヘシンチャンプ、シザー、アドソンプライヤー、ニードルホルダー付き |
| SYBR グリーン KIT ライト サイクラー 480 SYBR グリーン I マスターン | ロシュ | 4707516001 | SYBRグリーン |
| TBST-トゥイーン 0.1% バッファー | シグマ・アルリッヒ | ||
| テストカード Epoc 24 カード 13 パラメータ | シーメンス・ヘルティニアーズ | ||
| ティッシュTEK | サクラファインテック | 凍結保存液 | |
| TRIzol試薬 Invitrogen | サーモフィッシャーサイエンティフィック、カールスバッド、カリフォルニア州、米国 | 15596026 | TRIzol試薬 |
参考文献
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