方法論記事

α-Synuclein凝集体の鼻腔内投与技術

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DOI：

10.3791/66943

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2024年11月8日

 , 
1Department of Neurology, Graduate School of Medicine, Kyoto University

この記事について

サマリー

本プロトコルは、α−シヌクレイン凝集体の鼻腔内投与の方法を記載している。この手法は、パーキンソン病における嗅粘膜から嗅球へのα-シヌクレインの伝播に関する知見を提供します。

要約

パーキンソン病(PD)は、α-シヌクレイン(α-Syn)の凝集体であるレビー小体の存在を特徴とする神経変性疾患です。最近、この疾患は、迷走神経の嗅球(OB)または背側核からのα-Syn凝集体のプリオン様伝播を通じて発症および進行することが提案されました。OBにおけるα-Syn凝集体の起源は不明ですが、近年、嗅粘膜からの伝播が示唆されています。私たちは以前、マウスモデルでα-Syn凝集体を鼻腔内に投与すると、マウスのOBにα-Synの病理が誘発されることを示しました。本研究では、マウスのOBにα-Synの病理を誘発したα-Syn凝集体の鼻腔内投与の方法を提示する。α-Syn凝集体の鼻腔内投与は非常に簡便で分かりやすい方法であり、産婦人科におけるα-Synの病理の起源や嗅覚系を通じたα-Synの伝播経路を解明する研究に役立つツールになると考えています。

概要

パーキンソン病(PD)は、運動緩慢、安静時振戦、筋肉のこわばりなどの運動症状を呈し、神経変性疾患の中で2番目に多い疾患です1。PDは、嗅覚機能障害、認知障害、うつ病、幻覚、便秘、起立性低血圧などの非運動症状も示します。その病理学的特徴は、黒質におけるドーパミン作動性細胞死と、レビー小体2と呼ばれるα-シヌクレイン(α-Syn)凝集体の存在です。

注目すべきは、α-Synは、通常の条件下で可溶性モノマー(または四量体)の形で存在する140アミノ酸のタンパク質です。しかし、異常な条件下では、可溶性モノマーはオリゴマーやフィブリルなどの不溶性の高分子量凝集体に変換されます。α-Synのオリゴマーおよびフィブリルへの移行は、細胞毒性に関与していると報告されています3。

最近の研究では、ニューロン間でのα-Syn凝集体のプリオン様伝播が示唆されています。数多くの死後検査に基づいて、Braakらは2003年に、レビー小体の病理がやや常同的な方法で脳内で徐々に広がるという仮説(Braakの仮説)を提唱しました4,5。2008年、胎児中脳移植を受けたパーキンソン病患者の死後検査により、胎児組織に由来するドーパミン作動性ニューロンにレビー小体が明らかになった6,7。これらの研究は、α-Syn凝集体が罹患した脳から移植片に広がる可能性があることを示唆しており、Braakの仮説を裏付けています。

これらの観察結果に続いて、初代ニューロン培養とマウスでのα-Syn凝集体の脳内注射を含む実験により、レビー小体様凝集体の広がりが再現され、プリオン様の方法でα-Synが伝播するさらなる証拠が得られました8,9。

Braakらは、PDのレビー小体病理が嗅球(OB)および/または迷走神経の背側核(dmX)で開始されることを示しました4。Braakの仮説に基づき、いくつかの研究で、PD脳からのα-Syn凝集体またはレビー小体抽出物を実験動物のOBおよび消化管に投与したことが報告されている10,11,12。2018年に行われた研究では、野生型マウスのOBにα-Syn凝集体を投与すると、嗅覚経路に沿ってα-Synの病理が伝播し、嗅覚機能障害が生じることが実証されました13。我々は以前に、α-Syn凝集体をα-SynトランスジェニックマウスのOBに接種し、これが海馬の萎縮と記憶障害につながることを見出した14。

2022年には、ヒト以外の小型霊長類であるマーモセットのOBにα-Syn凝集体を接種しました。その結果、嗅覚経路に沿ったα-Syn病理の伝播、OBの萎縮、および広範な脳グルコース代謝低下がもたらされました10。

しかし、α-Syn凝集体の伝播がOBから発生する場合、α-Syn凝集体が最初に現れるのはどのメカニズムによるのかという重大な疑問が生じます。Saitoらは以前に、鼻粘膜にレビー小体が存在することを報告した15。α-Syn凝集体の存在は、リアルタイム震え誘発変換(RT-QUIC)分析16を使用して、PDおよび多系統萎縮症(MSA)患者の鼻粘膜で検出されました。特に、PDの前駆期と考えられている急速眼球運動睡眠行動障害(RBD)患者の鼻粘膜サンプルを分析したところ、α-Synレベルの増加が明らかになりました17。この研究は、α-Synの病理がPDの前駆期からでも鼻粘膜に存在する可能性があることを示唆しました。

これらの知見は、鼻粘膜から産婦人科への経路の可能性を示唆しているが、このシナリオを裏付ける実験的証拠は限られている。このギャップを埋めるために、マウスの鼻腔内にα-Syn凝集体を投与し、鼻粘膜から産婦人科へのα-Syn病理の伝播を調査しました。私たちの実験的アプローチは、野生型マウスのα-Syn凝集体の単回鼻腔内投与がOBにα-Synの病状を誘発することを示し、鼻粘膜からOBへの伝播経路の実験的証拠を提供しました。

プロトコル

この研究では、生後2か月のC57BL/6J雄マウスを使用しました。すべての実験手順は、国のガイドラインに従って実施されました。京都大学動物実験委員会より、本研究について倫理的な承認と許可が下りました（MedKyo 23,544名〉。

1. α-Synプリフォームドブリルの鼻腔内投与

  1. 以前に報告された方法に従って、PBS(4 mg / mL)中のマウスα-Synフィブリル溶液を調製します11。チューブを透明フィルムで包み、汚染を防ぎます。
  2. 200 μLのα-Synフィブリル溶液を超音波処理し、ウォーターバス型ソニケーターを使用してα-Synプレフォームフィブリル(PFF)を生成します(材料表)。超音波浴に水を入れ、角氷を加えて4°Cまで冷まして超音波処理します。各サイクルは30秒の超音波処理とそれに続く30秒の間隔(合計5サイクル)からなる合計5分間、フィブリルを超音波処理します。
    注意: α-Synの曝露を防ぐために、使い捨て手袋、マスク、安全ゴーグルなどの個人用保護具を使用してください。
  3. 10 μLのピペットチップを備えたP10ピペット(Table of Materials)を準備します。塩酸メデトミジン、ミダゾラム、およびブトルファノール (MMB) の組み合わせを使用して、腹腔内 (i.p.) 注射により各マウスに麻酔をかけます。MMB配合麻酔薬には、ミダゾラム(0.3 mg / kg)、メデトミジン(4 mg / kg)、酒石酸ブトルファノール(5 mg / kg)が含まれていました。ミダゾラム(1 mg/mL)0.3 mL、メデトミジン(5 mg/mL)0.8 mL、酒石酸ブトルファノール(5 mg/mL)1 mL、生理食塩水2.9 mLを混合する場合は、0.005 mL/gをi.p.注射で使用します。
  4. マウスが完全に麻酔されたことを確認するために10分待ちます。適切な麻酔は、マウスが横臥位にあり、自分自身を元に戻すことができない場合を確認できます。麻酔をかけたら、目の乾燥を防ぐために滅菌綿のアプリケーターを使用して眼科用軟膏を塗布します。
    注:麻酔なしでは、経鼻投与を行うと、マウスを仰臥位に保ち、マウスがくしゃみをするときにα-Syn溶液を適切に投与することは困難です。.これらの理由から、鎮静剤が必要でした。
  5. 麻酔をかけたマウスを仰臥位に置きます。ペーパータオルまたは同様の素材を体の下に置き、頭を少し下に傾けるようにします(図1A、B)。この配置により、投与されたα-Syn溶液が肺や食道に急速に流れ込むのを防ぎ、鼻腔内での滞留を促進します。鼻孔を 図1Cに示します。
  6. 1 μL の α-Syn 溶液 (4 mg/mL) を P10 ピペットに取り込み、ピペットの先端をマウスの鼻の近くに置きます。ゆっくりと丸い液滴を形成し、ピペットチップの端に保ちます(図1D、赤い矢印)。鼻腔内投与は片側鼻孔に対して行われ、対側をコントロール側として使用します。
  7. ドロップをマウスの鼻孔の片側に近づけ、マウスが自然に吸い込むのを待ちます。吸入を観察し、30秒から1分待ちます(図1E)。
  8. 手順1.6.-1.7を繰り返します。総容量20μLのα-Syn溶液を投与するまで。すべての手順の後、手袋を廃棄し、表面がα-Synで汚染されている場合は、ベンチを市販の洗剤で拭いてください
    注:手順を実行する人員によるα-Synフィブリルの吸入を防ぐために、すべての手順を安全キャビネットで実行する必要があります。.以前の報告では、25μLの容量が鼻から脳への薬物投与に最も効率的であることが示されています18。本研究では、同様の容量の20μLを使用します。また、前報告10のOBへの注入用と同じ濃度のPFFを使用しており、これはPFFの400μM(5.6mg/mL)に近い19。
  9. アチパメゾール(3 mg / kg; 資料表)I.P.注射により、メデトミジンを逆転させ、回復を促進します。アチパメゾール(5 mg / mL)0.6 mLと生理食塩水4.4 mLを混合する場合は、i.p.注射で0.005 mL / gを使用します。.
    注:α-Synの鼻腔内投与がどれほどストレスになるかは完全には理解されていないため、鎮痛を提供します。.
  10. マウスが胸骨の横臥を維持するのに十分な意識を取り戻すまで、マウスを放置しないでください。完全に回復したら、マウスをケージに戻します。

2. サンプル調製

  1. α-Synプリフォームドブリルの鼻腔内投与後1、3、6、および12か月で、治療したマウスを犠牲にします。.
    1. マウスを誘導ボックスに入れ、セボフルラン(>6.5%)を投与し、>60秒間呼吸停止が発生するまで続けます。マウスを取り外し、安楽死を確実にするために右心房切開による迅速な放血を行います。
  2. 25Gの針(材料表)を心臓の頂点に挿入します。マウスを4 mL/分で灌流し、15 mLのPBS溶液に4% PFAを注入します。
  3. ハサミで頭を切り落とし、メスで頭皮に2cmの切開をします。頭蓋骨を下から鼻にかけて外側のハサミで切開します(図2A、B)。OBを取得するには、OBの頭蓋骨を完全に取り除きます(図2B、黄色の円)。
  4. 頭をひっくり返し、脳神経を切断してから、鉗子で脳を慎重に取り除きます(図2C、D)。OBが無傷の脳を取得します(図2E)。無傷のOBを得るには、OBが頭蓋骨に付着するように鉗子で嗅神経を慎重に切断します(図2D、黄色の円)。
  5. 脳サンプルをPBS中の4%PFAに4°Cで一晩入れます。 脳サンプルを24時間以上放置しないでください。
    注:過度の固定は免疫組織化学染色を減少させます。長期保存が必要な場合は、脳サンプルを70%エタノールまたは0.1%アジ化ナトリウムを含むPBSで保存して、無菌性を維持します。

3. OBの免疫組織化学的染色

  1. 以下に説明するように、自動ティッシュプロセッサー(Table of Materials)を使用してサンプルをパラフィンします。
    1. 70%エタノールに120分間浸漬し、続いて100%エタノールに8回60分間浸漬します。次に、100%キシレンに3回、120分間浸します。
    2. パラフィンを60°Cで120分間浸漬した後、60°Cのパラフィンに240分間浸漬します。
  2. 以下に説明するように、サンプルをパラフィンに埋め込みます。
    1. モジュール式組織包埋センターを使用して、サンプルを60°Cのパラフィンに埋め込みます(材料表)。氷の上で冷やします。
  3. サンプルをミクロトーム(材料表)18で厚さ8μmに切断します。
  4. 以下に説明するように脱パラフィン化を行います。
    1. 100%キシレンに2回5分間浸漬し、続いて100%エタノールに2回3分間浸漬します。
    2. 70%エタノールに3分間浸漬します。PBSで3分間洗浄します。
  5. 以下に説明するように抗原賦活化を行います。
    1. 100%ギ酸に15分間浸します。リン酸緩衝生理食塩水(PBS)で2分間すすぎます。
    2. オートクレーブを120°Cで10分間加熱します。自然に冷まします。
  6. 1%過酸化水素をメタノールに10分間浸漬します。PBSで5分間洗浄します。
  7. スライド上にPBS中の500 μLの5%スキムミルクを加え、室温で30分間インキュベートします。
  8. 500 μLの抗リン酸化α-Syn抗体(p-α-Syn、1/10000)をPBSに入れ、スライド上に置き、4°Cで一晩インキュベートします。 PBSで2回、各5分間洗浄します。
  9. ユニバーサル免疫ペルオキシダーゼポリマー、抗ウサギ(材料表)と25°Cで1時間インキュベートします。 PBSで2回、各5分間洗浄します。
  10. 3,3'-ジアミノベンジジン(DAB)染色キット(材料表)を使用して、製造元の指示に従って5分間現像します。
  11. ヘマトキシリン溶液に1分間浸漬します(材料の表)。流水で10分間脱色します。
  12. 以下の説明に従って取り付けを行ってください。
    1. 70%エタノールに5分間浸漬します。100%エタノールに2回、5分間浸漬します。
    2. キシレン100%に2回、5分間浸漬します。埋め込み媒体(材料表)を使用して取り付けます。100 μLの埋め込み用メディウムをスライドに塗布し、ガラスカバースリップで覆います。
  13. All-in-One顕微鏡を使用して、倍率20倍および40倍で画像を取得します(材料表)。

結果

図 3 に、OB の α-Syn アグリゲートの例をいくつか示します。本研究では、α-Syn凝集体を片側性鼻孔に投与しました。2つの鼻腔は鼻中隔によって分離されており、各OBは嗅覚ニューロンを各鼻腔に別々に投影します。そのため、対側のOBをコントロールとして使用することができます。

P-α-Synの病理は、1ヵ月後および3ヵ月後に治療を受けた側の産婦人科では観察されなかった(図3A、B)。レビー神経突起様p-α-Syn凝集体は、6か月後および12か月後に治療側の糸球体で観察されました。(図 3C、D、F、G)。これらの凝集体は、コントロール側のOBでは観察されませんでした(図3E)。

ImageJ(Table of Materials)を用いて、α-Syn凝集体の計数やサイズ等の検討により、α-Synの病態を推定することができます。たとえば、このモデルでは、以前に α-Syn アグリゲートの数をカウントして報告しました20。治療側のOBでは、OBのレビー神経突起様凝集体が12か月にわたって有意に増加しました(一元配置ANOVA、続いてダネット検定、p < 0.01; 図3H)。コントロール側のOBでは、α-Synのアグリゲートはほとんどありません。

以前の研究では、マウスの脳に注入されたPFFは1週間以内に分解され、内因性のマウスα-Synはα-Syn凝集体に変換されたことが示されました19。本研究では、α-Synの病理の経時的な増加は、PFFの単回鼻腔内投与により、内因性マウスα-Synがα-Syn凝集体に変換されたことを示しています。これらの結果から、α-Synの病理が嗅覚粘膜から産婦人科に広がる可能性が示されました。

figure-results-1
図1:マウス鼻腔投与方法(A)マウスを仰臥位に置き、頭部をわずかに下に傾けた状態。(B)マウスの鼻孔は黄色の矢印で示されています。(C、D)α-Synフィブリル溶液をマウスの鼻孔に滴下し(C、赤矢印)、素早く吸入する(D、赤矢印)。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

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図2:無傷の嗅球を得るための手順の概要。 (A)はさみを使用して、頭蓋骨を矢状および横方向に切開します(黄色の破線)。(B)嗅球(OB)の頭蓋骨を完全に取り除きます。(C)頭をひっくり返し、脳を慎重に取り出します。脳の神経を切断します。(D)脳骨に付着している嗅神経を切断します。(E) 無傷のOBを持つ全脳 この図の拡大版を見るには、ここをクリックしてください。

figure-results-3
図3:嗅球の糸球体におけるP-α-Syn凝集体 (A-G)(A-D)治療側1、3、6、および12か月後(それぞれ1m、3m、6m、および12m)のOBのP-α-Syn(EP1536Y)免疫組織化学、および(E)鼻腔内投与の12か月後の対照側。(C、D)レビー神経突起のような糸状のα-Syn凝集体が糸球体の周囲に現れます。(F、G)拡大画像は、鼻腔内投与6ヶ月後および12ヶ月後のレビー神経突起様p-α-Synの高倍率画像です。(H)治療側および対照側のOBにおけるレビー神経突起様p-α-Syn沈着量(n = 4-5)。グラフは平均±SEMを示しています。 一元配置ANOVAの後にダネットの検定が続きます。**0<01.この数値は、前回のレポート20から修正されたものである。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

ディスカッション

以前の研究では、マカクザルの鼻腔へのα-Syn凝集体の投与は、ドーパミン作動性細胞の死と黒質への鉄沈着を誘発したが、α-Syn凝集体は観察されなかった21。プリオンプロモーター α-Synトランスジェニックマウス(M83マウス)の鼻腔内にA53Tヒトα-Syn凝集体を毎日28日間投与すると、脳にα-Synの病理が誘発され、マウスの運動症状が誘発されることが報告された19,22。本研究では、野生型マウスの鼻腔内へのα-Syn凝集体の単回投与が、産婦人科におけるα-Synの病理を誘発することを示しました。この簡単な方法は、鼻粘膜からOBへのα-Synの伝播を調査するために価値があると考えられます。

この方法でのα-Synフィブリルの十分な超音波処理は、以前の報告が断片化されたα-Syn凝集体の小さなサイズがα-Syn病理23,24を誘発するために最も効率的であることを示していたため、非常に重要です。α-Synフィブリルの超音波処理が不十分な場合、OBへの伝播がほとんどありません。異なるソニケーターは異なるソニケーションパワーを持っているので、このプロセスの最適化が必要です。α-Syn溶液をマウスの鼻孔に投与したときのマウスの仰臥位も重要です。マウスの頭が隆起すると、α-Syn溶液が肺と食道に流れ込みます。不適切な姿勢は、予期せぬ死やα-Synの伝播不足を引き起こす可能性があります。

本研究では、i.p.は麻酔にMMB併用麻酔薬を使用しました。MMB 併用麻酔は、良好な鎮静と鎮痛を提供することが報告されており、その効果はアチパメゾール23 によって急速に逆転する可能性があります。吸入麻酔は、麻酔を維持するために鼻孔をマスクで覆う必要があるため、α-Syn溶液を鼻腔内投与することはより困難です。さらに、ロテノンモデルは広く研究されており、非常に有用なモデル25です。ただし、これは薬物誘発モデルであり、特発性パーキンソン病(iPD)とは異なる病態メカニズムを持っている可能性があります25。このモデルはα-Synの伝搬を誘導したため、iPDにより近いと考えています。

私たちの研究はまた、外因性のα-Syn凝集体が鼻粘膜を介して感染する可能性があることを示唆しました。そのため、研究者がα-Syn凝集体を用いて実験を行う際には、α-Syn凝集体の吸入を避けるための注意が必要です。例えば、α-Synエアロゾルは、超音波処理ステップ中に生成される可能性がある。密閉型ソニケーターまたは安全キャビネット内でのソニケーションの使用をお勧めします。さらに、マウスはくしゃみをすることがあり、α-Synエアロゾルを生成する可能性があります。このリスクを軽減するには、すべての操作を安全キャビネット内で実行する必要があります。また、研究者は、α-Synへの曝露を防ぐために、使い捨て手袋、マスク、安全ゴーグルなどの個人用保護具を使用する必要があります。すべての手順の後、表面がα-Synで汚染されている場合、研究者はベンチを市販の洗剤で拭く必要があります。以前の報告では、市販の洗剤とSDSの両方が汚染された表面から凝集体を剥離させたことが示されています26,27。

この研究では、パラフィン切片の小さな構造が凍結切片よりもパラフィン切片の方が保存しやすいため、産婦人科のα-Syn病理を評価するためにパラフィン切片を使用しました。この研究では、α-Synの病理がOBで誘発されたことが示されました。しかし、観察されたα-Synの病理は軽度で限定的であり、主に糸球体内のレビー神経突起として知られる糸状の凝集体によって表されていました。

なお、本研究では、実験マウスにおける明らかな行動変化は観察されなかった。この方法によって誘発されるα-Synの病状は、行動表現型の変化を誘発するには不十分である可能性があります。重篤な病状や行動の変化につながる特定の状態を解明するには、さらなる調査が必要です。将来的には、鼻粘膜から産婦人科への増殖をより効率的に行う方法を確立することができれば、この簡単な方法は、手術技術なしでα-Synの増殖を評価する別の方法を提供します。

また、対照として、治療したマウスでは対側のOBを使用しました。ただし、前嗅核または梨状皮質から反対側のOBへの逆行性伝播は、長期的な追跡調査で発生する可能性があります。その場合、未処理のマウスを対照として用いた。

この簡単な方法は、鼻粘膜からOBへのα-Synの伝播に関する貴重な洞察を提供しますが、PDの根底にあるメカニズムを包括的に理解するには、さらなる研究が必要です。

開示事項

著者には、開示すべき利益相反はありません。

謝辞

すべての実験は氷川理恵氏によってサポートされました。事務処理をしてくださった松澤泰子さんに感謝いたします。本研究は、日本学術振興会科研費(M.S., No.JP19K23779、JP20K16493、およびJP20H00663)。

材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
オールインワン蛍光顕微鏡 BZ-X710キーエンスN/Aオールインワン顕微鏡
アンピシリン ナトリウム塩ナカライ テスク02739-32
バイオラプターIIソニックバイオBR2006Aウォーターバス型ソニケーター。
酒石酸ブトルファノール明治製菓WAK-52850
セルロースチューブミスミUC20-32-100
ディープウェルマキシマイザータイテックMBR-022UPシェーカー
ダイナコンピュティセルズ ジップ BL21(DE3)株式会社バイオダイナミクス研究所DS255コンピテントセル
EntellanSigma-Aldrich107961顕微鏡用迅速封入剤
Graefe Extra Fine Forceps Curved SerratedFST11152-10 鉗子
硬化細ハサミFST14090-09さみ
ヒストファイン シンプルステイン マウス MAX-PO (R)ニチレイバイオサイエンス414341ユニバーサル免疫ペルオキシダーゼポリマー 抗ウサギ
ImageJ ver 1.52pNANA
https://imagej.net/ innova4200ニューブランズウィック科学9105085インキュベーター シェーカー
イソプロピル-&β;-D-チオガラクトピラノシドナカライ テスク19742-94
LB ブロス、レノックスナカライ テスク20066-24
ライカ EG 1150 Hライカ14 0388 86 108モジュラー組織包埋センター
ライカ TP 1020ライカ14 0422 85108自動ティッシュ プロセッサ 
メデトミジン富士フイルム135-17473
マイクロム HM325 ロータリーミクロトームサーモサイエンティフィック902100
ミダゾラム丸石製薬4987-211-76210-0
新ヘマトキシリン G型武藤65-9197-38ヘマトキシリン溶液
静脈用普通翼針 D型 25GテルモNN2332R25G 針
Optima TLXの超遠心分離機のベックマンのクーラー8043-30-1197の超遠心分離機
P10ピペットギルソンFA10002P
パラフィンLeica
パラホルムアルデヒドNacalaiのtesque30525-89-4
オキシダーゼの汚れDABのキットNacalaiのtesque25985-50
Pirece BCAの蛋白質の試金のキットThermo Scientific23225BCA assay
pRK172Addgene#134504プラスミド
Q-セファロース Fast Flow. cytiva17051001イオン交換樹脂
はの39601095ペル

参考文献

  1. Tysnes, O. B., Storstein, A. Epidemiology of Parkinson's disease. J Neural Transm (Vienna). 124 (8), 901-905 (2017).
  2. Goedert, M. Alpha-synuclein and neurodegenerative diseases. Nature Rev Neurosci. 2, 492-501 (2001).
  3. Conway, K. A., et al. Acceleration of oligomerization, not fibrillization, is a shared property of both alpha-synuclein mutations linked to early-onset Parkinson's disease: implications for pathogenesis and therapy. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (2), 571-576 (2000).
  4. Braak, H., et al. Staging of brain pathology related to sporadic Parkinson's disease. Neurobiol Aging. 24 (2), 197-211 (2003).
  5. Braak, H., Rüb, U., Gai, W. P., Del Tredici, K. Idiopathic Parkinson's disease: possible routes by which vulnerable neuronal types may be subject to neuroinvasion by an unknown pathogen. J Neural Transm (Vienna). 110 (5), 517-536 (2003).
  6. Kordower, J. H., Chu, Y., Hauser, R. A., Freeman, T., Olanow, C. W. Lewy body-like pathology in long-term embryonic nigral transplants in Parkinson's disease. Nat Med. 14 (5), 504-506 (2008).
  7. Li, J. Y., et al. Lewy bodies in grafted neurons in subjects with Parkinson's disease suggest host-to-graft disease propagation. Nat Med. 14 (5), 501-503 (2008).
  8. Luk, K. C., et al. Pathological α-synuclein transmission initiates Parkinson-like neurodegeneration in nontransgenic mice. Science. 338, 949-953 (2012).
  9. Desplats, P., et al. Inclusion formation and neuronal cell death through neuron-to-neuron transmission of alpha-synuclein. Proc Natl Acad Sci U S A. 106 (31), 13010-13015 (2009).
  10. Sawamura, M., et al. Lewy body disease primate model with α-Synuclein propagation from the olfactory bulb. Mov Disord. 37 (10), 2033-2044 (2022).
  11. Uemura, N., et al. Inoculation of α-synuclein preformed fibrils into the mouse gastrointestinal tract induces Lewy body-like aggregates in the brainstem via the vagus nerve. Mol Neurodegener. 13 (1), 21(2018).
  12. Rey, N. L., et al. Widespread transneuronal propagation of alpha-synucleinopathy triggered in olfactory bulb mimics prodromal Parkinson's disease. J Exp Med. 213 (9), 1759-1778 (2016).
  13. Rey, N. L., et al. Spread of aggregates after olfactory bulb injection of α-synuclein fibrils is associated with early neuronal loss and is reduced long term. Acta Neuropathol. 135 (1), 65-83 (2018).
  14. Uemura, N., et al. α-Synuclein spread from olfactory bulb causes hyposmia, anxiety, and memory loss in BAC-SNCA mice. Mov Disord. 36 (9), 2036-2047 (2021).
  15. Saito, Y., et al. Lewy body pathology involves the olfactory cells in Parkinson's disease and related disorders. Mov Disord. 31 (1), 135-138 (2016).
  16. De Luca, C. M. G., et al. Efficient RT-QuIC seeding activity for α-synuclein in olfactory mucosa samples of patients with Parkinson's disease and multiple system atrophy. Transl Neurodegener. 8, 24(2019).
  17. Stefani, A., et al. Alpha-synuclein seeds in olfactory mucosa of patients with isolated REM sleep behaviour disorder. Brain. 144 (4), 1118-1126 (2021).
  18. Ucciferri, C. C., et al. Scoring central nervous system inflammation, demyelination, and axon injury in experimental autoimmune encephalomyelitis. J Vis Exp. (204), e65738(2024).
  19. Masuda-Suzukake, M., et al. Prion-like spreading of pathological α-synuclein in brain. Brain. 136 (Pt 4), 1128-1138 (2013).
  20. Sawamura, M., et al. Single-dose intranasal administration of α-syn PFFs induce lewy neurite-like pathology in olfactory bulbs. Parkinsonism Relat Disord. 112, 105440(2023).
  21. Guo, J. J., et al. Intranasal administration of α-synuclein preformed fibrils triggers microglial iron deposition in the substantia nigra of Macaca fascicularis. Cell Death Dis. 12 (1), 81(2021).
  22. Macdonald, J. A., et al. Assembly of α-synuclein and neurodegeneration in the central nervous system of heterozygous M83 mice following the peripheral administration of α-synuclein seeds. Acta Neuropathol Commun. 9 (1), 189(2021).
  23. Abdelmotilib, H., et al. α-Synuclein fibril-induced inclusion spread in rats and mice correlates with dopaminergic Neurodegeneration. Neurobiol Dis. 105, 84-98 (2017).
  24. Tarutani, A., et al. The effect of fragmented pathogenic α-Synuclein seeds on prion-like propagation. J Biol Chem. 291 (36), 18675-18688 (2016).
  25. Taguchi, T., Ikuno, M., Yamakado, H., Takahashi, R. Animal model for prodromal Parkinson's disease. Int J Mol Sci. 21 (6), 1961(2020).
  26. Bousset, L., Brundin, P., Böckmann, A., Meier, B., Melki, R. An efficient procedure for removal and inactivation of alpha-Synuclein assemblies from laboratory materials. J Parkinsons Dis. 6 (1), 143-151 (2016).
  27. Fenyi, A., Coens, A., Bellande, T., Melki, R., Bousset, L. Assessment of the efficacy of different procedures that remove and disassemble alpha-synuclein, tau and A-beta fibrils from laboratory material and surfaces. Sci Rep. 8, 10788(2018).

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