A プロトコルは、運動研究における筋電図(EMG)分析のための動物装着可能な小型測定装置とともに、筋肉内電極の設置と準備のためのものです。このシステムは、脳卒中モデルラットの運動回復を調べるためのリアルタイム筋電図データの無線伝送を可能にします。
A プロトコルは、運動研究における筋電図(EMG)分析のための動物装着可能な小型測定装置とともに、筋肉内電極の設置と準備のためのものです。このシステムは、脳卒中モデルラットの運動回復を調べるためのリアルタイム筋電図データの無線伝送を可能にします。
実験動物に対する筋内筋電図(EMG)測定法は、様々な形で実施されています。これらの方法の中で、ケーブルを外部測定装置にテザリングすると、実験動物の動きが制限される一方、埋め込み型装置は、かなりのサイズと重量の装置が常に存在するため、望ましくない副作用を引き起こす可能性があります。これらの課題に対して、低コストで無線で着脱可能な筋電図測定システムと実験手順を提案します。この記事では、小さなコネクタを備えた筋肉内ワイヤー電極の外科的設置とワイヤレスシステムの開発に焦点を当てています。特に、このシステムでは、ワイヤー電極のみが動物の体内に挿入されます。このシステムを使用すると、動物の背中に取り付けられたコネクタに回路システムを取り付けるだけでEMG測定を簡単に行うことができ、ラップトップでリアルタイムに監視できます。提案手法を段階的に詳細に説明し、その後、ラットの後肢に筋肉内電極を挿入するデモンストレーションを行います。移動研究のためにトレッドミル実験が行われ、得られた電気生理学的信号がその後取得および分析されます。
筋電図は、収縮中に筋線維によって生成される電位を記録することを含みます。これらの特性は、運動ニューロンから個々の筋肉に送られる神経活性化信号によって決定されます。筋電図は、リハビリテーション、運動、脳、神経関連の研究で広く使用されており、測定方法は表面筋電図(sEMG)と筋肉内筋電図(iEMG)1に大きく分類できます。表面電極は、非侵襲的であり、簡単な準備プロセスを必要とするため、特にウェアラブルアプリケーションにおいていくつかの利点があります2。埋め込み型sEMGでは、電極が筋肉を貫通する必要がないiEMGと比較して、外科的プロセスが簡単です。これらの利点にもかかわらず、sEMGは、筋-電極界面での乱れ、運動アーチファクト、電極接触の品質、隣接する筋肉からの信号クロストークなどの信号汚染を受けやすいです1。これらの課題は、小動物を対象とした研究でよく見られるように、電極が近接して配置されている場合に特に問題になります。一方、iEMGは、電極の貫通のために追加の外科的処置を必要とします。追加の手順にもかかわらず、この方法では、電極が筋肉組織に恒久的に埋め込まれているため、筋肉固有のEMG記録をより正確に、より少ないクロストークで3に提供します。小動物の運動研究では、信頼性の高い電極取り付けによる筋肉特有の筋電図情報が重要であるため、iEMGが好まれます4。
小動物の電極からEMG記録を取得するためのいくつかのアプローチが報告されています。テザーケーブルは、電極を外部測定機器に接続するために一般的に使用されます5,6,7,8,9,10,11、デバイスを体内に埋め込むことができます12、またはワイヤレスウェアラブルプラットフォームを動物に配置できます><テザリングケーブルは、この目的のための互換性のある商用機器が利用可能であるため、最も広く報告されている方法です。しかし、テザーワイヤーは動物に不快感を与え、その動きはケーブルによって制限されることが多く、研究に影響を与える可能性があります。埋め込み型デバイスはワイヤレスソリューションを提供しますが、バッテリー寿命が限られているため、実験の期間が制限される場合があります。さらに、恒久的に設置されたデバイスのサイズと重量は、動物にストレスや不快感を引き起こし、研究に影響を与える可能性があります。ワイヤレス電力伝送技術は、埋め込み型デバイスの問題に対処するために提案されていますが、小型デバイスへの信頼性の高いエネルギーリンクを維持することは、通常、非常に困難です14。さらに、高電磁界へのばく露は、免疫機能の低下や脳の神経変性変化の可能性など、予期せぬ結果をもたらす可能性があります15,16。
この取得システムは、信号処理を処理し、EMG記録を基地局に無線で送信するワイヤレスのウェアラブルプラットフォームとしても実装できます。これは好ましい方法ですが、ユーザーにとっては技術的な課題であり、実験の詳細は文献で十分に取り上げられていないことがよくあります。
この研究では、小動物の移動研究のためのシンプルで低コストで信頼性の高い筋電図取得方法を紹介します。ラットの後肢の筋肉には一対のiEMG電極が埋め込まれ、増幅、アナログ-デジタルコンバーター、ワイヤレステレメトリーなどの信号取得システムの残りの部分が動物の背中に取り付けられます。EMGデータは、リアルタイム監視のためにパーソナルコンピュータに送信され、データはローカルに記録されます。トレッドミルでの移動実験を行い、脳卒中回復研究でシステムを実証します。
すべての倫理的および実験的な手順とプロトコルの承認は、申請番号の下で施設動物管理および使用委員会によって付与されました。CGU1-2021-IA0041です。この研究では、7週齢の雄のSprague-Dawleyラットを使用しました。試薬と機器の詳細は、材料表に記載されています。
1. 動物の調理法
2. 電極の準備
3. 手術
4. プリント基板(PCB)の設計と製作
5. ソフトウェアの構成
6. トレッドミルテスト
7. データ分析
本研究では、EMG取得のための簡便なワイヤレス手法を提示します。外科的手処置が必要ですが、電極の挿入およびコネクタの固定を行う特定の領域のみを部分的に切開するため、動物への負担を大幅に軽減できます。本デモンストレーションでは、下肢に電極を挿入しましたが、同様の手法を用いて他の様々な部位でも電気生理学的研究を行うことが可能です。このアプローチは、テザーケーブルを必要とせず、行動制限を課すことなく電気生理学的信号を連続的に測定できるという利点があります。回路PCBの直径は9 mm、高さは3 mmで、総重量は3 gです。バッテリー交換は容易であり、提案したシステムにより運動行動の連続的なモニタリングが可能になります。コネクタとデバイスの装着状態、およびEMG波形を示す写真を図7に示します。
本研究では、ラットの運動パターンの解析にトレッドミルを使用した。トレッドミルは動物の運動解析において有効なツールであり17、筋肉または神経系の問題の評価が可能となる。ラットの自由運動の研究にも使用できるが、本実験では特に、さまざまな条件下で生じる運動異常の解析を目的としている。そのためには、持続的かつ反復的な運動が必要であり、我々の目的にはトレッドミルが適している。
EMGを用いて動物の歩行を分析するために、さまざまな手法を用いることができます。これらの手法のうち、行動解析には対称性指数(symmetry index)が用いられました21,22。対称性指数は、身体の両側にある2つの筋肉の活動バランスを測定するものであり、本研究では脳卒中からの回復を評価するためにこれを使用しました。

図 1: ワイヤ電極の作製工程。 (A>) ワイヤ構造と絶縁被覆除去位置の模式図。筋肉にワイヤを挿入する際、過剰な挿入を防ぐために3つの結び目を作る必要がある (B>) ワイヤ端部の絶縁被覆を完全に除去した状態 (C>) 筋肉との接触を容易にするため、絶縁被覆を部分的に除去した状態 ここをクリックして、この図の拡大版を表示してください。

図 2: ワイヤ電極およびコネクタの組み立て工程。(A>) 組み立て用材料の準備。(B>) 金属部品へのワイヤの挿入。(C>) 金属部品へのワイヤのはんだ付け。(D>) プラスチックハウジングの開口部からのワイヤの引き出し。(E>) ワイヤと金属部品のプラスチックハウジングへの挿入。(F>) すべてのワイヤの組み立て完了後、シアノアクリレート系接着剤を用いてプラスチックハウジングを縫合ガイド(グレーの部分)に固定する。ここをクリックして、この図の拡大版を表示してください。

図3本処置に必要な手術器具。 本術式に必要な手術器具一式:(1) 縫合針、(2) 鉗子、(3) 鉗子、(4) 外科用鋏、(5) 精密鋏、(6-7) 止血鉗子、(8) 持針器、(9) 調製済み電極。 こちらの図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4: 電極線の装着手順。 (A) 背部および脚部の切開位置。 (B) 切開部からニードルホルダーを挿入し、電極線を把持する。 (C) 電極線を切開部から引き出す。 (D) 標的筋への縫合手技。電極を筋肉の最も太い部分の周囲に 5 mm 間隔で配置する。 (E) 手術完了後の最終状態。 こちらをクリックして、この図の拡大版を表示してください。

図 5: コネクタの配置。 (A) コネクタ下部の縫合。 (B) 縫合用ワイヤーによるコネクタの固定。 (C) コネクタ上部への接着剤の塗布と、保護用メタルシールドの配置。 ここをクリックして、この図の拡大版を表示してください。

図 6: EMG計測のデモンストレーション。 (A) ラットに装着されたEMG計測システムの写真。 (B) 速度 25 m/min でトレッドミル試験を実施している様子。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図 7: 測定されたEMGおよびエンベロープ処理済みEMG波形。(A) 測定されたEMG信号の生波形。 (B) エンベロープ取得に使用されたフィルタリング済みEMG信号。 (C) 対称性指標分析のための閾値線を含むエンベロープ波形。こちらのリンクをクリックして、この図の拡大版を表示してください。
補足図 1:PCB回路レイアウトの概略図。プリント基板(PCB)回路レイアウトの概略図であり、コンポーネントの配置と接続を示している。ここをクリックして、この図をダウンロードしてください。
補足図2:背面層のPCB回路設計。プリント回路基板(PCB)背面層の設計であり、回路のコンポーネント配置とルーティングの詳細を示している。こちらをクリックしてこの図をダウンロードしてください。
補足図 3:最上層のPCB回路設計。プリント基板(PCB)の最上層の設計であり、コンポーネントのレイアウトと電気的な接続を示している。ここをクリックしてこの図をダウンロードしてください。
補足コーディングファイル 1:ADC設定用ファームウェアの準備。8ビットの分解能と毎秒2サンプル(kSPs)のサンプリングレートを持つ2チャンネルアナログ-デジタルコンバータ(ADC)を設定するためのファームウェア準備手順です。こちらをクリックしてファイルをダウンロードしてください。
補足コーディングファイル 2:Pythonベースのプロッティングアプリケーション。本研究においてデータの可視化および解析に使用したPythonベースのプロッティングアプリケーションの説明です。こちらのリンクをクリックしてファイルをダウンロードしてください。
この研究は、小型で実装が容易で、低コストでワイヤレスな筋電図 (EMG) 取得システムを提示します。このシステムは、有線の外部測定機器に依存しないため、ケーブルによる信号劣化を効果的に防止します。コネクタを頭ではなく背中に取り付けることで、手術プロセスが大幅に容易になり、合併症のリスクが軽減されます。このセットアップにより、プラットフォームが側壁にぶつかり、信号アーティファクトが発生する可能性も最小限に抑えられます。さらに、集中した重量が頭にかからないため、首の疲労が軽減されます。
このプロトコルには、いくつかの重要なステップ、特に筋肉内電極の正確な準備とコネクタの慎重な配置が含まれています。絶縁体が正確に剥がれ、結び目が正しく結ばれていることを確認することは、電極配置中の過度の挿入を防ぐために不可欠です1.さらに、手術後の手術部位を監視することは、潜在的な合併症を早期に特定し、それによって関係する動物の健康を確保するために非常に重要です。
提案された手法は堅牢ですが、特定の変更によりその有効性が高まる可能性があります。たとえば、特定の筋肉のサイズに基づいて電極の長さを調整すると、接触品質が向上します。さらに、測定中に信号損失やノイズが発生した場合、トラブルシューティングには接続をチェックし、デバイスが電磁干渉から適切にシールドされていることを確認することが含まれる可能性があります6。手術チームに適切なトレーニングを提供することで、手順上のエラーを軽減し、全体的な成功率を向上させることもできます。
その利点にもかかわらず、この装置の重量は約 3 g で、ラットには問題ありませんが、小型または若いマウスには不快感を引き起こす可能性があります。この不快感は歩行パターンに影響を与える可能性があり、それによって EMGore による 行動分析に影響を与える可能性があります。RATをケージ内に放置すると、デバイスまたはコネクタを保護できず、損傷のリスクがあります13。デバイスが使用されていないときの保護のために金属製のケースが実装されましたが、さらなる開発によりこの側面が強化される可能性があります。
このシステムの重要性は、テザー デバイスによって課せられる制約を受けることなく、継続的で高品質の EMG 記録を提供できることにあります。テザーケーブルや大型の埋め込み型デバイスなどの従来の方法では、動物の動きが制限され、ストレスが誘発され、結果が歪む可能性があります5。この技術は、さまざまな実験状況における運動機能と回復を理解するために重要なデータ収集の忠実度を維持しながら、より人道的なアプローチを提供します3。
今後の研究では、この手法の応用が数多くあります。現在の研究は、歩行中の筋肉の対称性を評価するために内側腓腹筋 (MG) 筋に焦点を当てていましたが、この方法論は他の筋肉にも適応でき、心電図 (ECG) 測定にも拡張できます。電極の数を増やすと、複数の部位11からの同時信号収集が可能になり、筋肉の調整と機能の包括的な分析が容易になります。この進歩は、脳卒中の回復やその他の神経筋疾患のためのリハビリテーション戦略についての洞察につながる可能性があります。
結論として、提案された EMG 取得システムは、動物の移動研究の分野において大きな進歩をもたらします。このシステムは、既存の方法の限界に対処し、将来の研究のための多用途のプラットフォームを提供することで、さまざまな実験環境における運動機能と回復の理解を深めることが期待されています。
すべての著者には利益相反はありません。
この研究は、韓国国立研究財団(NRF-2020M3A9E4104385)および国立ナノファブセンターのナノ医療機器開発プロジェクト(助成金番号:1711160154)によって資金提供されました。
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.2 mm厚ニッケルプレート | ベンダー3D | ||
| プリントフィラメント | cubicon | A-100 | |
| 7週間齢 RAT | JABIO | SD(DBL)[7W M] | |
| シールド | を固定するための | 接着剤Okong | |
| 1028453ANT ANT1 | Johanson Technology Inc. | 2450AT07A0100001T | |
| C1, C15, C16, C20 | Vishay | 1n | 0201(0603)メートル法 |
| C10, C13 | Vishay | 100p | 0201(0603)メートル法 |
| C11, C12 | Vishay | 4p | 0201(0603)メートル法 |
| C14, C19 | Vishay | 0.39n | 0201(0603)メートル法 |
| C2, C17 | Vishay | 22n | 0201(0603)メートル法 |
| C3, C5, C6 | Vishay | 0.1u | 0201(0603)メートル法 |
| C4, C18 | Vishay | 2.2u | 0201(0603)メートル法 |
| C7 | Vishay | 4.7u | 0402(1005)メートル法 |
| C8, C21 | Vishay | 1u | 0201(0603)メートル法 |
| C9 | Vishay | 1p | 0201(0603)メートル法 |
| ケージ | JEUNG DO B&P | JD-C-02 | |
| クリーンクロス | キンバリー | 41112 | |
| コネクタ アクセサリ | Harwin | M20-1060400 | プラスチック ハウジング |
| コネクタ アクセサリ | Harwin | M20-1180042 | 金属部品 |
| 電動バリカン | バズ | RFC-928 | |
| ヒートガン | QUICK | 861DW | |
| IC1、IC3 | アナログデバイス | AD8232 | EMG測定用AFE |
| IC2 | Nordic半導体 | nRF52832-CIAA | |
| イソフルラン | Hana Pharm | 657801261 | |
| L1 | Vishay | 3.3n | 0201(0603)メートル |
| 法Li-poバッテリー | TheHan | TW402025 | 13 mm * 10 mm * 4 mm、30mAh |
| ピンヘッダー | Harwin | M22-2530505 | |
| R1, R2, R9, R10, R13, R14, R21, R22 | Vishay | 10M | 0201(0603)メトリック |
| R11, R23 | Vishay | 100k | 0201(0603)メトリック |
| R12, R24 | Vishay | 1M | 0201(0603)メトリック |
| R3, R4, R5, R7, R15, R16, R17, R19 | Vishay | 180k | 0201(0603)メトリック |
| R6, R18 | Vishay | 160k | 0201(0603)メトリック |
| R8, R20 | Vishay | 768k | 0201(0603)メートル法 |
| はんだワイヤー | アルファメタル | SACX0307 | |
| はんだごて | Hakko | FX-951 | |
| AMシステム | 793200 | でコーティングされたステンレス鋼線 | |
| AILEE | 301289 | ||
| 縫合線 | Ethicon | 604G | |
| トレッドミル | Daejong Bio | DJ2-243 | |
| U1 | Torex Semiconductor | XC6204B332DR-G | |
| Y1 | Murata Electronics | XRCTD32M000N1P1AR0 |
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