Imiquimodによる乾癬マウスモデルの作製

サマリー

ここでは、イミキモドの利用により確立された、非常に有効で安定した乾癬モデルマウスを紹介します。さらに、乾癬の重症度を評価するために採用された方法論について詳しく説明します。

要約

乾癬は、皮膚の肥厚、スケール、紅斑を特徴とする、一般的な慢性の再発性炎症性の皮膚疾患です。この疾患の病因は非常に複雑で、遺伝学、免疫、環境要因などのさまざまな要因の相互作用が関与しています。乾癬の根底にあるメカニズムを調査するために、研究者は乾癬の複数の動物モデルを開発しました。しかし、方法論のばらつきは、これらのモデルを一貫して構築するための課題を提示しています。本研究では、imiquimod(IMQ)を用いて高効率で安定な乾癬マウスモデルを確立し、総合的に評価した。8週齢のSPFグレードの雌C57BL/6Jマウスを用いて、乾癬マウスモデルを確立しました。1週間の順応後、脱毛領域に皮膚が炎症または損傷したマウスを除外しました。2日目から、5%IMQクリーム(62.5mg / d)を7日間連続して脱毛した首と背中の領域に毎日塗布しました。実験では、体重の日々の測定、皮膚撮影、皮膚のスコアリング、行動観察を行いました。実験後、脾臓指数の決定、皮膚組織学的分析、血清サイトカイン検出、および皮膚mRNAレベルの検出を行いました。その結果、IMQ群のマウスは、紅斑、鱗屑、皮膚の肥厚などの典型的な乾癬様症状を発症し、引っ掻く行動の増加、体重減少、脾臓指数の上昇、皮膚の厚さの増加を伴うことが示されました。また、血清中のTNF-α、IL-23、IL-17Aのレベル、および皮膚中のIL-23、IL-17A、IL-17F、IFN-γのmRNAレベルに大幅な変化が見られました。血清サイトカインレベル(TNF-α、IL-23、IL-17A)と炎症誘発性マーカー(IL-23、IL-17A、IL-17F、IFN-γ)の皮膚mRNA発現は、著しく上昇しました。対照的に、対照群はそのような変化を示さなかった。この研究は、IMQ導入時間を最適化し、投与プロトコルを標準化することにより、皮膚の変化を動的に監視しながら、研究者が信頼性の高い乾癬モデルを構築するための標準化されたフレームワークを提供することを目的としています。

概要

乾癬は、一般的な慢性、再発性、および炎症性の全身性皮膚疾患であり、尋常性乾癬が最も主要な臨床症状^です1。その臨床的特徴には、通常、皮膚浸潤、厚さ、鱗屑、紅斑²が含まれ、乾癬性関節炎、うつ病、メタボリックシンドローム、心血管疾患¹など、さまざまな合併症を引き起こすこともあります。さらに、乾癬はしばしば慢性掻痒症を伴います³。世界的に、乾癬^は人口の2%から3%に影響を及ぼし4、その発生率は増加しています。したがって、ヒト乾癬の病理学的特徴を厳密に模倣した信頼性の高い動物モデルを確立することは、その病因を明らかにし、新しい治療戦略を開発するために重要です。

皮膚科学研究の分野では、乾癬は、遺伝的、免疫学的、環境的要因の相互作用を伴う複雑な病因により大きな注目を集めており、詳細な研究には大きな課題があります¹。現在の研究では、乾癬の発症は主にT細胞によって媒介され、活性化するとケラチノサイトが過剰増殖し、分化過程でサイトカインの分泌を変化させることが示されています⁵。このプロセスでは、イ....

プロトコル

以下の動物使用プロトコルは、広西チワン族自治区中医薬大学の施設福祉および倫理委員会(DW20191220-153)によって審査され、承認されています。購入したマウスの動物証明書はSCXK(Xiang)2024-0009でした。本研究では、8週齢のC57BL/6J雌マウス(SPFグレード)を無作為にグループに分け、各グループに6匹のマウスを含めました。ケージは温度管理された部屋(23±2°C、明暗サイクル12時間)に置かれ、食事と水に自由にアクセスできます。実験のフローチャートを 図 1 に示します。IMQクリームで誘導されなかったことを除いて、対照群のマウスは、他のすべての点でIMQ群のマウスと同じ治療を受けました。

1.動物の調理

1. 動物を環境に1週間適応させた後、モデリングを開始します。実験を開始する前に、75%エタノール溶液を使用して実験テーブルを細心の注意を払って消毒してください。
2. マーカーペンを使用して、マウスの尾にはっきりと印を付け、個々の識別を確保します。
3. シェーバーを使用して、すべてのマウスの首と背中の毛を約4 cm x 3 cmの領域で剃ります(0日目; 図2A)。綿棒を使用して....

結果

IMQの連続投与後、IMQ群のマウスは乾癬を彷彿とさせる背中の皮膚の臨床症状を示し(図4)、IMQによって誘発された領域は紅斑、鱗屑、および厚さの典型的な症状を示しました(図5)。対照的に、対照群はIMQ群と同様の症状を示さなかった。対照群と比較して、3日目からIMQ群では紅斑と小鱗屑が現れ始めました(図5A、C)。5日目までに、これらのマウスは表面スケールが増加した浸潤性プラークを発症しました(図5E)。8日目までに、皮膚紅斑が激しくなり、表面に広範な鱗屑が見られ、表皮の厚さが著しく、ヒト乾癬病変に似た発疹が現れ(図5B、D、F)、合計スコアが大幅に増加しました(図5G、H)。

ディスカッション

私たちの研究では、IMQを利用して乾癬様皮膚病変を誘発し、乾癬モデルを構築しています。このモデルは、乾癬の発症の根底にあるメカニズムを研究し、乾癬の治療法の開発に関する洞察を提供するために使用できます。van der Fits⁷ による研究では、最初に IMQ 導入を実施したとき、導入時間は 5 日または 6 日に設定されました。それにもかかわらず、Jabeen らは、IMQ 誘発性乾癬モデルの重症度は、IMQ¹⁶ の適用後^{6 日目から 8 日目にかけて}最大値に達することを示唆しました。これを考慮して、IMQ誘導時間を7日間に延長することにより、実験プロトコルを最適化しました。この調整により、乾癬の症状をより包括的に明らかにすることができ、以前のプロトコルと比較して乾癬の典型的な特性を示すのにより有利になります。

以前の研究

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
5% イミキモドクリーム	四川メドシャイン製薬株式会社
40220602 75% エタノール	XUE HUAN	20240401
分析天秤	ザルトリウス	SQP
脱毛クリーム	レキット ベンキーザー	20240612 08X
電子スケール	Yingheng Technology	7915
医療用ティッシュペーパー	JD	20221208
シェーバー	HORD深セン	AUX-C6S
滅菌綿棒	北侖川	20230728