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Research Article
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Erratum Notice
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Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
この方法論では、視運動および全身回転中の視線安定化に対する視覚的および前庭の寄与を調査しました。刺激は、視覚、前庭、および視前庭の試験を通じて実施されました。ねじれ眼球運動の増加と眼振の頻度は、各試験の反射的脳幹反応に対する感覚特異的運動情報の皮質下リレーの指標として機能しました。
本プロトコルは、視運動刺激、前庭刺激、および視野前庭刺激の組み合わせを使用して、ロール面回転中の視覚および前庭入力の相対的な影響を評価します。被験者は、孤立した視覚回転、暗闇の中での全身前庭回転、および静的な視覚シーンと頭の回転を組み合わせた視前庭刺激を受けました。動的および静的な眼球運動の増加、絶対振幅、速度、および加速度を、知覚応答とともに測定しました。試験には、動眼運動固定を安定させるための運動前後のベースライン休憩期間が含まれていました。Chronos Eye-Tracking Device (C-ETD) を使用して、3 つの並進次元と 3 つの回転次元にわたって眼のねじれと頭の動きを記録し、正確な目と頭の追跡が達成されました。眼球運動は、遅位相速度と眼振頻度について分析され、両眼からのねじれ出力を平均し、アーティファクトのあるフレームを除外することでデータ品質が保証されました。リアルタイムの視線アライメントモニタリングにより、必要に応じて試験を繰り返すことができ、事後分析により交絡運動が排除されました。視運動刺激には、固定点の周りを回転する投影された視覚要素が含まれていましたが、前庭試験では、暗闇の中で電動全身回転が使用されました。視前庭試験は両方の刺激を組み合わせて、相対的な網膜運動を作成しました。アイトラッカーとヘッドトラッカー間のデータ同期により、100 Hzで記録された正確なフレームごとの分析が保証されました。視線の安定化に対する感覚固有の寄与は、試験タイプ間で遅い位相速度を比較することによって定量化されました。感覚特異的な増加は、視覚反応と前庭反応を視前庭転帰で割ることによって指標化され、合計された個々の反応との比較を通じて検証されました。結果は、視覚と前庭入力の相対的な寄与を定量化した、堅牢な感覚統合を明らかにしました。このプロトコルは、ロールプレーンの回転中の多感覚統合を評価するための詳細なフレームワークを提供します。したがって、このプロトコルは、モーション処理における感覚障害を解明し、新しい眼球運動バイオマーカーを提示するのに役立つ可能性があります。これは以前、視覚的混乱と動きの加速が動き処理にどのような影響を与えるかを評価するために使用されており、脳震盪患者の視覚入力への依存度が高まっていることを強調してきました。
モーション処理は、基本的かつ継続的なニューラルプロセスです。人間では、主に視覚感覚系と前庭感覚系を通じて情報を受け取り、それぞれ外部運動と自己運動を反映します。これら2つのシステムは、下部および上部の神経領域にわたって複雑なニューラルネットワークを採用していますが、最も基本的なレベルでは、基本的な皮質下経路に依存して、良好な姿勢制御と視線安定性を可能にする反射反応を生成します1,2。固有受容感覚は、良好な姿勢制御への 3 番目の感覚寄与因子として機能し、体性感覚が視線安定化行動を導く可能性があることが示されていますが、明確な眼球運動を生み出す上でのその役割は限られています 1,3。
視線安定化は、一般に、目を動かす視覚要素に追従させる視運動反射 (OKR) と、目を頭の反対方向に動かすことで視力をサポートする前庭眼反射 (VOR) の 2 つの別々の反射弧によって達成されます1。これらの反射的弧は別個の実体ではありますが、いくつかの神経経路も共有しており、習慣的な状態では、視覚入力と前庭入力を自然に組み合わせて、動きの印象を作り出します4。
この基本的な感覚運動統合中に視覚と前庭入力がどのように処理されるかを評価するには、いくつかの方法があります。多くの機能バランステストは、異なる反復で視覚入力と前庭入力を組み合わせた5,6,7ですが、他のテストは視線安定化反応を評価するためにアイトラッキングを採用しています8,9。これら 2 つの非常に異なる運動反応は重要な神経経路を共有しており、最近の研究では、視線の安定化と姿勢制御の間の強力な相関関係を概説しました10,11。アイトラッキングがますます利用可能になり、非自発的な運動コマンドに完全に依存しているため、アイトラッキングはバランス反応よりも生来の感覚運動統合を反映しているという議論がなされるかもしれません。
研究の大部分は、眼球運動反応を評価する際に、垂直方向または水平方向の視線安定化を利用しています12,13。現在のプロトコルは、代わりに、視線安定化の主な指標として、視軸を中心とした目の回転である眼球ねじれを実装しています。眼ねじれは、ヨーまたはピッチの回転、または並進運動によって引き起こされる視線安定化よりも動的なゲインを示します14。これは、より大きな変動性と相まって、ねじれが視覚的な乱雑さや加速度などの運動パラメータ、または病状の影響を受けやすいことを意味します15、16、17、18。ねじれは自発的な眼球運動制御の範囲外であるため、被験者は意図された運動命令ではなく、注意を通じてのみ反応に影響を与えることができるため、基本的な感覚運動統合のより直接的な指標としても機能します19。眼ねじれは、ロール面20,21における視覚回転と前庭回転の両方によって引き起こされる可能性があります。したがって、ねじれ OKR と VOR を使用して、感覚運動統合中に視覚および前庭運動情報が最も基本的なレベルでどのように処理されるかを評価することができます。孤立した視覚刺激と前庭刺激を発行し、その反応を視野前庭試験を組み合わせた試験中に観察された反応と比較することにより、各感覚系が眼球運動反応にどのように影響しているか、その結果、脳が特定の設定で外部運動と自己運動をどのように処理するかを推測できます。また、主観的な運動処理障害を特徴とするさまざまな病状が、視前庭統合のこの基本的な能力にどのように影響するかを調査することもできます。視線安定性は姿勢安定性10,11と直接相関し、ほぼ同じ基本的な神経経路22を共有していることが示されているため、眼球運動反応は、プレッシャープレート測定を必要とせずに、さまざまな条件に対する個人の姿勢安定性を示す可能性もあります。これは、脳震盪後症候群で観察されるような感覚再重み付けの患者を評価するときに特に興味深い場合があります18。
本プロトコルは、視動力学的回転と全身ロール面回転の組み合わせを採用して、ねじりOKRおよびVOR応答を引き起こす方法論を概説する。目と頭の追跡を使用して眼の捻転と前庭入力を追跡し、結果のデータを使用して、各感覚モダリティが互いにどのように比較されるかを推測できます。このプロトコルの目標は、人間および感覚の再計量に苦しむ個人における視線の安定化と感覚運動統合の基本的な能力に対する感覚の影響を評価するための堅牢な方法論を提示することでした。
本研究では、ロール面回転中の視覚および前庭運動処理への相対的な寄与を評価しました。これには、被験者を孤立した視運動回転、暗闇の中で孤立した前庭全身回転、および静的な視覚シーンを見ながら被験者を回転させる複合視前庭運動刺激をさらすことが含まれていました( 図1を参照)。これは、脳震盪後の視覚運動に対する主観的過敏症によって示されるように、健康な対照者と感覚の再体重測定に苦しんでいる個人に対して行われました。主な結果パラメータには、各刺激中の動的および静的な眼球運動の増加、および絶対的な眼球運動の振幅、速度、および加速度が含まれていました。現在のプロトコルの各試験は、回転運動が開始される前に被験者、または視覚シーンを 20 秒間静止させておくことから開始されました。所定の振幅に達した後、シーンまたは被験者は、試験が終了する前にさらに 20 秒間、その回転振幅に保たれました。安定した動眼運動固定を可能にし、ベースラインを確立するための最小要件を満たすために、各回転運動の前後に少なくとも 10 秒間刺激を静止させることをお勧めします。本プロトコルは、反時計回り方向にすべての刺激を発行したが、方向性はねじり応答15に影響を与えないことが示されていることに注意してください。結果変数の再帰的な性質により、トレーニングや順応は必要とは考えられませんでした。
すべての参加者は、参加前に書面によるインフォームドコンセントを提供しました。この研究は地域倫理審査委員会(2018/1768-31/1)によって承認され、ヘルシンキ宣言に概説されている原則に従って実施されました。プロトコルは STROBE ガイドラインに従いました。
1. 参加者の選定
2. 視線と頭の追跡
注:現在のプロトコルでは、視運動と前庭運動のパラメータをそれぞれ反映して、全身回転中に正確な目と頭の追跡が必要です。このため、ヘッドマウント型視線追跡装置が必要であり、本プロトコルではChronos Eye-Tracking Device(C-ETD)が実装された。
3. 視運動刺激
注: 視運動刺激中、被験者は前庭試験中と同じ位置で安静に座ります。被写体は画面の前の中央に配置し、視線を主要な視線位置に合わせ、水平方向と垂直方向の両方で前方を向いた視線を確保する必要があります。中央の固定点である円は、アクティブな刺激段階で方向性のある動きの手がかりを提供します。小さな円などのオプトキネティック要素が画面全体に均等に分散され、明確なコントラストを提供します。視覚要素は、所定の速度または加速度で固定点の周りを回転し、設定された振幅に達します。
4.前庭刺激
注: 前庭試験では、視覚的および固有受容的な入力を最小限に抑えながら、ロール面での頭の回転を分離するために、完全な暗闇の中で全身を回転させました。このプロトコルでは、それぞれがACブラシレスサーボモーター(400 V)によって駆動される2つの独立したベルトで駆動されるカスタム設計の電動スレッドを使用し、動きを正確に制御できるようにしました。回転中心は、高さの違いに対応するために眉間に一直線に合わせました。参加者は、意図しない動きを最小限に抑えるために頭を固定しながら、前方の想像上の基準点に注視するように指示されました。C-ETD システムからの加速度計データを使用して、頭部の安定性を監視し、動きパラメータがプロトコルに準拠していることを確認しました。
5.視前庭刺激
注: 視前庭刺激は、前庭試験で説明されているように、全身回転と視運動試験からの静的視覚画像を組み合わせたものです。これにより、網膜上の視野が体の回転と反対の方向に相対的に回転し、視運動と前庭運動の両方の入力が単一の凝集刺激に統合されました。
6. データ分析
注: 眼のねじれは、信号品質が 0.5 を超えるデータのみを含む、C-ETD ソフトウェアによる虹彩特徴追跡を使用して評価されました。瞳孔の両側にある2本のトラッキングラインを各眼に選択し、信号品質が0.5を超えるフレーム数が最も多い眼からのデータを平均化しました。データは、眼振と頭の動きのアーティファクトを除いたOriginPro 2017を使用して分析され、参加者はまばたきのアーティファクトを最小限に抑えるために刺激の1秒前に目を開けたままにするよう促されました。
合計 171 件の試験が実施され、すべての参加者が 3 つの加速レベルで視覚刺激、前庭刺激、および視覚と前庭の組み合わせ刺激を受けました。結果として生じたすべての眼振遅い段階について、アイトラッキング評価を実施しました(対照参加者9人(女性7人)でn = 223、患者10人(女性3人)でn = 331)。統計分析は、各参加者(n = 19)について得られた平均値に基づいており、データは試験間で平均化されました。健康な対照者と患者は、年齢の点で一致しました。
皮質下運動統合測定の検証
主な目的は、実験パラダイムが期待される皮質下視線安定化反応を誘発し、各刺激モダリティと加速レベルが遅位相ねじれの異なるパターンを誘発することを確認することでした。すべての条件において、視覚のみの刺激は最も遅い遅位相速度を生成しましたが、最も速いものは、加法皮質下統合と一致して、視覚と前庭を組み合わせた試験中に記録されました( 図2を参照)。同様に、刺激の加速が増加すると、すべてのモダリティで緩速位相速度が徐々に高くなりました。これらの発見は、C-ETD 追跡プロトコルの感度を検証し、刺激の開始からピークまでの加速度に基づく眼刺激ゲインの計算が、多感覚運動処理の動的差異を正確に反映していることを確認しました。
脳震盪後症候群における視運動感受性の増加
刺激伝達およびねじれ追跡システムが運動タイプと加速度の大きさを確実に区別することを確立したので、次にこのプロトコルを使用して、脳震盪後に多感覚統合がどのように変化するかを調査しました。参加者間で一貫した堅牢な方法論的追跡が観察され、低速位相応答の代表的な痕跡を 図3A、D、Gに見ることができます。患者は対照よりも速い遅位相速度を示し、特に視覚および視覚前庭の状態でグループの違いが現れましたが、前庭のみの反応は同等でした ( 図 3B、C、E、F、H、I を参照)。これは、前庭処理は保存されているが、視覚運動に対する感度が増加していることを示しています。これらの結果は、眼球運動処理における感覚特異的な変化を分離する方法の能力を強化します。
眼球運動の増加に対する視運動学的影響
視線安定化行動に対する感覚入力の影響を定量化するために、より広いダイナミックレンジのために選択されたねじれ低位相応答の加速を使用して、眼刺激ゲインを計算しました。ゲイン指標は、眼球運動が刺激の加速度をどれだけ厳密に追跡するかを反映しており、刺激の回転と検証された頭の位置を正確に制御して監視されました。反復測定分析により、条件間で有意差が確認されました (F1.47,34 = 154.821;P < 0.001;ηp2 = 0.901)、視覚前庭試験が最も高い増加(平均 = 0.65;95%CI、0.59-0.70)を示し、次いで前庭試験(平均 = 0.39;95%CI、0.34-0.45)および視覚試験(平均 = 0.16;95%CI、0.12-0.21)が続きました。
この段階的な応答パターンは、刺激ロックされたゲイン測定を検証し、この方法論が多感覚変調の微細な違いをどのように解決できるかを示しています。患者では、コントロールと比較して視覚試験と視覚前庭試験の両方でゲインが大幅に増加し ( 図 3D、H、L を参照)、脳震盪が視運動入力に対する感受性を高めるという仮説を裏付け、中枢ゲイン制御の変化を示唆しています。
視覚と前庭の運動統合に対する感覚の寄与を定量化する
視覚前庭の遅位相速度の相加的な性質は、孤立した視覚反応と前庭反応の合計を測定された視覚前庭反応と比較することによってさらに調べられました。同じ忠実度の高いねじれ追跡データを使用しても、有意差は見つかりませんでした (F1,17 = 0.806;P = 0.382)、システムが安定した多感覚統合を確実に捉えていることを示しています。このパターンは、すべての加速度レベルで一貫していました(F2,16 = 1.066;P = 0.368)、視線安定化における以前に実証された視覚と前庭の相互作用と一致します 2,15,16,18。
各モダリティの相対的な寄与の分析により、特に高い加速度レベルでは、前庭入力が一貫して視覚的寄与を上回っていることが明らかになりました (F1,17 = 148.105;P < 0.001;ηp2 = 0.897)、感覚重み付けの加速度依存シフトを示唆しています( 図4を参照)。これらの結果は、健康な個人と患者集団の両方における感覚特異的な運動処理を評価する本プロトコルの能力を反映しています。
眼振頻度と時間分布の分析
視動学的クイックフェーズ生成(眼振拍動)が状態または参加者グループによって異なるかどうかを評価するために、すべての試験で拍動の存在とタイミングについて評価されました。時間的分析は、手動アーティファクト除去と刺激前のまばたき抑制によって保証されるように、明確に定義されたクイックフェーズを備えた高品質の試験 (n = 145) に限定されました。対照では合計 191 回、患者では 270 回の眼振拍動が確認されました。
全体的な眼振頻度にはモダリティまたはグループ間で差は見られませんでしたが、視覚的試験では有意な時間的変化が観察されました (F1,33.56 = 6.334;P = 0.017)。患者は、特により高い加速度で、対照と比較して眼振拍動の早期発症を示しました( 図5を参照)。頻度の変化のないこの早期発症は、時間的に異なる脳震盪における視運動学的反応性の高まりを示唆しています。これらの結果は、データパイプラインにおける時間分析と定量分析の両方の利点を浮き彫りにしています。

図1:実験セットアップと視線安定化眼球運動反応。(A-C)視覚(A)、前庭(B)、および視覚-前庭(C)複合刺激中の実験セットアップおよび観察された眼球運動反応。左側のパネルは実験の配置を示しており、28°の固定振幅で3つの加速度レベルで投与された視覚(オレンジ)、前庭(紫)、および視覚前庭(緑)刺激の方向を示しています。緑色の点灯は椅子の動きを示し、半透明の緑色は相対的な視運動を表します。オレンジ色と紫色の矢印は、それぞれ投影された視覚シーンと機械化されたそりの方向を示します。プロジェクタースクリーンは水平方向に50.35°、垂直方向に32.08°の視野角にまたがり、各ドットは1.15°の視野角に対応しました。右側のパネルには、低、中、高加速度での各刺激条件中に記録された代表的な視線安定化眼球運動の痕跡が表示されます。ねじれ眼球運動と輻輳眼球運動の両方が表示されており、方法論が両方の応答を動員していることを示していることに注意してください。垂直発散プロットは、右瞳から左瞳孔の位置を差し引くことによって取得されます。視覚のみの刺激下での視運動学的応答は、わかりやすくするために反極性でプロットされ、刺激振幅は 4 倍で除算されます。トレースの持続時間は、低加速度、中加速度、高加速度でそれぞれ 2.8 秒、2 秒、1.4 秒に制限されます。この数値は18から修正されています。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図2:視覚、前庭、および視覚前庭試験における視線安定化速度の比較。 (A、B)平均ねじれ眼球運動速度に対する感覚モダリティの影響と、加速度強度との相互作用を示すカテゴリカル散布図。(A)平均ねじり速度に対する感覚モダリティの主な効果(F2,34 = 117.151、p < 0.001、ηp² = 0.873)を、度/秒の絶対値として表示します。(B)ねじり速度の感覚モダリティと加速度強度の間の有意な相互作用を示します(F4,14 = 28.625; p < 0.001; ηp² = 0.891)。データは、平均(線)と95%信頼区間(エラーバー)でプロットされます。統計分析は、対照参加者 9 名と脳震盪後症候群患者 10 名を対象に実施されました。*p < 0.05、**p < 0.01、***p < 0.001。この図は、元の出版物18 から変更されています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図 3: 脳震盪患者の視運動的視線安定化速度の増加と増加。(A-I) 7°/s² 加速度での視覚 (A)、前庭 (D)、および視覚前庭 (G) 刺激中の健康な個人 (破線) と脳震盪後症候群患者 (実線) の間のねじれ (赤色) 眼球運動反応の比較。(A、D、G)代表的な痕跡が提示され、視覚刺激における視運動学的反応は、明瞭さと刺激振幅の極性を逆にして 4 倍で割って示されます。トレースは 2.8 秒で終了します。(B、E、H) カテゴリカル散布図は、視覚、前庭、および視覚前庭刺激にわたる平均ねじり速度 (F2,16 = 5.811; p = 0.013; ηp² = 0.421) に対する感覚モダリティとグループの相互作用効果を示しています。データは、絶対値 (度/秒)、平均 (線) と 95% 信頼区間 (エラー バー) で表されます。(C、F、I)棒グラフは、視覚 (C)、前庭 (F)、および視覚前庭 (I) 試験中のグループ間のねじれゲインに対する感覚モダリティの有意な効果を示しています (F2,16 = 7.503; p = 0.005; ηp² = 0.484)。ねじりゲインは、ねじり加速度 (初期からピークの遅いフェーズまでの時間の経過に伴う速度変化として決定される) と刺激加速度の比率として計算され、ゲイン 1 は完全な一致を反映します。統計分析は、対照参加者 9 名と脳震盪後症候群患者 10 名を対象に実施されました。*p < 0.05、**p < 0.01、***p < 0.001。これらの発見は、患者が健康な対照と比較して、視覚および視覚前庭刺激中により速い遅位相速度とより高いゲインを示したことを示しています。この図は、元の出版物18 から変更されています。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図4:脳震盪患者の運動処理に対する感覚の寄与の変化。 (A、B)視覚前庭ねじれ反応に対する視覚および前庭入力の比例寄与を示す棒グラフ。(A) 患者と対照の両方によって表される平均視覚および前庭の寄与に対する加速の影響を、視覚と前庭の複合反応の割合として表示し、95% 信頼区間をエラーバーとして示します (F2,16 = 8.684; p = 0.003; ηp² = 0.521)。結果は、ねじり視線の安定化に対する視覚的寄与が加速度レベルが高いほど減少することを示しています。(B) 統合された視覚前庭ねじれ応答に対するグループの違いと感覚モダリティの寄与の相互作用効果を強調します (F1,17 = 21.863; p < 0.001; ηp² = 0.563)。データは、関節反応に対する視覚および前庭入力の相対的な寄与として提示され、患者は健康な対照と比較して、視線の安定化のために視覚的な動きの手がかりに多く依存し、前庭入力にあまり依存していないことを示しています。統計分析は、対照参加者 9 名と脳震盪後症候群患者 10 名を対象に実施されました。*p < 0.05、**p < 0.01、***p < 0.001。この図は、元の出版物18 から変更されています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

図5:眼振の分布は、脳震盪患者の視覚運動に対する神経反応性の増加を示しています。 (A-F)視覚、前庭、および視覚前庭刺激にわたる患者と対照の眼振の発症と時間分布を示すヒートマップと間隔プロット。(A-C)ヒートマップは、視覚 (A)、前庭 (B)、および視覚前庭 (C) 試験のすべての加速レベルにわたって、刺激の開始から終了まで記録されたすべての眼振拍動の開始を表示します。さまざまな試行期間を考慮するために、時間分布は開始時刻と終了時刻の間で正規化され、各ティックは合計期間の 10% の増加を示します。各ヒートマップの右側にある色付きの垂直バーは、任意の時点での眼振クイックフェーズの各数に関連する色の強度を示し、クイックフェーズの数が多いほど色の濃淡が暗くなります。(D-F)区間プロットは、視覚 (D)、前庭 (E)、および視覚前庭 (F) 試験中の患者と対照の眼振発症時間の平均分布に対する感覚モダリティ効果 (F2,46.48 = 8.219; p < 0.001) を示しています。各刺激の主な効果は左側の長方形に表示され、相互作用効果は右側の長方形に表示されます。y軸は、刺激の開始と終了の間に眼振拍動が観察された正規化された時間を概説し、それぞれ0と1として数値表されます。したがって、0.8は刺激時間の80%が経過したことを示します。患者は、対照と比較して視覚的試験中に眼振の発症が早く、グループ (患者または対照) と加速レベルの間に有意な相互作用がありました (F4,52.14 = 4.482; p = 0.003)。エラーバーは95%信頼区間を表します。統計分析は、対照参加者 9 名と脳震盪後症候群患者 10 名を対象に実施されました。p < 0.05、**p < 0.01、***p < 0.001。これらの発見は、患者が対照と比較して視覚刺激中により速い眼振拍動分布を経験したことを示唆しています。この図は、元の出版物18 から変更されています。この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。
著者には報告すべき利益相反はありません。
この方法論では、視運動および全身回転中の視線安定化に対する視覚的および前庭の寄与を調査しました。刺激は、視覚、前庭、および視前庭の試験を通じて実施されました。ねじれ眼球運動の増加と眼振の頻度は、各試験の反射的脳幹反応に対する感覚特異的運動情報の皮質下リレーの指標として機能しました。
本研究は、Promobilia Foundation (TW への研究助成金 A23126) の支援を受けました。
| 交流ブラシレスサーボモーター / バルドール BSM90C、400 V | BBモーターズ&メカニカル、アラスカ州フォートスミス、アメリカ合衆国 | UPC 781568378342 | 機械式そりの製造に使用されました |
| クロノス目追跡装置(C-ETD) | クロノス・ビジョン GmbH、ベルリン、ドイツ | 現在は利用できません | 同社からはより新しいモデルも提供されており、より高い記録速度を提供しています。 |
| オリジンプロ | オリジンラボ、マサチューセッツ州ノーサンプトン、アメリカ合衆国 | オリジンプロ17 | 目の痕跡、頭部痕跡、椅子の痕跡を視覚化・分析するために使用されました。 |
| SPSS統計学 | IBM、シカゴ、イリノイ州、アメリカ合衆国 | SPSS統計 28 | 統計解析に使用 |