このプロトコルは、食品廃棄物を生分解性ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)バイオプラスチックに変換するためのスケーラブルな方法を提供します。食品廃棄物の前処理には停止した嫌気性消化を、PHA生合成には好塩性微生物発酵を、PHA回収には化学薬品を含まない下流プロセスを利用します。
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このプロトコルは、食品廃棄物を生分解性ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)バイオプラスチックに変換するためのスケーラブルな方法を提供します。食品廃棄物の前処理には停止した嫌気性消化を、PHA生合成には好塩性微生物発酵を、PHA回収には化学薬品を含まない下流プロセスを利用します。
世界的なマイクロプラスチック危機は、食品廃棄物処理の課題の増大と相まって、これらの環境問題に一緒に対処するための革新的な解決策を必要としています。ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)は、海洋生態系を含むすべての環境で完全に生分解性を持つユニークなバイオプラスチックであり、石油ベースのプラスチックに代わる持続可能な選択肢を提供します。同時に、食品廃棄物をPHA生産の原料として利用することは、食品廃棄物処理の課題を軽減しながら、価値の高い生分解性プラスチックを生産するための効果的な戦略を提供します。この研究では、食品廃棄物からPHAを生成するための段階的なプロトコルを提供し、高い細胞PHA含有量と品質を確保するために必要なクリティカルケアを強調しています。このプロセスは、嫌気性環境を維持し、固体保持時間などのパラメータを最適化することで、食品廃棄物を微生物同化可能な揮発性脂肪酸(VFA)に変換するアレスド嫌気性消化から始まります。次に、VFAが豊富な消化物を使用して、乾燥細胞重量の最大66%±5%のPHAを蓄積できる好塩性微生物である Haloflex mediterraneiを培養します。 H. mediterranei の高塩分栽培環境は、培養汚染を防ぎ、最適なPHA生産を確保しました。細胞増殖は、PHAハーベスティングの理想的な時間を決定するために、光学密度を測定することによってモニターされます。細胞は、浸透圧勾配を活用した化学薬品を含まない水ベースの方法を使用して溶解され、93±3%のPHA回収を達成し、続いて溶媒ベースのPHA精製により96%±2%のPHA純度が得られます。各ステップは、高品質の生分解性プラスチックの生産を確保するために不可欠です。この論文では、停止型嫌気性消化、純培養発酵、ケミカルフリー細胞溶解、および溶媒ベースのPHA精製の詳細な方法を提供し、食品廃棄物をパイロットおよびフルスケールのアプリケーションに適した生分解性バイオプラスチックに変換するためのスケーラブルで持続可能なアプローチを提供します。
プラスチック汚染と食品廃棄物処理は環境問題の高まりであり、持続可能な廃棄物管理と材料開発を通じて両方の課題に対処する革新的なアプローチの必要性が浮き彫りになっています1。従来の石油由来のプラスチックは、環境汚染やマイクロプラスチック汚染の主な原因であり、何世紀にもわたって埋め立て地や水生生態系に存在し続けています2。ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)は、微生物バイオプラスチックの一種であり、従来のプラスチックに匹敵する機械的特性を持つ完全生分解性の代替品を提供しながら、自然環境での完全な分解を保証します3。しかし、PHAの高い製造コストは、依然として広範な商業的採用の大きな障壁となっています4。この制限を克服するための有望なアプローチの1つは、コーンスターチやグルコース5などの純粋な炭素源に依存する現在の工業プロセスでは、原料が総生産費の約50%を占めるため、微生物PHA生合成のための費用対効果の高い炭素源として有機廃棄物を活用することです。廃棄物の価値を高めることで、このアプローチは有機材料を埋め立て地から転用するだけでなく、石油ベースのプラスチックの持続可能な代替品に変換し、廃棄物の蓄積とプラスチック汚染の問題に同時に対....
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1. 食品廃棄物の収集と準備
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aADからの食品廃棄物特性とVFA生成
調製済み食品廃棄物スラリー中のTS、VS、およびC:N比の例を 表1に示します。食品廃棄物の組成には、サンプリング源や時間によって固有のばらつきがあるため、TS、VS、C:N比の値の変動が予想されます。ばらつきは許容できるが、定期的なTS、VS、およびC:N比の測定は、プロセスモニタリング、微生物バランス、および全体的なaADシステムの最適化に不可欠である37。
VFA濃度は、aAD消化器の操作の安定性と効率の重要な指標として機能します。 表 3 は、例として 4 つの運用サイクルの VFA データを示しています。これらのサイクル中、VFA濃度は4.13 ± 0.05 g HAc/Lで安定しており、aAD発酵槽がVFAを安定して生成できることが確認されました。この値は、文献22で報告されている値に匹敵し、パイロットスケールのaADシステムの運.......
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aADからのVFA制作
VFAは、H. mediterraneiが食品廃棄物をPHAに変換する際の重要な前駆体として重要な役割を果たしています。したがって、aAD中に高いVFA濃度を維持することが不可欠です。aAD25でのVFA生産を強化するために、いくつかの戦略を採用することができます。効果的なアプローチの一つは、理想的な期間が8日以下のSRT最適化であり、これはメタン生成菌のウォッシュアウトを促進しながら加水分解と酸生成を最大化し、それによって過剰なVFA消費を防ぐ46。好熱条件(45-55°C)は基質の可溶化と酸性化を改善し、中温条件と比較してVFAの生産性を高めることができるため、温度調節は別の効果的なアプローチである47。さらに、2-ブロモエタンスルホン酸などの化学的阻害剤の添加、またはpH 4での短期間のpHショックは、主要な微生物経路を標的とするか、メタン生.......
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著者は何も開示していません。
この研究は、エネルギー省-エネルギー効率および再生可能エネルギー局(Prime Award No.DEEE0009268)および米国農務省国立食糧農業研究所(賞番号2023-79000-38973)。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 空気 | エアガス | AI UZ300 | GC操作に使用 |
| ポンプ座 | クラウドレイ | ハイレア ACO-009D | |
| 塩化アンモニウム | アクロスオーガニック | A0396560 | |
| オートクレーブ | ステリス | AMSCOラボ250 | ATCC培地調製に使用 |
| 秤 | メトラー・トレド | 00 ME204TE | |
| ミキサー | ヴェヴォル | IB750LV+BLD300+WB-1 | |
| バケツ | ロウズ | モデル 50640 | 5ガロンBPAフリープラスチック製一般バケツ |
| 塩化カルシウム二水和物 | アクロスオーガニック | A0362932 | |
| クロロホルム | ミリポアシグマ | C2432 | |
| デシケーター | TS、VS、VSS測定に使用できる任意のタイプ | ||
| 消化チューブ、PTFEライナー付きスクリューキャップ | ミリポアシグマ | CLS982613 | |
| デジタルリアクターブロック | ハッハ社 | DRB200 | Hach VFA定量法で使用 |
| デジタルスターラー | サイロゲックス | SCI550-プロ | |
| ディスク遠心分離機 | アルファ・ラバル株式会社 | クララ 20 | |
| 三角フラスコ | アマゾン | B07V3JPQMM | |
| エタノール | アマゾン | B09DGVL4ML | |
| 凍結乾燥機 | ラボコンコ | 10030133、1027319、0109621 | FreeZone 2.5リットルフリーズドライシステム |
| ヒュームフード | ケワウニーサイエンティフィックコーポレーション | シュプリームエアLV | |
| 炉 | サーモサイエンティフィック | モデルF30428C | |
| ガスクロマトグラフィー(GC) | アジレント | モデル8890 | |
| Haloferax mediterranei | ATCCの | 33500 | |
| 水素 | エアガス | ハイUHP300 | GC操作に使用 |
| ナイフ | 食品廃棄物の削減に使用されるあらゆるタイプ | ||
| 潤滑油 | フィッシャーサイエンティフィックカンパニー | NC9844626 | |
| 塩化マグネシウム六水和物 | フィッシャーサイエンティフィックカンパニー | BP214-500 | |
| 硫酸マグネシウム七水和物 | ミリポアシグマ | M1880型 | |
| メトナール | ミリポアシグマ | 34860 | |
| 安息香酸メチル | ミリポアシグマ | 93583 | PHA定量の内部標準として使用 |
| マイクロプレートリーダー | BioTek シナジー | シナジーH1 | |
| 窒素 | エアガス | NIのUHP300 | GC操作に使用 |
| オーブン | サーモサイエンティフィック | オーム750 | |
| 蠕動ポンプ | シンプリーポンプ株式会社 | PM6000 交流 | 優れた空運転能力を備えた高流量自吸式ポンプで、高粒子スラリーを処理でき、1/8インチの壁チューブ用に設計されています。 |
| pHメーター | フィッシャーサイエンティフィックカンパニー | AE150 | |
| PHA規格 | ミリポアシグマ | 403105 | |
| パイロットaAD消化槽 | クエーサーエネルギーグループ、インディペンデンス、オハイオ州、米国 | 総容量100 L、作業容量80 L のステンレス鋼発酵槽。 | |
| パイロットPHA発酵槽 | マヌカツリー | SF-50l ISO 9001 CE | 二重層ジャケット付きガラスリアクター |
| 塩化カリウム | ジーバイオサイエンス | 162006 | |
| ポンプチューブ | 内径が1/8インチ、外径が3/8インチの任意のブランドのシリコンチューブ | ||
| 炭酸水素ナトリウム | フィッシャーケミカル | 241787 | |
| 臭化ナトリウム | カロライナ | 21139-45 | |
| 塩化ナトリウム | アマゾン | B0787CFHF3 | |
| 水酸化ナトリウム、ペレット | フィッシャーバイオ試薬 | 236088 | |
| 次亜塩素酸ナトリウム | ミリポアシグマ | 425044 | |
| Sorvall LYNX 4000 超高速遠心分離機 | サーモサイエンティフィック | 75006580 | 下流のPHA回収におけるPHA顆粒の収集に使用されます |
| 分光光度計 | ハッハ社 | DR3900 | Hach VFA定量法で使用 |
| 硫酸 | ミリポアシグマ | 258105 | |
| シリンジフィルター | アマゾン | B06X6GTKVY | |
| TOC分析装置 | 島津製作所 | 型式 TOC-LCSN | |
| 揮発性酸TNTplusバイアルテスト | ハッハ社 | TNT 872 | 50〜2,500 mg/Lの酢酸の範囲でVFAを測定できます。 |
| 湯沸かし器 | ボッシュ株式会社 | トロニック 3000 T 7 ガロン (ES8) | |
| 酵母エキス | フィッシャーサイエンティフィックカンパニー | AAJ6028736 |
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