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方法論記事

食品廃棄物からの持続可能なバイオプラスチック生産のためのスケーラブルな段階的アプローチ

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DOI:

10.3791/68499

2025年7月18日

この記事について

サマリー

このプロトコルは、食品廃棄物を生分解性ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)バイオプラスチックに変換するためのスケーラブルな方法を提供します。食品廃棄物の前処理には停止した嫌気性消化を、PHA生合成には好塩性微生物発酵を、PHA回収には化学薬品を含まない下流プロセスを利用します。

要約

世界的なマイクロプラスチック危機は、食品廃棄物処理の課題の増大と相まって、これらの環境問題に一緒に対処するための革新的な解決策を必要としています。ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)は、海洋生態系を含むすべての環境で完全に生分解性を持つユニークなバイオプラスチックであり、石油ベースのプラスチックに代わる持続可能な選択肢を提供します。同時に、食品廃棄物をPHA生産の原料として利用することは、食品廃棄物処理の課題を軽減しながら、価値の高い生分解性プラスチックを生産するための効果的な戦略を提供します。この研究では、食品廃棄物からPHAを生成するための段階的なプロトコルを提供し、高い細胞PHA含有量と品質を確保するために必要なクリティカルケアを強調しています。このプロセスは、嫌気性環境を維持し、固体保持時間などのパラメータを最適化することで、食品廃棄物を微生物同化可能な揮発性脂肪酸(VFA)に変換するアレスド嫌気性消化から始まります。次に、VFAが豊富な消化物を使用して、乾燥細胞重量の最大66%±5%のPHAを蓄積できる好塩性微生物である Haloflex mediterraneiを培養します。 H. mediterranei の高塩分栽培環境は、培養汚染を防ぎ、最適なPHA生産を確保しました。細胞増殖は、PHAハーベスティングの理想的な時間を決定するために、光学密度を測定することによってモニターされます。細胞は、浸透圧勾配を活用した化学薬品を含まない水ベースの方法を使用して溶解され、93±3%のPHA回収を達成し、続いて溶媒ベースのPHA精製により96%±2%のPHA純度が得られます。各ステップは、高品質の生分解性プラスチックの生産を確保するために不可欠です。この論文では、停止型嫌気性消化、純培養発酵、ケミカルフリー細胞溶解、および溶媒ベースのPHA精製の詳細な方法を提供し、食品廃棄物をパイロットおよびフルスケールのアプリケーションに適した生分解性バイオプラスチックに変換するためのスケーラブルで持続可能なアプローチを提供します。

概要

プラスチック汚染と食品廃棄物処理は環境問題の高まりであり、持続可能な廃棄物管理と材料開発を通じて両方の課題に対処する革新的なアプローチの必要性が浮き彫りになっています1。従来の石油由来のプラスチックは、環境汚染やマイクロプラスチック汚染の主な原因であり、何世紀にもわたって埋め立て地や水生生態系に存在し続けています2。ポリヒドロキシアルカノエート(PHA)は、微生物バイオプラスチックの一種であり、従来のプラスチックに匹敵する機械的特性を持つ完全生分解性の代替品を提供しながら、自然環境での完全な分解を保証します3。しかし、PHAの高い製造コストは、依然として広範な商業的採用の大きな障壁となっています4。この制限を克服するための有望なアプローチの1つは、コーンスターチやグルコース5などの純粋な炭素源に依存する現在の工業プロセスでは、原料が総生産費の約50%を占めるため、微生物PHA生合成のための費用対効果の高い炭素源として有機廃棄物を活用することです。廃棄物の価値を高めることで、このアプローチは有機材料を埋め立て地から転用するだけでなく、石油ベースのプラスチックの持続可能な代替品に変換し、廃棄物の蓄積とプラスチック汚染の問題に同時に対....

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プロトコル

1. 食品廃棄物の収集と準備

  1. 図 1A に示すように、地元のレストランから食品廃棄物を収集します。得られた廃棄物を視覚的に評価します。観察の結果、廃棄物の主なものは野菜の皮、廃棄された生肉、米や麺類などの炭水化物が豊富な成分で構成されていることが明らかになりました。炭素と窒素(C:N)の比率は、ステップ5.1および5.2で詳述されているように測定し、食品廃棄物が主に炭素に富んでいる場合は、最適なC:N比が20:128に近い状態で調整する必要があるかもしれません。
  2. 10ガロンのバケツに5kgの食品廃棄物を入れ、2.5Lの水を追加します。ブレンダーを電源に接続します。ブレードを食品廃棄物と水の混合物に沈め、 スタート ボタンを押してブレンドを開始します。完全に均質化されるまで、少なくとも30分間ブレンドします(図1B)。ブレードを上下に動かして、食品廃棄物を完全にブレンドします。
    注意: 過熱を防ぐために、ブレンダーのスタートボタンを1分間離す必要がある場合があります。
  3. ブレンド後、ブレンダーを取り外し、お湯と食器用洗剤で洗浄します。バケツに蓋をし、バケツにサンプル名と調製日をラベル付けし、すぐに使用しない場合は4°Cで保管します。<....

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結果

aADからの食品廃棄物特性とVFA生成
調製済み食品廃棄物スラリー中のTS、VS、およびC:N比の例を 表1に示します。食品廃棄物の組成には、サンプリング源や時間によって固有のばらつきがあるため、TS、VS、C:N比の値の変動が予想されます。ばらつきは許容できるが、定期的なTS、VS、およびC:N比の測定は、プロセスモニタリング、微生物バランス、および全体的なaADシステムの最適化に不可欠である37

VFA濃度は、aAD消化器の操作の安定性と効率の重要な指標として機能します。 表 3 は、例として 4 つの運用サイクルの VFA データを示しています。これらのサイクル中、VFA濃度は4.13 ± 0.05 g HAc/Lで安定しており、aAD発酵槽がVFAを安定して生成できることが確認されました。この値は、文献22で報告されている値に匹敵し、パイロットスケールのaADシステムの運.......

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ディスカッション

aADからのVFA制作
VFAは、H. mediterraneiが食品廃棄物をPHAに変換する際の重要な前駆体として重要な役割を果たしています。したがって、aAD中に高いVFA濃度を維持することが不可欠です。aAD25でのVFA生産を強化するために、いくつかの戦略を採用することができます。効果的なアプローチの一つは、理想的な期間が8日以下のSRT最適化であり、これはメタン生成菌のウォッシュアウトを促進しながら加水分解と酸生成を最大化し、それによって過剰なVFA消費を防ぐ46。好熱条件(45-55°C)は基質の可溶化と酸性化を改善し、中温条件と比較してVFAの生産性を高めることができるため、温度調節は別の効果的なアプローチである47。さらに、2-ブロモエタンスルホン酸などの化学的阻害剤の添加、またはpH 4での短期間のpHショックは、主要な微生物経路を標的とするか、メタン生.......

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開示事項

著者は何も開示していません。

謝辞

この研究は、エネルギー省-エネルギー効率および再生可能エネルギー局(Prime Award No.DEEE0009268)および米国農務省国立食糧農業研究所(賞番号2023-79000-38973)。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
空気エアガスAI UZ300GC操作に使用
ポンプ座クラウドレイハイレア ACO-009D
塩化アンモニウムアクロスオーガニックA0396560
オートクレーブステリスAMSCOラボ250ATCC培地調製に使用
メトラー・トレド00 ME204TE
ミキサーヴェヴォルIB750LV+BLD300+WB-1
バケツロウズモデル 506405ガロンBPAフリープラスチック製一般バケツ
塩化カルシウム二水和物アクロスオーガニックA0362932
クロロホルムミリポアシグマC2432
デシケーターTS、VS、VSS測定に使用できる任意のタイプ
消化チューブ、PTFEライナー付きスクリューキャップミリポアシグマCLS982613
デジタルリアクターブロックハッハ社DRB200Hach VFA定量法で使用
デジタルスターラーサイロゲックスSCI550-プロ
ディスク遠心分離機アルファ・ラバル株式会社クララ 20
三角フラスコアマゾンB07V3JPQMM
エタノールアマゾンB09DGVL4ML
凍結乾燥機ラボコンコ10030133、1027319、0109621FreeZone 2.5リットルフリーズドライシステム
ヒュームフードケワウニーサイエンティフィックコーポレーションシュプリームエアLV
サーモサイエンティフィックモデルF30428C
ガスクロマトグラフィー(GC)アジレントモデル8890 
Haloferax mediterraneiATCCの33500
水素エアガスハイUHP300GC操作に使用
ナイフ食品廃棄物の削減に使用されるあらゆるタイプ
潤滑油フィッシャーサイエンティフィックカンパニーNC9844626
塩化マグネシウム六水和物フィッシャーサイエンティフィックカンパニーBP214-500
硫酸マグネシウム七水和物ミリポアシグマM1880型
メトナールミリポアシグマ34860
安息香酸メチルミリポアシグマ93583PHA定量の内部標準として使用
マイクロプレートリーダー BioTek シナジーシナジーH1
窒素エアガスNIのUHP300GC操作に使用
オーブンサーモサイエンティフィックオーム750
蠕動ポンプシンプリーポンプ株式会社PM6000 交流優れた空運転能力を備えた高流量自吸式ポンプで、高粒子スラリーを処理でき、1/8インチの壁チューブ用に設計されています。
pHメーターフィッシャーサイエンティフィックカンパニーAE150
PHA規格ミリポアシグマ403105
パイロットaAD消化槽クエーサーエネルギーグループ、インディペンデンス、オハイオ州、米国総容量100 L、作業容量80 L のステンレス鋼発酵槽。
パイロットPHA発酵槽マヌカツリーSF-50l ISO 9001 CE二重層ジャケット付きガラスリアクター
塩化カリウムジーバイオサイエンス162006
ポンプチューブ内径が1/8インチ、外径が3/8インチの任意のブランドのシリコンチューブ
炭酸水素ナトリウムフィッシャーケミカル241787
臭化ナトリウムカロライナ21139-45
塩化ナトリウムアマゾン B0787CFHF3
水酸化ナトリウム、ペレットフィッシャーバイオ試薬236088
次亜塩素酸ナトリウムミリポアシグマ425044
Sorvall LYNX 4000 超高速遠心分離機サーモサイエンティフィック75006580下流のPHA回収におけるPHA顆粒の収集に使用されます 
分光光度計 ハッハ社DR3900Hach VFA定量法で使用
硫酸ミリポアシグマ258105
シリンジフィルターアマゾンB06X6GTKVY
TOC分析装置島津製作所型式 TOC-LCSN
揮発性酸TNTplusバイアルテストハッハ社TNT 87250〜2,500 mg/Lの酢酸の範囲でVFAを測定できます。
湯沸かし器ボッシュ株式会社トロニック 3000 T 7 ガロン (ES8)
酵母エキスフィッシャーサイエンティフィックカンパニーAAJ6028736

参考文献

  1. Sabapathy, P. C. Recent developments in polyhydroxyalkanoates (phas) production-a review. Biores Tech. 306, 123132(2020).
  2. Koller, M., Simon, K. M. R. Haloarchaea as emerging big players in future polyhydroxyalkanoate bi....

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再版と許可

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