方法論記事

シロイヌナズナにおける男性減数分裂前期中のセントロメア運動のライブイメージング特性評価

DOI：

10.3791/68569

⸱

2025年10月24日

 ,  ,  , 
1Université Paris-Saclay, INRAE, AgroParisTech, Institute Jean-Pierre Bourgin for Plant Sciences (IJPB), 78000, Versailles, France

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

減数分裂前期の染色体移動は、胞子形成の基本であるあまり理解されていない現象です。このプロトコルは、 シロイヌナズナ の男性減数分裂前期におけるセントロメアの動きを取得、分析、および定量化する方法を説明しています。

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

減数分裂は、有性生殖に不可欠な細胞分裂です。減数分裂前期には、母方と父方の相同染色体が互いに認識して結合し、核質内の急速な動きによって促進されるプロセスです。減数分裂前期の動きは、核膜への染色体の付着と、核膜を介して染色体に伝達される細胞質力に依存しています。植物では、葯内の雄の減数分裂細胞へのアクセスが限られており、脆弱性があるため、ライブイメージングアプローチと染色体運動分析が技術的に困難になります。実際、これらの動きは非常に速く、それらを分析するには最適な取得条件を見つける必要があります。ここでは、シ ロイヌナズナの 男性の減数分裂前期の急速な染色体運動を捕捉する効率的な方法が、蛍光タグ付きセントロメアの動きを追跡することにより、タイムラプスムービーで説明 されています。これは、共焦点レーザー走査顕微鏡(CLSM)を使用した葯の解剖と画像取得を3Dおよび経時的に行うことに基づいています。減数分裂Zスタックを7秒ごとに取得することで、タグ付けされたセントロメアの軌跡を再構築および分析するのに十分な解像度が得られます。抽出されたデータはその後処理され、これらの染色体移動の定量分析が可能になります。このデータからのモデルの開発は、このプロセスを駆動する力の性質や強度など、染色体の急速な移動のメカニズムを理解するために不可欠です。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

減数分裂は、遺伝物質をある世代から次の世代に忠実に伝達することを保証する基本的な生物学的プロセスです。減数分裂のプロセスは、減数分裂Iと減数分裂IIの2つの連続した細胞分裂ラウンドに分けられます。減数分裂Iの前には、相同染色体が互いに認識してペアになる長い前期があります。この延長された前期の間に、多くの生物学的プロセスが発生します。相同染色体のペアリングに加えて、これらの染色体はシナプシスと呼ばれるプロセスも受けます。シナプスは、相同染色体をその長さに沿って接続するシナプトネム複合体として知られるタンパク質複合体の形成を伴います。シナプトネマ複合体は相同組換えを促進し、続いて相同染色体間の遺伝物質の交換とクロスオーバーの形成を促進します。これらは相同染色体間の物理的接続を確立し、それらの適切な整列とバランスの取れた分離を促進します1,2。

相同染色体認識中、急速前期染色体移動 (RPM) が重要な役割を果たすことが知られています。いくつかのモデル種で実施された研究では、レプトテン中に染色体が核膜(NE)に付着することが示されています。それらは、LINC(Linker of Nucleoskeleton and Cytoskeleton)タンパク質複合体を介して、NEを介して細胞質細胞骨格に接続されています3。細胞質で発生した力は、LINC複合体を介して染色体に伝達され、染色体の移動が可能になります。

RPM の研究は、減数分裂の基本的なメカニズム、特に相同染色体の認識に関与するメカニズムを理解するために不可欠です。ただし、これらの動きを研究するには、特定のライブ画像実験が必要です。A. thalianaのほとんどのライブイメージング研究は、体細胞組織と栄養器官に焦点を当てています。これらの研究は、細胞がどのように臓器を生じさせるかを決定するために実施されました4。このような研究は分裂組織5と根6で行われています。最近、いくつかのチームが減数分裂を含む花の発達をリアルタイムで観察する技術を開発しました A. thaliana 数日間にわたって7,8。ただし、これらのプロトコルは要求が厳しく、多数のサンプルに対してセットアップするのが難しい場合もあります。

この記事では、 A.thalianaの減数分裂中の染色体動態の生細胞イメージングと分析のための詳細なプロトコルを紹介します。サンプル調製のための簡単な技術である共焦点顕微鏡法と染色体の蛍光標識を併用することで、染色体の動きを短時間にわたって高い空間的および時間的分解能で捉えました。このプロトコルは、イメージング用の植物組織の準備、光毒性を最小限に抑え、画質を最大化するためのイメージングパラメータの最適化、ならびに画像処理とデータ分析の概要を示しています。この方法により、減数分裂中のセントロメアダイナミクスの正確な定量化が可能になり、配偶子形成の成功の根底にある染色体の挙動を理解するために重要です。この知識は、特に生殖能力と遺伝的多様性に影響を与える染色体ペアリングと組換えプロセスの研究を促進することにより、作物育種プログラムの改善において、農業に直接的な影響を及ぼします。

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プロトコル

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このプロトコルは、GFP-CENH3およびNUP54-RFP導入遺伝子9,10を発現するトランスジェニックA.タリアナ植物を使用します。CENH3マーカーは、セントロメアの動きを追跡することができます。NUP54マーカーは核孔にラベルを付け、核を区別するのに役立ちます。他のマーカーを使用することもできますが、サンプルが継続的に照射されるため、これらは光退色に耐性がなければなりません。マーカーが光退色を受けないようにするには、同じレーザー条件と取得パラメータで実験を実行し、画像取得期間中信号が安定していることを確認します。使用する試薬と機器は、材料表に記載されています。

1. 植物の成長と培養

  1. 温室の鉢に直接種を蒔きます。
  2. 鉢を温室に入れます 温室 次の条件下で:16時間昼/8時間夜、20°C、70%湿度。
  3. 植物を温室で約4週間成長させます。植物は、5/6の花茎を持つ段階に達する必要があります( 図1Aを参照)。

2.葯の解剖とスライドの準備

  1. スライドガラスを準備し、スペーサー(直径9 mm、深さ0.12 mmの穴あきの両面接着剤)をその中央に置き、両側の保護フィルムを剥がすように注意します。このスペーサーはサンプルを保持し、スライドとカバーガラスの間にスペースを作ります。
  2. スペーサーの中央に8 μLの水道水を堆積させます。
  3. 鉗子を使用して、主茎の1つから花序を摘み取ります( 図1Bを参照)(出現する茎からの小さな花序は使用しないでください)。
  4. 定規を取り付けた実体顕微鏡の下で新しいスライドに花序を置きます。長さ約0.5 mmの花芽を選択します(図1C)。
  5. 鋭利な針を使用して、つぼみをそっと開き、がく片と花びらを引き離して葯だけを残します。葯を傷つけたり、乾かさないように注意してください。
  6. 葯の房をスペーサーキャビティ内の水中に繊細に移します。脱水症状を避けるために、がく片と花びらを取り除いた直後にこれを行います。
  7. スペーサーキャビティ内にいくつかの葯房を堆積させます。
  8. 気泡を避けて、スライドをカバーガラスで覆います。これを行うには、カバーガラスに8 μLの水を加え、スペーサーキャビティに水滴を垂らしてカバーガラスを慎重に裏返します。葯房が合計16 μLの水に浸され、カバーガラスがスペーサーにしっかりと接着されていることを確認してください( 図1Dを参照)。 図2)。

3. 共焦点顕微鏡によるタイムラプス観察 – イメージングセットアップ

注:イメージングパラメータを設定する方法は、使用する共焦点システムによって異なります。イメージング パラメーターの詳細については、「 ディスカッション」 セクションを参照してください。画像は、CLSMと20倍の水浸レンズを使用して取得されました。水浸対物レンズを使用すると、生体サンプルが水中に取り付けられるため、屈折率の一致が向上します。

  1. 488 nmでGFPを励起し、494 nmから547 nmの間のハイブリッド検出器で検出することにより、顕微鏡をセットアップします。
    メモ:ハイブリッド検出器オフセットゲインは100に設定されました。RFPは561 nmで励起され、584〜629 nmのハイブリッド検出器で検出されます。ハイブリッド検出器のオフセットゲインは130に設定されました。スキャン速度は400Hzで、スキャンは双方向です。ライン平均 2 が適用されます。2つのチャンネルは、取得時間を最小限に抑えるために同時に集録されました。レーザー出力は、488 nm レーザーで 15%、561 nm レーザーで 30% に設定されました。
  2. 明視野照明を使用して葯の位置を特定します。
  3. 明視野チャネルを使用して、細胞の形状に基づいて減数分裂段階を決定します。
    注:RPMを観察するには、ザイゴテンまたはパキテンステージが必要です。Z軸に沿った焦点の変化により、細胞の3D形状を推定できます。レプトテン段階では、減数分裂細胞ははっきりとした正方形の形状を示し、核小体は核の中心に配置されているため、簡単に識別できます。接合子とパキテンの段階では、減数分裂細胞は台形になり始め、核小体は核膜に向かって移動します。ジプロテン段階までに、減数分裂細胞は完全に丸みを帯びた形態を示します10。
  4. ソフトウェア上の葯を視覚化します。RFPシグナルは、細胞の減数分裂段階の優れた指標でもあります。
    注:ザイゴテン/パキテン段階の減数分裂細胞は、三日月形のNUP54標識を示し、これらの段階でのNEの制限領域における核細孔のクラスター化に対応します(図3A)。必要に応じて、葯を水平に配置するように回転させます( 図3を参照)。
  5. 画像サイズを 400 ピクセル x 150 ピクセルに定義し、デジタルズームを 4 にして、画像の葯を中央に配置します。
  6. できるだけ多くの無傷の減数分裂細胞を得るために、画像化するサンプルの厚さを定義します。ただし、取得時間を最小限に抑えるために、Zスライスの数を制限することが重要です。厚さ15μmの場合、16枚のzスライスが作成されます。 Zスタックは1.04μmのステップサイズで取得しました。
  7. 連続取得を行うには、時間区間の時間間隔をゼロに設定してください。顕微鏡と上記のパラメータを使用すると、16スライスの取得時間は約6〜8秒です。最小獲得時間は2分だが、最大20分まで行くことができる。
  8. 取得を開始します。

4. 画像解析 – セントロメアの動きの追跡

注:セントロメアの動きを再構築するには、3Dの動きを追跡できる画像解析ソフトウェアが必要です。ソフトウェアは、各取得時に、定義されたパラメータに基づいて、オブジェクトを蛍光信号に割り当てます。次に、追跡ツールが移動するオブジェクトを自動的に分析し、リネージュプロットを作成します。

  1. 画像の前処理
    1. 動きの解析を容易にするために、取得後の画像処理を行います。たとえば、適応情報抽出プロセス(デコンボリューションアルゴリズム)を使用して、微細な構造や詳細を明らかにし、画質を向上させることができます。
  2. グローバルセントロメアトラッキング
    1. 画像のすべてのセントロメアをトラッキングする: スポットモジュールを使用して、スポットを(時間の経過とともに)自動的にトラッキングします。
    2. ソースチャンネル(この場合は緑色)を選択します。GFP-CENH3でマークされたセントロメアのXY直径1μmを示します。物体検出は、画像内のすべての物体を識別します(図3B)。
    3. コントロールウィンドウの下部にあるグラフを使用して、信号強度に基づいて検出の品質を変更します。
    4. 自動回帰モーショントラッキングアルゴリズムを使用して、軌道をトレースします(図3C)。すべての軌跡を視覚化することで、体細胞組織から減数分裂細胞を簡単に識別できます(ビデオ1)。
  3. 単一の減数分裂細胞におけるセントロメアの追跡
    注:3D可視化ソフトウェアを使用して、核と軌道を確認し、無傷で取得中のどの時点でもトリミングされていない核のみを分析します。トリミングされた減数分裂細胞の分析は、誤ったデータをもたらします。
    1. 自動セントロメアトラッキング
      注:単一の核を解析する場合、プロセスは最初から再開されます。
      1. スポットモジュールを使用して、選択した核のスポットを(経時的に)追跡し、 オプション「関心領域のみをセグメント 化し、スポットを(経時的に)追跡する」オプションを使用して、対応する関心領域(ROI)を定義します。
      2. 核を 3 つの次元すべてで、時間の経過とともに適切に含める ROI を選択してください。(図4A)。
      3. セントロメア検出(図4B)および追跡(図4C)には葯全体と同じパラメータを使用します。
      4. 系統プロット(図4F)では、すべての軌跡が示されています。分析された減数分裂細胞の外側の軌跡を除去できます(図4C)。トラックを選択し、キーボードのDeleteキーを使用して削除します。これらは、ソフトウェアの3Dビューアを使用して簡単に識別できます。
    2. 手動セントロメアトラッキング補正
      注:ほとんどの場合、追跡ソフトウェアは互いに近すぎるセントロメアを区別できないため、軌道を手動で修正する必要があります。
      1. 編集 モードを使用して 、オブジェクトを削除または追加します。オブジェクトが正しい平面に追加されていることを確認します。
      2. 3Dで細胞を慎重かつ徹底的に個人的に分析した後、系統プロットを使用してトラック 編集 モードで新しいオブジェクトを手動で接続します。 図4E、Gは、 減数分裂細胞の画像と線形プロットでそれぞれ修正された軌道を示しています。 ビデオ2 は、矯正後の1つの減数分裂細胞の軌跡を示しています。
      3. データのエクスポート
        1. 追跡データをスプレッドシート プログラム形式にエクスポートして、さらなるデータ処理と分析を容易にします。これらのファイルには、ソフトウェアで実行された追跡の結果の測定テーブルが含まれています。
        2. エクスポートされたスプレッドシートファイルに次の変数が含まれていることを確認してください。時間:各測定の時点を記録します。各トラックを一意に識別するトラック ID。変位デルタX、Y、Zは、各時点での3次元の位置の変化を表します。位置 X、Y、Z は、空間内の各オブジェクトの絶対位置を格納します。

5. データ分析

注: このパートでは、RStudio12 で実行される R11 スクリプトを使用したデータ分析ワークフローについて説明します。これらは、Data INRAE リポジトリ (10.57745/V1NNFI) から取得できます。すべての数値は、計算されたメトリックを視覚化するために ggplot213 を使用して生成されます。スクリプトは、次の手順を順番に実行します。meiomove-sub-config.R スクリプトは、最初に実行され、R 環境を初期化し、必要なライブラリをロードし、グローバル変数を定義します。スクリプトへのリンクは次のとおりです https://doi.org/10.57745/V1NNFI

  1. データの読み取りと選択
    注: 使用するスクリプトは、meiomove-sub-loader.R として保存されます。
    1. 追跡データを含むすべての個々のExcelファイルを収集し、それらを1つの統合ファイルにマージします。
    2. マージされたファイルを TSV 形式 (タブ区切り値) で保存して、その後のデータ処理ステップとの互換性を確保します。
    3. 変位値を経時的に累積することで x、y、z の位置を計算し、追跡された各オブジェクトの空間軌道が正確に再構築されるようにします。これは、誤った XYZ 位置をエクスポートするソフトウェアのバグを補うために行われました。
  2. データクリーニング
    注: 使用するスクリプトは、meiomove-sub-clean.R として保存されます。
    1. 最小持続時間が 50 秒の短いトラックを削除します。これらのトラックには、ノイズや不正確さが発生する可能性があるため、意味のある分析に十分なデータ ポイントが含まれていません。
    2. 位置 (X、Y、Z) が時間の経過とともに一定のままであるトラックは、解析に関係のないアーティファクトまたは静的構造を示すため、特定して削除します。
    3. 欠落している変位値 (NA エントリ) を除外して、データの整合性を確保し、後のステップでの計算エラーを回避します。
    4. 画像解析ソフトウェアから得られた変位値が再計算された値と大きく異なるトラックを検出して削除し、追跡データの一貫性と信頼性を確保します。
  3. 減数分裂細胞ドリフトの修正
    注: 使用するスクリプトは、meiomove-sub-clean.R としても保存されます。
    1. 減数分裂セントロメアと体細胞セントロメアを区別することにより、獲得中のドリフトの可能性を説明します。このステップにより、観察された動きが実験的なアーティファクトではなく生物学的プロセスに対応していることが保証されます。
    2. 安定した基準として機能する体細胞に対する減数分裂細胞の位置を調整することにより、ドリフト補正を適用します。
  4. 出力生成
    注: 使用するスクリプトは、meiomove-sub-metrics.R として保存されます。
    1. 各タイムステップの瞬間速度を計算して、時間の経過に伴う移動速度の変化を追跡します。
    2. 連続する時間ステップ間の移動方向の変化を表す旋回角度を計算し、軌道パターンについての洞察を提供します。結果は、results/dataframes/metrics-by-step.tsv (出力 1) として保存されます。
    3. 追跡対象物が開始位置に対してどれだけ移動するかを定量化し、探索的行動を示す celltrackR14 を使用してアウトリーチ比率を計算します。結果は results/dataframes/metrics-celltrackr.tsv (出力 2) として保存されます。
    4. 個々のトラックの平均速度を計算して、観測期間全体にわたる移動特性を要約します。トラックごとの平均旋回角度を計算して、全体的な動きの方向性と行動パターンを分析します。結果は、results/dataframes/metrics-by-id.tsv (出力 3) として保存されます。
    5. 各セル トラックの各タイムステップでの重心位置を決定します。重心は、特定の減数分裂細胞におけるセントロメア位置の平均です。
    6. 各タイムステップでの重心サイズを計算すると、平均位置の周りのセントロメアの空間的分散の尺度が得られます。時間の経過に伴う重心サイズの変化は、セントロメア トラック間のグローバルな一貫性に関する情報を提供します。結果は、results/dataframes/metrics-by-cell.tsv (出力 4) として保存されます。
    7. 速度の相互相関を計算して、追跡対象の異なるオブジェクトの移動ダイナミクス間の関係を分析し、潜在的な協調的な動作を明らかにします。結果は results/dataframes/metrics-correlations.tsv (出力 5) として保存されます。
    8. 各トラックの平均二乗変位 (MSD) を計算し、モーション タイプを特徴付けるために、特定の時間間隔 (タイムラグ) にわたってセントロメアが移動した平均二乗距離を定量化する重要な指標です。
      注: MSD がタイムラグの増加とともにどのように進化するかを調べることで、運動が主に拡散的か閉じ込められているかを推測できるため、根底にある動的挙動についての洞察が得られます。結果は results/dataframes/metrics-msd.tsv (出力 6) として保存されます。

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結果

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シ ロイヌナズナの減数分裂の前期における染色体の動きを視覚化するための迅速なプロトコルが開発され、複数のタイムラプス取得が可能になり、大規模なデータセットの分析が可能になりました。セントロメアの可視化を可能にするGFPマーカーを発現する減数分裂細胞、および核の可視化を可能にするRFPマーカーを、記載されたプロトコルに従って4分間画像化する。

ここで説明するプロトコルで使用される取得パラメータは、セントロメアの十分な空間的および時間的分解能を達成するように最適化されており、したがって、それらの動きの正確な追跡を可能にします。これらのパラメータは、光退色を最小限に抑えるように最適化されており、取得全体を通じて安定した信号強度を保証します。接合子/パキテン段階の葯からの3つの減数分裂細胞の分析により、22個のセントロメアの動きの分析が可能になりました。この数は、細胞のセント...

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ディスカッション

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現在のプロトコルは、シロイヌナズナの減数分裂前期におけるセントロメア運動の in vivo イメージングと分析を可能にします。このプロトコルは、正立顕微鏡または倒立共焦点顕微鏡のいずれかで実装できるため、共焦点技術を備えたほとんどの研究室で利用できるようになります。共焦点システムは、スキャン速度、感度、検出器、および波長を分離する機能が異なりますが、取得パラメータを調整して、良好な時間的および空間的分解能の画像を取得することができます。蛍光タンパク質の選択も10様々ですが、これらは強力で連続的なレーザー照明に耐える必要があります。染色体(この場合はセントロメア)を追跡するために使用されるマーカーは、光退色に対してより耐性がある必要があります。しかし、マウスに示されているように、ゲノムの他の領域に特異的な蛍光マーカーも使用でき、セントロメア周囲領域に対応するテロメアが追跡される15。他のマーカーは、たとえばシナプスマーカー(ZYP1タンパク質...

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開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

著者は利益相反を宣言しません。

謝辞

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この研究は、ジャン・ピエール・ブルジャン研究所の植物観測所技術プラットフォームであるPO-PlantsとPO-Cytoの支援の恩恵を受けています。この研究は、ANR (MeioMove ANR-21CE12-0042 : M.G., P.A., L.C., S.L., および DYSCORD ANR-23-CE20-0036-02, M.G., L.C.) によって資金提供されました。ジャン・ピエール・ブルジャン研究所は、サクレー植物科学(ANR-17-EUR0007)の支援を受けています。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
繁殖地TREF(ジフィー)101820/02227861
共焦点顕微鏡ライカTCS SP8 AOBS(音響光学ビームスプリッター)
コンフォーカルソフトウェアライカLAS X 3.5.0.18371ソフトウェア
カバースリップポール・マリエンフェルト有限会社10705222x22 No1,5H
鉗子アイデアルテック4.SA.0高精度ピンセット
GFP:CENH3Ravi ら 2010年ここで使われるシロイナドプシス・タリアナの種子
ggplot2 ggplot2: Elegant Graphics for Data Analysis  Reference13https://ggplot2.tidyverse.org
針用の取っ手ハマッハーループ用ハンドル、長さ170mm
イマリスオックスフォードの楽器イマリス 9.7.2画像解析 - 「スポット」モジュール
レンズライカHC PL APO CS2 20×/0.75 IMM
ライトニングライカ適応型デコンボリューション共焦点データからの自動インテリジェント情報抽出
照明ヴェーゲレドアポロ LL252-Gen2
針ワトキンス&ドンカスターE3ピン 0.0124インチ(0.31mm)×25mm
NUP54:RFPCromerら 2024年ここで使われるシロイナドプシス・タリアナの種子
壺テク(ポッペルマン)VDF 7x7x6.5 cm
RRCoreチームR: 統計のための言語と環境 コンピューティング。R Foundation for Statistical Computing(オーストリア・ウィーン) Reference11https://www.R-project.org/  
Rstudioポジットチーム RStudio:R. Posit Software向け統合開発環境、PBC、ボストン、マサチューセッツ州。Reference12http://www.posit.co/
スライドニッテル・グラス10000326×76×1.0mm
スペーサーサーモフィッシャーセキュアシールスペーサー、8井戸、直径9mm、深さ0.12mm。各スペーサーを個別にカットしてください
立体顕微鏡ニコンSMZ800

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zickler, D., Kleckner, N. Meiotic chromosomes: Integrating structure and function. Annu Rev Genet. 33 (1), 603-754 (1999).
  2. Zickler, D., Kleckner, N. Meiosis: Dances between homologs. Annu Rev Genet. 57 (1), 1-63 (2023).
  3. Kim, H. J., Liu, C., Dernburg, A. F. How and why chromosomes interact with the cytoskeleton during meiosis. Genes (Basel). 13 (5), 901(2022).
  4. Harline, K., Roeder, A. H. K. An optimized pipeline for live imaging whole Arabidopsis leaves at cellular resolution. Plant Methods. 19 (1), 10(2023).
  5. Prunet, N. Live confocal imaging of developing Arabidopsis flowers. J Vis Exp. (122), e55156(2017).
  6. Peng, Z., Jiao, Y., Wang, Y. Live imaging of Arabidopsis shoot primordia via a confocal laser scanning microscope. STAR Protoc. 4 (2), 102217(2023).
  7. Prusicki, M. A., et al. Live cell imaging of meiosis in Arabidopsis thaliana. eLife. 8, e42834(2019).
  8. Valuchova, S., et al. Imaging plant germline differentiation within Arabidopsis flowers by light sheet microscopy. ELife. 9, e52546(2020).
  9. Ravi, M., Chan, S. W. L. Haploid plants produced by centromere-mediated genome elimination. Nature. 464 (7288), 615-618 (2010).
  10. Cromer, L., et al. Rapid meiotic prophase chromosome movements in Arabidopsis thaliana are linked to essential reorganization at the nuclear envelope. Nat Commun. 15 (1), 5964(2024).
  11. R: A language and environment for statistical computing. , at https://www.R-project.org/ (2021).
  12. RStudio: Integrated development environment for R. , at http://www.posit.co/ (2025).
  13. Wickham, H. Data Analysis. ggplot2. , 189-201 (2016).
  14. Wortel, I. M. N., et al. CelltrackR: An R package for fast and flexible analysis of immune cell migration data. Immunoinformatics. 1 - 2, 100003(2021).
  15. Lee, C. -Y., et al. Mechanism and regulation of rapid telomere prophase movements in mouse meiotic chromosomes. Cell Rep. 11 (4), 551-563 (2015).
  16. Nozaki, T., Weiner, B., Kleckner, N. Rapid homologue juxtaposition during meiotic chromosome pairing. Nature. 634 (8036), 1221-1228 (2024).
  17. Fang, Y., Spector, D. L. Centromere positioning and dynamics in living Arabidopsis plants. Mol Biol Cell. 16 (12), 5710-5718 (2005).
  18. Arpòn, J., Gaudin, V., Andrey, P. A method for testing random spatial models on nuclear object distributions. Plant Chromatin Dynamics: Methods and Protocols. 1675, 493-507 (2018).

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