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方法論記事

昆虫病原性真菌の病原性スクリーニングのためのChilli Thrips (Scirtothrips dorsalis Hood)飼育システムの確立

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DOI：

10.3791/68600

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2025年7月18日

 ,  ,  , 
1Master Program in Plant Medicine and Good Agricultural Practice, National Chung Hsing University, 2Department of Entomology, National Chung Hsing University, 3Applied Zoology Division, Taiwan Agricultural Research Institute, 4International Doctoral Program in Agriculture, National Chung Hsing University

この記事について

サマリー

寒天を含むガラス容器で改変された分離葉法を使用してチリアザミウマを大量に飼育するための分離葉バイオアッセイプロトコルが確立され、高い生存率と同期した発生が保証されました。このシステムは、2齢 幼虫に対する昆虫病原性真菌の病原性の効率的なスクリーニングを可能にし、実験室、温室、および野外評価のための信頼性の高いアザミウマの供給を提供します。

要約

唐辛子アザミウマ(Scirtothrips dorsalis Hood)は、台湾の観賞用および食用作物の経済的に重要な害虫です。昆虫病原性真菌(EPF)は、アザミウマを管理するための環境に優しい生物学的防除剤として働いています。EPF分離株の毒性を実験室条件下でスクリーニングすることは、現場での適用前に、実験室の条件下でアザミウマに対してスクリーニングすることが重要です。しかし、アザミウマの飼育方法に関するデータは限られており、大規模な実験室でのスクリーニングには課題があります。この問題を解決するために、 S. dorsalisの大量生産のための改良型実験室飼育法を開発した。

この方法は、唐辛子アザミウマに対するEPFの評価に適した寒天含有ガラス容器を使用した一葉飼育システムを利用しています。この最適化された分離葉バイオアッセイシステムは、唐辛子アザミウマに対するEPFの有効性を評価するのに適しています。このシステムは、病原性スクリーニングのために同じ発達段階で多数のアザミウマを生産する能力を持っています。試験結果によると、 Cordyceps cateniannulata (Cc-NCHU-213)分離株は、接種後7日(d.p.i.)で、唐辛子アザミウマの2番目の 幼虫に対して最も高い病原性(53.6%)を示したことが示されました。また、寒天に包埋された葉盤は7日以上も新鮮に保たれ、観察期間中を通じてアザミウマが生存できた(対照処理の生存率は90%)ことから、飼育システムの安定性が示されました。このプロトコルは、大量生産のための安定した飼育システムと、唐辛子アザミウマに対するEPF分離株の病原性を評価するためのシステムを示しており、他のアザミウマにも有用性があり、現場でアザミウマを制御するための潜在的なEPF分離株のスクリーニングを可能にします。

概要

唐辛子アザミウマ(Scirtothrips dorsalis Hood;Thysanoptera:Thripidae)は、野菜や観賞用および果物作物1を含む、40の異なる植物科にわたる100以上の植物種に蔓延する多食性の害虫です。熱帯および亜熱帯アジア-東南アジア、インド、日本、台湾2に自生しています。私たちの知る限り、唐辛子アザミウマは、台湾のマンゴー、お茶、ブルーベリー、蓮などの農作物や観賞用作物の害虫です。過去20年間で、唐辛子アザミウマは、グローバリゼーションの増加と農産物貿易の開放により、いくつかの国で重大な経済的害虫になりました。さらに、高い繁殖能力と新たに侵入した地域への適応性が、この害虫の蔓延に貢献しました1,3。

唐辛子アザミウマは、主に若い葉、新芽、花びら、未熟な果実を食べ、壊死と組織の死につながります3。さらに、落花生芽壊死ウイルス(GBNV)、落花生葉扇状スポットウイルス(GCFSV)、落花生黄斑ウイルス(GYSV)4、タバコストリークウイルス(TSV)5など、さまざまな植物病害の媒介者として機能します。その結果、唐辛子アザミウマによる給餌は、影響を受ける作物の収量と価値を大幅に減少させる可能性があります。唐辛子アザミウマの管理を成功させるには、文化的、生物学的、化学的防除戦略を利用した統合的な害虫管理計画が必要です1。台湾では、有機農家は一般的に、ナローレンジオイルやニームオイルなどの非化学材料、または捕食性のダニや微細な海賊虫の使用を含む生物学的防除方法を利用しています(個人的な観察による)。しかし、農家からのフィードバックによると、花や結実の季節にこれらのオイルを施用すると、受粉が妨げられ、花粉が損傷し、収量と経済的価値が低下する可能性があります。したがって、アザミウマの効果的な代替防除手段を開発することは、有機農家にとって非常に重要です。

昆虫病原性真菌(EPF)は、効果的で持続可能な害虫管理技術であることが示されている昆虫を殺す真菌のグループです6,7,8。いくつかの研究で、唐辛子アザミウマに対するEPFの有効性が実証されています。商用EPFであるBeauveria bassiana GHA(BotaniGard_ES)およびMetarhizium brunneum F52(Met-52 EC)は、バラの植物の唐辛子アザミウマの大幅な制御を示しています9,10。 コショウ植物のアザミウマの個体数は、冬虫夏草(= Isaria fumosorosea)によっても減少させることができる11。Lecanicillium lecaniiやPurpureocillium lilacinumなどの他のEPFは、唐辛子植物やお茶を含むさまざまな作物の唐辛子アザミウマに対してテストされており、この害虫の防除に効果的でした12,13。

温室や野外でのアザミウマ防除に対するEPFの有効性を調査した以前の研究の中には、最も効果的なEPF種/菌株を最初にスクリーニングせずに実施されたものがあり、その有効性は限られていました。EPFの慎重なスクリーニングは、害虫管理を大幅に強化する可能性があります。多くの研究で、ケージ内の無傷の植物に対するバイオアッセイのためにアザミウマを飼育しています11,14。無傷の植物飼育システムは、アザミウマにとってより自然な環境を提供しますが、アザミウマは各段階で異なる行動を示すため、さまざまな発達段階の管理に課題をもたらします。このばらつきは、特定の実験目的のための標的ステージの選択を複雑にする可能性があります。さらに、無傷の植物飼育システム内の土壌条件は、チリアザミウマの蛹化および排泄に影響を及ぼし、それにより、その後のバイオアッセイ15に利用可能な個体数を減少させ、さらなるバイオアッセイのための資源を制限する可能性がある。さらに、ストレスを受けた植物はアザミウマの行動を変える可能性があり、より時間とリソースを大量に消費する可能性があるため、植物全体の飼育システムでは、より多くのスペースと継続的な手入れが必要です。実験室でのバイオアッセイ実験のために、非生物植物材料(例えば、分離した植物組織や人工飼料)に基づくアザミウマの飼育システムの報告はほとんどないが、これらの方法の詳細はしばしば不明瞭であるか、省略されていた12,16。

この研究は、実験室条件下での唐辛子アザミウマのシンプルで費用対効果が高く、持続可能な大量飼育システムを開発することを目的としています。このプロトコルでは、リーフディスク飼育方法7 が、大量アザミウマの飼育に対してより効率的で制御されたアプローチを提供するように変更され、環境条件の厳密な制御を通じてバイオアッセイの発生段階を正確に選択することを可能にした。さらに、昆虫病原性真菌(EPF)分離株の病原性を50%致死時間(LT50)および50%中央致死濃度(LC50)で評価するための安定した再現性のあるバイオアッセイシステムが開発されました。これは、特定の投与量での推定時間、およびチリアザミウマの50%の死亡率を引き起こすために必要な真菌懸濁液の濃度を指します。 それぞれ。この方法を適用することにより、野外で採取されたアザミウマを正しく同定し、アザミウマの安定した実験室コロニーを維持して、より簡単で再現性の高い方法を使用してさまざまな真菌分離株の有効性を試験することができます。

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プロトコル

注:完全な実験フローチャートを 図1に示します。

1.チリアザミウマのフィールドコレクションとコロニーのメンテナンス

  1. 唐辛子アザミウマのコレクション
    1. 影響を受けたブルーベリー農場のブルーベリー植物に唐辛子アザミウマが蔓延していないか、葉の両面と花の中を視覚的に調べます。
    2. 各サンプルの詳細(植物の一部や蔓延の程度など)を記録し、従来の農業や有機農業など、鉱物油や天敵の施用を含む生産慣行を農家に確認します。
    3. 唐辛子アザミウマがはびこっている葉や花を切り、プラスチック製のジッパーバッグ(材料表)に移し、アザミウマを生かしておくために、ジッパーバッグを内部に空気を入れて密封します。サンプルを3時間以内に実験室に持参してください。
      注意: サンプルをクーラーに入れます フィールド収集の時間が3時間以上の場合。
    4. ガラス製飼育容器(高さ35mm、内径45mm)を用意し、ガラス製飼育容器の底に円形のペーパータオル(直径40mm)を3枚重ね、ろ過水を8〜10滴(400〜500μL)加えます(図1 、 材料表)。
    5. マンゴー畑から若い赤いマンゴーの葉を集めます(図1)。ガラス製の飼育容器を準備する前に、葉を洗い、光学顕微鏡(Table of Materials)で昆虫の卵やその他の昆虫の汚染がないか確認してください。マンゴーの葉をレザーカッター(Table of Materials)で円形の円盤(40 mm)に切り、濡れたペーパータオルの上に置きます。
      注:マンゴーの葉は、季節限定で成長する若いブルーベリーの葉よりも、アザミウマを養うためのより安定した資源です。
    6. 光学顕微鏡で10倍の倍率で唐辛子アザミウマを観察し、10匹の成虫アザミウマ(オス5匹、メス5匹)を細かい塗装ブラシ(材料表)でガラス飼育容器に移します。
    7. 各ガラス飼育容器を2層のパラフィルムで密封し(材料表)、換気用の#00昆虫ピンを使用して約40個の小さな穴を開けます(材料表)。
    8. ガラス製の飼育容器をインキュベーターに保管し、25 ± 1 °C、相対湿度 ~70%、光周期を明暗 (L:D) = 12 h: 12 時間 (材料表) にします。
    9. 48時間後にペイントブラシを使用して大人を取り除きます。
      注:私たちの観察によると、雌のアザミウマはガラス飼育容器に移されてから~2日後に卵を産みます。
    10. 卵で葉の組織を実体顕微鏡で観察し、産卵をさらに確認します(図1 および 材料表)。卵と一緒に葉の上に新鮮なマンゴーの葉の円盤を置き、湿度を維持するためにペーパータオルにろ過した水を8〜10滴加えます。
  2. チリアザミウマの個体数の維持
    注:卵は~5〜7日後に1番目の 幼虫に孵化します。
    1. 1匹 目の幼虫が入った葉を新しいガラス製の飼育容器に直接移します。
      注:ペイントブラシを使用して、マンゴーの葉の腐った予期しない真菌の成長による汚染を避けながら、1年生 の幼虫を新しいガラス飼育容器にそっと移します。私たちの観察に基づくと、成体の女性は1日あたり平均6個の卵を産みます。
    2. 唐辛子のアザミウマを毎日観察してください。ペーパータオルに4日ごとに8〜10滴のろ過水を加えます。古い葉が乾く前に、4日ごとに容器内に新鮮なマンゴーの葉のディスクを追加します。
      注:1番目の 幼虫は、温度や湿度などの環境要因にもよりますが、7~10日で成虫に出現します。
    3. アザミウマが成虫に成長するまで、チリアザミウマの個体数を毎日観察し、長期的な個体数維持のためにステップ1.1.4の手順を繰り返します。
  3. チリアザミウマの大量飼育
    1. 維持された集団から女性の成虫を収集し、上記の手順に基づいてガラス製の飼育容器を準備します。
    2. 10人の女性の成虫をコンテナに移し、ステップ1.1.4から1.1.10までの手順に従って、卵の入った葉を取得します。
      注:成体の女性は1日平均6個の卵を産みます。
    3. ~120匹の1st instar幼虫を、ペイントブラシを使用して新しいガラス飼育容器にそっと移します。
    4. 唐辛子のアザミウマを毎日観察してください。4日ごとにペーパータオルに8〜10滴のろ過水を追加します。古い葉が乾く前に、4日ごとに新鮮なマンゴーの葉の円盤を容器に入れます。
    5. 卵が産まれてから1〜5日後に7匹の幼 虫を集めます。7〜10日後に2番目の 幼虫を収集します。~14日後に成人をバイオアッセイのために採取します(図2)。
      注:さらなる実験のために、唐辛子アザミウマのさまざまな段階を区別するために形態を観察してください(図2)。

2. チリアザミウマの分子同定

注:野外から収集されたアザミウマは、唐辛子アザミウマの一般的に使用されるマーカーであるミトコンドリアシトクロムオキシダーゼI(COI)遺伝子の断片を使用した分子同定により、種レベルまで同定する必要があります17,18。

  1. チリアザミウマゲノムDNAの抽出
    1. 成虫のアザミウマ1匹を1.5mLの遠心分離チューブに集めます(材料表)。
    2. ペレット乳棒を使用して唐辛子アザミウマを均質化し、市販のキットを使用してメーカーのプロトコルに従ってゲノムDNAを分離します(材料の表)。
  2. PCR増幅とDNAシーケンシング
    1. PCR Master Mix(2x)とCOIプライマーペア、フォワードプライマーLCO 1490、および部分的なミトコンドリアCOI遺伝子を増幅するリバースプライマーHCO 2198(材料表)を使用して、予想されるチリアザミウマDNA断片を増幅します。
      1. 2 μL の thrip ゲノム DNA テンプレート、フォワードプライマーとリバースプライマー各 1 μL、2x PCR Master Mix 10 μL、ddH2O 6 μL を含む 20 μL PCR 混合物を調製します (材料表)。
      2. サーマルサイクラーでPCRを以下のサイクル条件で実施します:初期変性を94°Cで2分間、94°Cで35サイクルで30秒、52°Cで1分間、72°Cで1分間、その後、最終的に72°Cで10分間延長します(材料表)。
    2. 1%アガロースゲル中で電気泳動してPCRアンプリコンをチェックし、増幅結果を確認します(図3)。
    3. ターゲットバンドを切除し(予想されるアンプリコンサイズは658 bpでした)、メーカーのプロトコルに従ってGel / PCR精製キットを使用してチリアザミウマのCOI PCRアンプリコンを精製します。精製した製品をシーケンシング用に、市販のシーケンシングサービスを通じてお送りください。(資料の表)。
  3. シーケンス解析
    1. 参照されているソフトウェア(Table of Materials)を使用して、シーケンスの品質を評価します。
    2. FASTAまたはTXTファイルを開き、望ましくない配列を削除して、5'末端と3'末端の両方で低品質の塩基を手動でトリミングします。
    3. デフォルトのパラメータを使用してNCBIデータベース(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)でBLAST検索を実行し、種の同一性を確認します。

3. 昆虫病原性真菌の調製

注:この研究で使用したEPF分離株を 表1に示します。

  1. 真菌資源ライブラリからの真菌分離株の回収
    1. 保存した真菌分生子ストック(分生子分生子を30%グリセリンに懸濁)を-80°Cの冷凍庫から解凍します。
    2. 分生子懸濁液約10μLを移し、層流フード内の細胞スプレッダーを使用して、5.5 cm 1/4 Sabouraud dextrose agar(SDA)プレート上に均等に広げます。培地は、0.75 gのSabouraudデキストロースブロスと1.5 gの寒天を100 mLの二重蒸留水(ddH2O)に混合することによって調製されます(材料の表)。
    3. ペトリ皿をパラフィルム(材料表)で密封し、プレートを25°Cで10〜14日間暗所インキュベーターに移します。
    4. 活発に成長している真菌の菌糸体を、新鮮な1/4 Sabouraud dextrose agar(SDA)プレートに縞模様にして継代培養します。菌類を25°Cの暗闇で10〜14日間インキュベートして、収穫前に分生子が発達できるようにします。
      注:その後のバイオアッセイには、約10日齢の真菌培養物を使用してください。14日以上経過した培養物は、分生子の生存率が低下する可能性があるため、病原性試験には推奨されません。
  2. 分生子懸濁液の調製
    1. 10-14日齢の菌類培養液の表面に2-3mLの0.03%Tween 80を1/4 SDAで加えます。無菌ループを使用して分生子をそっとこすります(材料の表)。
    2. 真菌懸濁液を清潔な15mL遠心チューブに移します。
    3. 最高速度でボルテックスして懸濁液を均質化し、濾紙でろ過して菌糸の破片を取り除き、純粋な分生子懸濁液を取得します。
    4. 血球計算盤(Table of Materials)を使用して、光学顕微鏡で分生子の数を確認し、懸濁液を108 分生子/ mLに希釈します。
    5. 分生子懸濁液をUV光で滅菌したマイクロ噴霧器に移し、その後のバイオアッセイアプリケーションのために。
      注意: 沈降を避けるために、各移送の前に分生子懸濁液が完全に渦巻されていることを確認してください。使用前に、マイクロスプレーを層流フード内で30分間紫外線にさらして滅菌してください。

4. 唐辛子アザミウマに対する病原性スクリーニング

  1. 2番目の 幼虫の準備
    1. 次の実験の手順1.3.1-1.3.5に従って、2番目の 幼虫を収集します。
      注:2番目の 幼虫は、最初の幼虫と比較して、黄色の体色と広い腹部で区別します(図2)。
  2. 接種容器の準備
    注:唐辛子アザミウマの対象作物に基づいて葉の種を選択します。この研究では、寄生したブルーベリー「ビロキシ」(V.corymbosum L.× V.darrowii Camp)の葉の畑から唐辛子アザミウマを採取しました。したがって、唐辛子アザミウマに対するEPFのバイオアッセイは、ブルーベリーの葉で実施されます。
    1. ブルーベリー農場から若いブルーベリーの葉を集め、ブルーベリーの葉を洗って、表面のほこりやその他の節足動物が存在する場合はそれを取り除きます。
    2. 葉を風乾するか、ペーパータオルを使用して水を拭き取ります。次に、実体顕微鏡でブルーベリーの葉の表面に他の節足動物や卵がないか確認します。節足動物が存在する場合は、すべて取り除きます。
    3. 直径2.8cmのリーフディスクをレザーカッター(Table of Materials)でカットし、1%漂白剤(次亜塩素酸ナトリウム溶液)で葉を消毒し、滅菌水で2回すすぎ、葉に付着した漂白剤の残留物を取り除きます。
      注意: 寒天化する前にリーフディスクを準備して、リーフディスクを水寒天に適切に埋め込むことができるようにします。
    4. 2.5%水寒天溶液(ddH2O100 mLあたり2.5 gの寒天)をオートクレーブして滅菌します。
    5. 2.5%水寒天培地3mLを層流フード内の小型ガラス容器(高さ35mm、内径30mm)に注ぎ、寒天が固まる前に注ぎます。寒天が半固体状態に達するまで、約40°Cまで冷まします。
    6. リーフディスク(同軸面を上にして)を寒天上にそっと置き、寒天表面の上に最小限の露出でわずかに埋め込みます。水寒天が完全に固まると、ガラス容器はバイオアッセイの準備が整います。
  3. EPFの接種と観察
    1. 塗布する前に、分生子懸濁液を十分にボルテックスします。マイクロ噴霧器を使用して、0.1 mLの懸濁液(ステップ3.2.4で調製)をガラス容器内の約10 cmの距離から各葉ディスクの表面に均一に塗布します。.
      注:実験の前にスプレー領域をテストしてください。スプレーがリーフディスク全体を薄い層で均一に覆っていることを確認します。葉に溜まった水に液滴が溜まった場合は、接種量を減らして濡れすぎないようにしてください。
    2. 分生子懸濁液を葉の上で無菌条件下で30分間風乾します(例:.、層流フード内)。
    3. 2番目の 幼虫のうち10匹を細かいペイントブラシを使用して各容器に移し、各ガラス飼育容器を2層のパラフィルムで密封します。
    4. 換気用の#00昆虫ピン(材料表)を使用して、~30個の小さな穴を開けます。
    5. 25 ± °C のインキュベーターで容器に、相対湿度 ~70% と光周期 L:D = 12 h: 12 h を接種します。
    6. 唐辛子アザミウマの死亡率を実体顕微鏡で観察し、毎日10倍の倍率で7日間記録します。
    7. 死んだ幼虫はガラス容器に入れて、真菌症を観察し、EPF感染を確認します。

5. 選択したEPF分離株のバイオアッセイ

注:最も毒性の高いEPF分離株または高病原性を持ついくつかの分離株のいずれかを、唐辛子アザミウマに対する用量依存的なバイオアッセイに選択できます。106 から 108 分生子/mL の範囲の 3 つの異なる分生子濃度を使用して、用量と病原性との関係を評価しました。

  1. 分生子懸濁液の調製
    1. 手順3.1に従って、選択したEPF分離を回復します。
    2. ステップ 3.2 で説明したように、3 つの濃度の分生子懸濁液(106、107、108 分生子/mL)を調製します。
  2. 2番目の 幼虫の準備
    1. ステップ4.1に従ってセカンドインスターの幼虫を収集し、新しく出現した成虫を入手します。
  3. 接種容器の準備
    1. 手順4.2に従います。水寒天に埋め込まれたブルーベリーの葉の円盤が入った接種容器を準備します。
  4. EPFの接種と観察
    1. ステップ4.3で説明されているように、3つの濃度の分生子懸濁液でEPF接種を行います。

6. 統計分析

  1. 死亡率の計算
    1. 一元配置分散分析 (ANOVA) を実施して真菌処理間の違いを評価する前に、Arcsin 変換によって各真菌株の死亡率データを変換します (有意水準を p < 0.05 として設定)。
    2. テューキーの正直有意差(HSD)検定を使用して、治療手段の事後比較を行います。
  2. 致死時間の中央値(LT50)と致死濃度の中央値(LC50)の計算
    1. プロビット回帰分析を使用して、致死時間の中央値 (LT50) と致死濃度の中央値 (LC50) を計算します。
    2. 「total」、「response」、「duration」(LT50 の場合)または 「concentration」(LC50 の場合)という名前の変数を作成し、ソフトウェア インターフェイスで観測データを入力します。
      注:観察期間内に累積死亡率が50%を超えない場合、LT50および/またはLC50の値は確実に推定できません。
    3. プロビット分析を実行するには、[ 分析] |回帰 |プロビット。「total」をテストした昆虫の総数、「response」を死んだ昆虫の数、「duration」または「concentration」を共変量として設定します。不均一性因子の有意水準を0.05に設定するには、[ オプション ]を押し、[ 不均一性因子の使用の有意水準 ]を 0.05に設定します。

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結果

この研究で提示された実験フローチャートは、唐辛子アザミウマの安定した飼育システムを、フィールド収集からEPF分離株の病原性のスクリーニングまで確立できることを示しました(図1)。形態学的観察により、チリアザミウマを他のアザミウマと区別することができますが、PCRアンプリコンサイズやCOIシーケンシングなどの部分的なCOI配列を分子マーカーとして使用することで、野外で採取されたアザミウマがチリアザミウマとして同定されることをさらに確認することができます(図3)。分離葉飼育システムは、アザミウマが子孫を繁殖させるためのより良い制御環境(すなわち、温度と湿度)と十分な食料源を提供します。これにより、飼育容器内の安定した唐辛子アザミウマのコロニーを確保します。病原性スクリーニングバイオアッセイ(図4)の対照処理におけるアザミウマの生存率は90%であることも、分離葉飼育システムが、さまざまな種類のアザミウ...

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ディスカッション

チリアザミウマは、トウモロコシ、ピーナッツ、コショウ、大豆、イチゴ、サツマイモ、トマトなど、経済的に重要な数多くの作物に影響を与える世界的に重要な害虫です1,11,19。現在の制御戦略は、文化的慣行、生物学的防除剤、および天敵、線虫、およびEPFの使用を含む化学的処理を含む統合アプローチに依存しています11,14,20,21。しかし、EPFの有効性を評価するほとんどの研究は、温室や野外条件に焦点を当てているため、毒性の高い分離株の選択には時間がかかり、効率も劣ります。さらに、チリアザミウマの実験室での飼育は、その小型、強いチグモタク...

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開示事項

著者は、この作品には利益相反が関与していないことを宣言します。

謝辞

ブルーベリーの植物を提供してくださったHumiブルーベリー農場(台中市五峰区)のLin, Huanf-Jen氏に特に感謝します。この研究は、National Science and Technology Council(NSTC)の113-2313-B-005 -024 -MY3の支援を受けました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
#00 昆虫ピンエントスフィンクス DMM0220英国製
1.5 mL遠心分離管コーニング社団法人MCT-175-C米国製
10 & ムー;L 接種ループネストサイエンティフィック718201米国製
100 bp DNAラダーIIIジェネエイドDL007台湾製。
2x SuperRed PCRマスターミックスバイオツールTE-SR01台湾製
6cmペトリ皿アルファプラスサイエンティフィック16021台湾製
寒天バイオマン・サイエンティフィックAGR001.1微生物学グレード
アガロースバイオマン・サイエンティフィックPB1200台湾製
BioGreen Safe DNAゲルバッファーバイオマン・サイエンティフィックSDB001T台湾製
Easy DNA 高速抽出組織キットフィッシャー・バイオテックET-100https://www.fisherbiotec.com.au/wp-content/uploads/2021/11/FB-EDNA-DNA-Kits-flyer-11Nov21.pdf(オーストラリア製)
フォワードプライマー:LCO 1490ゲノミクス PO-PR220919G6シーケンス: 5'-GGT CAA CAA ATC ATA AAG ATA TTG G-3'
GenepHlow ゲル/PCR キットジェネエイドDFH300http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf
ガラス飼育コンテナ&NBSP;サンシャインラボ機器会社サイズ:高さ35mm、内径45mm。プラスチックまたはガラスカップの任意の類似サイズで再配置できます。
血球計算器ポール・マリエンフェルド640030ドイツ製
孵卵器ハイポイントF740台湾製
革製カッターリアルハンドメイドワークショップhttps://shopee.tw/jj891004?カテゴリ ID=100636&entryPoint=ShopByPDP&itemId=16023929406
MiniAmpサーマルサイクラーサーモフィッシャーサイエンティフィックA37834米国製
光学顕微鏡&nBSP;ニコン Ci-L日本製
絵筆Tian Chengブラシ会社4716608400352サイズ0または1の丸いブラシに相当する、先端の細い水彩ブラシに置き換えることができます。
ペーパータオル5月の花BLS007-8台湾製
パラフィルムMベミスPM-996米国製
ペレット乳棒バイオマン・サイエンティフィックGT100R型台湾製
リバースプライマー:HCO 2198ゲノミクス PO-PR220919G6シーケンス: 5'-TAA ACT TCA GGG TGA CCA AAA AAT CA-3'
サブローデキストロースブロスハイメディアMH033-500Gインド製
実体顕微鏡ソップトップSZN71台湾製
TAEバッファー50Xバイオマン・サイエンティフィックTAE501000台湾製
トゥイーン80パンリーク AppliChem142050.1661台湾製
ジッパーバッグウェンチェンプラスチックカンパニー1809000061サイズ:幅12cm、長さ17cm。(台湾製)

参考文献

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