Method Article

閉経後骨粗鬆症のラットモデルにおけるブプレウルスの骨保護的役割

DOI:

10.3791/68675

⸱

August 22nd, 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1YouJiang Medical University for Nationalities, 2Affiliated Hospital of YouJiang Medical University for Nationalities, 3ShenZhen International Travel Health Care Center (ShenZhen Customs Port Clinic)

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

本研究では、閉経後骨粗鬆症の卵巣摘出ラットモデルを用いて、ブプル(柴胡)経口液が炎症誘発性因子を抑制し、抗炎症因子を増強することで骨の微細構造を改善することを実証しました。これは、その抗炎症メカニズムがエストロゲン欠乏症誘発性骨粗鬆症を部分的に軽減することを示唆しています。

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

このプロトコルは、卵巣摘出 (OVX) ラットの閉経後骨粗鬆症に対するチャイフー投与の効果を調査することを目的としています。8週齢の雌スプレイグ・ドーリーラットは、閉経後骨粗鬆症モデルを確立するために背側アプローチを使用して両側卵巣摘出術を受けた。異なる用量の柴胡経口液剤を経口強制経口投与を12週間連続して投与し、続いて骨の微細構造を評価し、炎症性サイトカインレベルを測定しました。中用量および高用量のChai hu治療は、OVXラットの骨量減少を部分的に阻害し、炎症誘発性サイトカイン発現を低下させ、抗炎症性サイトカインレベルをアップレギュレートしました。骨破壊の重症度は低用量から高用量に有意に減少し、骨の微細構造再建において用量に関連した改善が観察されました。Chai hu は、エストロゲン欠乏症による骨量減少と微細構造の悪化を軽減し、それによってこの OVX モデルにおける OP の進行を抑制しました。これは、関与する経路の抗炎症効果に起因している可能性があります。

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

骨粗鬆症 (OP) は、骨量の減少、骨強度の低下、および骨の微細構造の破壊を特徴とする一般的な代謝性骨疾患です1。OP は原発性または続発性のいずれかとして現れる可能性があり、原発性 OP は閉経後 OP (PMOP)、老人性 OP、および特発性 OP (青年によく発生します) に分類されます。その中で、I 型 PMOP は主に PM 女性に発生し、エストロゲン2 の循環レベルの低下により閉経後の骨密度が著しく低下します。これは全身性代謝性骨疾患であり、破骨細胞活性の増加と激しい分化をもたらします3。さらに、骨吸収の強度はその形成よりもはるかに大きいため、骨量が減少し、骨の脆弱性と骨折のリスクが増加します4。

現在の研究では、変形性関節症や歯周炎などの多くの慢性炎症性疾患が重大な骨量減少と関連していることが判明しており、炎症が OP5 と密接に関連している可能性があることが示唆されています。PMの女性は年齢を重ねると、内分泌の変化に加え、生理機能や免疫機能が低下し、慢性炎症状態が長期間放置されます。これらの炎症促進因子や T 細胞由来のサイトカインの多くは、骨量減少に重要な役割を果たしています。したがって、PMOPは慢性炎症性疾患としても認識されています6,7。

伝統的な中国医学 (TCM) は、PMOP の予防と治療において長い歴史と豊富な臨床経験を持ち、ホリスティックな管理と個別化された診断と治療に重点を置き、内分泌系と免疫系を同時に調節できるため、閉経後の女性にとってはありがたいことです8。これにより、大部分の女性が治療を受けることができます。現代の薬理学的研究と臨床試験では、TCM にはマルチターゲット、低毒性、低副作用、安価という利点があることが示されています。PMOP9 の TCM 治療では、合併症のリスクを大幅に減らすことができます。

柴胡自体には抗炎症作用10 と抗うつ作用11があり、体内のホルモン分泌を調節し12 、健康を助けることができます13。柴胡は、感情を落ち着かせ、消化を促進し、胃や腸で吸収する効果のある中医学複合製剤である逍遥丸で主要な役割を果たす主成分です。また、気と血のエネルギーを補充し、月経周期の症状とそれに伴う不快感を調節することでも知られています14。チャイフーの主成分はチャイフーサポニンで、強力な抗炎症作用があり、主に腫瘍壊死因子α(TNF-α)、インターロイキン1β、IL-6などの炎症誘発性サイトカインの発現を阻害することに現れます15。さらに、抗炎症性サイトカインであるIL-10の発現を高め、それによって大腸炎、子宮内膜炎、16型肝炎などの炎症を緩和します。

標準的な OP 治療 (ビスフォスフォネート17、選択的エストロゲン受容体モジュレーター18、 およびデノスマブ19 の使用を含む) と比較して、Chai hu は一般的に使用される TCM として、多成分、多標的の作用機序という潜在的な利点があります。標準治療は通常、特定の骨代謝経路20 (破骨細胞活性の阻害) を標的としており、これは胃腸の不快感、顎の骨壊死のリスク増加、インフルエンザ様症状などの特定の副作用、および高額な長期薬剤費21 と関連している可能性があります。

関連文献のレビューにより、OPのPMラットに介入するためのChai huの使用が治療的緩和効果をもたらす可能性があることがわかりました22。したがって、バイオインフォマティクスと薬理学的分析、およびドッキング部位を予測するための分子ドッキングシミュレーションに基づいて23 、柴胡が炎症過程に介入し、体の免疫状態を調節し、骨の免疫恒常性を回復できるという仮説を立てました。これらは骨再建状態の安定性を促進し、OPを軽減するという望ましい治療効果を達成します。

この研究では、柴胡経口液 (濃度: 1 g/mL) を 12 週間連続して投与しました。投与計画は、TCM および薬物動態研究における臨床的に一般的な用量に基づいて設計されました24。

この投与方法の全体的な目標は、安定した臨床的に関連する投与プロトコルを確立し、それによって標的モデル (閉経後骨粗鬆症のラット モデル) における Chai hu の持続的な介入効果を体系的に評価することです。この投与アプローチにより、薬物が実験期間を通じて有効な血漿濃度を維持することが保証され、その後の評価 (骨代謝指標や炎症因子レベルなど) に信頼できる介入基礎が提供されます。さらに、関連疾患における柴胡の役割とその用量効果関係を明らかにするのに役立ち、実験研究における伝統的な漢方薬の標準化された投与の参照パラダイムを提供します。

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Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

動物を含むすべての実験手順は、実験動物のケアと使用に関するNIHガイド(第8版)に従って実施され、Youjiang Medical University for Nationalitiesの動物倫理委員会によって特別に承認されました(承認番号2024071001)。

1. ネットワーク薬理学の分析

注:サイバー薬理学は、システム生物学、計算生物学、薬理学を組み合わせたアプローチであり、生体分子ネットワークを解析することで薬物の作用機序と薬物間相互作用を理解することを目的としています25。

  1. Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP: http://ibts.hkbu.edu.hk/LSP/tcmsp.php) などのツールを使用して、経口バイオアベイラビリティ (OB) と薬剤類似性 (DL) が良好な活性化合物をスクリーニングします。OBを≥30%、DLを≥0.1826に設定します。Chai hu を検索して [Herb Details ] をクリックして、すべての化合物データをダウンロードします。ダウンロードしたファイルに Chaihu という名前を付けます。
  2. コア成分のMOL IDをTCMSPデータベースに貼り付けることで、コア成分のターゲット名を取得します。TCMSP バッチ検索に貼り付けて [ターゲット予測] を選択し、[送信] をクリックします。
  3. UniProtshデータベースを開き、ターゲット名列を検索にコピーして、貼り付けたターゲットタンパク質名とまったく同じ太字のタンパク質名を見つけます。対応するタンパク質名を見つけたら、その後の列に対応する遺伝子名を収集します。
  4. Relevance スコア ≥ 1 に従って GeneCards (https://www.genecards.org) データベース内の骨粗鬆症関連遺伝子をフィルタリングし、すべての (5741) 遺伝子27 を取得します。
    注:GeneCardsデータベースから関連性スコア≥1の遺伝子を選択する理由は次のとおりです。スコア≥1は、遺伝子が標的疾患との関連を文書化していることを示し、関連性が報告されていない遺伝子と明確に区別されます(スコア= 0)。この閾値は、無関係な遺伝子からの過度の干渉を回避しながら、信頼できる疾患関連性を持つ遺伝子の保持を保証します。より低い閾値(<1)には、検証された関連性のない遺伝子が含まれ、それによって偽陽性が増加する可能性があります。
  5. 疾患関連遺伝子セットと交差する薬物標的を組み合わせた後、交差する遺伝子を取得します。疾患標的と薬物有効成分の相互作用に基づいて、Cytoscape ソフトウェアを使用して伝統的な漢方薬-有効成分-標的-疾患交差ネットワークを構築します。
  6. Stringデータベース(https://cn.string-db.org/)を通じてタンパク質間相互作用(PPI)情報を取得し、PPIネットワークを構築します。Cytoscape(https://www.cytoscape.org)を開き、ダウンロードしたTSVファイルをアップロードネットワークに読み込み、[TOP10またはTOP20>計算]を選択し、[ 送信]をクリックします。
  7. Cytoscape にインポートするテーブルを 2 つ作成します。ネットワークという名前の電子スプレッドシートファイルを作成します。A列に、漢方薬の略語に置き換えられたのと同じMOL ID(CH1、CH2など)を入力します。列 B に MOL ID というラベルを付け、MOL ID の昇順で並べ替えます。列 C にシンボルとしてラベルを付けます。Chaihu関連ファイルから成分ID(MOL ID)と遺伝子名をそれぞれB列とC列にコピーします。次に、列 B を削除し、列 A の名前を MOL ID に変更します。
  8. 表をテキストの末尾まで拡張します。[記号]列に、漢方薬の略語に置き換えたMOL ID(CH1、CH2など)を入力します。MOL ID列に、伝統的な漢方薬の略語CHを入力します。上記の手順により、情報補足と漢方薬-コンポーネント-ターゲットネットワークの構築が完了します。
  9. 次に、2 番目のフォームである TYPE ファイルを実行します。新しいスプレッドシートを作成し、TYPEという名前を付けます。列 A を Term として、列 B を TYPE としてラベル付けします。遺伝子名を用語列にコピーし、タイプ列に遺伝子属性を指定します(目的は遺伝子を検索することであり、操作が簡単なようにすべての遺伝子名が選択されます)。[Term] 列に成分を入力し、成分に属性 drug1 を付けます。
  10. Cytoscapeソフトウェアにインポートします。ネットワークファイルをアップロードするにはネットワークをインポートし、タイプファイルをアップロードするにはテーブルをインポートします。検索ボックスに「gene」と入力し、 Enter キーを押してすべての遺伝子を選択し、選択した遺伝子を左に引いて、[ Layout] > Attribute() > [Selected ] をクリックします (括弧内の円形または正方形を選択)。
  11. ネットワーク薬理学分析の結果と実験データを組み合わせて、薬物作用の主要な化合物と分子メカニズムを特定します。

2. 分子ドッキング

注:分子ドッキングは、小分子(リガンド)と標的タンパク質または生体分子28との間の最適な結合モードおよび親和性を予測するための計算技術です。

  1. 受容体およびリガンドの調製
    1. 受容体(タンパク質)ソース:RCSBタンパク質データバンク(https://www.rcsb.org)から標的タンパク質のPDBファイルを取得します。3Q4B(IL-6受容体の例)を検索し、「PDB形式>ファイルをダウンロード」をクリックします。
    2. 編集 >削除 >水、無関係イオン、非必須配位子(金属イオンなどの重要な補因子を保持)をクリックして、結晶学的水分子を除去します 編集 > >ヘテロ原子を削除します。欠落している水素原子を追加するには、[ Edit > Hydrogens] > [Add] をクリックします。protein.pdbqtとして保存します。[ Edit > Charges] > Compute Gasteiger をクリックし、[Grid > Macromolecule] > >[Save as PDBQT] を選択します。
    3. リガンド(低分子)ソース:PubChem(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov)からリガンド構造をダウンロードします。サイコサポニンA(CID:6443568)を検索し、3Dコンフォーマー>SDFをダウンロードをクリックします。
    4. Open Babelソフトウェアを使用して、SDF形式のサイコサポニンAファイルを低エネルギーの3次元立体配座を持つPDB形式のファイルに変換し、サイコサポニンAと名付けます。
  2. ドッキング パラメータの設定(AutoDock ツール)
    1. 受容体ファイルとリガンドファイルをロードします。低分子ファイルサイコサポニンAをインポートし、PDBQTファイルとして保存します。続いて、受容体とリガンドをロードします:高 分子>ドッキング>開くをクリックし、 IL6_receptor.pdbqtを選択します。次に、 リガンド>ドッキング>開くをクリックし、saikosaponinA.pdbqtを選択します。
    2. グリッドボックスの設定: [ グリッド] > [グリッドボックス] をクリックし、アクティブなサイトを完全に囲むようにボックスサイズを調整し (左側のパネルのコントロールダイヤルを使用して微調整します)、ファイル > [現在の保存を閉じる ] をクリックして、ファイルに grid.gpf という名前を付けて、現在の設定を保存します。
    3. AutoGrid 実行プログラムをセットアップする: [AutoGrid の実行] をクリックし、grid.gpf ファイルを選択して、[ 起動] をクリックします。次に、ドッキングパラメータを設定します。順番に、[ドッキング]メニューで[ 高分子 ]をクリックし、タンパク質ファイル IL6_receptor.pdbqtを選択します。[ リガンド] をクリックし、低分子ファイルサイコサポニンA.pdbqtを選択します。遺伝的アルゴリズムを設定して確認します。ドッキングパラメータを調整して確認します。最後に、[出力] で Lamarckian (4,2) アルゴリズムを選択し、ファイルに dock.dpf という名前を付けて保存します。
    4. AutoGrid を実行して結果を保存する: AutoDock を実行をクリックし、dock.dpf ファイルを選択して、シミュレーションを開始します。完了したら、「 複合構造の書き込み」をクリックし、複合構造に名前を付けて、PDBQT 形式で保存します。
  3. PyMOLを使用した結果分析
    1. Open Babelソフトウェアを使用して、前の分子ドッキングステップから得られたPDBQT形式ファイルをPDB形式に変換します。次に、PDB 形式のファイルを PyMOL ソフトウェアにインポートして、後続の視覚化操作を行います。
    2. リガンドを見つけて個別に分離する: リガンドを選択したら、[ セレ ] をクリックし、[色から 色 ] を選択して色を変更します。「Sele」列で、「アクション」の下の「 オブジェクトの抽出 」をクリックして、リガンドを新しい独立したオブジェクトとして抽出します。
    3. 水素結合距離測定:sele列で、[ アクション]をクリックし、[極性接触]を見つけて、[ オブジェクト内の他の原子へ]をクリックします。水素結合は黄色の線で表示されます。ウィザード列 の測定オプション をクリックし、 水素結合の両端の原子 を順番にクリックし、 完了 をクリックして測定を完了します。
  4. 画像をエクスポートする: 「ファイルで 画像をPNGとしてエクスポート」 をクリックします。高解像度レンダリングが必要な場合は、ray 300 (ピクセル調整可能)と入力して Enter キーを押します。

3. マイクロCT解析

  1. 雌SDラット(32週齢、320〜350 g)にペントバルビタールナトリウム(40 mg / kg)を腹腔内に注射して深部麻酔を行い、角膜反射(綿棒に触れてもまばたきがない)および痛みの反射(鉗子を挟むために後肢が収縮しない)がないことによって確認されます。
    1. 後肢分離手術を行います。ラットを外科的麻酔薬用量(40 mg/kg)の3〜5倍の用量でペントバルビタールナトリウムを腹腔内注射して安楽死させ、仰臥位に置き、鼠径靭帯に沿って恥骨結合の上1cmに3cmの横切開を行います。細筋と縫工筋の間の隙間を鈍く解剖して、大腿動脈(拍動性尿細管構造)を露出させます。4-0縫合糸を使用して大腿動脈の両端を結紮し、その間に結紮されていない部分を残してから、眼科用ハサミで血管を切断して横断します。
    2. 下肢を内側に回転させて大腿骨頭を寛骨臼から脱臼させ、関節包と丸靱帯を切断して、大腿骨頭の完全性を維持します。無傷の後肢を予冷した生理食塩水に浸し、4%ホルムアルデヒド溶液に24〜48時間固定します。
  2. イメージングのセットアップ: マイクロ CT スキャンのために固定大腿骨を施設に届けます。Micro-CTデバイスの電源を入れ、 小動物骨スキャン プリセットプログラムを選択します。次のスキャンパラメータを使用します:X線電圧 = 90 kV、X線電流 = 80 μA、視野(FOV) = 36 mm、ピクセルサイズ = 72.0 μm、回転 = 360°、スキャン時間 = 14 分。
  3. 固定されたラットの左脚大腿骨をサンプルホルダーに入れ、写真を撮る大腿骨端を固定し、デバイスを起動し、マシンのセルフテストが完了するのを待ちます。プレビュースキャン(低解像度高速スキャン)を開始して、サンプルが中央に配置されていることを確認し、大腿骨全体を覆うように関心領域を調整します。
  4. スキャンと撮影が完了すると、X線光源は自動的にオフになります。このとき、機械内の放射線値は基準を超えており、保護具なしでサンプルを取り出すことは絶対に禁じられています。
  5. 画像解析:スキャナーの内蔵ソフトウェアを使用して、骨パラメータ(骨密度[BMD]、小柱帯数)を分析します。再構成された画像を保存してエクスポートし、さらに評価します。

4. ラット骨組織からのRNA抽出のための定量的リアルタイムPCR

  1. 右大腿骨から付着した筋肉と筋膜を取り除きます。100〜200mgの骨組織を細かく切ります。2〜3個の粉砕ビーズと500 μLのRNA抽出バッファーを加えます。ティッシュグラインダーを使用して、70 Hz、4°Cで5分間均質化します。
  2. 相分離: 遠心分離後、溶液は上部水相 (RNA を含む) と下部の暗色沈殿物 (タンパク質、DNA、および多糖類を含む) に分離されます。500 μLの上清を新しいRNaseフリーの1.5 mLチューブに慎重に移します。
  3. 単離から得られた上部溶液を、製造元の指示に従ってトータルRNA抽出のために処理します。
  4. 溶解液にイソプロパノールを加えた後、チューブをそっと反転させて溶液を混合し、室温で10分間放置します。この時点で目視チェックを実行します。白い凝集状RNA沈殿物(管壁に付着)が観察された場合、RNAが効果的に沈殿したことを示しています。
  5. 200 μLのピペットチップを使用して、残留液体を吸引します。白いRNAペレットをチューブの底/壁に保持します。RNAを50〜100 μLのRNaseフリー水に再懸濁し、-80°Cで保存します。
  6. 2 μLのRNAテンプレート、10 μLのマスターミックス、2 μLのDNase、および5 μLのヌクレアーゼフリー水をヌクレアーゼフリーチューブに混合します。ピペッティングで穏やかに混合します。
  7. 37°Cで2分間インキュベートして、ゲノムDNA汚染を除去します。55°Cで15分間インキュベートします。反応の最後に、85°Cで5分間インキュベートして反応を中止します。
  8. 逆転写されたDNAを氷上に置くことにより、リアルタイム蛍光定量PCRシステムを設定します。すべての成分を事前に混合します:10 μLのqPCR SYBR Green Master Mix(Roxなし)、フォワードプライマーとリバースプライマー各0.4 μL、および8.2 μLのRNaseフリー水を分割して添加し、氷上で操作し、光から保護します。
  9. qPCRプログラムを次のように実行します:95°Cで5分間、1サイクルの予備変性に続いて、95°Cで10秒間40サイクル変性します。アニーリング、伸長、蛍光取得を60°Cで30秒間、SYBRグリーンチャンネルで40サイクル実行します。65〜95°Cの温度の融解曲線を0.5°C増分/ステップおよび5秒/ステップで取得します。使用したプライマーを 表1に示します。

5.動物の準備

  1. 48匹の雌の未経産SDラット(SPFグレード、8週齢、体重200-220 g)を入手します。
  2. 実験手順の前に、すべてのラットをSPFグレードの隔離施設で7日間の検疫期間で順応させ、SPF制御された実験室環境(温度:22〜24°C、湿度:45%〜55%)に収容します。

6. 被験薬の調製

  1. 柴胡経口液剤(中国国家医薬品承認第Z41021539号)を取得します。この製剤には、有効成分として柴胡(北部ソース)が含まれており、香料、ショ糖、プロピレングリコールなどの賦形剤が含まれています。各10mLバイアルには、10gの粗ハーブに相当する抽出物が含まれています。

7. 卵巣摘出ラットモデルの作製

  1. 術前準備:ラットを12時間高速で水に 自由にアクセス します。すべての手術器具をオートクレーブ滅菌して器具滅菌を行います。
  2. 麻酔と準備:腹腔内注射(40 mg / kg)によってペントバルビタールナトリウムを投与します。角膜反射の欠如(綿棒で角膜に触れてもまばたきがない)とつま先ピンチ反射の欠如(クランプ時に後肢の収縮がない)を評価することにより、麻酔の深さをチェックします。15〜20分後、手術部位を剃り、ヨウ素で消毒し、有窓ドレープで覆います。動物の目の乾燥を防ぐために、手術中にビタミンA眼軟膏(15,000 IU / gを含む)を塗布します(表2)。
  3. 卵巣摘出ラットモデル:専用の無菌手術室で手術を行います。すべての職員は完全な隔離ガウンを着用していました。手術前にカウンタートップと周囲の機器を75%エタノール (表2) で拭き、紫外線ランプを少なくとも30分間オンにして、空気中や表面の微生物を除去します。
    1. 背側皮膚を1cm切開し、皮下組織を鈍く解剖し、筋肉層をつまんで1cm切開します。ファットパッドを見つけて外側に表示し、卵巣(色は真っ赤)を識別します。卵管を4-0縫合糸で結紮し、卵巣組織を切除し、4%パラホルムアルデヒドを含む50mL遠心分離管に入れます(表2)。
  4. 創傷の閉鎖と消毒:縫合する前にペニシリン粉末を傷口に振りかけます。6番非吸収性縫合糸で筋肉層を縫合し、2番縫合糸で皮膚を閉じます。閉じた切開部をヨウ素で消毒し、局所ペニシリン粉末を塗布します。
  5. 術後のケア: 体温を維持するために、温水筒とタオルを備えた新鮮なケージにネズミを置きます。腸閉塞を防ぐために、手術後24時間速食(水が許可された)動物。ペニシリンパウダーを切開部位に毎日3日間連続して塗布します。
    1. 手術切開部の周囲にリドカイン(1%〜2%濃度、最大5mg/kg)を注射して、術直後の痛みを軽減します。3〜5日間継続的な鎮痛を提供し、突然の中止を避けるために痛みの重症度に基づいて用量を徐々に減らします。.
    2. 舌の落下や気道閉塞を防ぐために、目覚める前に動物を横臥位または頭を下にして状態に保ちます。目覚めた後の自律的な快適なポジショニングを可能にします。戦闘や交差感染を避けるために、完全に回復するまで術後の動物を他の動物から隔離します(図1)。

8. 実験的グループ分けと薬物投与

  1. グループ割り当て:合計40匹のSDラットを5つのグループ(グループあたりn = 8)、すなわち、正常対照、モデル対照、低濃度チャイフー、中濃度チャイフー、および高濃度チャイフーに分けます。
  2. 中用量 (5 mL/kg) グループの場合、29,30 にあるガイドラインに基づいて投与量を選択します。低濃度グループ:2.5 mL/kg、中濃度グループ:5 mL/kg、高濃度グループ:10 mL/kgについては、1:2:4の濃度勾配比に従います。
  3. 薬の投与:経口強制口を使用し、1日1回薬を投与します。正常対照群とモデル対照群(両側卵巣摘出術を受けた動物)については、同量の生理食塩水で経口強制検口投与を行います。手術後1週目に治療を開始し、12週間継続します。

9. 実験後の分析とデータ収集

  1. 5つの動物群に対して以下の分析を行います:骨構造のマイクロCTとラット大腿組織における炎症性サイトカインmRNA発現の測定。
  2. 大腿骨小柱の微細構造の視覚化された画像を含むデータを収集します。定量的骨パラメータ(骨密度、骨体積分率、小柱帯の厚さ標準偏差、小柱帯間隔、小柱帯数、および接続密度を含む);大腿組織における炎症誘発性サイトカイン (IL-6、IL-17) および抗炎症性サイトカイン (IL-4、IL-10) の相対的な mRNA 発現レベル。
  3. GraphPad Prism 10.1.2ソフトウェアを使用して、一元配置分散分析(ANOVA)によるデータ分析を実行します。平均のグループ間差の統計的有意性は、p < 0.05 と定義されました。事後多重比較は、Tukeyの検定を使用して実行されました。

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Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

GO機能とKEGG経路濃縮分析

バイオインフォマティクスにおけるGOおよびKEGG濃縮分析を利用して、PMOPに対するChai Huの潜在的な作用機序を予測しました。疾患に対する柴胡の有効成分と交差する標的遺伝子のGO濃縮解析では、2138の有意なエントリが得られ、各グループで上位10の有意な結果がリストされています (図2D)。生物学的プロセス (図2A)に関しては、交差する遺伝子は主にリポ多糖類と活性酸素種へのフィードバックに関与していました。細胞成分セクション (図2B)では、交差する遺伝子は、主に細胞の分泌顆粒の内腔とコラーゲン含有細胞外マトリックスに関与していま...

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Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PMOP は、PM の女性によく発生する骨代謝の全身性障害であり、エストロゲンの不足によって引き起こされ、骨芽細胞と破骨細胞のバランスが崩れ、破骨細胞の骨吸収が促進され、骨芽細胞の骨産生が減少します31。体内の炎症因子のレベルも破骨細胞と骨芽細胞の分化に影響を与え、炎症誘発性因子の過剰発現が破骨細胞の分化に寄与することを示す研究が増えています32。同様に、抗炎症因子の過剰発現は破骨細胞の発現を阻害します33。これは、抗炎症主導のレジメンを使用して PMOP を治療することが実現可能である可能性があることを示しています。

漢方薬の柴胡は、炎症の治療、風邪やインフルエンザの予防、体内のホルモン分泌の調節、肝臓の保護のために臨床現場で広く使用されています34.ハーブ処方のチャイフーは、他の薬と組み合わせてPMOPの治療のために容易に...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

著者らは、利益相反はないと宣言している。

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この研究は、百色市科学研究および技術開発プログラムと、2025 年広西チワン族自治区大学若年および中年教師科学研究基礎能力向上プロジェクト (プロジェクト番号: 2025KY0549) の支援を受けました。著者らは、原稿の編集をしてくれたインペリアル・カレッジ・ロンドンのデヴ・スーラナ博士とYMUNに感謝します。ZYとLYRは、この作業に等しく貢献しました。

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.9%塩化ナトリウム注射 華仁製薬電話番号 h1712059
1×PBS サーモフィッシャー10010023
75%アルコール 南京試薬C069156931
95%エタノール 南京試薬C0691520075
無水エタノールマックリンE809056
Bupleurum chinense 河南百泉薬局株式会社Z41021539
脱灰液&NBSP;ソーラービオE1171
エリスロマイシン軟膏 広州白雲山製薬グループ株式会社株式会社白雲山河吉公製薬工場H44023088
イソプロピルアルコール 済南金日和化学有限公司23727-29-9
ペニシリンVカリウムカプセル四川製薬H20103156
ポリホルムアルデヒド(CH2O)nビヨタイムP0099
ポビドンヨード消毒剤&NBSP;広東恒建製薬有限公司H44023924
リアルタイム蛍光PCRキットYeasen Biotechnology11201ES03
RNA抽出キットモナドバイオテックMI20201S
RNA逆転写キットYuGongバイオテックEG15123S
ペントバルビタールナトリウム 上海吉祥バイオテクノロジー株式会社JX082085
トリゾール サーモフィッシャー〒15596026CN

References

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