領域特異的腸管とのリンパ伝達の選択的障害のためのマウス腸系膜リンパ節摘出術

サマリー

このプロトコルは、腸系膜リンパ節鎖上の4つのステーションそれぞれで安全かつ良好に耐容性のあるマウスの腸系膜リンパ腺摘出術の生存手順を記述しています。この手術は、遠位大腸、近位大腸、および/または小腸とのリンパ伝達の選択的障害を可能にするよう適応可能です。

要約

免疫監視と抗原耐性のバランスは腸内微小環境内で微妙なバランスであり、その間、局所リンパ節内で循環するT細胞プライミングの重要な役割がよく知られています。T細胞プライミングに続き、最近の文献では、臓器の排水リンパ節に存在する非循環T細胞が独自の冗長性でない役割を示すことが示され始めています。特に腸ではリンパ排尿が非常に特異的であることが知られています。しかし、これらの局所細胞が全身機能冗長性とどのように異なる独自の影響を真に理解するためには、科学界はこれらのリンパ節を分離し選択的に摂動させる明確な手順を必要としています。ここでは、腸間膜リンパ節鎖の4つのステーションそれぞれで安全かつ耐容性のあるマウス腸系膜リンパ節摘出術の生存手技を説明します。この手術は、遠位大腸、近位大腸、および/または小腸とのリンパ伝達の選択的障害を可能にするよう適応可能です。詳細な説明書、視覚的な補助、成功率向上のための役立つヒント、そして最適でない生存のためのトラブルシューティングが含まれています。切除されたリンパ節は、必要に応じてすぐに下流処理に備えられます。この技術は、遠位結腸、近位結腸、および/または小腸からのリンパ排流の選択的遮断を必要とする研究に最適です。

概要

T細胞は適応免疫における主要な効果細胞タイプの一つであり、感染、自己免疫、悪性腫瘍など多様な疾患カテゴリーで役割が説明^{されています。}T細胞の機能にとって重要なステップは、局所リンパ節などの二次リンパ器官内の抗原提示細胞による三相プライミング^です。現代医学において、複数の臓器系にわたる適切な腫瘍学的切除の基本手段として、局所サンプリングやエンブロックリンパ節切除(5,6,7,8)が含まれます。例えば、大腸がんでは、長期生存率の向上と明確な相関があるため、12個のリンパ節を摘出し、治癒目的の切除で検査することが合意ガイドラインに推奨されています。^6,7。しかし、局所リンパ節は本当に無罪放免で摘出できるのでしょうか?マウスを対象とした最近の研究では、腫瘍排出リンパ節に抗腫瘍T細胞前駆体のリザーバーが存在し、腫瘍^微小環境9,10,11で起こる末端分化やT細胞の枯渇から保護されていることが示されています。これは、これほど重要な集団を排除することが、現在の免疫監視能力を低下させる可能性を示唆しています。

マウスの腸リンパ管排出パターンは腸系膜リンパ節鎖に沿ってかなり特化していることが知られています。例えば、近位結腸はほぼ完全に第1リンパ節ステーション、小腸は第2・第3リンパ節ステーション、遠位結腸は主に第4リンパ節ステーション¹²によって排出されます(図1、補足図1)。したがって、腸のセグメントとリンパ管間の直接的なコミュニケーションは、これらの結節の標的焼灼によって妨げられることがあります。リンパ節と組織間の輸送を阻害するために、FTY720のようなS1P受容体作動薬やインテグリン阻害剤が一般的に用いられます。しかし、これらの薬剤は広範に密輸を抑制するため、特定のリンパ節の寄与を調べることはできません(^13,14)。しかし、腸リンパ節内の免疫相互作用の局所的な影響を科学界が研究する能力は、各ステーションごとに明確に説明された外科的切除法が存在しないため制限されています。このギャップを踏まえ、各リンパ節站でのマウス腸系膜リンパ節摘出術の生存手技が開発され、以下で説明します。この手術の全体的な目的は、高い術後生存率と寛容性を持つマウスにおいて、腸系膜リンパ節の安全かつ信頼性の高い切除を達成することです。

この手法は試験されており、複数の株(例:Balb/c、C57BL/6J、129S4)の幼体および成マウスで容易に実施されていますが、アクセスしやすく容易に識別できるリンパ節の必要性により制限があります。したがって、通常より小さいまたは認識しにくいリンパ節を持つマウスモデルや遺伝子型(例:リンフォトシンα欠損マウス)と組み合わせるには適さない可能性があります¹⁵。さらに、高齢マウス(>15週齢)は内臓脂肪が多く、リンパ節の特定や隔離が困難になる傾向があります。これは禁忌ではありませんが、成功や処置の制限となることがあります。これらの制限に加え、腸系膜リンパ節摘出術はリンパ節の高度に制御され選択的な撹乱を提供します。この処置は、リンパ節およびそれに伴う常駐免疫細胞や相互作用が腸の各区画(例:近位結腸、遠位結腸、小腸)に与える局所的な影響に関する疑問を解明するのに最適です。

図1:腸系膜リンパ節連鎖の部位の解剖学的ランドマーク 。(A) 標識なし、および (B) 4つの主要な腸系膜リンパ節の標識図図。近位結腸の排液は主にステーション1を経由し、小腸は主にステーション2/3、遠位結腸は主にステーション4を経由します。(DC=遠位結腸、ICV=回腸結腸、PC=近位結腸、CEC=盲腸、IV/JV=回腸血管/空腸血管、SI=小腸)スケールバー:1.5cm。このフィギュアの拡大版はこちらをクリックしてください。

プロトコル

すべての処置はイェール大学の施設動物ケア・使用委員会のプロトコルに準拠して実施されます。この手法の開発には、8〜12週齢のC57BL/6株、野生型マウス、年齢・性別・遺伝子型に適合した偽対照群が用いられました。オスとメスのマウスの両方が含まれていました。体重は18〜25gの範囲でした。試薬および使用機器は 材料表に記載されています。

1. 器具、動物、手術室の準備

1. すべての手術器具を滅菌しろ。手術面と麻酔鼻のコーンは70%エタノールで洗浄されていることを確認してください。
2. 吸入式麻酔用ヴェポライザー装置に鼻のコーンと吸引装置を設置し、過剰な麻酔薬の吸収を防いでいます。動物の体温と備蓄を便利で無菌の場所に設置し、温水循環パッドを備えた作業台を設置しましょう。
   注:この手順には手術顕微鏡は必要ありません。しかし、視覚化を改善するためにこのツールを含めることも検討してください。
3. 吸入麻酔用ヴェポライザー装置から鼻から2L/minの酸素流量で2%-3%の吸入イソフルランを投与することで麻酔を誘発します(機関承認プロトコルに従い)。
   1. 呼吸数が約30〜40回/分で、後足のつねりに反応がないことを確認することで、適切な麻酔の平面を確保しましょう。適切な麻酔面を定期的に再確認し、イソフルランの流量を調整してください。
      注意:あるいは、注射麻酔薬も適切です。
4. 適切な鎮痛および局所麻酔については、所属機関のガイドラインに従ってください。例えば、3.25 mg/kgのブプレノルフィンXRのような長時間作用型鎮痛剤を皮下投与し、計画された切開部で最大0.04 mL/5gの1mg/mLリドカイン溶液を皮下投与します。
5. 動物を仰向けにし、目の潤滑剤を塗り、腹部の毛を抜いたり切り抜き、腹部をポビドン/ヨウ素溶液で滅菌し、その後70%エタノールを投与します(図2A)。
6. 滅菌手袋を使い、手術室に通じる窓を開けて動物に滅菌のカーテンを貼りましょう。処置中は無菌性を保ちましょう。

図2:腸系膜リンパ節摘出術における主要な手技ステップの代表画像。(A) 腹部の窓を抜き滅菌した。(B) 皮膚と白線に0.5cmの切開。(C)回腸を右、近位結腸を左、盲腸下を位置付けることによる腸間膜リンパ節鎖の露出。第一の腸間膜リンパ節は回腸結腸動脈(白い矢印)に沿って位置しています。(D)腸間膜リンパ節の切除(色くなっている)。スケールバー:0.5 cm(E)体 外 腸系膜リンパ節(白い矢印;2.5 mm x 3 mm)。ティック数=1 mm。 この図の拡大版はこちらをクリックしてください。

2. 腸系膜リンパ節摘出術の準備

1. 皮膚に0.5〜1cmの中央線切開を入れます。腹壁から皮膚を鈍く剥離し、白線(linea alba)を特定します。白線に0.5〜1cmの切開を入れて腹膜腔にアクセスします(図4B)。
   注:ステーション2/3/4のノードへのアクセスを改善するために、切開頭状骨を延長することを検討してください。ただし軟骨楔突起を超えないようにしてください。
2. 鈍い先端のガベージ針 で 腹腔内に体温対応の無菌生理食塩水1mLを注入し、腸の位置調整の準備として滅菌カーテンを湿らせます。無菌で湿らせた綿先の綿棒を使って、切開部から盲腸を特定・内臓切除します。
   1. 鋭利な器具で腸を扱うのは避けてください。怪我の原因になる可能性があります。乾燥を防ぐために、定期的にカーテンや腸を湿らせ直してください。
      注:マウスセクムは一般的に腹部の左下象限に生息しますが、どの象限にも収容可能です。
3. 切除対象となる腸系膜リンパ節の位置を明確にし、以下の具体的な指示(3.1-3.4)に従ってください。解剖学的ランドマークと同定については 図1A、B を参照してください。

3. 腸系膜リンパ節の解離および切除

1. 第一リンパ節ステーション(近位結腸排液;補足図1A、B)。
   1. 外側に出した腸を湿ったカーテンに合わせ、盲骨は下側、近位結腸は上方、末端回腸は外科医の右側(動物の左側)に向かって配置します。 図1A、 図2C)。
   2. 腸系膜リンパ節鎖を特定してください。これは大腸に沿って縦方向に走っています。角度のある細かい鉗子を使い、閉鎖鉗子を閉鎖鉗子をこれらの構造間の隙間に置き、鉗子を優しく開かせて、回結腸血管から離れた最初のリンパ節を鈍く切り離します。
      1. 鉗子を取り外し、この動作を2〜3回繰り返し、安全な切除に十分な平面ができるまで繰り返します。主要な大腸血管の損傷を避けてください(図3A,B)。
         注意:大量出血が見られた場合は、処置を中止し、動物を人道的に安楽死させてください(機関で承認されたプロトコルに従い)。
   3. オプション:近傍リンパ節への側副経過のリスクを理論的に低減するため、9-0黒モノフィラメントナイロン縫合糸と細かい鉗子を用いて、リンパ節鎖に沿った単一切断縫合(遠位1mm、近位1mm)を用いて、9-0黒モノフィラメントナイロン縫合糸と細かい鉗子を用いて針を押し込むオプションの縫合結紮を行う(図3C,D)。
   4. 結紮された尾リンパ管を優しく引き戻し、細かいはさみで頭から尾にかけて標的リンパ節を切除します(図3E)。
      注:多くの場合、マウスは回腸結腸動脈からリンパ節の後方側に小さなながらも見える摂食管を持っています。この血管からの出血は、綿先端の綿棒で優しく圧迫することで止血を達成できます。

図3:腸系膜リンパ節摘出術(第一段階)からの注釈付き静止画と解説。 (A) 腸の正しい向きが第一の腸系膜リンパ節ステーション(白い矢印)を露出させること。(B) 回腸結腸動脈(ブルーアロー)と結節の間に平面が作られます。(C) リンパ節の頂点に入る給尿血管の縫合結紮(青い矢印)は、回腸結腸血管を排除し、これらの構造間の空間から出て行う(白い矢印)。(D) 回腸結腸動脈の遠位枝を注意し避けつつ、リンパ節基底の縫合結紮を行う。(E) リンパ節は以前に形成された組織面に沿って切除され、リンパ節に向かって高い位置に保たれ、縫合結紮(黒い矢印)が残されます。(F) 止血が確認され、回腸結腸動脈の遠位枝が適切な血流を確保し、かつて結節が存在していた空洞(フェードアウトされた矢印)に残留リンパ節がないことが確認されます。スケールバー:0.5cm。この図の拡大版はこちらをクリックしてください。

2. 第2リンパ節ステーション(中遠位小腸排液)
   1. 小腸も優しく内臓を切り取ってください。外側に出した腸を湿ったカーテンに合わせ、盲腸は下部、近位結腸は上位、小腸は外科医の右側(動物の左側)に向かって配置します。 図1A)。
   2. 腸系膜リンパ節鎖を特定してください。これは大腸に沿って縦方向に走っています。2番目のステーションは回腸血管と空腸血管の合流点から始まります(図1B)。
      1. 角度のある細い鉗子を使い、閉鎖された鉗子をこれらの構造間の空間に置き、鉗子を優しく開かせて、大腸血管から離れた第二リンパ節の位置を鈍く切り離します。
      2. 鉗子を取り外し、この動作を2〜3回繰り返し、安全な切除に十分な平面ができるまで繰り返します。主要な大腸血管の損傷を避けてください。また、回腸血管と空腸血管にも特に注意してください。怪我をすると非常に危険です。
         注意:大量出血が見られた場合は処置を中止し、動物を人道的に安楽死させてください。
   3. オプション:近隣リンパ節への側副経過のリスクを理論的に低減するため、リンパ節鎖に沿った単一切断縫合(1 mmずつ遠位1mm、2リンパ節近位1 mm)を用いて、9-0黒モノフィラメントナイロン縫合糸と細かい鉗子を用いて針を駆動するオプションの縫合結紮を行う(補足図2A)。
   4. 結紮したリンパ管の尾を優しく引き戻し、細い先端のハサミを使って標的リンパ節の位置を頭から尾部まで切除します(補足図2B)。
      注:多くの場合、マウスは回腸結腸動脈からリンパ節の後方側に小さなながらも見える摂食管を持っています。この血管からの出血は、綿先端の綿棒で優しく圧迫することで止血を達成できます。
3. 第2および第3リンパ節站(近中遠位小腸排液; 補足図1C,D'
   1. 小腸全体を後部結びつく(トライツ靭帯)まで優しく内臓を切り開きます。外側に出した腸を湿ったカーテンに合わせ、盲腸は下部、近位結腸は上位、小腸は外科医の右側(動物の左側)に向かって配置します。 図1A)。
   2. 腸系膜リンパ節鎖を特定してください。これは大腸に沿って縦方向に走っています。2番目のステーションは回腸血管と空腸血管の合流点から始まります(図1B)。
      1. 角度のある細かい鉗子を使い、閉鎖鉗子をこれらの構造間の空間に置き、鉗子を優しく開かせて、結腸血管から離れた第2および第3リンパ節の位置を鈍く剥離します。
      2. 鉗子を取り外し、この動作を2〜3回繰り返し、安全な切除に十分な平面ができるまで繰り返します。主要な大腸血管の損傷を避けてください。また、回腸血管と空腸血管にも特に注意してください。怪我をすると非常に危険です。
         注意:大量出血が見られた場合は処置を中止し、動物を人道的に安楽死させてください。
   3. オプション:近傍リンパ節への側副動脈の理論的リスクを減らすために、リンパ節鎖に沿った単一の中断縫合(通常1 mmの遠位、1 mmの外側、1 mmの近位に1 mm)を用いて、9-0黒モノフィラメントナイロン縫合と細かい鉗子を用いて針を駆動する(補足図3B、C)。
      1. 回腸・空腸血管束のすぐ表層にある求心性リンパ路に注目してください(補足図3B)。縫合結紮はリンパ管の深部まで、また浅い位置から主要な血管構造にかけて進むように注意してください。回腸・空腸の血管束を損傷すると有害になるためです。
   4. 結紮されたリンパ管を優しく引き戻し、細かいまたは超細細のポイントハサミを使って尾から頭側にかけて標的リンパ節を切除します。
      注意:進める前に、小腸がピンク色で十分に灌流されていることを確認してください。回腸・空腸血管の偶発的な結紮は虚血性小腸を引き起こします。
4. 第4リンパ節ステーション(遠位結腸排液;補足図1E,F')
   1. 小腸全体を後部結びつく(トライツ靭帯)まで優しく内臓を切り開きます。外側に出した腸を湿ったカーテンに合わせ、盲腸は下部、近位結腸は上位、小腸は外科医の右側(動物の左側)に向かって配置します。 図1A)。
   2. 腸系膜リンパ節鎖を特定してください。これは大腸に沿って縦方向に走っています。第4站は遠位結腸のすぐ内側、第3站の外側に位置しています(図1B、 図4A)。
      1. 角度のある細かい鉗子や超細先端のハサミを使い、閉まった鉗子/ハサミをこれらの構造間の隙間に置き、優しく開くようにして、第四リンパ節の部位を結腸血管や周囲の脂肪から鈍く切り離します。
      2. 鉗子やハサミを外し、この動作を2〜3回繰り返し、安全な切除に適した平面ができるまで繰り返します。主要な大腸血管の損傷を避けてください。
         注意:大量出血が見られた場合は処置を中止し、動物を人道的に安楽死させてください。
   3. オプション:近隣リンパ節への側副線のリスクを理論的に低減するため、各特定可能なリンパ節(通常はリンパ節から1mm離れた)に9-0黒モノフィラメントナイロンと細かい鉗子を用いて、1回の中断縫合を施すオプションの縫合結紮を行う(図4B - D)。
   4. 結紮されたリンパ管を頭部から優しく引き戻し、超細粒のハサミを使って尾から頭まで標的リンパ節を切除します(図4D,E)。

図4:注釈付き静止画と腸系膜リンパ節摘出術(第4局)からの解説。 (A) 腸の向きが正しいと、第4腸系リンパ節(白い矢印)が遠位結腸の内側、第3のリンパ節の外側に露出します。(B,C)リンパ節の鈍的解離後、各特定できるリンパ節の栄養管(青い矢印)を含め、縫合結紮(黒い矢印)を施行します。(D) リンパ節は以前に作られた組織面に沿って切除され、リンパ節に向かって高い位置に保ち、縫合結紮(黒い矢印)を残します。(E) 結節の切除(白い矢印)後、止血が確認され、縫合結紮(黒い矢印)が確認され、かつて結節があった空洞(薄い矢印)は残留リンパ節がないことが確認されます。スケールバー:0.2cm。この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。

4. 腸系膜リンパ節摘出術の完了

1. 回腸結腸血管、回腸血管、空腸血管の遠位枝を観察し、血流が正常であることを確認しましょう。十分に灌流された腸は明るくピンク色で、脈動が目に見えます。
   1. 綿先端の綿棒を使って腹部内容物を腹膜腔に戻します。戻る前に腸の綿片、綿、布、縫合糸を取り除くことに注意してください。これにより追加の外科的炎症を引き起こす可能性があります。
   2. 腸が間膜にねじれていないか確認するために、腸が明るい/ピンク色(灌流済み)であり、鈍い灰色や紫色(虚血性)ではないことを確認してください。
2. 閉鎖直前に腹部に体温対応の無菌生理食塩水1mLを注入し、意識のない体液の損失や蒸発を補う。腹部を2層(腹壁と皮膚)で6-0モノフィラメントポリプロピレン縫合糸で走るように閉じます。
3. 傷口に滅菌手術用接着剤を塗りましょう。
   注意:または、皮膚の閉じには中断縫合や創傷クリップを使用することもあります。

5. 術後ケア

1. 動物を清潔なケージに移し、半分は温水の循環パッドがあり、食べ物や水は自由に使えます。
2. 動物が麻酔から回復するまで待ち、苦痛の兆候を注意深く観察してください。適切な行動(呼吸数の増加、自己起立、歩行、グルーミングなど)で麻酔から迅速に回復しない場合は、人道的に安楽死させてください。
3. すべての動物が麻酔から回復したら、ケージを動物ケア施設に戻し、水、餌、寝具、リッチング用品を 自由に提供してください。
4. 術後12時間ごとに3日間、痛みや苦痛の兆候(前かがみ姿勢、活動減少、関与の低下、グルーミングの不振)を評価します。苦痛の兆候を示すマウスは人道的に安楽死させてください。
5. 永久縫合糸(6-0モノフィラメントポリプロピレンなど)を使用する場合は、術後10日目に切開部を確認し、残留した縫合材を除去してください。

6. リンパ節の管理

1. 直ちに、切除組織を500μLリン酸塩緩衝生食塩水(PBS)を入れた1.5mLのマイクロ遠心分離管に入れて浮力試験を行います。PBSの組織沈下を観察し、誤って切除された脂肪を観察してリンパ節切除を確認し、浮遊します(図5A)。
   注意:切除されたリンパ節ステーションは直ちに下流処理に入ります。
2. 生細胞技術では、切除したリンパ節ステーションを細胞培養培地(例:DMEM、RPMI)またはPBSを氷上に置きます。計画的な組織学では、切除したリンパ節ステーションを固定剤(例:中性緩衝ホルマリン10%、パラホルムアルデヒド4%)に置きます。

結果

この手術の正確性を確認するため、4〜6週齢の年齢・性別・遺伝子型が一致したC57BL/6J株の兄弟11頭に対して腸間膜リンパ節摘出術を実施しました。操作時間はマウス1匹あたり5〜15分の範囲でした。すべてのマウスは手術に良好に耐え、周術期生存率は100%でした。切除したサンプルはPBSに氷置きされました。すべてのサンプルは即座に沈み、低脂肪濃度が確認されました。切除されたサンプル(および4つの別々の内臓脂肪対照群)は100μmの細胞ストレーナーで粉砕し、PBSで洗浄されました。細胞懸濁液は450 x g で4°Cで5分間遠心分離し、その後100 μL PBSで氷上で60分間染色し、以下の抗体/濃度で染色しました:FITC結合抗マウスCD45.2(104)、マウスモノクローナル抗体(1:100; 5 μg/mL)、および生存可能性のためのDAPI(1:100; 15 μg/mL)。細胞はPBSで洗浄され、450 x g で4°Cで5分間遠心分離し、1%パラホルマルデヒドに氷の上で20分間固定しました。細胞は最後にPBSで洗浄され、450...

ディスカッション

ここでは、安全かつ耐容性の高いマウス腸系膜リンパ節摘出術の生存手技として、4つのリンパ節各ステーションで実施します。この手技の主な制約は、曝露と腸系膜に沿ったリンパ節の進行との間に間接的な関係があることです。最初のリンパ節ステーションは、全体が容易かつ容易に露出します。第2リンパ節ステーションはしばしば見え、第^2リンパ 節から第^4リンパ 節への曝露は皮膚/腹壁切開の頭側を延長することで改善できます。しかし、遠位結腸の後方付着部のため、この切開からは深部構造への損傷を避けてアクセスできる(最遠端結腸や直腸)が限られています。

もう一つの重要な制限は、偽求心性および/または側副リンパ管の形成です。膝窩リンパ盆地では、側支リンパ管が手術切除後2〜7日で発達し始め、2〜3週間以内に機能的な収縮を得ることが示されています^16,17。腸間膜リンパ節盆地がこの早期機能的...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
麻酔回路	どんな人でも		あるいは注射麻酔
BD LSRIIフローサイトメーター(または同等品)	BDバイオサイエンス		FACS Divaソフトウェア(フローサイトメトリー用)を搭載し、nbsp;
ブプレノルフィンXR	どんな人でも		鎮痛のために
細胞培養培地および	どんな人でも		(生細胞技術の場合、すなわちDMEMまたはRPMI)
ダピ	バイオレジェンド	422801	作動濃度:15 ug/mL
エタノール(水中で70%)	どんな人でも		掃除用
FITC共役抗マウスCD45.2(104)	バイオレジェンド	109806	作動濃度:5 ug/mL
鉗子:角度のある細かい鉗子	ロボズ	RS-5058	素材:デュモクセル;パターン#5、45度角;先端サイズ 0.1 X 0.06mm
鉗子:細かい先端の鉗子	ロボズ	RS-4960	素材:デュモスター;パターン#1;先端サイズ:0.20 × 0.12mm
鉗子:細かい先端の鉗子	ロボズ	RS-4966	素材:Dumostar、Biologieのヒント;パターン#3;先端サイズ:0.08 x 0.04mm
リドカイン	どんな人でも		鎮痛のために
金属ガベージ針	どんな人でも		20/22ゲージの再利用可能な直線口口用ガベージ針、ステンレス製です。
ニードルドライバー	ロボズ	RS-6410	カストロビエホの針ホルダー;まっすぐ
OPTIONAL:   デュアル/ツインのグースネック顕微鏡LEDライト	どんな人でも
OPTIONAL: エバンスブルーダイ	シグマ	E2129-10G	任意のリンパトレーシングのために。
オプション: 操作顕微鏡	ライカ	MZ9.5	ライカ Mz9.5 ステレオヘッド操作顕微鏡
リン酸緩衝生理食塩水(PBS)	どんな人でも
ポビドン/ヨウ素溶液	どんな人でも		皮膚の準備や滅菌のために
ハサミ:先端が細かいはさみ	ロボズ	RS-5605	マクファーソン・ヴァナス;3mmの切断刃;曲面型(ステーション3/4ノード用)
ハサミ:細い先端のハサミ	ロボズ	RS-5650SC	シュアカット・カストロビエホ・ハサミ(ステーション1/2/3ノード用)
ハサミ:中くそくはさみ	ロボズ	RS-5676	ノイズ;13mmの切断刃;まっすぐだ
サージカルグルー	どんな人でも		3M Vetbond組織接着剤
縫合線:6-0ブルーモノフィラメントポリプロピレネックス	どんな人でも
縫合糸:9-0 黒一繊維ナイロン縫合糸	どんな人でも		(任意)少し大きい8-0も使えますサイズの縫合糸。
組織固定剤	どんな人でも		(計画組織学の場合、例えば中性バッファリングホルマリン10%またはパラホルムアルデヒド4%)
温水循環式ヒーターパッド	どんな人でも