方法論記事

肺がんにおけるシスプラチン耐性を抑制するためのβ-エレメンを介したLINC00511調節のメカニズムの調査

DOI：

10.3791/68825

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2025年8月19日

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1School of Pharmacy, Changchun University of Traditional Chinese Medicine, 2Health Care Department, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Teaching Department, The Third Affiliated Clinical Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 4The Research Center of The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 5Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine, 6Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine

この記事について

サマリー

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

シスプラチン (DDP) 耐性は、肺がんにおける化学療法の有効性を制限します。この研究は、β-エレメン(β-Ele)がLINC00511をダウンレギュレートすることによってA549/DDP細胞の耐性をどのように逆転させるかを解明することを目的としていました。 in vitro および RNA-seq 分析では、この調節が好気性解糖と Wnt/β-カテニン シグナル伝達を阻害し、化学療法抵抗性を克服するための潜在的な戦略を提供することが示されました。

要約

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

シスプラチン耐性は非小細胞肺がんにおける化学療法の有効性を大幅に制限するため、この障壁を克服するための新しい戦略の開発が必要です。この in vitro 研究は、β-Ele が LINC00511 媒介解糖系および Wnt/β-カテニンシグナル伝達経路 を介して 肺腺癌細胞のシスプラチン耐性を逆転させるメカニズムを解明することを目的としていました。シスプラチン耐性ヒト肺腺癌細胞株(A549/DDP)は、プラスミドトランスフェクションによって過剰発現またはノックダウンのいずれかLINC00511確立されました。トランスフェクション効率は、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(qRT-PCR)を使用して評価され、LINC00511発現レベルが検出されました。5-エチニル-2'-デオキシウリジン(EdU)アッセイ による 評価では、A549/DDP細胞増殖の有意なβ-エレ媒介阻害が示されました。さらなるRNA-seq解析により、シスプラチン耐性に対するβ-エレメンの阻害効果は、細胞解糖の干渉およびWnt/β-カテニンシグナル伝達経路の活性化の抑制と密接に関連していることが明らかになりました。グルコーストランスポーター1(GLUT1)、ピルビン酸キナーゼM2(PKM2)、乳酸デヒドロゲナーゼA(LDHA)、β-カテニン、グリコーゲンシンターゼキナーゼ3β(GSK-3β)などの主要タンパク質のウェスタンブロット分析により、β-エレメンが好気性解糖を阻害し、LINC00511のダウンレギュレーションを通じてWnt/β-カテニンシグナル伝達経路の活性化をブロックすることにより、シスプラチン耐性を逆転させることが示されました。まとめると、これらの結果は、β-エレメンがLINC00511およびそれに関連する好気性解糖/Wnt/β-カテニン経路を標的とすることにより、肺がんのシスプラチン耐性を克服することを示しています。これにより、将来の前臨床および臨床研究のための理論的枠組みが確立され、潜在的な治療標的が明らかになります。

概要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

世界中の悪性腫瘍の中で、肺がんは非常に高い発生率と致死率を示し、気管支上皮細胞の悪性形質転換と浸潤性増殖を特徴とします 1,2。組織病理学的特徴に基づいて、肺がんは非小細胞がん (NSCLC) または小細胞がん (SCLC) のいずれかに分類されます3。NSCLC が肺がん症例全体の約 85% を占めていることは言及する価値があります 4,5。NSCLC の第一選択化学療法標準として、シスプラチン (DDP) は臨床的に不可欠です6.しかし、臨床観察により、腫瘍細胞は、主に免疫逃避経路の活性化、薬物標的遺伝子の変異、薬物代謝経路の調節不全など、複数のメカニズムを介して薬剤耐性を発症する可能性があることが明らかになりました 7,8,9。

長いノンコーディングRNA(lncRNA)は、タンパク質コード能力を欠く200ヌクレオチド(nt)>転写産物を表します10。蓄積された証拠は、lncRNAがmiRNAをスポンジ化し、その標的遺伝子を放出する競合する内因性RNA(ceRNA)として機能する11、アポトーシスシグナル伝達経路の調節12、DNA損傷修復への関与13、細胞オートファジーの調節など、複数のメカニズムを通じて腫瘍細胞のシスプラチン耐性を逆転させることができることを示しています14.さらに、腫瘍代謝リプログラミングに関する研究の進歩に伴い、lncRNA がこのプロセスにおいて重要な調節役割を果たしていることを示す実質的な証拠が明らかになりました。好気性解糖系を示すWarburg効果は、悪性細胞の基本的な代謝特性を構成します15。急速な細胞増殖のためのエネルギーを供給するだけでなく、生合成の前駆体として機能する中間代謝産物を生成し、悪性腫瘍増殖の要求を満たすタンパク質と脂質の合成をサポートします16。肺がんでは、lncRNAが好気性解糖経路を調節することにより、腫瘍の進行と化学療法抵抗性に有意な影響を与えることが確認されています17,18。

このうち、近年広く研究されているlncRNA分子であるLINC00511は、さまざまな悪性腫瘍の発生と発生と密接に関連していることが報告されています19。これらの発見は、腫瘍代謝リプログラミングにおける lncRNA の関与の特定のメカニズムを解明するだけでなく、lncRNA を標的とした腫瘍治療戦略の理論的根拠を提供し、潜在的な治療の道を切り開きます。

Curcuma zedoaria の根茎に由来する β-Ele は、抗腫瘍効果が確立された生理活性セスキテルペノイドです。私たちの以前の研究では、β-Ele が PI3K/Akt/mTOR シグナル伝達経路の選択的阻害剤として機能し、腫瘍代謝を標的とすることによりシスプラチンとの相乗効果を生み出すことが実証されています。NSCLCマウス異種移植モデル20における腫瘍増殖を有意に抑制した。その後の研究では、miR-301a-3p/AMPKαシグナル伝達軸の調節 を介して NSCLC細胞の好気性解糖を弱めるβ-Eleの能力が実証され、その結果、腫瘍停止転帰がもたらされます21。以前の調査結果に基づいて、LINC00511が肺がんのシスプラチン耐性を軽減することを確認しました。それにもかかわらず、正確な分子作用機序はまだ完全に解明されていません。

腫瘍代謝再プログラミングにおける好気性解糖の極めて重要な役割と、腫瘍の発生と進行におけるLINC00511の重要な役割を考慮して、この研究は、β-Ele がLINC00511媒介性好気性解糖経路を調節することにより、肺がんにおけるシスプラチン耐性を逆転させることができるかどうかを調査することを目的としています。

以前の証拠は、β-Eleがアポトーシス経路を活性化し22、エキソソーム分泌を調節し23、細胞周期を停止することにより、シスプラチン耐性を逆転させ、抗腫瘍効果を高めることができることを示しています24。しかし、これらの既知のメカニズムは通常、広範な効果を示し、特定の分子標的の正確な調節を欠いているため、臨床的翻訳可能性が制限されます。したがって、より的を絞った、明確に定義されたメカニズムを持ち、シスプラチン耐性を克服するための臨床翻訳の強い可能性を実証する新しい戦略を探索することが緊急に必要とされています。本研究では、β-Eleの即時の生物学的作用を重視した先行研究に対し、本研究では、肺がんにおける化学感作の逆転の根底にある新しいメカニズムの解明を目的として、A549/DDP細胞におけるWarburg代謝およびWnt/β-カテニンシグナル伝達経路に対するβ-Eleの影響を特徴づけています。この記事では、β-Ele が lncRNA を標的とすることで化学療法抵抗性を逆転させる新しいアプローチを明らかにするだけでなく、肺がんの臨床管理のための新たな理論的基盤と潜在的な介入標的を提供します。これらの発見は、特定の分子標的 (LINC00511) と主要なシグナル伝達経路 (Warburg および Wnt/β-catenin) の詳細な解明を通じて、臨床翻訳の可能性が大幅に向上していることを示しています。これらは、肺がん患者の化学療法感受性を改善し、生活の質を向上させるための確固たる科学的根拠を提供するとともに、肺がんの精密治療戦略の開発を進めることが期待されています。

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プロトコル

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. 溶媒の調製

  1. A549/DDP細胞用の培地溶液の調製:10%ウシ胎児血清(FBS、詳細は材料表を参照)、1%ペニシリン-ストレプトマイシン溶液(P/S、詳細は材料表を参照)、および2 μg/mLシスプラチン(DDP、詳細は材料表を参照)を添加したハムのF-12K完全培地(詳細は材料表を参照)でA549/DDP細胞を培養します。
    1. 完全培地溶液の調製: 500 mL の FBS と 5 mL の P/S を 500 mL のハムの F-12K 培地に加え、その後完全に混合して完全な培地溶液を調製します。
    2. シスプラチンを含む完全培地溶液の調製:シスプラチン粉末1mg(DDP、詳細は 材料表 を参照)を秤量し、1mLの二重蒸留水(ddH2O)に溶解してストック溶液を調製します。200 μLのストック溶液を100 mLの完全培地(ステップ1.1.1に従って調製)に加え、完全に混合して、2 μg/mLのシスプラチンを含む完全培地の作業溶液を調製します。
      注:シスプラチンは細胞毒性物質であるため、すべての手順はヒュームフードまたはバイオセーフティキャビネットで実行し、手袋、白衣、ゴーグルなどの保護具を着用してください。
  2. β-Ele投与液:この研究で使用した薬物濃度は、私たちの研究チームによって実施された以前の実験の結果に基づいています20,21。1 mgのβ-Ele(詳細は 材料表参照)を20 μLのジメチルスルホキシド(DMSO、詳細は 材料表を参照)に溶解して原液を調製する。完全培地を使用してストック溶液を25 mLに希釈し、40 μg/mLのβ-Ele作業溶液を得る。
    注:DMSOは皮膚を介した他の物質の吸収を高める可能性があるため、すべての操作手順をヒュームフードまたはバイオセーフティキャビネットで実行し、手袋、実験服、ゴーグルなどの保護具を着用してください。

2. 細胞培養 

  1. この研究では、ヒト肺腺癌シスプラチン耐性細胞株(A549 / DDP、Procell、詳細については 材料表 を参照)を使用します。この細胞株がショートタンデムリピート(STR)解析によって同定され、ATCCおよび他のデータベースの標準系統と正常に一致していることを確認します。
    1. STR解析法では、約1 x 106個の細胞を採取し、市販のDNA抽出キットを用いてゲノムDNAを抽出します(詳細は 材料表 を参照)。
    2. DNAタイピングに適した検証済みのマルチプレックスSTRシステムを採用し、性別決定遺伝子座とともに20のSTR遺伝子座を増幅します。次の熱サイクル条件下でPCR増幅を実行します:95°Cで2分間の初期変性、続いて94°Cで30秒間29サイクルの変性、59°Cで45秒間アニーリング、72°Cで45秒間伸長し、72°Cで10分間の最終伸長ステップを行います。
    3. 得られたPCR産物は、メーカーの指示に従って、自動遺伝子分析装置を使用してキャピラリー電気泳動 を介して 分析します。ここでは、フラグメント解析ソフトウェア(詳細は 材料表 を参照)を使用して対立遺伝子タイピングを実施し、ピーク検出閾値は150相対蛍光単位(RFU)に設定されました。
      注:生成された20遺伝子座のSTRプロファイルは、公開データベースで利用可能なA549/DDP細胞株の参照プロファイルと比較されました。80%を超える一致率は相同性を示すと考えられた。無関係な対立遺伝子ピークがないことは、相互汚染がないことをさらに確認しました。
  2. 液体窒素から細胞を取り出し、液体が完全に溶けるまで急速に解凍するために37°Cのウォーターバスに入れます。細胞懸濁液を5 mL遠心分離管に移し、2容量の完全培地溶液を加え、混合物を穏やかに再懸濁します。遠心分離(358 × g、5分、室温)後、上清を慎重に廃棄します。
    注:液体窒素からの細胞凍結保存チューブを使用する場合は、凍結防止手袋とゴーグルまたはフェイスマスクを着用し、チューブの口を向かないでください。
  3. 細胞ペレットを1 mLの完全培地に穏やかなピペッティングで再懸濁し、9 mLの完全培地を加えて懸濁液を10 mLに希釈します。細胞を100mmの細胞培養皿に播種し、インキュベーター(詳細については 材料表 を参照)で37°Cおよび5%CO2で培養します。細胞継代比は1:2〜1:3に維持されました。
    注:シスプラチンは、細胞毒性のあるプラチナ化学療法薬です。この方法では、A549/DDP細胞をシスプラチンを含む培地で培養します。したがって、シスプラチンを含む廃培地を専用の廃液バレルに回収し、定期的に有害廃棄物処理会社に送って専門的な処分を行ってください。

3. プラスミドトランスフェクション 

  1. LINC00511過剰発現用のプラスミドコンストラクトと、細胞トランスフェクション用の遺伝子特異的siRNA標的LINC00511(遺伝子ID:400619;転写物ID:NR_033876.1)を使用します。利用されたsiRNA配列を 表1に示します。
siRNA配列
名前センス 5'-3'アンチセンス 5'-3'
LINC00511-ホモ-1625
CAGCUGUGAACUUCCUUUATT
UAAAGGAAGUUCACAGCUGTT

表1:siRNA配列リスト

  1. 蘇生後に第3世代に継代されたA549/DDP細胞を無作為に選択し、1 x 105細胞/ウェルの密度で6ウェルプレートに均一に接種します。各ウェルにはランダムに番号が付けられ、ウェルはこれらの乱数に基づいて実験グループに割り当てられました。
  2. 密度が約70%に達したら、トランスフェクション試薬(詳細は 材料表 を参照)を使用して細胞をトランスフェクトします。
    1. siRNAトランスフェクション溶液を調製します。
      1. 250 μLの最適化された最小必須培地(Opti-MEM、詳細については 材料表 を参照)を5 μLのトランスフェクション試薬と混合し、均一性を確保するために3〜5倍に穏やかにボルテックスし、室温で5分間インキュベートします。
      2. 5 μLのsiRNA(50 nM)を250 μLのOpti-MEMで希釈し、3〜5倍に穏やかにボルテックスして完全に混合します。希釈したトランスフェクション試薬をsiRNA溶液と組み合わせ、室温で20分間インキュベートして、siRNAトランスフェクション複合体を形成します。
    2. プラスミドトランスフェクション溶液を調製します。
      1. 250 μLのOpti-MEMと5 μLのトランスフェクション試薬を混合し、均一性を確保するために3〜5倍に穏やかにボルテックスし、室温で5分間インキュベートします。
      2. 2 μgのプラスミドを250 μLのOpti-MEMで希釈し、3〜5倍に穏やかにボルテックスして、完全に混合します。希釈したトランスフェクション試薬をプラスミド溶液と組み合わせ、室温で20分間インキュベートしてプラスミドトランスフェクション溶液を調製します。
      3. siRNAトランスフェクション溶液とプラスミドトランスフェクション溶液をそれぞれ6ウェルプレートに加えます。各ウェルに1,500 μLの完全培地を加えます。均一に分布するように、添加の前後にセルプレートを穏やかに混合します。分析前に、プレートを37°C、5%CO2でトランスフェクション後24時間インキュベートします。

4. 定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応(qRT-PCR)によるトランスフェクション効率の検出

注:次の手順に従って、qRT-PCR検出のためにステップ3.3で24時間トランスフェクションした後、細胞を採取します。すべての実験は、3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施されました。

  1. RNA抽出
    1. 超高純度RNA抽出キットを使用してください(詳細については、 材料表 を参照)。キットの指示に従って6ウェルプレート内の培地を廃棄し、細胞をPBSで洗浄します。続いて、500 μLのフェノール-グアニジンベースの溶解試薬溶液を各ウェルに加え、ガンの先端で細胞を軽く吹き付けて完全に懸濁させ、混合物を遠心分離管に移します。細胞サンプルが完全に溶解されるように、5分間放置します。
    2. 100 μLのフェノール-グアニジンイソチオシアネート溶解試薬を加え、15秒間激しく振とうし、室温で2分間放置します。最後に、上部水相を慎重に吸引し、吸着カラムに移し、4°Cで13,400 x g で10分間遠心分離します。
    3. RNAをシリカゲル膜に結合します。バッファーRW1とバッファーRW2で洗浄してタンパク質を除去します。続いて、DNase Iを添加して残留DNAを消化し、バッファーRW2で二次洗浄を行い、不純物を完全に除去します。最後に、RNAをRNaseフリーの水で溶出し、13,400 x g で1分間遠心分離することにより、RNAサンプルを収集します。
  2. RNA濃度を測定します。
    1. 各1.5 μLのサンプルRNA溶液を微小核酸検出器に入れ(詳細については 材料表 を参照)、A260/A280値を読み取ります。
      注:測定されたA260 / A280値が1.8〜2.0の範囲内にあり、RNA濃度が20 ng / μLから200 ng / μLの場合、これはRNA品質が許容可能であり、その後の実験に使用できることを示しています。
    2. 測定値に基づいて、測定された最小RNA濃度をベンチマークとして使用して、すべてのサンプルで一貫したRNA濃度を確保し、続いてPCR実験を行い、RNA溶液をピロカーボネートジエチル(DEPC)水で希釈します。
  3. RNAの逆転写
    1. 抽出したトータルRNAをテンプレートとして使用し、逆転写キットの指示に従ってcDNAを合成します(詳細については、 材料表 を参照)。キットの要件に従って反応システムを準備します。
    2. 抽出したRNA溶液と反応系を8列チューブに加え、各グループに2つの複製ウェルを設定します。37°Cで15分間インキュベート、85°Cで5秒間の熱変性、4°Cで5分間冷却するという連続した条件で反応を開始します。
  4. PCR反応
    1. SYBR GreenベースのプレミックスPCRマスターミックス(詳細については材料表を参照)を使用して、リアルタイム蛍光定量PCRシステム(詳細は材料表を参照)でPCR増幅を実施します。GADPHを参照遺伝子として使用し、プライマー配列を表2に示し、反応混合物を次のように調製します:0.4 μLの対応するプライマー、2 μLのcDNAテンプレート、および反応混合物を8ウェルストリップチューブに順次添加して、最終的な反応量を達成します。
    2. PCR増幅:95°C30秒(1サイクル)、95°C5秒(40サイクル)、60°C20秒(40サイクル)。 2-ΔΔCt 法25を用いて標的遺伝子の相対発現量を計算する。データの信頼性を確保するために、すべての実験を 3 回独立して繰り返します。
      注: 実験手順中に発生する化学廃棄物は、指定された有害廃棄物容器に収集し、機関の方針に従って認定された有害廃棄物管理サービスによって処分する必要があります。
プライマー配列
入門シーケンス(5'-3')
人間-LINC00511-FTTTCCCAGCACAGCTCAATC
人間-LINC00511-RTCCCTTCTCCCTCGGTCA
GAPDH-FAATCCCATCACCATCTTCCA
GAPDH-RAAATGAGCCCCAGCCTTCT

表2:PCRアッセイ用のプライマー配列

5. EdU検出

  1. EdUアッセイキットを使用して、A549/DDP細胞の増殖に対するLINC00511発現の変化の影響を評価します(詳細については、 材料表 を参照)。
    1. 蘇生後に第3世代に継代されたA549/DDP細胞を無作為に選択し、2 x 104 細胞/ウェルの密度で24ウェルプレートに均一に接種します。
      注:ここでは、すべての実験を3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施しました。
    2. 各ウェルにランダムに番号を付け、これらの乱数に基づいてウェルを 4 つの実験グループのいずれかに割り当てます: 対照群、β-Ele グループ、β-Ele + LINC00511 過剰発現 (β-Ele + OV-LINC00511) グループ、および β-Ele + LINC00511 ノックダウン (β-Ele + si-LINC00511) グループ。
  2. 細胞密度が約70%に達したら、ステップ3.3に従ってプラスミドトランスフェクションおよび干渉処理を行います。トランスフェクションの24時間後、元の培地を廃棄し、β-Ele(40 μg/mL)を含む培地溶液1 mLを薬物処理群の各ウェルに加えます。
  3. 細胞を40 μg/mLのβ-Eleで24時間処理した後、標識のために細胞をEdUとインキュベートします。次に、細胞を4%パラホルムアルデヒドで10分間固定し、0.5%Triton X-100で透過処理します。
  4. クリック反応溶液(キット付属のクリック添加剤試薬1バイアルを1.3mLの脱イオン水に十分に混合して溶解して調製)を暗所に加え、暗所で30分間反応を維持します。反応が完了したら、細胞をPBSで洗浄し、続いて5分間ヘクスト染色を行います。最後に、蛍光顕微鏡を使用して結果を観察します(図1 および 図2)。
    注:DMSOは透過性が高く、可燃性の液体です。このスキームでは、β-Ele 投与液には DMSO が含まれています。したがって、使用後はβ-Ele投与液を専用の廃液バレルに回収し、定期的に有害廃棄物処理会社に渡して専門的な処分を依頼してください。

6. グルコース含有量の検出 

注:すべての実験は、3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施されました。

  1. 蘇生後に第3世代に継代されたA549/DDP細胞を無作為に選択し、1 x 105細胞/ウェルの密度で6ウェルプレートに均一に接種します。各ウェルにランダムに番号を付け、これらの乱数に基づいてウェルを実験グループに割り当てます。
  2. 細胞密度が約70%に達したら、ステップ3.3で説明したようにプラスミドトランスフェクションと干渉を進めます。トランスフェクションの24時間後、処理群の細胞を40 μg/mLのβ-Eleで処理します。
  3. 薬物処理の24時間後、細胞から上部培地を回収し、1000 × g で5分間遠心分離します。上清を回収します。グルコース検査キットの指示に従って(詳細については 材料表 を参照)、反応溶液を調製し、上清と完全に混合します。
  4. サンプルをグループごとに5つの反復ウェルを備えた96ウェルプレートに入れます。プレートを軽く振って、37°Cで10分間インキュベートします。波長505 nmのマイクロプレートリーダーを使用して各ウェルの吸光度を測定し、テストキットに提供されている式を使用してグルコース含有量を計算します。
    figure-protocol-1
    ここで、C標準= 5.55 mmol / L、N =希釈係数。
    注: 実験手順中に発生する化学廃棄物は、指定された有害廃棄物容器に収集し、機関の方針に従って認定された有害廃棄物管理サービスによって処分する必要があります。

7. 乳酸含有量の検出 

注:すべての実験は、3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施されました。

  1. 蘇生後に第3世代に継代されたA549/DDP細胞を無作為に選択し、6ウェルプレート(1×105 細胞/ウェル)に均一に接種します。各ウェルにランダムに番号を付け、これらの乱数に基づいてウェルを実験グループに割り当てます。細胞密度が約70%に達したら、ステップ3.3で説明したようにプラスミドトランスフェクションと干渉を進めます。トランスフェクションの24時間後、処理群の細胞を40 μg/mLのβ-Eleで処理します。
  2. 薬物処理の24時間後、細胞から上部培地を回収し、1000 x g で5分間遠心分離します。上清を回収します。乳酸検査キットの指示に従って(詳細については 材料表 を参照)、反応溶液を調製し、上清と完全に混合します。
  3. 合計250 μLのサンプルを96ウェルプレートの各ウェルに追加し、各グループに5つの反復ウェルを設定します。プレートを軽く振って、37°Cで10分間インキュベートします。マイクロプレートリーダーを使用して530 nmの波長で各ウェルの吸光度を測定し(詳細については 材料表 を参照)、テストキットに提供されている式を使用して乳酸含有量を計算します。
    figure-protocol-2
    ここで、 C標準= 3 mmol / L、N =希釈係数。
    注: 実験手順中に発生する化学廃棄物は、指定された有害廃棄物容器に収集し、機関の方針に従って認定された有害廃棄物管理サービスによって処分する必要があります。

8. バルクRNA-seq

  1. サンプルデータベースの確立
    1. 実験用にA549/DDP細胞を選択し、対照群、DDP群、β-Ele(40μg/mL)+DDP(48μM)群、β-Ele+DDP+OV-LINC00511群、β Ele+DDP+si-LINC00511群に分けます。各グループに 3 つのサンプルを含めます。
    2. 各細胞群からトータルRNAを抽出します。磁気ビーズベースのmRNA単離キット(詳細は 材料表 を参照)を使用して、オリゴ(dT)でコーティングされたビーズがA-T塩基対 を介して mRNAのポリ(A)テールに選択的に結合する真核生物のmRNAを濃縮します。フラグメンテーションバッファー(1 μL/μgのRNA、詳細については 材料表 を参照)を加え、94°Cで7分間インキュベートして、mRNAを短いセグメントにフラグメント化します。
    3. 製造元の指示に従って、ランダムヘキサマープライマーを使用して第一鎖cDNA合成を進めます。セカンドストランドcDNA合成の場合は、適切な量の反応バッファー、RNase H、およびDNAポリメラーゼIを添加してプロセスを完了します。
    4. 二本鎖cDNAに対して、25°Cで30分間インキュベートし(末端修復)、直後に72°Cで30分間インキュベート(Aテール)することにより、末端修復とAテールリングを実行します。末端修復フラグメントへのシーケンシングアダプターのライゲート。
    5. カルボキシル修飾磁性シリカビーズを使用して、ライゲーション産物を精製し、サイズ選択します(詳細については 、 材料表 を参照)。最後に、PCR増幅によってシーケンシングライブラリを構築します。
    6. サンプル調製後、DNBSEQ-T7プラットフォームでシーケンシングライブラリを分析します(詳細については、 材料表 を参照)。シーケンスのためにサンプルをパターン化アレイマイクロアレイチップにロードします。
      注:この装置は、高解像度イメージングシステムを使用して光信号を収集、読み取り、および識別し、個々の塩基の配列情報を決定しました。続いて、追加のシーケンスサイクルを実行して、次の塩基の配列を取得します。複数のサイクルの後、生のシーケンスデータが生成されました。
  2. バイオインフォマティクス解析
    1. マシン上のサンプルをシーケンスして、マシン外データとも呼ばれる生データを取得します。さらに、fastp(v 0.21.0)を使用してシーケンスデータを処理します。3'アダプター配列を含むリードを削除し、主要なフィルタリング基準の一部として、平均品質スコアがQ20を下回る低品質のリードを排除します。クリーンアップされた高品質のデータに基づいて、すべての下流分析を実施します。
      注:fastpを使用してシーケンスデータの初期フィルタリングを実施します。特定のコマンドラインパラメータについては、トランスクリプトームデータセット(https://github.com/OpenGene/fastp#rna-seq-processing)の公式ドキュメントを参照してください。
    2. FastQC(v 0.12.0)を使用して、クリーニングされたシーケンスデータの品質を評価します。品質要件は次のとおりです: 塩基の少なくとも 90% の品質スコアは Q20 よりも高いものでなければならず、残りのアダプター配列の割合は 1% を超えてはなりません。これらの基準を満たすデータは適格と見なされ、下流の分析に使用できます。
      注:公式ガイドライン(https://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)に従って、FastQCを使用してクリーニングされたシーケンスデータの品質を評価します。
  3. 遺伝子発現解析
    1. DESeq2 ソフトウェアを使用して、2 つの比較グループ間で差次発現分析を実行します。
      1. まず、データをソフトウェアに入力してDESeq DataSetを構築します。次に、すべてのサンプルで合計数が10未満の遺伝子を除外します。
      2. 最後に、差次遺伝子解析を行い、結果を抽出します。差次発現遺伝子をスクリーニングするための条件は次のとおりです。発現の倍数変化|log2FoldChange|> 1、有意性 padj ≤ 0.05 です。
        注: DESeq2 ソフトウェアの詳細な操作手順については、公式 Web サイトの詳細な手順を参照してください: https://www.bioconductor.org/packages/release/bioc/html/DESeq2.html.

9. ウェスタンブロット(WB)によるタンパク質発現レベル変化の検出 

注:すべての実験は、3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施されました。

  1. ウェスタンブロッティングを実行して、細胞タンパク質の発現レベルを定量します。
    1. 蘇生後に第3世代に継代されたA549/DDP細胞を無作為に選択し、1 x 105 細胞/ウェルの密度で6ウェルプレートに均一に接種します。
    2. 各ウェルにランダムに番号を付け、これらの乱数に基づいて、コントロール、β-Ele、OV-LINC00511、si-LINC00511、β-Ele + OV-LINC00511、およびβ-Ele + si-LINC00511の6つの実験グループのいずれかにウェルを割り当てます。
    3. 細胞密度が約70%に達したら、ステップ3.3で説明したようにプラスミドトランスフェクションと干渉を行います。トランスフェクションの24時間後、対照群に新鮮な培地を提供しながら、処理群をβ-Ele(40 μg/mL)にさらします。両方のグループをさらに24時間培養します。
    4. 続いて、1675 × g で 5 分間遠心分離して細胞ペレットを収集します。細胞の各グループを、1 mM PMSFを含む500 μLのRIPA溶解バッファーで氷上で30分間溶解します(詳細については、 材料表 を参照)。
  2. 細胞ライセートを13,400 × g で4°Cで10分間遠心分離し、上清を回収します。BCAタンパク質濃度アッセイキットを使用してタンパク質濃度を測定します(詳細については、 材料表 を参照)。同量のタンパク質サンプルを10%SDS-PAGEで分離し、電気泳動 によって ポリフッ化ビニリデン(PVDF)膜に移します。
  3. 膜をブロッキング溶液(5%スキムミルク/0.1%トゥイーン-20(TBST)を含むトリス緩衝生理食塩水)に室温で2時間浸漬し、GLUT1、PKM2、LDHA、β-カテニン、GSK-3β(1:1000)、およびβ-アクチン(1:2000、詳細については 材料表 を参照)に対する一次抗体とともに4°Cで一晩インキュベートします。
    1. 翌日、メンブレンをTBSTで5分間、室温で穏やかに振とうと3回洗浄します。
  4. 翌日、メンブレンを二次抗体溶液(HRP標識ヤギ抗ウサギIgG、1:2000)でインキュベートし、室温で1時間穏やかに振とうします。
  5. 最後に、市販のECL発色溶液を0.1 mL/cm2添加して、PVDF膜を完全に覆います。曝露する前に室温で1分間インキュベートします。強化された化学発光システムを使用してバンドを視覚化および分析します(詳細については、 材料表 を参照)。 図4C および 図5Bを参照してください。
    注: 実験手順中に発生する化学廃棄物は、指定された有害廃棄物容器に収集し、機関の方針に従って認定された有害廃棄物管理サービスによって処分する必要があります。

10. 統計的分析 

注:すべての実験は、3つの独立した生物学的反復(n = 3)で実施されました。

  1. 実験データをグループ別に整理し、GraphPad Prismソフトウェア(バージョン8.0.2、詳細は 材料表 を参照)に入力します。ソフトウェアガイドラインに従ってデータの可視化と統計的有意性分析を実行します。測定データは平均±標準偏差として表されました。グループ間の統計的差異は、η² (エタ 2 乗) 効果量計算による一元配置分散分析を使用して評価され、続いて Tukey の多重比較検定26 が行われました。**P < 0.01 を統計的に有意であると考えます。

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結果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

β-EleはA549/DDP細胞の増殖を有意に抑制します

本実験では、β-EleとDDPの投与濃度を、先行研究20,21の結果に基づき決定した。A549/DDP細胞をβ-Eleで単独またはDDPと組み合わせて処理し、DDP化学療法抵抗性への影響を分析しました。EdU分析(図1)により、24μMおよび48μMの濃度のDDPは、ブランク群と比較してA549/DDP細胞の増殖を有意に阻害することが明らかになりました(P < 0.01、d = 23.52)。

さらなる比較により、β-Ele(40 μg/mL)...

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ディスカッション

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この研究は、肺がんにおけるシスプラチン耐性という重要な臨床問題に焦点を当てました。世界で最も多くのがんによる死亡者数を占めている肺がんは、5 年生存率が 20% 未満であり続けています29,30。シスプラチンは、プラチナベースの化学療法薬の基礎として、DNA 複製を阻害して抗がん効果を発揮する効率的で広域スペクトルの抗がん剤です31。しかし、患者の約半数が長期の臨床使用中に後天性薬剤耐性を発症し、その結果、治療の失敗や疾患の進行が観察されています16。したがって、シスプラチンに対する肺がんの感受性を高めるための効果的な戦略を特定することは、患者の生存率と予後を改善するために非常に重要です。lncRNAは腫瘍多剤耐性の多機能調節因子として機能し、最近の研究では、肺がん細胞の薬剤耐性メカニズムに対するlncRNAの影響にますます焦点が当てられています

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開示事項

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

すべての著者には、宣言する利益相反はありません。

謝辞

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

この研究の資金は、吉林省自然科学財団によって賞番号に基づいて提供されました。YDZJ202401058ZYTS。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
A549/DDP細胞プロセルCL-0519URL:https://www.procell.com.cn/p/a549-ddp--cl-0519
非常にクリーンな作業台蘇州安泰エアテックSW-CJ-2FDURL:http://www.sz-antai.com
BCAタンパク質濃度アッセイキットソーラービオPC0020URL:https://www.solarbio.com
卓上遠心分離機熱ピコ17URL:https://www.thermofisher.com
細胞培養チャンバー熱3111URL:https://www.thermofisher.com
細胞培養皿バイオフィルTCD000100URL:http://www.biofil.com.cn
化学発光分析装置秦郷楽器 4300URL:https://www.clinx.cn/about_us
シスプラチンアラジンC295225-250mgURL:https://www.aladdin-e.com/
DNBSEQ-T7遺伝子配列決定装置MGIテック株式会社T7URL:https://www.mgitech.cn/
イージーピュア マイクロゲノムDNAキットトランスジェンバイオテックEE181-01URL:https://www.transgen.com/
ECL発色液ソーラービオPE0010URL:https://www.solarbio.com
EDU検出キットビヨタイムC0071SURL:https://www.beyotime.com
酵素標識機器デティ機器HBS-1096AURL:https://www.detiebio.cn/
ウシ胎児血清FBS)クラークFB15015URL:https://zn.clarkbio.com/
フラグ/プライムバッファ イェン11277ESURL:https://www.yeasen.com/products/detail/2151
ジーンマッパー ソフトウェア 6熱バージョン 6フラグメント解析ソフトウェア。URL:https://www.thermofisher.cn/  
GenReaderプラットフォーム北京Yuewei Gene Technology Co., Ltd.https://yyigou.com/product/detail/0000037250.html毛細管電気泳動に用いる自動遺伝子分析装置
グルコース検査キットJiancheng BioA154-1-1URL:http://www.njjcbio.com
GLUT1ポリクローナル抗体プロテインテックグループ21829-1-APですURL:https://www.ptglab.com
GraphPadプリズムGraphPadソフトウェアバージョン 8.0.2URL:https://www.graphpad.com
GSK-3&ベータ;抗体親近感AF5016URL:https://www.affbiotech.com
ハムのF-12KプロセルPM150910URL:https://www.procell.com.cn/
Hieff NGS DNA選択ビーズイェン12601ESURL:https://www.yeasen.com/products/detail/939
HieffNGS mRNA単離マスターキットイェン12603ZHURL:https://www.yeasen.com/products/detail/1119
HRP標識ヤギ抗ウサギIgGサービスバイオGB23303URL:https://www.servicebio.cn
乳酸検査キットJiancheng BioA019-2-1URL:http://www.njjcbio.com
LDHA特異的ポリクローナル抗体プロテインテックグループ19987-1-APURL:https://www.ptglab.com
ライトサイクラー 96ロシュLC96URL:https://lifescience.roche.com
リポフェクタミン 2000インビトロゲン11668-019URL:https://www.thermofisher.com/invitrogen
オプティMEMギブコ31985-070URL:https://www.thermofisher.com/gibco
ペニシリン-ストレプトマイシン(P / S)バイオシャープBL505A型URL:https://www.biosharp.cn/
PKM2特異的ポリクローナル抗体プロテインテックグループ15822-1-APですURL:https://www.ptglab.com
PMSF ビヨタイムST506URL:https://www.beyotime.com
PrimeScript RT試薬キット(パーフェクトリアルタイム)タカラRR037AURL:https://www.takarabio.com
RIPAライセートビヨタイムP0013BURL:https://www.beyotime.com
シーケンシングプラットフォームBGIのDNBSEQ-T7URL:https://www.bgi.com/global
TB グリーン プレミックス Ex TaqタカラRR420A型URL:https://www.takarabio.com
微量核酸検査機Aosheng 楽器ナノ100URL:http://www.hzaosheng.com
TRIzon PaIキャンバックス・バイオテックCW0597SURL:https://www.canvaxbiotech.com
トリプシンバイオシャープBL501A型URL:https://www.biosharp.cn/
超高純度RNAキット(DNase I)キャンバックス・バイオテックCW0597SURL:https://www.canvaxbiotech.com
β-アクチン抗体プロテインテックグループ60008-1-IGURL:https://www.ptglab.com
&β;-カテニン抗体 親近感DF6794URL:https://www.affbiotech.com
β-エレメンシグマ63965-25MGURL:https://www.sigmaaldrich.com

参考文献

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thandra, K. C., Barsouk, A., Saginala, K., Aluru, J. S., Barsouk, A. Epidemiology of lung cancer. Contemp Oncol (Pozn). 25 (1), 45-52 (2021).
  2. Huang, J., et al. Distribution risk factors, and temporal trends for lung cancer incidence and mortality: A Global Analysis. Chest. 161 (4), 1101-1111 (2022).
  3. Wang, H., Hu, Y., Lu, H., Wu, Z., Zhang, Y. Association between SOX gene family expression, DNA methylation, and miRNA regulation in lung adenocarcinoma progression. Discov Oncol. 16 (1), 188(2025).
  4. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 71 (3), 209-249 (2021).
  5. Qin, Z., et al. Phase separation of EML4-ALK in firing downstream signaling and promoting lung tumorigenesis. Cell Discov. 7 (1), 33(2021).
  6. Wang, X., Wang, H., Jiang, H., Qiao, L., Guo, C. Circular RNAcirc_0076305 promotes cisplatin (DDP) resistance of non-small cell lung cancer cells by regulating ABCC1 through miR-186-5p. Cancer Biother Radiopharm. 38 (5), 293-304 (2023).
  7. La Montagna, M., Ginn, L., Garofalo, M. Mechanisms of drug resistance mediated by long non-coding RNAs in non-small-cell lung cancer. Cancer Gene Ther. 28 (3-4), 175-187 (2021).
  8. Wu, S. G., Shih, J. Y. Management of acquired resistance to EGFR TKI-targeted therapy in advanced non-small cell lung cancer. Mol Cancer. 17 (1), 38(2018).
  9. Altorki, N. K., et al. The lung microenvironment: an important regulator of tumour growth and metastasis. Nat Rev Cancer. 19 (1), 9-31 (2019).
  10. Zhang, H., Wang, Y., Liu, X., Li, Y. Progress of long noncoding RNAs in anti-tumor resistance. Pathol Res Pract. 216 (11), 153215(2020).
  11. Li, H. Q., Fu, X. B., Guo, H. Y., Sun, Y., Wang, D., Zhang, Z. Z. Sevoflurane reverses cisplatin resistance in neuroblastoma cells through the linc00473/miR-490-5p/AKT1 axis. Saudi Medical Journal. 43 (11), 1209-1216 (2022).
  12. Guo, F., Cao, Z., Guo, H., Li, S. The action mechanism of lncRNA-HOTAIR on the drug resistance of non-small cell lung cancer by regulating Wnt signaling pathway. Exp Ther Med. 15 (6), 4885-4889 (2018).
  13. Ren, L., et al. The DDUP protein encoded by the DNA damage-induced CTBP1-DT lncRNA confers cisplatin resistance in ovarian cancer. Cell Death Dis. 14 (8), 568(2023).
  14. Chen, L., et al. H19/miR-107/HMGB1 axis sensitizes laryngeal squamous cell carcinoma to cisplatin by suppressing autophagy in vitro and in vivo. Cell Biol Int. 45 (3), 674-685 (2021).
  15. Peng, X., Li, S., Zeng, A., Song, L. Regulatory function of glycolysis-related lncRNAs in tumor progression: Mechanism, facts, and perspectives. Biochem Pharmacol. 229, 116511(2024).
  16. Kryczka, J., Kryczka, J., Czarnecka-Chrebelska, K. H., Brzeziańska-Lasota, E. Molecular mechanisms of chemoresistance induced by cisplatin in NSCLC cancer therapy. Int J Mol Sci. 22 (16), 8885(2021).
  17. Liu, J., Zhu, Y., Wang, H., Han, C., Wang, Y., Tang, R. LINC00629, a HOXB4-downregulated long noncoding RNA, inhibits glycolysis and ovarian cancer progression by destabilizing c-Myc. Cancer Sci. 115 (3), 804-819 (2024).
  18. Liao, M., et al. Targeting the Warburg effect: A revisited perspective from molecular mechanisms to traditional and innovative therapeutic strategies in cancer. Acta Pharm Sin B. 14 (3), 953-1008 (2024).
  19. Song, Z., Luo, J., Wu, M., Zhang, Z. linc00511 knockdown inhibits lung cancer progression by regulating miR-16-5p/MMP11. Crit Rev Eukaryot Gene Expr. 33 (7), 17-30 (2023).
  20. Cheng, G., et al. β-elemene suppresses tumor metabolism and stem cell-like properties of non-small cell lung cancer cells by regulating PI3K/AKT/mTOR signaling. Am J Cancer Res. 12 (4), 1535-1555 (2022).
  21. Li, L., et al. β-elemene suppresses Warburg effect in NCI-H1650 non-small-cell lung cancer cells by regulating the miR-301a-3p/AMPKα axis. Biosci Rep. 40 (6), BSR20194389(2020).
  22. Yao, C., Jiang, J., Tu, Y., Ye, S., Du, H., Zhang, Y. β-elemene reverses the drug resistance of A549/DDP lung cancer cells by activating intracellular redox system, decreasing mitochondrial membrane potential and P-glycoprotein expression, and inducing apoptosis. Thorac Cancer. 5 (4), 304-312 (2014).
  23. Song, H., et al. β-elemene ameliorates cisplatin resistance of gastric cancer via regulating exosomal METTL3-m6A-ARF6 axis. Cell Biochem Biophys. 83 (2), 2047-2058 (2025).
  24. He, J., et al. β-Elemene promotes ferroptosis and reverses radioresistance in gastric cancer by inhibiting the OTUB1-GPX4 interaction. Front Pharmacol. 15, 1469180(2024).
  25. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  26. Yang, L., Tao, Y., Luo, L., Zhang, Y., Wang, X., Meng, X. Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapus ameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis. J Ethnopharmacol. 288, 114988(2022).
  27. Zhang, Z., Zhang, Y., Qin, X., Wang, Y., Fu, J. FGF9 promotes cisplatin resistance in colorectal cancer via regulation of Wnt/β-catenin signaling pathway. Exp Ther Med. 19 (3), 1711-1718 (2020).
  28. He, J., et al. Sox2 inhibits Wnt-β-catenin signaling and metastatic potency of cisplatin-resistant lung adenocarcinoma cells. Mol Med Rep. 15 (4), 1693-1701 (2017).
  29. Bray, F., et al. Global cancer statistics 2022: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA Cancer J Clin. 74 (3), 229-263 (2024).
  30. Im, J. Y., et al. CYB5R3 functions as a tumor suppressor by inducing ER stress-mediated apoptosis in lung cancer cells via the PERK-ATF4 and IRE1α-JNK pathways. Exp Mol Med. 56 (1), 235-249 (2024).
  31. Manguinhas, R., et al. Impact of the APE1 Redox Function Inhibitor E3330 in non-small cell lung cancer cells exposed to cisplatin: Increased cytotoxicity and impairment of cell migration and invasion. Antioxidants (Basel). 9 (6), 550(2020).
  32. Jiang, L., et al. HCP5 is a SMAD3-responsive long non-coding RNA that promotes lung adenocarcinoma metastasis via miR-203/SNAI axis. Theranostics. 9 (9), 2460-2474 (2019).
  33. Singh, D., Assaraf, Y. G., Gacche, R. N. Long non-coding RNA mediated drug resistance in breast cancer. Drug Resist Updat. 63, 100851(2022).
  34. Sun, W., Zu, Y., Fu, X., Deng, Y. Knockdown of lncRNA-XIST enhances the chemosensitivity of NSCLC cells via suppression of autophagy. Oncol Rep. 38 (6), 3347-3354 (2017).
  35. Lu, Y., Tian, M., Liu, J., Wang, K. LINC00511 facilitates Temozolomide resistance of glioblastoma cells via sponging miR-126-5p and activating Wnt/β-catenin signaling. J Biochem Mol Toxicol. 35 (9), e22848(2021).
  36. Kong, X. Z., et al. Regulation of aerobic glycolysis by long non-coding RNAs in cancer. Biochem Biophys Res Commun. 479 (1), 28-32 (2016).
  37. Mao, Y., Xia, Z., Xia, W., Jiang, P. Metabolic reprogramming, sensing, and cancer therapy. Cell Rep. 43 (12), 115064(2024).
  38. Vaupel, P., Schmidberger, H., Mayer, A. The Warburg effect: essential part of metabolic reprogramming and central contributor to cancer progression. Int J Radiat Biol. 95 (7), 912-919 (2019).
  39. Ward, P. S., Thompson, C. B. Metabolic reprogramming: a cancer hallmark even warburg did not anticipate. Cancer Cell. 21 (3), 297-308 (2012).
  40. Nagao, A., Kobayashi, M., Koyasu, S., Chow, C. C. T., Harada, H. HIF-1-dependent reprogramming of glucose metabolic pathway of cancer cells and its therapeutic significance. Int J Mol Sci. 20 (2), 238(2019).
  41. Xie, Y., Wang, M., Xia, M., Guo, Y., Zu, X., Zhong, J. Ubiquitination regulation of aerobic glycolysis in cancer. Life Sci. 292, 120322(2022).
  42. Hua, G., Zeng, Z. L., Shi, Y. T., Chen, W., He, L. F., Zhao, G. F. LncRNA XIST contributes to cisplatin resistance of lung cancer cells by promoting cellular glycolysis through sponging miR-101-3p. Pharmacology. 106 (9-10), 498-508 (2021).
  43. Yin, D., Hua, L., Wang, J., Liu, Y., Li, X. Long Non-coding RNA DUXAP8 facilitates cell viability, migration, and glycolysis in non-small-cell lung cancer via regulating HK2 and LDHA by inhibition of miR-409-3p. Onco Targets Ther. 13, 7111-7123 (2020).
  44. Vallée, A. Aerobic glycolysis activation through canonical WNT/β-catenin pathway in ALS. Med Sci (Paris). 34 (4), 326-330 (2018).
  45. Rathee, M., et al. Canonical WNT/β-catenin signaling upregulates aerobic glycolysis in diverse cancer types. Mol Biol Rep. 51 (1), 788(2024).
  46. Li, R., Lv, M., Liu, J., Sun, Q. Tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 promotes aerobic glycolysis and cisplatin resistance by regulating the Wnt/β-catenin signaling pathway in lung cancer. Histol Histopathol. , (2024).
  47. Zhao, Q., Chen, L., Zhang, X., Yang, H., Li, Y., Li, P. β-elemene promotes microglial M2-like polarization against ischemic stroke via AKT/mTOR signaling axis-mediated autophagy. Chin Med. 19 (1), 86(2024).
  48. Jiang, Z., Jacob, J. A., Loganathachetti, D. S., Nainangu, P., Chen, B. β-Elemene: mechanistic studies on cancer cell interaction and its chemosensitization effect. Front Pharmacol. 8, 105(2017).
  49. Li, J., Li, Y., Meng, F., Fu, L., Kong, C. Knockdown of long non-coding RNA linc00511 suppresses proliferation and promotes apoptosis of bladder cancer cells via suppressing Wnt/β-catenin signaling pathway. Biosci Rep. 38 (4), BSR20171701(2018).
  50. Tan, Z., et al. Small peptide LINC00511-133aa encoded by LINC00511 regulates breast cancer cell invasion and stemness through the Wnt/β-catenin pathway. Mol Cell Probes. 69, 101913(2023).
  51. Ghafouri-Fard, S., Safarzadeh, A., Hussen, B. M., Taheri, M., Ayatollahi, S. A. A review on the role of LINC00511 in cancer. Front Genet. 14, 1116445(2023).
  52. Liu, J., et al. Targeting Wnt-driven cancer through the inhibition of Porcupine by LGK974. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (50), 20224-20229 (2013).
  53. Wang, W. J., et al. Serum lncRNAs (CCAT2, LINC01133, LINC00511) with squamous cell carcinoma antigen panel as novel non-invasive biomarkers for detection of cervical squamous carcinoma. Cancer Manag Res. 12, 9495-9502 (2020).
  54. Fan, K., Liu, Z., Gao, M., Tu, K., Xu, Q., Zhang, Y. Targeting nutrient dependency in cancer treatment. Front Oncol. 12, 820173(2022).
  55. Liu, B., et al. Knockdown of LINC00511 decreased cisplatin resistance in non-small cell lung cancer by elevating miR-625 level to suppress the expression of leucine rich repeat containing eight volume-regulated anion channel subunit E. Hum Exp Toxicol. 41, 9603271221089000(2022).

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