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研究記事

胃癌における共刺激分子LLT1の免疫療法有効性評価における発現、臨床的意義、および役割

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DOI：

10.3791/68827

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2025年10月10日

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1Department of General Surgery, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 2Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 3Jiangsu Institute of Clinical Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University, 4Jiangsu Key Laboratory of Clinical Immunology, Soochow University, 5Jiangsu Key Laboratory of Gastrointestinal Tumor Immunology, The First Affiliated Hospital of Soochow University

この記事について

サマリー

この研究では、マルチオミクスと臨床分析を通じて、胃がんの予測免疫療法バイオマーカーとしての LLT1 を調査します。この研究では、治療結果を向上させるための精密免疫療法アプローチを促進するために、免疫回避と腫瘍微小環境調節における LLT1 の役割を評価します。

要約

LLT1は、新規の免疫チェックポイント分子であり、潜在的な治療標的です。免疫療法は進行胃がんの転帰を改善しました。しかし、多くの患者は反応しないか耐性を発症し、予測バイオマーカーが不足しています。胃がんの免疫回避における LLT1 の役割と免疫療法反応に対するその効果は不明のままです。これを評価するために、複数のアルゴリズム(TIMER、CIBERSORT、およびESTIMATE)を使用して、Cancer Genome Atlas(TCGA)胃腺癌データセットでLLT1発現を分析し、免疫細胞浸潤を定量化しました。タンパク質発現は、268 の胃腺癌サンプルの免疫組織化学 (IHC) および 115 の免疫療法後の組織の多重免疫蛍光 (MIF) によって検証されました。統合されたトランスクリプトームおよびプロテオミクスデータは、腫瘍微小環境の特徴および臨床免疫療法の結果との関連について分析されました。結果は、高いLLT1タンパク質発現が、進行度の低い腫瘍特性(浸潤深度とリンパ節転移が低い; P < 0.05)、全生存期間が長くなります (P = 0.012)。LLT1 mRNAおよびタンパク質レベルは、CD8+ T細胞およびM1マクロファージ浸潤の増加と、腫瘍微小環境におけるPD-L1発現の上昇と相関していました。予後データが入手可能な患者198人の最初のコホートのうち、LLT1発現が高い患者(n=117)は、発現が低い患者(n=81)と比較して有意に長い全生存期間を示しました。免疫療法と化学療法の併用で治療された患者の2番目のコホートでは、LLT1発現が高い腫瘍(n = 48)は、LLT1発現が低い腫瘍(n = 67)よりも無増悪生存期間が長かった(P = 0.014)。PD-1+CD161+ 免疫細胞集団の有意な増加 (P < 0.05) は、治療抵抗性患者 (n=53) と比較して免疫療法に有効な患者 (n=62) で観察されました。結論として、LLT1 発現は、胃がんにおける良好な予後の有望なバイオマーカーです。私たちの知る限り、これは LLT1 の発現が胃がんにおける化学療法と免疫療法の併用に対する反応の改善を予測することを実証した最初の研究であり、免疫療法戦略を導く上での LLT1 の可能性を裏付けています。

概要

胃食道がん、特に胃がん (GC) は、世界で 5番目に多いがんであり、5番目に致死率が高いがんであるという特徴があります。世界の統計によると、毎年約100万人の新規症例が確認されており、東アジアがこの病気の不釣り合いな割合を占めており、世界の発生率の半分以上を占めています1。早期 GC と診断された患者の場合、生存の見通しは非常に良好であり、内視鏡的粘膜下層剥離 (ESD) または根治的外科的介入後に 90% 以上が 5 年生存率を達成しています2。ただし、初期症状の微妙な症状は、多くの場合、局所進行期または転移性期の診断につながります 3,4。これらの進行期の患者の見通しは悲惨で、治療を受けずに放置された患者の全生存期間 (OS) の中央値はわずか 6 か月です。フルオロウラシルとプラチナに基づく併用化学療法レジメンを投与しても、OS の中央値は約5 年に延長されるだけです。

最近、免疫チェックポイント阻害剤と呼ばれるこれらの新薬により、後期胃がんの治療に大きな変化が見られます。これらは、特定のマーカーであるPD-L1が現れるがん細胞の特効薬に似ており、複合陽性スコア(CPS)スケールで少なくとも1のスコアがあります。これらの治療法は、高マイクロサテライト不安定性 (MSI-H) と呼ばれる、DNA にすべて混在しているがんに対しても非常に効果的です。この新しいアプローチは、患者により多くの時間を提供するという違いをもたらします 6,7。重要な臨床試験では、PD-L1 陽性コホート内で、CPS が 10 以上の個人は、PD-1 モノクローナル抗体による治療後に生存率がより顕著に増加することが示されています 8,9。それにもかかわらず、現在の免疫療法は依然として複数の臨床的課題に直面しています:客観的奏効率(ORR)は一般に20%未満、二次耐性率は40%〜60%と高い、不完全なバイオマーカー予測システム(既存のバイオマーカーは潜在的な受益者の30%〜40%しか特定できません)、および免疫関連有害事象(irAE)の管理の難しさ10,11,12,13,14.二重免疫チェックポイント遮断 (PD-1/CTLA-4 阻害の併用など) または化学免疫療法レジメンは奏効率を 40%-60% に高めることができますが、患者の約半数は依然として持続的な臨床的利益を達成できません15。したがって、マルチオミクス特徴に基づく精密分類システムの確立、新しい予測バイオマーカーの発見、および新しい免疫チェックポイントの同定は、GC 免疫療法の臨床転帰を改善するための重要な研究の方向性となっています。

レクチン様転写物 1 (LLT1) は C 型レクチン関連タンパク質であり、ナチュラル キラー (NK) 細胞受容体ファミリーの構成要素である CD161 が同定された結合パートナーとして機能します。その合成に関与するCLEC2D遺伝子は、特定のエクソンをバイパスする選択的スプライシングイベントを通じて5つの異なるアイソフォームを生じさせます。LLT1として知られるバリアント1は、細胞膜16,17に存在する唯一のバリアントとして検証されています。LLT1 発現は、主に B リンパ球、NK 細胞、樹状細胞 (DC)、特定の T 細胞集団 (活性化および制御性 T 細胞を含む)、単球、マクロファージなどのさまざまな免疫細胞型で観察され、特定の悪性細胞や炎症エピソード中にも観察されます18。初期の発見は、LLT1がToll様受容体(TLR)刺激後にDCおよびB細胞でアップレギュレートされることを示しています。LLT1とCD161の結合は、NK細胞を介した細胞毒性を抑制することが示されており、免疫応答の調節に関与していることが示唆されています18。B細胞では、LLT1の発現はウイルス感染または炎症刺激によってアップレギュレートされます。抗原提示細胞(APC)として機能する場合、LLT1-CD161相互作用は、T細胞増殖またはIFN-γ産生を共刺激しながらNK細胞機能を抑制することにより、二重の免疫調節効果を発揮します19。

LLT1 は、トリプルネガティブ乳がん、神経膠芽腫、B 細胞非ホジキンリンパ腫など、さまざまながん細胞に存在することが知られています。このタンパク質は、NK 細胞に見られる CD161 受容体と結合し、がん細胞を破壊する能力を効果的にブロックし、免疫応答の回避を助けます 20,21,22。HPV 陰性中咽頭扁平上皮癌における注目すべき観察は、LLT1 の可変発現であり、免疫組織化学的研究によると、これは三次リンパ構造 (TLS) 内で高度に発現した場合に予後に良好な有意を示しますが、腫瘍細胞上での LLT1 の存在は予後不良に関連しています23。さらに、非小細胞肺がん (NSCLC) の文脈では、LLT1 はがん細胞自体では検出されませんが、腫瘍微小環境 (TME) 内で検出され、その mRNA 発現レベルは予後が良好になります24。

Mathewson et al. 神経膠腫研究で実証されたように、CD161 をブロックすると、in vitro での 神経膠腫細胞の T 細胞媒介性殺傷が強化され、 in vivo での抗腫瘍機能が改善され、免疫チェックポイント標的としての CD161 の治療可能性が強調されています25。LLT1がCD161の標準リガンドであることを考えると、18免疫治療標的としてのLLT1の役割は真剣に検討する必要があります。免疫療法における PD-1 と PD-L1 の間の重要な相互作用と同様に、胃がんにおける LLT1 の生物学的機能と免疫療法の結果との相関関係を調査することは、重要な臨床的価値を持っています。

この研究は、mRNA とタンパク質レベルの両方の調査を統合して、胃がん腫瘍微小環境内の LLT1 発現パターンの包括的な分析を提供します。進行胃がんの予後バイオマーカーとしてのLLT1の可能性を体系的に評価し、免疫療法の有効性に対する予測値を評価します。これらの洞察は、その臨床的翻訳の可能性をより深く理解するのに役立ちます。

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プロトコル

ヒトを対象とした研究は、東呉大学第一附属病院の倫理委員会によって審査され、承認されました(承認番号2019026)。東呉大学第一附属病院の倫理審査委員会は、このデータ使用の倫理審査の免除を承認または許可しました。さらに、すべての参加者からインフォームドコンセントが得られました。

バイオインフォマティクスデータ解析
TCGAおよびTumor IMmune Estimation Resource(TIMER)データベースの徹底的な汎がん発現分析検査の後、LLT1の挙動は、特に胃がんに焦点を当てて、さまざまながんタイプにわたって調査されました。TISIDB データベースを利用して、LLT1 発現レベルと胃がんのさまざまな分子サブタイプとの相関関係を調査しました。患者の臨床的特徴と LLT1 発現との相関関係は、R プログラミングを通じて TCGA データを使用してさらに分析されました。GO および KEGG 分析を使用して、胃発がんにおける LLT1 の機能的役割を調査しました。さらに、ESTIMATE (発現データを使用した MAlignant 腫瘍組織におけるストロマル細胞および免疫細胞の推定) アルゴリズムを使用して、LLT1 発現パターンに従って腫瘍組織における免疫細胞および間質細胞浸潤レベルを定量化しました。CIBERSORT アルゴリズムを利用したさらなる分析を実施して、LLT1 発現レベルと腫瘍微小環境内の特定の免疫細胞浸潤パターンとの相関関係を評価しました。TCGAデータセットとR統計プログラミング(v4.4.1)を使用して包括的なバイオインフォマティクス分析を実行し、LLT1発現プロファイルと免疫調節バイオマーカーの間の潜在的な相関関係を調べました。最後に、TCIA (The Cancer Immunome Atlas) データベースを利用して、LLT1 発現が PD-1/PD-L1 免疫チェックポイント遮断療法に対する反応を予測できるかどうかを調査しました。

GAC検体と組織マイクロアレイ(TMA)の構築
次のように2セットの組織マイクロアレイデータを生成しました。

最初のセットは、2011 年に手術を受けた GAC 患者 268 人の検体を遡及的に分析しました。病理学者はパラフィンブロックを選択し、腫瘍コア領域を特定し、それらを組織マイクロアレイに構築しました。個々のサンプル部位には、性別、年齢、新生物の寸法、腫瘍性分化の程度、がんの進行期、浸潤の深さ、リンパ管の関与、遠隔転移の存在など、関連する臨床パラメーターを細心の注意を払って監視するために、個々のサンプル部位に個別の識別子が割り当てられました。全生存期間 (OS) は、治療の開始から死亡の発生または 2017 年 12 月の締切日までの間隔として定義されました。包括的なOSデータは、198人の参加者のサブセットに対してのみ利用可能であったことを強調する必要があります。

2番目のセットには、2016年から2023年の間に東呉大学第一付属病院で外科的/内視鏡的切除を受けた未治療の進行性GC患者115人が含まれていました。病理学者はパラフィンブロックを評価し、疾患の進行を綿密に追跡しながら組織マイクロアレイを構築しました。特に、すべての検体は術前治療の前に採取され、術後治療は主にPD-1モノクローナル抗体と化学療法の併用で構成されていました。

すべての外科的切除標本は胃の前庭部から採取されました。すべてのサンプルを中性緩衝ホルマリンに固定し、パラフィンに包埋しました。H&E染色切片の評価に基づいて、2人の上級病理学者がパラフィン包埋標本から最も代表的な組織領域を独自に特定しました。組織マイクロアレイ (TMA) は、自動組織アレイヤーを使用して構築され、組織コアは事前定義されたモジュールに従って TMA ブロック内に正確に配置されました。最後に、完成したTMAブロックを経験豊富な組織技師によって厚さ4μmで切片化しました。

免疫組織化学(IHC)およびマルチプレックス免疫蛍光(mIHC)
免疫組織化学的および多重免疫蛍光アッセイは、構築された組織マイクロアレイ上で実施されました。IHC染色は、以前に確立された方法論に従って実施されました26。マイクロアレイパラフィン切片の最初のセットをスライドガラスに移し、72°Cで1時間焼成しました。切片をキシレンで脱パラフィンし、連続的に増加したエタノール希釈液で再水和した後、ペルオキシダーゼブロッキング溶液を30分間適用することにより、内因性ペルオキシダーゼ活性をブロックしました。抗原回収は、スライドをクエン酸抗原回収溶液(pH 6.0)中で110°Cで3分間沸騰させることによって行いました。5%BSAブロッキングバッファーでブロッキングした後、切片をマウス抗ヒトCLEC2Dモノクローナル、マウス抗ヒトCD3モノクローナル(すぐに使用)、マウス抗ヒトCD4モノクローナル(すぐに使用)、ウサギ抗ヒトCD8モノクローナル(すぐに使用)、マウス抗ヒトCD11cモノクローナル(1:50)、マウス抗ヒトCD19モノクローナル(すぐに使用)、マウス抗ヒトCD31モノクローナル(すぐに使用)、 マウス抗ヒトCD56モノクローナル(すぐに使える)、マウス抗ヒトCD68モノクローナル(すぐに使える)、ウサギ抗ヒトFoxp3モノクローナル(1:50)、マウス抗ヒトIL-17モノクローナル(1:50)、マウス抗ヒトIFN-γモノクローナル(1:50)、マウス抗ヒトKi67モノクローナル(1:50)、マウス抗ヒトPD-L1モノクローナル(すぐに使える)4°Cで一晩27,28.次に、スライドを洗浄し、西洋わさびペルオキシダーゼ標識二次抗体(抗マウスおよびウサギ)と室温で30分間インキュベートした。インキュベーション後、サンプルを洗浄し、EnVision検出システムを免疫検出に使用しました。顕微鏡下でチップに茶色の領域が現れ始めたら、注意深く観察する必要があります。茶色の領域が増加しなくなったら、発色反応を停止する必要があります。スライドはメイヤーのヘマトキシリンで対比染色され、中性接着剤で取り付けられました。陰性対照では、一次抗体の代わりにマウスまたはウサギのIgGを使用しました。陽性対照はヒト扁桃腺組織でした。マイクロアレイ切片の2番目のセットは、マルチプレックス免疫組織化学(mIHC)に使用されます。前述の抗原検索およびブロッキング条件を再利用することで、抗体パネルはPD-L1(480 nm)、CD161(520 nm)、LLT1(570 nm)、PD-1(620 nm)、CD8(690 nm)、およびPAN-CK(780 nm)としてスペクトル的に最適化されます。一次抗体を、元のプロトコル29と同じ条件下(新たに導入されたPANCKおよびCD161を除く)で、推奨される1:100希釈でインキュベートし、続いてチラミドシグナル増幅(TSA)蛍光染色を行いました。蛍光染色の各ラウンドの後、抗体ストリッピングが実行され、続いて抗原回収、内因性ペルオキシダーゼブロッキング、および非特異的標的ブロッキングが繰り返されてから、次の一次抗体をインキュベートします。マルチプレックス免疫組織化学を行う場合、3つのポイントが重要です:蛍光色素ごとに事前実験を実施する必要があり、強く発現した抗体は弱い蛍光シグナルと対になり、弱く発現した抗体は強い蛍光シグナルと対になり、各蛍光マーカーを染色した後、染色結果は光保護条件下で顕微鏡で観察する必要があります。6番目の蛍光色素で染色した後、DAPI対比染色を標識細胞核に適用し、スライドをマウントします。最後に、すべての組織マイクロアレイをデジタル病理スキャナーを使用してスキャンし、AI を活用したデジタル病理画像解析ソフトウェアで分析しました。

IHC/mIHC染色評価
染色結果は、2 人の専門病理学者によって二重盲検法で解釈されました。彼らは、高倍率対物レンズ (200 倍の倍率) または対応する蛍光設定 (200 倍) を使用して染色の深さを測定し、0 (染色なし) から 3 (強烈な染色) の範囲のスコアを割り当てました。胃癌サンプル内のLLT1陽性細胞の画分は、0(<5%)、1(5-25%)、2(26-50%)、および3(>50%)の4つの層別化に分けられました。免疫反応性スコア (IRS) は、LLT1 陽性細胞の染色深度と割合の積から導き出されました。スコアがゼロの検体は陰性とみなされましたが、スコア 1-4 は弱発現、5-7 は中程度、8-9 は強い発現を示しました。Ki67やCD3などの他のマーカーの発現を評価するためにも、同じ基準が適用されました。評価とグループ化の方法に基づいて、サンプルは強い(IRS8-9)、中程度(IRS5-7)、弱い(IRS1-4)、または発現なし(IRS0)とラベル付けされました。スコアが最も低い患者 (IRS≤4) は低発現グループに割り当てられ、スコアが高い患者 (IRS≥5) は高発現グループに割り当てられました。

ただし、PD-L1マーカーについては、CPSを使用して別のアプローチが採用されました。このスコアは、100 倍にスケールアップされた生存腫瘍細胞の総数に対する PD-L1 陽性細胞 (腫瘍細胞、免疫細胞、および間質細胞を含む) の比率によって決定されました。CPS が 5 を超える個人は高発現コホートに配置され、CPS が 5 以下の個人は低発現コホートにグループ化されました。

免疫療法反応のグループ化
固形腫瘍の反応評価基準バージョン 1.1 (RECIST 1.1) に沿って、患者の標的病変の評価は 4 つの異なるカテゴリに分類されます: (a) 完全奏効 (CR): すべての標的病変が完全に消失しており、すべての病理学的リンパ節 (標的と非標的の両方) の短軸は 10 mm 未満でなければなりません。(b) 部分奏効 (PR): 測定可能なすべての標的病変の累積直径がベースライン測定値から少なくとも 30% 減少しています。(c) 進行性疾患 (PD): このカテゴリは、標的病変の累積直径が研究中に記録された最小値と比較して少なくとも 20% 増加した場合に適用されます (最小値を表す場合はベースラインを基準として使用)、絶対増加は 5 mm 以上です。さらに、新しい病変の出現も進行性疾患 (PD) として分類されます。(d) 病変の安定 (SD): 標的病変の累積直径は、研究全体を通じて PR の減少基準も PD の増加基準も達成していません。2つの層別化手法が実装されました。最初の方法は、PD (n=53) および SD (n=46) 患者が非レスポンダー グループ (n=99) で構成され、PR (n=15) および CR (n=1) 患者がレスポンダー グループ (n=16) を形成しました。2 番目のアプローチでは、疾患の進行に応じて患者を分類し、CR、PR、および SD 患者を免疫療法の有効コホート (n=62) として分類し、PD 患者を免疫療法の非効果コホート (n=53) として分類しました。

統計分析
実証的評価は、R コンピューティング プラットフォーム (バージョン 4.4.1) と SPSS Statistical ソフトウェア パッケージ (バージョン 27.0) を使用して実行されました。研究コホート間の格差は、カイ 2 乗分割表分析を適用することによって調査されました。Spearman のノンパラメトリック相関手法を使用して、変数間の関連の強さと方向を調査しました。生存時間の変動は、有意性のログランク検定によって補完されたカプラン・マイヤー推定量の構築を通じて分析されました。その後、コックス比例ハザード回帰モデルを使用して、患者の生存転帰に影響を与える可能性のある要因を特定しました。統計的有意性は、<0.05 の両側 p 値しきい値として事前に定義されていました。調査結果の堅牢性を確保するために、潜在的な交絡変数を評価するための包括的な感度分析が実施され、それに応じて多変量モデルが調整されました。さらに、臨床理解を促進するためにハザード比の明示的な解釈が提供され、特定された危険因子が患者の予後に及ぼす実際的な影響が強調されました。

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結果

CLEC2D mRNA発現と胃癌サブ分類/臨床パラメータとの関連
TIMERデータベースによって促進されたTCGAデータセットを利用した最初の包括的ながん検査では、図1Aに示すように、さまざまな癌組織にわたるCLEC2D転写産物レベルの顕著な上昇が明らかになりました。この観察は、CLEC2D がさまざまながんの病因と進化に関与する一般的な発がん因子として機能する可能性があることを示唆しています。TCGA-STAD データセットを使用して、癌性胃組織と非癌性胃組織間の CLEC2D mRNA レベルの綿密な比較が実施されました。408の比類のないサンプルの評価により、腫瘍標本におけるCLEC2D mRNA発現が正常なサンプルと比較して統計的に有意に増加することが明らかになりました(P < 0.01、図1B)。これらの結...

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ディスカッション

私たちの研究では、腫瘍組織で正常組織よりも高い CLEC2D mRNA 発現が示されました。胃がんの免疫組織化学的結果により、腫瘍組織における LLT1 タンパク質の発現が高いと予後が良好になり、腫瘍微小環境における免疫細胞浸潤と正の相関があることが明らかになりました。免疫療法を受けている胃がん患者の組織の分析により、LLT1 の発現が高いほど免疫療法反応の改善が予測されることが示されました。私たちの研究は、胃がん組織におけるLLT1の発現と臨床的意義を調査し、胃がんの臨床免疫療法に新たな評価マーカーを提供しました

CLEC2D mRNA発現レベルと対応するタンパク質レベルとの間に不一致が観察されました。この矛盾は、CLEC2D遺伝子の5つの選択的にスプライシングされた変異体の存在に起因する可能性がありますが、そのうちの1つだけが機能的なLLT1タンパク質をコードしています。他の4つのノンコーディングスプライスバリアントの存在は、mRNA存在量とタンパク質発現の...

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開示事項

著者らは潜在的な利益相反を報告していない。

謝辞

データサポートを提供するために、感謝の謝辞が TCGA データベースに拡張されます。この研究は、中国国家自然科学基金(助成金番号81974375)および蘇州科学技術開発計画(SKY2022129)の助成金の支援を受けました。この研究は ARRIVE ガイドラインに準拠しています。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
5% BSAブロッキングバッファー北京ソーラーバイオサイエンス&ベジンTechnology Co., Ltd.、中国SW3015
抗CD11c ZSGB-BIO、中国5D11
抗CD161アブカム、ケンブリッジ、イギリスAB302564
抗CD19  ZSGB-BIO、中国EPl69
抗CD3 ZSGB-BIO、中国LNl0
抗CD31ZSGB-BIO、中国 ウマブ30
抗CD4ZSGB-BIO、中国ウマブ64
抗CD56 ZSGB-BIO、中国UMAB83
抗CD68 ZSGB-BIO、中国KP1
抗CD8ZSGB-BIO、中国第334話
CLEC2D対策アブカム、ケンブリッジ、イギリスアブ197341
アンチ Foxp3R&D Systems、米国1054C型
抗IFN-&ガンマ; サンタクルーズバイオテクノロジーSC-74108
抗IL-17R&D Systems、米国 MAB317 
抗Ki67 ZSGB-BIO、中国8H5
抗パンサイトケラチン アブカム、ケンブリッジ、イギリスAB7753
抗PD-1アブカム、ケンブリッジ、イギリスAB137132
アンチPD-L1DAKO、デンマーク22C3
自動組織アレイ装置Estigen OU、タルトゥ、エストニアビーチャー ATA 27この装置は、主に組織マイクロアレイの構築に使用されます。
クエン酸抗原回収液Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd 、中国C752119
DAB発色剤キット AiFang Biological、中国AFIHC004
デジタルパソロジースキャナー寧波江峰生物情報技術有限公司、中国KF-FL-020この装置は主に、免疫組織化学およびマルチプレックス免疫組織化学チップのスキャンに使用されます。
GraphPad プリズム 10GraphPad Software、米国v10.0.3このソフトウェアは、カプラン・マイヤー曲線のプロット(対数ランク統計分析付き)、科学的データの視覚化、および図の準備用です。
PBSのAladdin Biochemical Technology Co., Ltd 、中国P743267
ペルオキシダーゼ遮断液AiFang Biological、中国AFIHC012
ポリマー-HRP結合ヤギ抗マウス/ウサギ二次抗体AiFang Biological、中国AFIHC001
6色7マーカーマルチプレックス免疫蛍光染色キットAiFang Biological、中国AFIHC037この試薬キットは、マルチプレックス免疫組織化学(mIHC)用に設計されています。
SPSSのIBM Corporation、米国IBM SPSS 統計 27このソフトウェアは、データの統計分析に利用されました。
R プロジェクトRコアチームV4.4.1 バージョンすべての R パッケージ、関連コード、および元のファイルがパブリック データベースにアップロードされています。
VISIOPHARMソフトウェアVisiopharm、デンマーク2025.02.2.18022 x64このソフトウェアは、主に病理画像の定量分析用に設計されています。

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