方法論記事

マウス卵母細胞減数分裂中の染色体分離の生細胞イメージング

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DOI：

10.3791/68847

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2025年10月10日

 , 
1The Christopher Chen Oocyte Biology Research Laboratory, UQ Centre for Clinical Research, The University of Queensland

この記事について

サマリー

ここでは、クロマチンにH2B-RFP、紡錘体可視化にSiR-Tubulinを使用して、マウス卵母細胞の染色体分離を研究するための生細胞イメージング技術を要約します。サンプルの調製、マイクロインジェクション、培養、イメージングのセットアップ、および分析について詳しく説明し、減数分裂染色体動態の高解像度で光毒性を最小限に抑えたイメージングを実現するための実用的なガイドを提供します。

要約

卵母細胞減数分裂中の正確な染色体分離は、適切な胚発生を確保し、異数性関連疾患を予防するために不可欠です。蛍光標識技術と組み合わせた生細胞イメージングは、減数分裂染色体動態を高い時空間分解能で研究するための強力なアプローチとなっています。このプロトコルでは、クロマチン標識のためのヒストンH2B-RFPと紡錘体追跡のためのSiR-チューブリンの使用に焦点を当てて、生きたマウス卵母細胞における染色体分離を視覚化するための主要な方法論を要約します。サンプル調製、mRNAマイクロインジェクション、卵母細胞培養、生細胞イメージングチャンバーのセットアップ、および共焦点顕微鏡設定の手順について説明し、これらはすべて、光毒性を最小限に抑えながら高解像度イメージングを実現するために最適化されています。さらに、光毒性、画像処理、減数分裂イベントの定量分析などの重要な実験上の考慮事項を強調します。このプロトコルは、現在の方法論の包括的な評価を提供することにより、生きた卵母細胞の染色体動態を調査し、減数分裂研究の精度と再現性を向上させようとしている研究者にとって実用的なガイドとして機能します。

概要

卵母細胞減数分裂中の染色体および紡錘体のダイナミクスを正確に視覚化することは、女性の配偶子の成熟と異数性リスクを支配するメカニズムを理解するために重要です1,2,3,4,5。哺乳類の卵母細胞は、胚小胞の破壊(GVBD)、染色体の凝縮、紡錘体集合、非対称分裂など、高度に調整された一連の減数分裂イベントを受けます6。固定時点イメージングはこれらのプロセスの貴重なスナップショットを提供しますが、時間分解能に欠けており、サンプリング間隔間で発生する一時的または急速なイベントをキャプチャすることはできません。対照的に、蛍光標識染色体および微小管の生細胞イメージングは、これらの動的プロセスをリアルタイムで監視するための強力なアプローチを提供します2,3,7。これにより、個々の卵母細胞内の減数分裂イベントのタイミング、期間、シーケンスを直接観察でき、固定サンプルでは見逃される可能性のある一過性イベントの特定が可能になります。ただし、マイクロインジェクションおよびイメージング中に卵母細胞の生存率と生理学的完全性を維持するには、細心の注意を払った取り扱いと最適化された条件が必要です8。

このプロトコルは、マウス胚小胞(GV)期の卵母細胞にH2B-RFP cRNAをマイクロインジェクションし、クロマチンの蛍光標識を可能にし、その後、減数分裂全体を通して染色体と紡錘体の挙動のタイムラプス共焦点イメージングを可能にするための包括的なワークフローを記述しています4。この方法は、ホルモンプライミング、卵母細胞単離、制御された温度条件下でのマイクロインジェクション、および環境制御を備えた共焦点顕微鏡を使用したライブイメージングなどの主要なステップを統合しています4,9。この論文の全体的な目標は、生きたマウス卵母細胞の染色体および紡錘体の動態をリアルタイムで視覚化するための堅牢で再現性のあるワークフローを提示し、減数分裂調節と異数性リスクの根底にある分子および細胞メカニズムを調査するためのプラットフォームを提供することです。

このプロトコルは高い時間的および空間的分解能を提供しますが、外因性レポーターの発現に依存しているため、内因性タンパク質ダイナミクスを完全に複製できない可能性があり、過剰発現すると天然の減数分裂プロセスを妨げる可能性があります。研究者はこれらの制限を考慮し、可能な限り補完的なアプローチを使用して調査結果を検証する必要があります。

このプロトコルは、減数分裂メカニズム、染色体分離エラー、および卵母細胞の質に対する遺伝的または環境的摂動の影響を調査する研究をサポートするように設計されています。生殖生物学における基礎研究とトランスレーショナルアプリケーションの両方に堅牢なプラットフォームを提供します。

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プロトコル

すべての実験は、地元の動物倫理委員会によって承認されたプロトコルに従って実施されなければなりません。実験手順は、3Rの原則(置換、削減、改良)に厳密に従う必要があります。マウスは、標準化された環境条件(22°C、湿度60%)で、餌や水に自由にアクセスできる認定動物施設に収容する必要があります。

1. 卵母細胞の採取と準備

注:すべての機器と試薬は滅菌でなければなりません。実体顕微鏡下でマウスピペットを使用してすべての卵母細胞の取り扱いを行います( 材料表を参照)。すべての培地液滴を鉱物油で覆います(図1A-E)。

  1. ホルモン刺激
    1. 卵母細胞採取の46〜48時間前に、妊娠中の牝馬の血清ゴナドトロピン(PMSG; 材料表を参照)の5国際単位(IU)を3〜4週間齢の雌マウスに腹腔内注射します。
      注:B6CBAF1マウス(C57BL / 6J×CBA / CaCrlのF1子孫)は、優れた卵母細胞収量と良好な成熟特性のために好ましい。
  2. 培地の調製
    1. 0.2 μmシリンジフィルターを使用して、M2およびM16培地( 材料 表を参照)をろ過します。100 mMのストックから希釈することにより、IBMXを100 μMの最終濃度まで補充します。
    2. 35 mmのプラスチック製組織培養皿に5〜6滴のM2-IBMX(各~30 μL)と3滴のM16-IBMXを調製します。すべての液滴を鉱物油で覆います。卵母細胞を単離する前に、M2-IBMX皿を37°Cのホットブロック(図1A)に置き、M16-IBMX皿を37°C、5%CO2 インキュベーターに少なくとも30分間置きます(図1C)。
    3. 卵巣郭清用に800〜1,000 μLのM2-IBMX(油なし)を含む追加の皿を準備します。実体顕微鏡に取り付けられた37°Cの加熱プレートに置きます(図1B)。
  3. 卵母細胞の分離
    1. 頚部脱臼によるマウスを犠牲にする。下腹部を70%エタノールで拭き、皮膚と腹膜に小さな水平切開をして腹腔に入ります。切開部の端を指で引き離して切開部を伸ばします。
    2. 鉗子を使用して、腸を邪魔にならないように掃き出し、腎臓の上極にある上腹部の卵巣を露出させます。細い鉗子とマイクロハサミを使用して、組織への損傷を避けながら卵巣を慎重に切除します。卵巣を100〜200 μLの予熱したM2-IBMX培地を含む1.5 mLチューブにすぐに移します。
    3. 卵巣を予熱したM2-IBMX培地1 mLに移し、加熱された解剖顕微鏡ステージに移動します(図1B)。脂肪組織と卵管の残骸を慎重に取り除きます。
      注: 卵胞や卵母細胞への損傷を防ぐために、卵巣を優しく扱ってください。動物室から実験室への移送中は、卵巣を暖かい培地に維持します。
    4. 27 Gの針を使用して卵胞に穴を開けることにより、卵丘 - 卵母細胞複合体(COC)を放出します(図1A-B)。COCを収集し、M2-IBMXの25〜30 μLの液滴に移します(図1D)。
    5. 狭口径ガラスパスツールピペットでピペッティングを繰り返すことにより、卵丘細胞を解離します(図1E)。
      注: 口ピペッティングは卵母細胞の取り扱いに一般的に使用されますが、特に口ピペッティングが制限されている、または実行不可能な環境では、機械式ピペッターまたはマイクロマニピュレーターが代替手段を提供します。これらの代替案は、同様のプロトコルで首尾よく採用されています10,11。
    6. 20倍〜40倍の倍率の実体顕微鏡を使用して、より大きな直径と中央に配置されたGVに基づいて、完全に成長したGVステージの卵母細胞を識別して選択します。光から保護した37°Cのホットブロック上の新鮮な30 μLのM2-IBMX液滴に移します。
      注:生理学的完全性を維持するために、すべての手順を通じて卵母細胞を37°Cに維持します。すべての媒体を予熱し、すべての顕微鏡ベースの取り扱いとマイクロインジェクションに温度制御されたステージを使用します。
    7. マイクロインジェクションを行う前に、37°Cの加熱ステージで卵母細胞を20分間回復させます。

2. H2B-RFP cRNA調製

注:すべての手順は、清潔でRNaseのない環境で手袋を着用して実行してください。RNaseを含まない水と試薬のみを使用し、できればRNase阻害剤の存在下で作用します。

  1. H2B-RFPプラスミド( 材料表を参照)を、インサートに隣接するプライマーを使用したサンガーシーケンシングにより配列検証します。有能な 大腸菌 (DH5αなど)を形質転換し、単一のコロニーを選択し、適切な抗生物質を含むLBブロスで増殖させることにより、プラスミドを増幅します。標準のミディまたはマキシ調製キットを使用してプラスミドを精製します。詳細な手順については、Green and Sambrook12 を参照してください。
  2. 製造元の指示に従って、市販のミニプレップキットを使用してプラスミドDNAを精製します。分光光度計を使用してDNA濃度を定量します。
  3. ベクター骨格を1回切断する適切な制限酵素を使用して、インサートの下流で2〜4 μgのプラスミドDNAを線形化します(H2B-RFPにはNotIを使用しました)。 表1 に記載されているように、適切なバッファーと酵素濃度を使用して消化反応を設定し、37°Cで1〜2時間インキュベートします。アガロースゲル電気泳動により完全な線形化を確認します。複数のバンドは消化が不完全であることを示します。市販のキットを使用する場合は、製造元の指示に従ってください。
    注:インサートの下流で最適な消化条件下で正確に切断する制限酵素を選択してください。アガロースゲル上に小さなアリコートを流すことにより、線形化を検証します。
  4. 消化反応を1 μLのプロテイナーゼK(10 μg/mL)、5.3 μLの10%SDS、および50 μLのヌクレアーゼフリー水と50°Cで1時間インキュベートすることにより、RNase汚染を除去します。
    注:このステップは、RNaseおよびタンパク質汚染物質を除去するために不可欠です。RNaseフリー試薬のみを使用し、クリーンな作業条件を維持してください。
  5. 消化したDNAをフェノール:クロロホルム:イソアミルアルコール(25:24:1)で抽出し、続いてクロロホルム抽出します。
    注:毒性を最小限に抑え、サンプル処理を合理化するために、フェノール/クロロホルム抽出の代わりに、市販のカラムまたはビーズベースの精製方法(シリカ膜や磁気ビーズシステムなど)を使用することもできます。
  6. 3M酢酸ナトリウムと100%エタノールを添加してDNAを沈殿させます。-80°Cで少なくとも2時間インキュベートします。
  7. 12,000〜14,000 x g で4°Cで10分間遠心分離してDNAをペレット化します。 ペレットを70%エタノールで洗浄し、4°Cで5分間同じ速度で再度遠心分離し、短時間(2〜5分)自然乾燥させ、6 μLのRNaseフリー水に再懸濁します。
    注:エタノール沈殿および遠心分離後、チューブの底に目に見える半透明または白色のペレットが形成されるはずです。ペレットが見られない場合は、より高速で遠心分離を繰り返すか、DNA濃度を再評価します。
  8. 製造元のプロトコルに従って、T7 mMESSAGE mMACHINEキット(表2を参照)を使用して in vitro 転写を実行します。
  9. 転写反応を37°Cで少なくとも2時間インキュベートします。転写物の長さが5 kbを超える場合は、インキュベーションを延長します。
  10. 10 μL反応量あたり1 UのDNase Iを使用し、37°Cで15分間インキュベートし、DNase処理によりテンプレートDNAを除去します。
  11. 塩化リチウム沈殿13を用いて合成したcRNAを精製する。沈殿と遠心分離の後、チューブの底に目に見える半透明または白色のペレットが形成されるはずです。RNAペレットを70%エタノールで洗浄します。
  12. 最終的なcRNAペレットを20 μLのRNaseフリー水に再懸濁します。RNA濃度を測定し、RT-PCRを実行してからPCR産物の配列決定を行うことで、ポリ(A)テールの存在と長さを確認します。cRNAを1 μLの容量に分注し、-80°Cで保存します。

3. 卵母細胞の調製とマイクロインジェクション

注:手順全体を通して、卵母細胞の品質を維持するために、予熱培地と温度制御された顕微鏡ステージを使用して卵母細胞を37°Cに維持します。

  1. 準備
    1. H2B-RFP cRNAアリコートを氷上で解凍し、短時間遠心分離し、目的の濃度(例:250 ng/μL)に希釈します。
      注:最適なcRNA濃度は、構築物、発現系、および実験目標によって異なる場合があります。十分なシグナルを確保しながら過剰発現アーチファクトを最小限に抑えるために、cRNA濃度を滴定(例えば、50-300 ng/μLの範囲内)することをお勧めします。ユーザーはまた、コンストラクト発現後の卵母細胞の健康状態と生存率の機能的読み取り値として、減数分裂の進行 (GVBD、紡錘体形成、極体押し出しなど) を監視する必要があります。cRNAの注入濃度は通常0.2〜1 μg/μLの範囲であり、最適な結果は0.5 μg/μLで達成されることが多いことが報告されています2,3,4,5,7,8,9。
    2. ピペットプーラーを使用して、ホウケイ酸ガラス毛細血管(OD = 1.5 mm、ID = 0.86 mm、長さ= 100 mm)からマイクロインジェクション針を調製します(図2A)。
      注:縦型ピペットプーラーを使用します( 材料表; 図2A)。経験的にプルパラメータを最適化します。針先は、卵母細胞の損傷を最小限に抑えるのに十分な細さが必要ですが、目詰まりを防ぎ、スムーズなcRNA送達を可能にするのに十分な幅が必要です。
    3. RNaseフリーのマイクロローダーチップを使用して、0.5〜1.5 μLのcRNA溶液を針先にロードします。注入前に気泡を取り除いてください。
  2. マイクロインジェクション皿のセットアップ
    1. 100 μLのM2-IBMX培地でマイクロインジェクションディッシュを準備し、蒸発と浸透圧の変化を防ぐために鉱物油で完全に重ねます。
  3. 卵母細胞マイクロインジェクション
    1. 保持ピペットと注入ピペットをマイクロマニピュレーターシステムに取り付けます(図2B、C)。
    2. マイクロインジェクション皿を顕微鏡ステージに置きます。マウスピペットを使用して、卵母細胞をM2-IBMX液滴に移します。
    3. 保持ピペットと注入ピペットを卵母細胞と同じ水平面に持っていきます。
    4. 保持ピペットで穏やかに吸引して1つの卵母細胞を捕捉します(図2BおよびC)。
    5. 注射針を透明帯と卵に挿入し、細胞質を標的にし、核を避けます。
    6. 細胞内電位計を介して負の静電容量の短いパルスを使用して、H2B-RFP cRNAを送達します(図2B-E)。注入量は卵母細胞量の約5%に保ちます。注射の成功は通常、細胞質の小さいながらも明確な分散として見られます。膜の損傷を避けるために、射出圧力と射出タイミングを調整してください。
    7. 膜の裂け目を最小限に抑えるために、同じ角度で針を迅速かつスムーズに引き抜きます。
    8. 保持ピペットから卵母細胞を解放し、注入された卵母細胞と注入されていない卵母細胞を区別するために、皿の別の領域に再配置します(図2F)。このセットアップでは、注入されていない卵母細胞を皿の上部に置き、注入された卵母細胞を下部に移動させることでワークフローを整理します。
    9. 残りのすべての卵母細胞について、手順3.3.4〜3.3.8を繰り返します。注射後の生存率は、技術とmRNAの特性によって異なります。60%〜80%の生存率が期待できます。
  4. 注入後の取り扱い
    1. 注入された卵母細胞を、クリーンな培養皿内のM16-IBMX培地の新鮮な液滴に移します。
    2. H2B-RFP発現を可能にするために、37°Cで1〜4時間インキュベートします。cRNA濃度、転写物サイズ、発現効率に基づいてインキュベーション時間を調整します。

4. 減数分裂中のH2B-RFP標識染色体のタイムラプスイメージング

  1. 機器と媒体の準備
    1. 使用前に、共焦点顕微鏡ステージインキュベーターと環境チャンバーを37°Cに≥30分間予熱します(図3A)。ガスコントローラーの電源を入れ、ガスの流れを開始して、チャンバーを5%CO2 および周囲O2に維持します。長時間の生細胞イメージング中に卵母細胞の健康をサポートするために、チャンバーが加湿されていることを確認してください。
    2. 培養滴の調製:SiR-チューブリン(最終濃度100 nM)を添加した50 μLのM16培地を5〜6滴35 mmのペトリ皿に入れます。鉱物油で重ねます。別のガラス底イメージング皿に、M16 + SiR-チューブリンの5 μLを3滴置き、鉱物油で重ねます。使用前に両方の皿を37°Cで≥30分間予熱してください。
  2. 卵母細胞移植と洗浄
    1. 卵母細胞の洗浄:注入された卵母細胞を50 μL M16 + SiR-Tubulin滴に順次移し、残留IBMXを洗い流します(5回の洗浄を推奨)。卵母細胞の損傷を避けるために、優しく洗浄してください。
      注:残留IBMXは減数分裂の再開を阻害する可能性があるため、徹底的な洗浄が重要です。
    2. 最終転移:洗浄後、15〜20個の卵母細胞を、予熱したガラス底イメージング皿内のM16 + SiR-チューブリンの5 μL滴に移します。
  3. 顕微鏡のセットアップ
    1. イメージングディッシュの取り付け:ガラス底ディッシュを共焦点顕微鏡ステージに置きます(図3A)。卵母細胞を~10分間沈静させます。
    2. ステージの位置決め:明視野イメージングを使用して、卵母細胞を視野内の中心に配置します。顕微鏡ソフトウェアを使用して位置を保存します。
      注:この研究では、ライカTCS SP8共焦点顕微鏡とHC PL APO 20x / 1.0 NA水浸対物レンズを使用しました。ただし、入手可能性に応じて、同様の仕様の他の共焦点システムや対物レンズを使用できます。
    3. 水浸対物レンズのウォーターポンプセットアップ:水浸対物レンズを使用する場合は、ウォーターポンプシステムを操作して、5〜10分間隔で断続的に水を供給します。この周期的な流れにより、レンズとガラス底イメージング皿の間の水柱が維持され、乾燥を防ぎ、長期間の実験中に安定したイメージング条件が確保されます。油浸レンズの場合、この水流の設定は必要ありません。
  4. イメージング設定
    1. レーザースキャンモードに切り替えます。レーザー強度を次のように設定します:H2B-RFP(染色体)の0.5%(対物レンズで~100 μW)で561 nm。SiR-チューブリン(紡錘体微小管; 図3B、E)。
      注意: 適切なレーザー安全ガイドラインに従ってください。レーザーへの曝露を最小限に抑えて、サンプルの生存率を保護します。
  5. Zスタック取得
    1. 2〜4 μmのステップサイズで30〜50 μmに及ぶZスタックを取得します(図3B、C)。
    2. 600 Hzのスキャン速度を使用して、5〜10分間隔で画像をキャプチャします(図3B、D)。総イメージング時間は、監視される減数分裂段階に応じて12〜16時間に及ぶ可能性があり、光毒性と拡張された invitro 培養に対する卵母細胞耐性によって制限されます。
  6. シーケンシャル画像取得
    1. 顕微鏡システムでは、2つのHyD検出器でシーケンシャルスキャンを実行します。H2B-RFP:561 nmでの励起。580-630 nmで収集された発光。633 nmでのSiR-チューブリン励起;650〜700 nmで収集された発光(図3E)。
  7. タイムラプスイメージングの開始
    1. 長時間のタイムラプス取得を開始する前に、テスト画像を撮影して信号品質を確認してください。蛍光シグナルは均一に分布する必要があります:H2B-RFPはクロマチンを明確に標識する必要があり、SiR-チューブリンは過剰なバックグラウンドなしで微小管構造を強調する必要があります。短い予備イメージング実行でオートフォーカスの安定性と最小限の光退色を確認します。
    2. [ 開始] をクリックして、タイムラプス イメージングを開始します。
      注:M相のエントリをマークするGVBDは、通常、IBMXウォッシュアウトの60〜90分後に発生します(図4A)。このセットアップでは、C57BL / 6卵母細胞はGVBD後約8〜9時間で最初の極体を押し出します(図4A)。タイミングはマウスの系統や培養条件によって異なる場合があります。

5. イメージング後の処理

  1. 画像解析ソフトウェアでイメージングファイルを開くには、[ファイル] > [開く ]を選択し、イメージングセッションから .lifファイル を選択します。
  2. H2B RFPチャネルとSiR-TubulinチャネルのZ投影を生成するには、[ 処理]>[投影の生成]を選択します。投影タイプを[最大強度投影]に設定します。 RFPチャネルとSiR Tubulinチャネルの両方を選択し、[ 実行]をクリックします。
    注:DICチャンネルのZ投影は、画像がぼやける可能性があるため、実行しないでください。代わりに、最も鮮明に焦点を合わせている単一のDIC平面を特定して選択します。この集束したDIC画像をH2B-RFPおよびSiR-Tubulinチャネルの最大強度投影と組み合わせて使用すると、最適な可視化を実現します。
  3. 単一の明視野焦点面を抽出します。プロセスツールに戻り、「 編集」>「切り抜き」を選択します。 明視野チャンネルを選択し、Zスライダーを使用して最適な焦点面を見つけて、 適用をクリックします。
  4. 投影画像と明視野画像をマージするには、プロセスツールを開き、[ マージ]> [チャンネルの追加] を選択します。RFP投影法、SiR-チューブリン投影法、および単一の明視野画像を追加します。 マージされたセット を右クリックし、「 適用」をクリックします。
  5. [ ファイル] > [>画像のエクスポート] を選択して、最終的にマージされた画像をエクスポートします。高品質の非圧縮出力には、 TIFF 形式を選択します。
    注:TIFF形式でのエクスポートは、下流の分析と図の作成に推奨されます。

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結果

図4A、Bに示すように、このプロトコルは、卵母細胞中の染色体(H2B-RFP)および紡錘体微小管(SiR-チューブリン)の高品質の生細胞イメージングを可能にし、それによって減数分裂の成熟全体を通じて包括的な時空間情報を提供します。

図4AのH2B-RFPチャネルは、GVBDに続く最初のアライメント(図4A、03:00〜08:00)から後期Iでの分離(図4A、09:00黄色の矢印)、中期IIでの染色体アライメントで終了する染色体移動のすべての側面を明らかにしています(図4A、13:30)。高解像度の画像により、研究者は紡錘体微小管の再配列や微妙な染色体の位置決めなどの微細な構造を視覚化でき、減数分裂の進行、紡錘体の位置決め、極体の押し出しの研究が容易になり...

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ディスカッション

ここで提示されるプロトコルは、マウス卵母細胞のマイクロインジェクションおよび生細胞イメージングのための堅牢な方法を概説し、減数分裂中の染色体動態を高い時間的および空間的分解能で視覚化できるようにします。このアプローチの成功に重要なのは、採取やマイクロインジェクションからイメージングに至るまで、手順の各段階を通じて卵母細胞を細心の注意を払って取り扱うことです。卵母細胞は環境変動に非常に敏感であり、温度、pH、または浸透圧の偏差は、卵母細胞の生理学的完全性と発達の可能性を損なう可能性があります3,4,5,16,17。したがって、37°Cでの連続インキュベーション、予熱培地および温度制御された顕微鏡ステージの使用など、最適な条件を維持することは、長時間の...

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開示事項

著者らは開示するものは何もない。

謝辞

この研究は、クリストファー・チェン教授基金、クイーンズランド大学医学部からのスタートアップ資金、およびH.A.H.への全米保健医療研究評議会プロジェクト助成金(APP1078134年およびAPP1103689年)によって資金提供されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
1mlシリンジテルモSS+01T ツベルクリン精密なPMSG注入用シリンジ。
アガロースゲルインビトロゲン16500500DNAおよびRNAゲル電気泳動で核酸をサイズ別に分離し、H2B-RFP配列に適合させるために使用されます。
アルコールバーナーラボテックLW15557-01滅菌や口ピピットの準備に使用されます。
細菌培地(LBブロス)シグマ・アルドリッチL3022大腸菌やその他の細菌培養物の増殖に使用される標準培地。
細胞培養皿(35 × 10 mmおよび60 × 15 mm)シグマ・アルドリッチCLS430165、CLS430166卵母細胞の培養に使用されます。さまざまなサイズをご用意しています。
遠心分離機(卓上)エッペンドルフ5424R型研究室で一般的に使用される少量のサンプル用のコンパクトな遠心分離機です。
遠心分離管(15mlおよび50ml)コーニング352096, 352070遠心分離用の大型チューブで、細胞やタンパク質の処理に一般的に使用されます。
クロロホルムシグマ・アルドリッチC2432分子生物学プロトコル、特にDNA/RNA抽出で一般的に使用される溶媒。
CO2インキュベーター三洋電機 (型式:MCO-18AIC)卵母細胞培養のための制御されたCO2雰囲気を維持するように設計されたインキュベーター。
使い捨て超極細針(27 G&1/2インチ)ハンケ・サス・ウルフ4710004012採卵用の細い針
DNase I(RNaseフリー)サーモフィッシャーサイエンティフィックEN0521RNA調製物から汚染DNAを除去するために使用される酵素。
乾式加熱ブロックグラント・インスツルメンツ (モデル:QBD4)水を必要とせずにサンプルや反応を正確な温度で加熱するために使用されるブロック。
エタノール(分子生物学グレード)シグマ・アルドリッチE7023DNAおよびRNAの沈殿、および滅菌手順に使用されます。
細かい解剖はさみMet-App科学および手術器具2235マウス卵母細胞の精密解剖に使用
細い鉗子Met-App科学および手術器具2127マウス卵母細胞の精密解剖に使用
ゲル電気泳動システムバイオラッド1645050ゲル中の核酸またはタンパク質の電気泳動を行うためのシステム。
硫酸ゲンタマイシンシグマ・アルドリッチG1264細胞培養における細菌汚染を防ぐために使用される抗生物質。
ガラスパスツールピペット(230 mm)VWRの6121702卵母細胞口ピペットに使用されるガラスピペット 
IBMXのシグマ・アルドリッチI5879GVBDを予防するために用いられるホスホジエステラーゼ阻害剤
倒立顕微鏡ニコン培養皿の下から生きた細胞や生物を観察するために設計された顕微鏡。
マウス胚培養に適した軽質鉱物油シグマ・アルドリッチM5310培養中の卵母細胞を覆い、蒸発を防ぎ、温度を維持するために使用されます。
塩化リチウムシグマ・アルドリッチL9650RNA沈殿法で使用されます。
ライブセルイメージングシステムライカラスエックス高度な顕微鏡技術を使用して生細胞をリアルタイムに観察するために設計されたイメージングシステム。
M16培地(in vitro培養用)シグマ・アルドリッチM7292マウスの卵母細胞や胚の培養、その他のin vitro用途向けに設計された培地です。
マイクロ遠心チューブ(0.6mlおよび1.6ml)海王星3735.X、3745.X分子生物学や生化学のプロトコルでよく使用される遠心分離用の小容量チューブ。
マイクロ遠心チューブ(RNaseフリー)エッペンドルフ/ネプチューン022431081 (エッペンドルフ)RNA用のRNaseフリーチューブは、RNAの分解を防ぐ働きをします。
マイクロインジェクションニードルサッター機器P-30 ピペットプーラー卵母細胞への精密なマイクロインジェクションのための針
マイクロインジェクションシステムハーバード大学装置フェムトジェット、ピコポンプマウス卵母細胞にcRNAを高精度に注入するためのシステム。
ミニプレップキットキアゲン27106 (QIAprep スピン ミニプレップキット)分子生物学への応用のために細菌培養物からプラスミドDNAを単離するためのキット
口吸引器チューブアセンブリシグマ・アルドリッチA5177吸引卵母細胞用
ペレットペイントメルク・ミリポア69049-3遠心分離中のペレット形成を可視化するための製品。
フェノール:クロロホルム:イソアミルアルコールサーモフィッシャーサイエンティフィック15593031相分離のためのH2B-RFP抽出に使用される溶液。
H2B-RFPをコードするプラスミドアドジーンプラスミド #20972 赤色蛍光タンパク質(RFP) で染色体を標識するために使用されるプラスミド。
PMSGのプロスペックHOR-272マウスの過懸濁用 
プロテイナーゼKサーモフィッシャーサイエンティフィックEO0491タンパク質を消化するために使用される酵素で、DNA/RNA抽出手順で一般的に使用されます。
制限酵素 NotIニューイングランドバイオラボ(NEB)R3189SDNAクローニングおよび分子生物学への応用で使用される制限酵素で、H2B-RFPプラスミド線形化に使用されます。
RNase阻害剤(オプション)ニューイングランドバイオラボ(NEB)M0314SRNA関連実験中のRNA分解を防ぐために使用される酵素。
RNaseフリーの手袋VWR / フィッシャーサイエンティフィックサイズにより異なるRNA操作プロトコルで使用される、RNase汚染を防ぐために処理された手袋。
RNaseフリーのピペットチップアクシジェン / サーモフィッシャーT-300-R-SRNA関連アプリケーション向けにRNase汚染がないように設計されたピペットチップ。
RNaseフリーの水サーモフィッシャーサイエンティフィックAM9932分解を避けるためのRNAの働きに不可欠なRNase酵素を除去するために精製された水。
SDS(10%)シグマ・アルドリッチL3771電気泳動やその他の実験でタンパク質の変性に使用されるドデシル硫酸ナトリウム。
SiR-チューブリンスピロクロムSC002紡錘体の生細胞イメージングのためにチューブリンに特異的に結合する蛍光色素
酢酸ナトリウム(3 M)シグマ・アルドリッチS7899緩衝液として、また分子生物学の手順でDNAの沈殿に使用されます。
分光 光度 計サーモフィッシャー(NanoDrop)ND-ワン-W吸光度を測定して核酸、タンパク質などの物質を定量するために使用される機器。
実体顕微鏡ライカ・マイクロシステムズ  M165C型標本を低倍率で3次元で観察するために設計された顕微鏡で、解剖に役立ちます。
シリンジフィルターユニット(0.22-µm)メルクSLGP033RS特に微生物学および分子生物学の用途において、液体の無菌ろ過に使用されます。
シリンジとニードルの組み立てテルモSS + 01Tツベルクリンシリンジ正確なPMSG配送に使用されます。
T7 mMESSAGE mMACHINEキットサーモフィッシャーサイエンティフィックAM1344H2B-RFP cRNA調製のためのT7プロモーターからのRNAのin vitro転写用キット。
ウォーターバス/ヒーティングブロック助成金手段QBD4熱を必要とする実験で正確な温度を維持するために使用されます。

参考文献

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