マウス早産卵巣機能不全モデルの準備と評価

Diandian Jiao; Ping Zhou

doi:10.3791/69000

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方法論記事

マウス早産卵巣機能不全モデルの準備と評価

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DOI:

10.3791/69000

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2025年9月19日

Diandian Jiao¹ , Ping Zhou¹

¹The First Hospital of Anhui University of Science and Technology'

この記事について

サマリー

このプロトコルは、シクロホスファミド注射 を介して 早発卵巣機能不全マウスモデルを構築する方法を概説しています。このモデルは、ヒトの早発卵巣機能不全の病理学的進行を効果的、容易、適応性を持って再現し、高い信頼性と費用対効果を実証します。

要約

卵巣早期機能不全 (POI) は女性の不妊症につながる重大な状態であり、機構および治療研究には信頼できる動物モデルが必要です。ここでは、シクロホスファミド(CTX)誘導POIマウスモデルを確立および評価するための標準化されたプロトコルを提示します。発情周期が規則的である6〜8週間齢の雌マウスを選択し、腹腔内CTX注射を受けました:1日目に100 mg / kgの初期用量、その後の14日間20 mg / kgの毎日の用量。発情周期の動的変化は、ライト染色による膣塗抹細胞診 によって 監視されました。エストラジオール (E2)、卵胞刺激ホルモン (FSH)、および抗ミュラー管ホルモン (AMH) の血清レベルは、内分泌の変化を評価するために ELISA を使用して定量化されました。卵巣の組織病理学は、卵胞閉鎖症を定量化するためにパラフィン包埋切片のヘマトキシリン-エオシン (H&E) 染色によって評価され、顆粒膜細胞のアポトーシスを検出するために切断されたカスパーゼ-3 の免疫組織化学的分析が行われました。結果は、CTX処理マウスにおける発情周期の中断、E2およびAMHレベルの有意な低下、FSH濃度の上昇、濾胞閉鎖の増加、および顆粒膜細胞のアポトーシスの増強を示し、POIモデリングの成功を確認しました。このモデル構築方法は、化学療法による卵巣損傷のメカニズムを高度に模倣することができ、卵胞予備能の枯渇や性ホルモン障害などの典型的な病理学的特徴を示します。これは、化学療法の生殖毒性メカニズムを明らかにし、卵巣保護薬をスクリーニングし、妊孕性温存戦略を最適化するための信頼できる実験プラットフォームを提供します。さらに、このモデルは操作が比較的簡単で、低コストで、生産サイクルが短いため、実行と普及が容易です。この方法論は、視覚化可能な段階的な実験デモンストレーションのための JoVE の要件と一致しています。

概要

女性の生殖老化障害の最も一般的な形態である早発卵巣機能不全(POI)は、エストロゲン欠乏症の症状や生殖機能障害を通じて患者の身体的および精神的健康を著しく損なうだけでなく、骨折、自己免疫疾患、心血管疾患、真性糖尿病などの併存疾患を発症するリスクも高め^ます1。.したがって、効率的で安全な治療戦略の開発は、現代医学において非常に緊急の優先事項となっています。POI 研究に関連する臨床サンプルの入手可能性、多因子病因、および高い倫理的リスクを考慮すると、体系的な機構調査と安全性検証を可能にする信頼性の高い動物モデルの確立が不可欠になっています。

現在、化学療法誘発性卵巣損傷モデルは POI 研究に広く利用されています。免疫抑制特性を持つアルキル化剤であるシクロホスファミド (CTX) は、強力な性腺毒性化合物として同定されています。そのメカニズムには、細胞増殖を抑制するためのDNA架橋損傷が含まれており²、卵巣予^備細胞のアポトーシスにつながります^3,4。CTX ベースのモデルは、原始卵胞枯渇、低エストロゲン血症、卵胞刺激ホルモン (FSH) レベルの上昇など、POI の臨床的特徴を効果的に再現します。マウ....