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研究記事

卵巣予備能が低下した患者の IVF/ICSI-ET サイクルへの Yangjing Zhongyu 煎じ薬の組み込み

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DOI:

10.3791/69075

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2025年11月14日

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1College of Life Sciences, Hebei Normal University, 2Center for Reproductive Medicine of Changhai Hospital, Naval Medical University, 3Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Radiation Medicine, Faculty of Naval Medicine, Naval Medical University, 5Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

この記事について

サマリー

この研究は、Yangjing Zhongyu 煎じ薬が卵母細胞と胚の質を改善することにより、卵巣予備能が低下した女性の生殖補助医療の結果を高めることを示しています。早発卵巣不全のラットモデルでは、煎じ薬はホルモンバランスを回復し、卵胞の発達を促進し、オートファジーと脂質代謝を調節しました。

要約

伝統的な漢方薬である陽井中玉煎じ薬 (YZD) は、卵巣機能と生殖能力の転帰を改善することが示唆されていますが、標準化された臨床証拠は依然として限られています。この研究では、IVF/ICSI-ET を受けている卵巣予備能が低下している女性における YZD の効果を、早発卵巣不全 (POF) のラットモデルにおけるメカニズムの検証とともに評価しました。臨床試験では、DOR 患者は標準的な GnRH アンタゴニスト プロトコルを単独で、または YZD と組み合わせて投与されました。グループ間のベースライン特性は同等であり、YZDグループは回収された卵母細胞と高品質の胚の数が多く、伝統的な中国医学症候群のスコアが改善されました。並行して、ラットでPOFが誘導され、YZDで治療された動物は発情周期の改善、血清エストラジオールレベルの回復、卵胞刺激ホルモンの減少、およびより健康な卵巣組織型を示しました。電子顕微鏡検査により、YZDが卵巣細胞における過剰なオートファゴソーム形成と脂質蓄積を減少させることが明らかになり、オートファジー-脂質代謝軸の調節が示唆されました。これらの発見は、YZD が卵巣予備能機能を強化し、胚の発育を改善し、DOR の女性の妊娠の可能性を高める可能性があることを示しています。この標準化されたプロトコルは、YZD を生殖補助医療サイクルに統合するための再現可能なフレームワークを提供し、臨床生殖医療におけるその翻訳の可能性をサポートします。

概要

卵巣予備能の低下 (DOR) は、女性の生殖に関する健康を損なう臨床状態であり、卵胞の数または質の低下を特徴とします1。臨床的には、前庭卵胞数の減少、抗ミュラー管ホルモン (AMH) レベルの低下、または卵胞刺激ホルモン (FSH) 濃度の上昇によって反映されます2。DOR は不妊症例の約 10% を占めており、受胎の成功に対する大きな障壁となっています3。生殖補助医療 (ART) の文脈では、DOR の有病率は米国で 19%-26% と推定されており4、妊娠率の低下、子癇前症の発生率の増加、および再発性流産のリスクの増加と関連しています5。複数の治療アプローチが利用可能であるにもかかわらず、DOR 患者の ART 転帰を改善することは依然として大きな課題であり、新規で効果的な介入の必要性が強調されています6。

古典的なマルチハーブ漢方薬 (TCM) 製剤である Yangjing Zhongyu Decoction (YZD) は、生殖実践に長い間適用されてきました7。内分泌バランスを強化し、卵巣機能をサポートし、それによって体外受精および細胞質内精子注入-胚移植 (IVF/ICSI-ET) サイクルの転帰を改善すると考えられています8。予備的な臨床データは、YZD が卵巣反応を改善できることを示唆していますが、厳密なメカニズムおよびトランスレーショナル研究はまだ限られています。YZD が DOR 患者に作用する正確な生物学的経路は不明のままです 9,10。現在の文献では、漢方化合物が AMH 発現の調節、PI3K/AKT/mTOR などの濾胞閉鎖関連シグナル伝達経路の阻害、酸化ストレス損傷の軽減など、複数のメカニズムを通じて卵巣微小環境に影響を与える可能性があることが示されています。ただし、これらのメカニズムの仮説は主に間接的であり、実験的検証が欠けています。

この研究は、臨床評価と実験的検証を統合することにより、これらのギャップに対処します。具体的には、ARTを受けているDORの女性におけるYZDの効果を調べ、トリプテリギウム配糖体誘発DORラットモデルを用いてその機構的基盤を調査した。動物実験では、内分泌マーカー(エストラジオールとFSH)、胞状卵胞数、オートファゴソーム形成、卵巣組織における脂質蓄積をモニタリングしました。臨床転帰と実験的メカニズム データを組み合わせることにより、この研究は YZD を IVF/ICSI-ET サイクルに組み込むための標準化されたプロトコルを提供し、DOR 患者の卵巣予備能と生殖転帰を改善するための補助療法としての可能性を裏付ける新しい証拠を提供します。この研究の目新しさは、標準化された臨床応用とメカニズムの洞察を結びつける二重のアプローチにあり、生殖医療における YZD の臨床翻訳と理論的理解の両方を前進させます。

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プロトコル

すべての臨床処置はヘルシンキ宣言に従って実施され、上海長海病院の倫理委員会によって承認されました (承認番号。CHEC2022-156)。書面によるインフォームドコンセントは、すべての参加者から得られました。動物実験は長海医科大学倫理委員会によって承認されました(承認番号。CHEC2022-156)であり、国の実験動物管理基準に準拠しています。

臨床的特徴

患者の募集とグループ化
2022年8月から2023年3月にかけて、腎陰欠10 症候群と診断されARTを求める不妊症患者78名が、海軍軍医大学第一付属病院生殖医療センターと上海中医薬大学岳陽病院外来から募集された。参加者は、SPSS 23.0 乱数生成を使用して、対照群または治療群 (各 39 症例) のいずれかにランダムに割り当てられました。

診断基準
西洋医学の診断は、卵巣予備能指標に関する米国生殖医学会 (ASRM) 2020 年委員会の意見に従っていました11.基準には、FSH ≥ 10 IU/L、エストラジオール ≥ 80 pg/mL、洞状卵胞数 (AFC) < 7、および AMH < 0.5-1.1 ng/mL が含まれていました。腎陰欠乏症候群は、漢方薬婦人科12 および中医学症候群の診断効果基準13 に従って診断されました。

包含基準と除外基準
包含基準は、アンタゴニストプロトコルを使用して計画された IVF/ICSI-ET。卵巣反応不良の病歴(<5回収された卵母細胞);年齢20〜40歳。DOR 症候群と TCM 症候群の両方の基準を満たしている。そして署名されたインフォームドコンセント。除外基準には、子宮内膜の病理(ポリープ、結核、異形成、がん)、子宮奇形、併存疾患(糖尿病、狼瘡)、最近のホルモン療法(3か月<)、骨盤手術歴、染色体異常、または薬物アレルギーが含まれていました。排除基準は、登録後 2 週間以内のプロトコルの逸脱、有害事象、離脱、または自然受胎に適用されました。

投薬方法
両群は、月経2〜3日目に経膣超音波検査とホルモン検査によるベースライン評価を受けました。対照群は、アンタゴニストレジメンを受けました:組換えFSHまたはヒト閉経期ゴナドトロピン、初期用量225 IU /日を5日間筋肉内投与し、その後、卵胞の成長に基づいて用量を調整しました。主要な卵胞の直径が 12 mm を超えると、GnRH 拮抗薬 (0.125 mg/日皮下投与) を開始し、トリガーまで継続しました。≥ 1 つの卵胞が 18 mm に達し、≥ 2 が 17 mm に達したとき、または ≥ 3 が 16 mm に達したとき、排卵は 250 μg の組換え hCG で引き起こされ、続いて 34-36 時間後に採卵が行われました。

治療群は、月経周期の2〜3日目からトリガー日まで、1日2回(朝と夕方)経口投与される陽井中玉煎じ薬(YZD)を追加して、同じプロトコルに従いました。臨床処方には、地黄 12 g、ハクヤク 12 g、山茱萸 10 g、アンジェリカ 12 g が含まれていました。

観察指標
臨床転帰には、年齢、BMI(体重(kg)/身長²(m²)として計算)、不妊期間、FSH、ゴナドトロピンの用量/期間、腎陰欠乏症候群スコア、洞卵胞の数(経膣超音波で評価、直径2〜9 mm)、回収された卵母細胞、中期II(MII)卵母細胞(採卵時に特定)、受精胚、卵割、高品質の胚(標準的な発生学検査基準で定義)、 妊娠6〜7週での超音波検査での胎嚢の存在として定義された臨床妊娠率。

実験動物
ここでは、30匹のSPFグレードの雌スプレイグ・ドーリーラット(8週齢、160〜200 g)を、制御された条件(23±2°C、湿度40%〜45%、12時間の明暗サイクル)下で自由 な食物と 水で順応させました。

薬の調製
YZDは、地黄30g、アンジェリカ15g、ハヤク15g、山茱萸15gで調製しました。ハーブを水で煎じ、200メッシュのフィルターでろ過し、70°Cの減圧下で濃縮しました。 低用量、中用量、高用量の最終溶液は0.34 g/mL、0.68 g/mL、および1.35 g/mLで、YZDの臨床用量の0.5倍、1.0倍、および1.2倍に相当します。煎じ薬は4°Cで保存しました。

モデリングとグループ化
DOR モデルは、トリプテリギウム配糖体の腹腔内注射 (15 日間、毎日 40 mg/kg) によって誘導されました。ラットをブランク(n = 6)、モデル(n = 6)、およびYZD治療群(低、中、および高用量、それぞれn = 6)にランダムに割り当てました。強制経口投与(10mL/kg体重)を1日1回行い、トリプテリギウム配糖体注射の初日から15日間継続した。

膣細胞診
発情周期の段階は、膣剥離細胞診によって評価されました。膣塗抹標本を 1 日 1 回 (08:00-10:00) 滅菌綿棒で採取し、30 μL の生理食塩水で希釈し、光学顕微鏡で 100 倍の倍率で検査しました。観察期間は15日間連続で続きました。正常な発情周期指数は、この期間中に規則的な4〜5日間の発情周期を示すラットの割合として定義されました。

ホルモンアッセイ
15日間の治療期間の終了時に麻酔下で心臓穿刺による全血を採取し、室温で30分間凝固させ、1000× g で4°Cで15分間遠心分離して血清を得た。E2 および FSH レベルは、製造元の指示に従って ELISA によって測定されました。

卵巣組織学
卵巣組織は、両方の卵巣の外科的切除によって安楽死の直後に収集され、冷たい生理食塩水ですすぎ、血液を除去し、次に4°Cで4%パラホルムアルデヒドで24〜48時間固定されました。組織を段階的なエタノールで脱水し、キシレンでクリアし、パラフィンに包埋し、4〜5μmで切片化しました。切片をヘマトキシリンとエオシンで染色し、脱水し、透明化し、マウントしました。

統計分析
データは SPSS 26.0 を使用して分析されました。正規変数は平均± SD として表され、t 検定によって比較されました。非正規変数を中央値 (IQR) として使用し、マンホイットニーの U 検定によって比較します。カテゴリ変数は%で表され、カイ2乗検定によって比較されました。p < 0.05 は統計的に有意であると考えられました。一貫性を保つために、同じ統計的手法を図分析に適用しました(個別のスチューデントのt検定の説明はありません)。

安全と廃棄物処理
パラホルムアルデヒド、キシレン、トリプテリジウム配糖体は、手袋、ゴーグル、白衣を着用した認定ヒュームフードで取り扱われました。こぼれと汚染された使い捨て製品は、ラベルの付いた有害廃棄物容器に収集され、施設のバイオセーフティSOPに従って廃棄されました。パラホルムアルデヒド、キシレン、およびトリプテリギウム配糖体を含むすべての手順は、適切な個人用保護具 (手袋、白衣、ゴーグル) を備えたヒューム フードで実行されました。化学廃棄物と動物の死骸は、施設のバイオセーフティガイドラインに従って処分されました。

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結果

臨床的特徴

研究中、対照群の患者3人がCOVID-19感染により離脱し、1人は肝機能異常のために除外され、35人の患者が残りました。治療群では、4人がCOVID-19のために中止し、35人の患者が研究を完了しました。したがって、合計 70 人の被験者が最終分析に含まれました。年齢、体格指数(BMI)、不妊期間、基礎FSHレベル、AFC、またはゴナドトロピン(Gn)の使用時間と用量(p > 0.05)にグループ間で有意差はなく、2つのグループがベースラインで同等であることが確認されました(表1)。

TCM症候群スコア

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ディスカッション

この研究では、生殖補助医療 (ART) における卵巣予備能低下 (DOR) の補助療法としての Yangjing Zhongyu 煎じ薬 (YZD) の潜在的な役割を調査しました。臨床所見は、標準的なアンタゴニストプロトコルに加えてYZDを投与された患者が、回収された卵母細胞と高品質の胚の数が大幅に増加したことを示しました。妊娠率はグループ間で有意差はありませんでしたが、良好な傾向が観察されました。これらの結果は、YZD が卵胞の質を高め、それによって ART の結果を改善する可能性があることを示唆しています。卵巣予備能は、女性の生殖能力とARTの成功の重要な決定要因です。成長ホルモン (GH)、デヒドロエピアンドロステロン (DHEA)、コエンザイム Q10 などのいくつかの薬理学的戦略は、DOR 患者の卵母細胞能力を改善するために適用されています。ただし、これらの薬剤は、多くの場合、中程度の有効性と、代謝障害や皮膚反応などの潜在的な副作用によって制限されます14,15

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開示事項

著者らは、競合する利益は存在しないと宣言している。

謝辞

この研究の支援は、中国国家重点研究開発計画(助成番号:2018YFC1004900):ラットの卵巣機能を改善するための卵胞液中の微生物代謝物エルカミドの調節に対する陽井中玉煎じ薬の効果とメカニズムに関する研究(助成金番号:2024QN027)によるものです。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
遠心機血清分離(1000 x g、15分、4 & dg;C)エッペンドルフ 5810R5811 000.012
綿棒(滅菌)膣細胞学サンプルの収集江蘇康堅医療用品KJ-MW-01
E2用のELISAキット血清エストラジオール定量(ラット)エラブサイエンス・バイオテクノロジー社E-EL-0152
FSH用のELISAキット血清FSH定量(ラット)エラブサイエンス・バイオテクノロジー社E-EL-R0391
エタノール(70–100%)組織学における段階的脱水中国 中硝薬化学試薬株式会社100092683
ガラススライド&カバースリップサンプルの取り付けCitotest Scientific、中国7101/1812
ヘマトキシリン&エオシン組織学のための染色溶液ビヨタイム・バイオテクノロジー、中国C0105S
光学顕微鏡組織学および細胞学的観察オリンパス(ジェネリック、商標なし)CX23
パラフィン埋め込み媒体ライカ・バイオシステムズ39601095
パラホルムアルデヒド(4%)組織調製のための固定液シグマ・オルドリッチP6148
生理食塩水(0.9%)膣塗抹治療の準備中国 中硝薬化学試薬株式会社10019318
スプラグ&アンドダッシュ;ドーリー・ラット実験動物(メス、8週齢、160歳以上;200g)北京威通麗華実験動物技術有限公司SCXK(北京)2024-0011
SPSSソフトウェア統計解析(バージョン26.0)IBM社RRID:SCR_002865
透過電子顕微鏡超微構造観測JEOL株式会社JEM-1400Plus
トリプテリギウム・グリコシズDORラットモデルの誘導ジェネリック供給業者(商標なし)TG-001
キシレン組織学用クリアリング試薬中国 中硝薬化学試薬株式会社10023418

参考文献

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