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方法論記事

マウス眼水晶体上皮および線維細胞バルク塊からのRNA単離

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DOI:

10.3791/69079

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2025年10月10日

 ,  , 
1School of Optometry and Vision Science Program, Indiana University

この記事について

サマリー

このプロトコルは、マウス眼レンズ上皮と線維細胞バルク塊の分離、続いてRNA単離およびqPCR分析を詳述する。この方法により、水晶体細胞コンパートメントを分離して、上皮細胞と分化した線維細胞におけるトランスクリプトームと生物学的プロセスをより詳細に分析することができます。

要約

水晶体は、目の前房にある特殊な透明な組織であり、上皮細胞と線維細胞の 2 つの主要な細胞型で構成されています。水晶体上皮細胞の単層が水晶体の前半球を覆っていますが、水晶体の大部分は水晶体繊維細胞の塊で構成されています。カプセルとして知られるコラーゲン基底膜が組織全体を取り囲み、カプセル化します。水晶体上皮細胞は水晶体カプセルに強く付着しており、カプセルを組織から剥がすことでバルク繊維塊から簡単に分離できます。水晶体単層内の少数の上皮細胞から十分なRNA濃度を得ることが困難であるため、以前は上皮細胞対線維細胞トランスクリプトームの研究が妨げられてきました。このプロトコルは、上皮および線維細胞コンパートメントおよびRNA濃度ステップをきれいに分離および単離し、単一のマウスレンズペアからの上皮細胞サンプルのその後のトランスクリプトーム実験を可能にする方法を提示する。水晶体の主要な細胞型を個別に調査する能力は、水晶体の維持と調節不全の生物学的メカニズムの調査に役立ち、加齢に伴う水晶体の病状の原因となる細胞型特異的破壊の特徴付けを可能にします。

概要

接眼レンズは、光を網膜に細かく集束させて鮮明な画像を生成する透明な器官です。水晶体は、前半球を覆う上皮細胞の単層と、組織のバルク塊を構成する線維細胞の2つの主要な細胞型で構成されています(図1)。水晶体は水晶体嚢として知られるコラーゲン基底膜で包まれており、上皮細胞がしっかりと接着しています。水晶体が成長するにつれて、赤道の上皮細胞は増殖し、同心円状に水晶体上に層状になった繊維細胞の初期殻に分化します1,2,3。生涯にわたる水晶体の成長は、発芽ゾーンを構成する赤道上皮細胞のこの小さな集団の継続的な増殖に依存します4。線維細胞が成熟するにつれて、すべての細胞小器官が分解されて光散乱物体5,6,7,8,9,10,11が除去され、組織の透明性が維持され、最も内側の線維細胞が最終的に圧縮され、硬い水晶体中心9,12が生じます.周囲の水晶体嚢により、水晶体内の細胞代謝回転はなく、組織周辺または皮質に新しい繊維が追加されるにつれて、精線維は生涯を通じて水晶体の中心にとどまります。レンズのファイバーセルは、その年齢に応じて異なる光学特性を有し、各所与の段階における異なる生物学的特性の時間的スナップショットを提供することができる13。

利用可能な外科的選択肢にもかかわらず、通常は透明な水晶体の混濁として定義される白内障は、依然として世界の失明の主な原因です14。白内障は、異なる病態生理学で水晶体上皮、皮質、または核に現れることがあります15。しかし、白内障形成の細胞的および分子的メカニズムは不明のままです16,17。これらのさまざまな種類の白内障を予防し、手術に代わる方法を開発する方法をよりよく理解するには、これらのさまざまな細胞型が水晶体内の恒常性をどのように維持するかをよりよく理解する必要があります。

上皮細胞と線維細胞は、水晶体内で異なる生理学的役割を果たします。例えば、細胞増殖は水晶体上皮に限定される18。一方、レンズ繊維はレンズのかさばの質量を構成し、レンズ9に構造と屈折特性を提供する。水晶体のさまざまなコンパートメントに関与する生物学的プロセスのより微妙な視点を得るには、上皮細胞と線維細胞を別々に調査する必要があります。ここでは、線維細胞バルクマスから上皮を単離し、各画分からmRNAを抽出し、逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応(RT-qPCR)を用いてこれらの転写産物を解析する方法を紹介します。

figure-introduction-1
図1:レンズの解剖学図。 水晶体は、前半球を覆う単層上皮細胞(青とオレンジ)と水晶体繊維のバルク塊(白)の2つの細胞型で構成されています。組織は、水晶体嚢(黄褐色)として知られる薄い膠原膜に囲まれています。前上皮細胞(青)は静止していますが、赤道上皮細胞(オレンジ)は増殖、分化、伸長して水晶体周辺で繊維細胞の新しい層(白)になります。新世代のファイバーセルは、同心円状のシェルで前世代のファイバーに重ねられます。最も古い水晶体線維細胞は、組織の中心に圧縮されています。この図は、Cheng (2024)38 から修正されています。 この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。

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プロトコル

すべての動物実験は、国立衛生研究所の「実験動物のケアと使用に関するガイド」およびインディアナ大学の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)から承認されたプロトコルに従って実施されました。

1. 作業エリア、機器、試薬の準備

  1. 使用前にオートクレーブピペットチップを使用し、RNase汚染を避けるためにRNA実験用にオートクレーブチップのボックスを指定します。
  2. ヒュームフードと組織均質化乳棒の作業表面積をRNase除染液で処理し、脱イオン水で十分にすすぎ、乾燥させます。
  3. 解剖ツール(湾曲鉗子、ストレート鉗子、顕微解剖はさみ)を70%エタノールに5分間浸し、使用前にデリケートな作業用ワイプで乾かします。
  4. 解剖と組織の分離ステップには、真新しい解剖トレイとペトリ皿を使用してください。
  5. 400 μLの冷たいトリゾール酸-グアニジニウム-フェノール試薬を、ドラフトフード内のDNAseおよびRNAseを含まない1.5 mL微量遠心チューブに分注します。

2. マウスレンズの解剖

  1. CO2 の過剰摂取とそれに続く二次的な手段として頸部脱臼を使用して成体マウスを安楽死させます。
  2. 湾曲した鉗子を使用して目を摘出します。
    1. 鉗子で目の周りの組織をそっと押し下げ、眼窩から目を突き出させます。目の下の鉗子を閉じ、しっかりと上に引っ張って取り外します。
    2. 750〜1000 μLの1xリン酸緩衝生理食塩水(PBS)を入れた1.5 mLの微量遠心チューブに眼を移します。
  3. 解剖のために、新鮮な1x PBSを入れた解剖トレイ内のウェルに眼を移します。
  4. 解剖顕微鏡下で、まっすぐな鉗子を使用して視神経の基部を保持し、鋭利な顕微解剖はさみで神経をできるだけ目に近づけて切断します。
  5. 視神経が接続されていた開口部に細いまっすぐな鉗子を慎重に挿入し、つまんで組織を所定の位置に保持します。
  6. 顕微解剖はさみの先端を同じ開口部に挿入し、目の後極から角膜と強膜の接合部に向かって慎重に切り取ります。レンズの損傷を防ぐため、器具を深く挿入しないでください。
    注:げっ歯類のレンズは目の中で大きな体積を占めるため、レンズに穴が開くのを防ぐために浅いカットをお勧めします。
  7. 顕微解剖はさみを使用して角膜と強膜の接合部に沿って切断し、目の周囲の少なくとも半分を分離します。
  8. まっすぐな鉗子を使用して、角膜を押しながら眼組織をそっと反転させ、角膜強膜切開部からレンズを押し出します。
  9. 細いまっすぐな鉗子を使用して、レンズから付着した大きな組織を慎重に取り除きます。
  10. 必要に応じて、湾曲した鉗子を使用して、清潔でデリケートな作業用ワイプでレンズをそっと転がし、付着したレンズ外組織が残っているものを取り除きます。
    注:ティッシュをタスクワイプの上に素早く転がし、ティッシュを過度に乾燥させないでください。水晶体嚢のドライスポットにより、水晶体表面に小さな混濁が生じる場合があります。これらの不透明度は、レンズを1x PBSに戻すと一般に可逆的であり、後続のステップには影響しません。
  11. 洗浄したレンズを1x PBSを含む6 cmのペトリ皿に移します。
  12. 細いまっすぐ鉗子を使用して、赤道付近の水晶体カプセルを浅く突き刺し、水晶体嚢を繊維バルク塊からそっと剥がします。水晶体上皮細胞はカプセルに付着したままになります。カプセルの解除で剥がれた可能性のある大きな繊維片をカプセルからそっと取り除きます。
  13. 細いまっすぐな鉗子でカプセルをそっとつかみ、1x PBSを旋回させて残りの繊維を取り除きます。緩く付着した線維細胞は、被膜細胞と上皮細胞から解離します。

3. RNA単離

注:RNA単離のワークフローをまとめて図 2に示します。

  1. 2 つのレンズ カプセルまたは 2 つのファイバー バルク マスを、400 μL の冷たい TRIzol 試薬を含むそれぞれの 1.5 mL 微量遠心チューブに堆積させます。
    注:繊維塊は、湾曲した鉗子を使用して皿からチューブに移動し、組織をすくい上げる必要があります。
  2. チューブのキャップをしっかりと閉め、後続のステップのために化学ヒュームフードに移動します。
  3. きれいなペレット乳棒を使用して、レンズファイバーのバルク塊を穏やかに均質化します。
    注:ファイバーの塊を完全に分解してください。
  4. サンプル(レンズカプセルまたは均質化されたファイバーバルクマス)をTRIzol中で室温でヒュームフード内で30分間インキュベートします。
  5. ヒュームフードで、TRIzol 試薬 400 μL あたり 200 μL のクロロホルムを各チューブに加えます。チューブをしっかりと閉じ、親指をチューブの底に置き、人差し指をキャップに当てたまま、手で15秒間激しく振ってください。
    注:材料リストに記載されている1.5 mLマイクロ遠心チューブは、密閉性が高いため使用されています。他のブランドの微量遠心チューブを使用する場合は、密閉性のないチューブのキャップの下からTRIzolとクロロホルム溶液が漏れる可能性があるため、振とう前にチューブの閉鎖とシールをテストしてください。
  6. サンプルを室温で10〜15分間インキュベートして、相分離を可能にします。
    注:脂質とタンパク質を含むチューブの底にピンクのTRIzol試薬層、DNAを含む相の間に白い層、RNAを含む上部に透明な水相があるはずです。白いDNA層は、上皮細胞サンプルで見るのがより困難になる場合があります。
  7. サンプルを14,000 x g で4°Cで15分間遠心分離します。
    注:チューブを遠心分離機に慎重に出し入れし、移送の段階を妨げないように注意してください。
  8. RNA Clean and Concentratorキットからチューブと試薬を組み立てます。スピンカラムチューブは、キットから収集チューブに取り付けられます。
  9. ヒュームフード内で、透明な水相(最上層)を清潔な1.5 mL微量遠心チューブに注意深く移し、体積に注意してください。
    注:水相の下の白色DNA層を乱したり、触れたり、描いたりしないでください。白い層を乱さないように、水相を移すときはチューブを傾けてください。サンプルを汚染するのではなく、チューブ内に少量の水相を残すことが望ましい。通常、200 μLのクロロホルムを添加すると、180〜190 μLの水相を回収できます。
  10. 200プルーフエタノールを水相に1:1の体積比で加えます。
    注:濃縮キットのRNA結合バッファーは、エタノールを添加する前に水相に2:1の体積比で添加できます。このステップは、RNA収量を増やすため、また単離後にRNAが十分な純度を持っているため、スキップされます。
  11. チューブを数回反転させるか、溶液を上下にピペッティングして穏やかに混合します。ピペッターを使用して、混合溶液をRNAスピンカラムに移します。
    注意: ピペットチップでフィルターに触れないように注意してください。
  12. スピンカラムを16,000 x g で4°Cで30秒間遠心分離します。
    注:チューブのセットを整理し、後続の遠心分離ステップでキャップが外れた場合に備えて、カラムの蓋と収集チューブの側面にラベルを付けることをお勧めします。
  13. フロースルーを廃棄し、400 μLのRNA Prep Bufferをスピンカラムに加えます。
  14. スピンカラムを16,000 x g で4°Cで30秒間遠心分離します。
  15. フロースルーを廃棄し、700 μLのRNA洗浄バッファーをスピンカラムに加えます。
  16. スピンカラムを16,000 x g で4°Cで30秒間遠心分離します。
  17. フロースルーを廃棄し、400 μLのRNA洗浄バッファーをスピンカラムに加えます。
  18. スピンカラムを16,000 x g で4°Cで1分間遠心分離します。
  19. フロースルーを廃棄し、16,000 x g で 4°C で 30 秒間もう一度遠心分離して、スピンカラムが乾燥していることを確認します。
  20. スピンカラムを新しい標識付き1.5 mLマイクロ遠心チューブに移動します。
  21. 15 μLのRNaseフリー水をメンブレンフィルターに加えます。室温で2分間インキュベートします。
    注意: ピペットチップでフィルターに触れないように注意してください。
  22. スピンカラムを16,000 x g で4°Cで30秒間遠心分離し、精製したRNAを溶出します。
    注:1.5 mLマイクロ遠心チューブのキャップは、遠心分離中は開いたままになります。スピンカラムとマイクロ遠心チューブを慎重に配置して、開いたキャップがローターの蓋に当たるようにして、遠心分離中に揺れたり壊れたりしないようにします。蓋はローターの回転方向に追従する必要があります。
  23. スピンカラムを取り外して廃棄します。RNA は、1.5 mL 微量遠心チューブに集められた液体中にあります。
  24. 1.5 mLの微量遠心チューブをしっかりと閉じ、RNAサンプルを55〜65°Cで10分間インキュベートして再溶解を促進します。
  25. 加熱ステップの後、すぐにサンプルを氷の上に置きます。
  26. サンプルを-80°Cで保存するか、cDNAに逆転写して長期保存します。
    注:RNAサンプルは、目立った濃度損失なしに最大3か月間保存されました。RNAサンプルを分注して保存するために、凍結融解サイクルを最小限に抑え、分解を防ぎます。

4. 紫外可視分光光度計によるRNA濃度測定

  1. RNAサンプルを氷上に置き、NanoDrop(紫外可視分光光度計)の電源を入れ、装置を初期化します。
  2. [ 核酸 ]メニューで、 RNA定量モジュールを選択します。
  3. RNA濃度ステップから2.0 μLの溶離液を台座(この場合は分子グレードの水)にピペッティングして、UV-Vis分光光度計をブランクします。装置アームを下げて、ブランクサンプルを読み取ります。
  4. 計器アームを持ち上げ、清潔で乾燥したデリケートなタスクワイプを使用してセンサー台座を洗浄し、続いて脱イオン水で濡らした別のワイプを洗い、続いてもう一度乾いたワイプで洗浄します。
  5. 必要に応じて、UV-Vis分光光度計のインターフェースにサンプルの詳細を入力します。
  6. 2.0 μLのRNAサンプルを台座にロードし、アームを下げて定量します。
  7. 手順4.4から4.6を繰り返して、サンプル間の台座をクリーニングします。
  8. 終了したら、必要に応じて実験を保存してエクスポートし、さらに定量します。

5. 逆転写

  1. 処理性と熱安定性の高い逆転写酵素を使用して、メーカーが推奨するプロトコルを使用して、2.0 μgのレンズファイバーRNAと抽出されたすべての上皮RNAを逆転写します。クリーンなPCRチューブで各サンプルの試薬とRNAを混合します。すべての溶液とRNAサンプルを氷上に保管してください。
    注:この転写酵素は、反応ごとに最大2.5μgのRNAを逆転写することができます。RNAからcDNAへの完全な変換が想定されているため、RNA開始濃度が推定cDNA濃度として使用されます。
  2. 表1にリストされている条件を使用して、サーマルサイクラーで反応を実行します。
  3. 逆転写したcDNAを-80°Cで保存するか、qPCRステップに進みます。
    注:cDNAはRNAよりも安定しているため、cDNAサンプルは目立った分解なしに最大4か月間保存されました。凍結融解サイクルが最小限に抑えられれば、サンプルはより長く保存できる可能性があります。
歩温度(°C)時間(分)サイクル
アニーリング25101
逆転写50101
酵素の不活性化8551
持つ4∞1

表1:逆転写のためのサーモサイクラー条件。 これらの条件は、特異的で、高度に処理性があり、熱安定性のある逆転写酵素に同調しています。使用する酵素やキットによって、実行条件が異なる場合があります。

6. 定量的リアルタイムPCR

  1. 反応を開始する前に、分子グレードの水で希釈して、cDNAストック溶液を所望の濃度に調製します。これらの実験では、1 μL の cDNA を 5 ng/μL で 5 ng/ウェル反応に使用します。すべての溶液とcDNAサンプルを氷上に保管してください。
    注:TaqManアレイプレート(0.1 mLフォーマット)は、ウェルあたり5〜50 ngのcDNAの反応に対応するために推奨されます。cDNAのアリコートを作成することは、凍結融解サイクルを制限するのに役立ちます。この研究では、サンプルは最大5回の凍結融解サイクルに制限されました。
  2. アドバンスドマスターミックスとプローブで構成されるワーキングマスターミックスを市販の推奨事項に調製します。準備の例については、セクション 7 を参照してください。すべての溶液とcDNAサンプルを氷上に保管してください。
    注:2つの異なる色素を持つ一対のプローブが、ウェルごとに一般的に使用されます。たとえば、この研究では、Crygs-FAM-MGBを対象遺伝子プローブとして、Ppia-VIC-MGBを内部対照として使用しました。 最終的なプローブ濃度とプライマー濃度の推奨用量は、それぞれ 250 nM と 900 nM です。ターゲットが非常に高度に発現している場合は、反応試薬の枯渇を防ぐためにプライマー制限プローブが必要になる場合があります。
  3. cDNAストック(1 μL)をqPCRプレート上の適切なウェルにロードし、続いてワーキングマスターミックス(9 μL)をロードします。マスターミックスを加えながらゆっくりと上下にピペッティングして溶液を混合します。cDNAの滴が溶液に混合されていることを確認し、気泡を避けてください。
    注:ターゲットの感度によっては、プレートを氷の上にロードする必要がある場合があります。
  4. 光学接着剤カバーを慎重に貼り付けて、qPCRプレートを密封します。粘着フィルムアプリケーターを使用してカバーを滑らかにし、各ウェルの周囲をしっかりと密閉します。
  5. ボルテックスプレートを1000RPMで10秒間混合します。
  6. プレートを室温で1000 x g で2分間遠心分離し、ウェルの底に気泡がないことを確認します。
  7. プレートを定量PCRサーマルサイクラーにロードし、 表2にリストされているサイクルを使用して実行します。
    注:従来のqPCRプロトコルは通常、40サイクルに制限されています。サイクルカウントを増やしても意味のある結果が得られる可能性は低いですが、40サイクルまでに、単一のターゲットコピーは理論的には約1兆アンプリコンを生成できます19。
歩温度(°C)時間サイクル
ウラシル-N-グリコシラーゼ (UNG) の不活性化501201
変性951201
変性95145
アニーリング6020
持つ4∞1

表2:定量的ポリメラーゼ連鎖反応のためのサーモサイクラー条件。 これらの条件は、特定の一連の市販の遺伝子発現アッセイに調整されています。増幅サイクルを40から45に増やす以外は、デフォルトのパラメータが使用されます。

7. qPCRの体積計算例

注:以下で説明する方程式の体積計算機のRソースコードは、 補足ファイル1で入手できます。この計算機は、 材料表に記載されているTaqmanプローブとマスターミックス用です。

  1. ピペッティングするウェルの数を決定し、最低12.5%の過剰を計算します。この過剰定数(kExcess)は、ピペッティング誤差を補正し、十分な溶液を確保します。この例では、96ウェルをサンプル調製のターゲットとして使用します。
    方程式：
    figure-protocol-1
    例：
    figure-protocol-2
    注:12.5%の過剰が整数でない場合、後続のステップで「適切な」数値を確保する簡単な方法は、最も近い井戸に切り上げ、 それに応じてk過剰を 調整することです。
  2. 作業マスターミックスの体積を計算します。これらの実験では、ウェルあたり1 μLのcDNAと9 μLのワーキングマスターミックスが使用されます。cDNAとマスターミックスの容量は、必要に応じて調整できます。
    方程式：
    figure-protocol-3
    例：
    figure-protocol-4
  3. 濃度修飾子(kConc)を計算します。この修飾剤は、cDNAと混合すると1倍に希釈される、より濃縮された作業マスターミックスを作成するために使用されます。
    方程式：
    figure-protocol-5
    例：
    figure-protocol-6
  4. プローブ(20倍)の体積を計算します。
    方程式：
    figure-protocol-7
    例：
    figure-protocol-8
  5. マスターミックスストック(2倍)の体積を計算します。
    方程式：
    figure-protocol-9
    例：
    figure-protocol-10
  6. 分子グレードのH2Oを使用して、作業マスターミックスを計算された体積まで上げます。
    方程式：
    figure-protocol-11
    figure-protocol-12
    figure-protocol-13
    figure-protocol-14
    figure-protocol-15
    例：
    figure-protocol-16
    figure-protocol-17
    figure-protocol-18
    figure-protocol-19
    figure-protocol-20

補足ファイル 1: ボリューム計算機の R ソース コード。このファイルをダウンロードするには、ここをクリックしてください。

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結果

水晶体上皮と繊維は、6〜7週齢の野生型マウスから単離されました。これらの実験には3匹のマウスを使用し、各マウスの2つのレンズカプセルまたは2つの繊維細胞塊をプールして1回の生物学的複製を行いました。プロトコルに記載されているように、TRIzol試薬相分離を使用してRNAを抽出しました。平均して、一対の水晶体上皮と繊維のバルク質量は、それぞれ0.8μg(SD ± 0.2)および9.7μg(SD ± 2.3)のRNAを生成しました。15 μL溶出液の平均濃度は、上皮サンプルと繊維サンプルでそれぞれ55.4 ng/μL(SD ± 16.3)および650.0 ng/μL(SD ± 152.2)でした。5 ng/ウェル反応を使用すると、理論的には、このプロトコルを使用して単離された一対の水晶体上皮から平均160の反応が可能になります。A260/280比で測定された平均RNA純度は、上皮で1.92(SD ± 0.05)、繊維で2.05(SD ± 0.01)であり、タンパク質汚染が最小限であることを示しています。一般に、~2.0のA260/280比はRNA20に対して純粋であると見なされます。全体として...

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ディスカッション

ここで紹介する手順は、分子生物学の方法でcDNAに逆転写できる個別のレンズコンパートメントからRNAを単離する能力を示しています。分析方法は感度が高いため、解剖段階ではレンズに付着した組織がきれいであることが不可欠です。これには、適切な清潔さを実現するために、Kimwipe でレンズを数回繰り返しする必要がある場合があります。上皮細胞サンプルを大量の繊維細胞で汚染しないように、線維性バルクマスコンパートメントからコラーゲンカプセルを分離する際にレンズを深く浸透しすぎないように注意する必要があります。水晶体上皮細胞はカプセルにしっかりと接着しており、上皮細胞とその下にある線維細胞との接着は比較的弱いため、カプセルと付着した上皮細胞を線維細胞塊からきれいに分離できます。レンズコンパートメントが単離され、TRIzolに堆積したら、有害なヒュームを避け、単離されたRNAの汚染と分解を防ぐために、サンプルを化学ヒュームフードで処理する必要があります。

RNA単離プロセスでは、RNA Clean and Concentrato...

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開示事項

著者らは開示するものは何もない。

謝辞

この研究は、国立眼科研究所からの助成金 R01 EY032056 (CC へ) によって資金提供されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
遠心分離機とローターフィッシャーサイエンティフィック午後14285554時
クロロホルム、HPLCグレードアルファ エザール22920
エタノール(190プルーフ)デコンラボ2801
エタノール(200プルーフ)フィッシャーバイオ試薬BP2818
フィッシャーブランドペレット乳棒フィッシャーサイエンティフィック12-141-363
鉗子、湾曲;学生ピンセット #7世界の精密機器501981
鉗子、ストレート;デュモン #5ファインサイエンスツール11252-40
鉗子、ストレート;学生用ピンセット #4世界の精密機器501978
キムワイプ、小型キンバリー・クラーク34155デリケートなタスクワイプ
MicroAmp 粘着フィルム アプリケーターアプライドバイオシステムズ4333183
MicroAmp EnduraPlate Optical 96ウェル高速クリア反応プレート(バーコード付き)アプライドバイオシステムズ4483485
マイクロピペッターエッペンドルフ 01-671-120
顕微鏡, 解剖カールツァイスステレオディスカバリー.V8
MiniAmp 光学式接着剤カバーアプライドバイオシステムズ4360954
MiniAmpサーマルサイクラーアプライドバイオシステムズA37834
MixMateプレートボルテックスミキサーエッペンドルフ5353000529
分子グレードの水フィッシャーサイエンティフィックBP28191
Nanodrop One Microvolume 紫外可視分光光度計サーモサイエンティフィックND-ワン-W
Nunc MicroWell ミニトレイフィッシャーサイエンティフィック12-565-154解剖トレイ
PCRチューブVWRの201007-012
ペトリ皿、60 mm x 15 mmフィッシャーサイエンティフィックFB0875713A
リン酸緩衝生理食塩水、1x ダルベッコギブコ14190-136
ピペットチップ、10 & マイクロ;L 目盛り付きUSAサイエンティフィック1161-3700
ピペットチップ、1250 & マイクロ;L XL 目盛り付きUSAサイエンティフィック1161-1720
ピペットチップ、200 & マイクロ;L プロファイル目盛り付きUSAサイエンティフィック1163-1700
QuantStudio 3 リアルタイム PCR システムアプライドバイオシステムズA28567
逆転写酵素、上付き文字IV VILO インビトロゲン11756050処理性と熱安定性に優れた逆転写酵素
RNAクリーン&コンセントレーター5キットザイモZR1013
RNaseフリー水フィッシャーバイオ試薬BP2819
RNaseZapシグマR2020RNase除染液
SealRite マイクロ遠心分離機 1.5 mL チューブUSAサイエンティフィック1615-5500
スーパーファイン ヴァンナス 8 cm世界の精密機器501778鋏
qPCR用TaqMan FASTアドバンスドマスターミックスアプライドバイオシステムズ4444557
TaqMan遺伝子発現アッセイ(FAM)プローブ(MTO)サーモフィッシャーサイエンティフィック4448892
トリゾールインビトロゲン15596026酸-グアニジニウム-フェノール溶液
ボルテックスミキサーサーモサイエンティフィック88880017

参考文献

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