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研究記事

脊髄損傷ラットにおける鍼治療におけるミエリン再生促進に関与するニューレグリン1-ErbB4シグナル伝達

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DOI:

10.3791/69166

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2026年2月20日

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Emergency and Intensive Care Unit, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 2Department of Neurology, Beijing Anzhen Nanchong Hospital of Capital Medical University & Nanchong Central Hospital, 3Department of Emergency and Intensive Care Unit, First Affiliated Hospital, Kunming Medical University

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

本研究は、SCIのラットモデルにおける電気鍼治療がミエリン再生に与える影響を調査し、Neuregulin1(NRG1)-ErbB4シグナル伝達経路がこの過程に関与しているかどうかを検証することを目的としています。

要約

脊髄損傷(SCI)はしばしば重度の神経機能障害を引き起こし、ミエリン修復は神経機能回復において重要なステップです。電気鍼治療(EA)は、従来の鍼治療と電気刺激を組み合わせた治療法であり、神経修復の分野で広く応用されています。しかし、EAに関与する特定のシグナル伝達経路はまだ完全には解明されていません。本研究は、脊髄損傷ラットにおけるEAがミエリン再生に与える影響を調査し、Neuregulin1(NRG1)-ErbB4シグナル伝達経路がこの過程に関与しているかどうかを検証することを目的としています。脊髄損傷ラットはT10脊椎節の動脈瘤クリップ損傷により誘発されました。L5-6椎間隙間にポリエチレン(PE)カテーテルを挿入し、皮下で固定して長期的な薬物送達系を確立しました。外因性NRG1およびそのアンタゴニストはPEカテーテルを通じて隔日投与され、1回の注射で20μLの容量を供給しました。EA治療は大追(GV14)および明門(GV4)の鍼穴で隔日で行われ、各セッションは30分間、4週間連続で行われました。結果は、EA治療が脊髄組織におけるミエリン塩基性タンパク質(MBP)の発現を有意に促進し、ラットの後肢運動機能を改善したことを示しました。さらに、外因性NRG1はEAと同様の効果を生み出しました。結論として、NRG1-ErbB4シグナル伝達経路はSCIラットにおけるEA誘導ミエリン再生に重要な役割を果たします。

概要

脊髄損傷は重度の神経学的障害を引き起こす外傷性疾患であり、通常は運動障害、感覚喪失、自律神経機能障害として現れ、世界中の人口100万人あたり年間約40〜80件の発生率があります1,2。損傷後、軸索断裂およびミエリン喪失が神経信号伝導を妨げる主な病理的特徴となります。ミエリンは中枢神経系(CNS)のオリゴデンドロサイトと末梢神経系(PNS)のシュワン細胞によって形成され、その完全性は神経インパルスの迅速な伝導に不可欠です。しかし、脊髄損傷後の局所微小環境における炎症反応、酸化ストレス、グリア瘢痕の形成はミエリン再生を著しく阻害し、慢性神経機能障害を引き起こします5。同時に、SCI後のオリゴデンドロサイト(OL)の死は軸索の脱髄を引き起こし、これは慢性的かつ持続的に進行します。研究により、ヒトモデルおよび動物モデルの両方における軸索脱髄はミエリン再生によって効果的に修復可能であることが示されています。したがって、ミエリン修復を促進する戦略を探ることは、脊髄損傷治療における重要な方向性の一つです。

鍼治療は古代の伝統的な医療技術として、中国、韓国、日本など複数の国で臨床実践で広く応用されています7,8。従来の鍼治療と電気刺激を組み合わせたEAは、臨床現場で広く採用されています。増え続ける証拠は、特に脊髄損傷後のミエリン再生を促進するなど、さまざまな疾患に対して治療効果を持つことを示しています。EA治療中は、GV14やGV49などの鍼穴の選択が非常に重要です。GV14は第7頸椎の棘突起の下、脊椎の正中近くに位置し、GV4は第2および第3腰椎の棘突起の間に位置します。これまでの研究では、炎症性シグナル伝達経路、酸化ストレス、神経栄養因子、オートファジーがEA誘発性ミエリン修復に関与していることが示されています10,11,12。さらに、GV14やGV4などの特定の鍼治療点がEA治療中にミエリン再生を促進する役割を果たすことが示唆される証拠が増えています。13、14、15。しかし、脊髄損傷後にEAがミエリン再生を調節する分子メカニズムはまだ完全には解明されていません。

NRG1は表皮成長因子ファミリーの一員であり、そのアミノ末端領域に基づき、6つのタイプ(I-VI)に分類できます16。NRG1とその受容体ファミリーであるErbB(ErbB1/2/3/4)は、神経系の発達と修復において重要な役割を果たし、神経細胞の移動、分化、再髄鞘化、シナプト形成などの過程に関与しています。PNSの発生過程で、シュワン細胞(SCs)はニューロン軸索に沿って増殖・移動し、ミエリンを形成し、NRG1-ErbB4シグナル伝達経路はPNSシュワン前体細胞の成熟に重要な役割を果たします17,18。過去の研究では、NRG1シグナル伝達経路が神経幹細胞からシュワン細胞への分化に関与し、SCI19後の神経細胞のミエリン修復を促進することが示されています。さらに、ある研究では脊髄損傷後にNRG1-ErbB4シグナル伝達経路が、オリゴデンドロサイト前体細胞(OPCs)をレミエリネーション電位20のシュワン様細胞へと変換することを示しています。Alexらは、ヒト誘導多能性幹細胞由来感覚ニューロンとラットシュワン細胞の共培養システムを構築し、NRG1-ErbBシグナル伝達経路を薬物で遮断することで神経細胞髄鞘化が有意に阻害されることを発見し、この経路がヒト感覚軸索髄鞘化を促進する役割を直接的に証明しました。別の研究では、EA治療が脊髄におけるNRG1の発現をアップレギュレーションし、炎症性痛みを緩和できることも示されています22。

脊髄損傷におけるNRG1-ErbB4シグナル伝達経路へのEAの影響に関する研究は限られており、その根本的なメカニズムは依然として不明です。本研究は、GV14およびGV4鍼位へのEA刺激がNRG1-ErbB4シグナル伝達を調節できるかどうかを調査し、脊髄損傷ラットにおけるミエリン再生促進および神経機能回復におけるその役割の可能性を探ることを目指します。本研究は、SCIラットにおけるNRG1-ErbB4シグナル伝達経路とEA誘導ミエリン再生の関係を初めて調査し、SCIの新規かつ効果的な治療戦略の開発に関する実験的証拠を提供しています。

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プロトコル

実験中は動物の苦痛を最小限に抑えるため、すべての倫理ガイドラインが遵守されました。実験プロトコルおよび設計は昆明医科大学動物実験委員会によって承認されました(承認番号:KMMU2021051)および大学の動物研究ガイドラインに従って実施されました。成虫のオスのスプラグ・ドーリーラット(生後8週、体重250〜270g、n = 60)は、中国雲南省昆明医科大学から取得されました。

動物の調理

動物たちは一定の湿度、適度な温度、12時間の明暗サイクルを持つ管理された環境で飼育されました。動物は11のグループにランダムに割り当てられました:S手術群(S, n = 6)、SCI群(M, n = 6)、ER処理群のSCI(M + EA, n = 6)、NRG-1β処理群のSCI(M + NRG-1β, n = 6)、5% DMSO溶媒群のSCI(M + D, n = 6)、PD158780阻害剤を伴うSCI、およびNRG-1β治療群(M + PD+NRG-1β, n = 6)、PD158780阻害剤およびEA治療群を用いたSCI(M + EA + PD, n = 6)、溶媒およびEA処理群を用いたSCI(M + EA + D, n = 6)、shRNAおよびEA処理群を用いたSCI(M + EA + shRNA, n = 6)、非標的化shRNAを含むレンチウイルスを含む脊髄損傷およびEA処理群(M + EA + NC, n = 6)、SCIおよびshRNA処理群(M + shRNA, n = 6)。現在のサンプルサイズは、類似モデルや介入を用いた過去の経験に基づいて決定されており、この数値で一貫して有意な効果が示されています。さらに、サンプルサイズにもかかわらず、主要なアウトカムにおいて統計的に堅牢かつ有意な差異が観察され、報告された結果への信頼が強化されました。

SCIラットモデル

ヤサルギル動脈瘤クリップ(チタン製、標準閉鎖力70g)を用いてクランプ型技術を用いて脊髄損傷のラットモデルを構築しました(図1A)。ラットは2%のペントバルビタールナトリウム(腹腔内投与30 mg/kg)で麻酔され、手術台に置かれました。背中の皮膚に3〜4cmの切開を行い、その後皮下組織と筋肉を層ごとに剥離してT9-11胸椎棘突起と椎弓を露出させました。血管クリップを用いてT10胸椎棘突起と椎弓を除去し、脊髄を完全に露出させました。ヤサルギル動脈瘤クリップはT10セグメント全体に垂直に配置され、60秒の滞留後に迅速に放出されました。このモデルは、以下の2つ以上の症状が観察された場合に成功とみなされました:(1) 体の痙攣性震え、(2) 尾を振る反射、(3) 脊髄に黒いつまみ跡が目に見える場合。適切な止血を確認した後、切開部を消毒し縫合しました。偽手術グループでも同様の処置が行われましたが、脊髄はクランプされていませんでした。術後、ラットは水分補給のために生理食塩水(腹腔内3mL)と、感染防止のため朝と夕方にそれぞれ1回ずつペニシリン(腹腔内10万単位)を3日間連続で投与しました。自然排尿が回復するまでは手動での排尿補助が提供されていました(1日2回)。

ラットの鞘内チューブと薬物送達

Storksonらの方法に従い、SCIモデル誘導の1週間前にラットのくも膜下腔にカテーテルを挿入しました。麻酔後、ラットは手術台に固定され、L5-6椎間が露出されました。19Gの針を用いて硬膜とくも膜を垂直に貫通しました。針は約1〜2mm進み、くも膜を突破した後、空間感があり、続いて脳脊髄液の澄んだ流れが確認され、刺しが成功したことを示しました。PE-10カテーテル(ポリエチレン、内径0.38mm、外径1.09mm)が穿刺針に沿ってくも膜下腔に挿入されました。カテーテルは約3cmの長さに進められ、カテーテルの先端はL3椎体近くに位置しました。挿入時、ラットの尾の振り返りや後肢の痙攣が観察され、脳脊髄液がカテーテルを通って流れ出し、カテーテルの位置がくも膜下腔内で確認されました。

NRG-1βとPD158780はジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解され、その後人工脳脊髄液(ACSF)で希釈され、最終的なDMSO濃度が0.5%未満に保たれました。最終的な作業濃度はNRG-1βが20 nM、24 PD158780 20 μMでした。SCI後2日目には、M + NRG-1β群のラットに20μLのNRG-1βを隔日で鞘内注射を受けました。M + EA + PD群のラットには、EA治療の2時間前に20μLのPD15878025を鞘内投与しました。

EA治療

手術後3日目 に、ラットは治療台に固定され、電気鍼治療(EA)治療のポイントであるGV14およびGV4に固定されました(図1B)。これらの穴に2本の鍼(0.25 mm x 13 mm)を3〜4 mmの深さで挿入しました。EA療法は、2 Hzのまばら波と10 Hzの高密度波、周波数比1:5のまばらな波パターンを持つ電気鍼治療器具を用いて行われました26。出力強度は30分間、隔日で5(約0.5 mA)に設定されていました。

行動評価

運動機能は、手術後0日、3日、7日、14日、21日、28日の四肢の動き、歩行、協調性、足の位置を評価するBasso, Beattie, and Bresnahan(BBB)スケール27を用いて評価されました( 図2D)。BBBのスケールは0(完全な麻痺を示す)から21(正常な歩行を示す)までの範囲です。すべての評価は、実験グループの割り当てを盲検された2人の研究者によって独立して実施されました。

サンプル採取

実験終了後、麻酔を受けたラットは解剖プラットフォームに固定され、組織採取が行われました。腹腔は開かれ、横隔膜が完全に露出し、血管損傷を避けるために虹彩ハサミで慎重に切り開かれました。その後、肋骨を両肋縁に沿って切り開いて心臓を露出させ、その後左心室の頂端に針を挿入し、約300〜400mLの事前に冷却されたPBSを迅速に灌流して全身血を浄化し、右心房から透明な液体が流れ出るまで続けました。分子タンパク質解析ではこの段階で灌流を停止し、脊柱を解離しました。椎骨を露出させるために隣接する肋骨や筋肉を切除した後、T10節を特定し、虹彩ハサミで約1cmの脊髄節を採取し、液体窒素で速凍して-80°Cで保存しました。 形態学的検査では、PBS後に4%パラホルマルデヒドに灌流を切り替え、筋肉の収縮と胴体の硬直で固定が成功したことが示されました。同じ脊髄は組織構造を保存するために慎重に剥離され、4%パラホルムアルデヒド4°Cで48時間固定されました。

ヘマトキシリンとエオシン染色

脊髄パラフィンの断片は60°Cのオーブンに入れられ、30分間予熱されました。脱ワックス:キシレンIを15分間、その後キシレンIIを15分間処理。再水和:100%エタノールで2分間処理し、その後95%エタノールで2分間処理し、次に80%エタノールで2分間、続いて70%エタノールで2分間処理します。 最後に5分間蒸留水を飲みました。ヘマトキシリン染色は7分間行われ、その後蒸留水で洗浄して残留染色液を除去しました。1%塩酸アルコールで3秒分化し、その後蒸留水で洗浄して残留染色液を除去しました。5%アンモニア水で2分間ブルーイングし、その後残留したブルーイング溶液を洗い流しました。30秒間の嗜酸染色を行い、その後蒸留水で洗浄して残留染色液を除去しました。切片の脱水は70%エタノールで10秒、次に80%エタノールで10秒、最後に100%エタノールで30秒間行いました。クリアリングはキシレンで5分間処理しました。取り付け後、スライドは自然乾燥され、乾燥後に画像を撮影しました。

ルクソールファストブルーステイン

切片はそれぞれ10分間キシレンで2回脱ワックスされ、その後LFBミエリン染色液で染色され、37°Cで一晩培養されました。 翌日、90%エタノールを使って余分な染色液を除去しました。切片はルクソール分異溶液(C0631S)で10秒分化し、その後75%エタノールに30秒浸けられ、灰白質が透明になるまで行われました。最後に、各セクションにエオシン染色液で1分間カウンターステインしました。

ウェスタンブロッティング

タンパク質サンプルは5分間水で煮沸しました。まず5μLのタンパク質マーカーを電気泳動ゲルにロードし、その後テストタンパク質サンプルを順次ロードしました。電気泳動はマーカーバンドが明確に分離されるまで80Vで開始され、その後電圧を130Vに上げて電気泳動が完了するまで維持されました。事前に切断されたPVDF膜をメタノールで1分間活性化し、その後ろ紙に置き、準備済みのゲルと重ね合わせました。タンパク質の移動は300 mAの一定電流で行われ、分子量に応じて移動時間を調整しました(±10分)。移植後、PVDF膜を培養箱に入れ、TBSTバッファーで5分間すすいで後、室温のシェーカーで5%スキムミルクで2時間ブロックしました。その後、膜はTBSTバッファーで3回、各5分間洗浄し、培養前にGAPDH(1:2000)、チューブリン(1:2000)、NRG1(1:1000)、Erb4(1:1000)、MBP(1:1000)などの一次抗体を1晩、4°Cで優しく振って投与しました。翌日、膜はTBSTバッファーで3回5分間洗浄され、その後2次抗体であるヤギ抗ウサギ抗体(1:4000)と室温のシェーカーで2時間培養しました。TBST洗浄後、化学発光法を用いてタンパク質バンドを可視化しました。ホワイトボード画像をImageJソフトウェアにインポートし、50ピクセルのロールボール半径を使って背景の引き算を行います。傾いた帯の場合は、Segmented Lineツールを使って帯をまっすぐにします。Rectangleツールを使ってターゲットバンドを選択し、「 プロットレーン 」を選択して密度プロファイルを作成し、グレースケールの値を可視化します。Magic Wandツールを使ってピークをセグメント化し、グレースケールの値を抽出します。データを保存した後、GraphPad Prismソフトウェアを使って棒グラフを作成します。

免疫蛍光

パラフィン断片はキレンで2回10分間脱ワックスされ、グラデーションエタノール系列で再水和されました。抗原採取は、切片を5%クエン酸溶液で15分間煮沸し、その後10%ヤギ血清で2時間ブロッキングすることで行われました。切片は4°Cで一晩、マウスモノクローナルNRG-1(1:200)、ウサギモノクローナルErbB4(1:300)、ヒトモノクローナルMBP(1:300)と共にインキュベートされました。0.1%トリトンX-100(PBST)を含むリン酸塩緩衝生理食塩水でそれぞれ10分間洗浄した後、切片は以下の二次抗体(FITC標識ヤギ抗マウスIgG(1:500)、FITC標識ヤギ抗ウサギIgG(1:500)、FITC標識ヤギ抗ヒトIgG(1:500)で暗闇で1時間インキュベートされました。各セクションはPBSTで3回10分間洗浄され、その後蛍光信号を保存するためにアンチフェード試薬で固定されました。スライドは暗闇で4°Cの温度で保管されていました。蛍光顕微鏡で10倍対物レンズの下で標的細胞を特定した後、蛍光顕微鏡で40倍レンズに切り替えて蛍光画像を捉えます。

リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)

ErbB4および参照遺伝子GAPDHのプライマーはNCBIのウェブサイトを用いて設計されました。プライマーの配列は以下の通りです:ErbB4 前方プライマー:ACAGCCCTCCTCCTGCCTAC;ErbB4逆プライマー:ATCTCAGCCGTTGCACCCT;GAPDHフォワードプライマー:CCCAGCTTAGGTTCATCATCAGGGT;GAPDHリバースプライマー:TACGCCAAATCCGTTCACA。大豆ほどの大きさの脊髄組織を1.5mLの遠心分離機チューブに入れ、合計600μLのRNA抽出試薬を加えました。組織は徹底的に均質化され、氷上で5分間培養され、その後12,000 x gで4°Cで5分間遠心分離されました。 上清液は新しい1.5 mLチューブに移され、クロロホルム400 μLが追加されました。混合物は十分に混ぜられ、12,000 x gで4°Cで5分間遠心分離されました。 上清液は再び新しいチューブに移され、400μLのイソプロパノールが追加されました。溶液は室温で10分間培養され、その後12,000 x gで10分間遠心分離されました。上澄液は廃棄され、RNAペレットは75%エタノール400μLで洗浄されました。7,500 x gで4°Cで5分間遠心分離した後、上清液は廃棄され、チューブはきれいな表面で逆さまにして自然乾燥させました。RNAペレットは60μLのRNAフリー水に溶けて十分に混合し、RNA濃度を測定しました。RNAの純度と濃度は260nmおよび280nmの吸収を測定し、260/280比が約2.0であることを確認しました。cDNA合成のために、反応1(gDNA消去酵素などを含む)と反応2(逆転写酵素などを含む)を徹底的に混合し、95°Cで15分間培養しました。蛍光PCR反応システムは、cDNA合成キットの指示に従って準備されました。2 μLのサンプルを23 μLのPCR反応混合物に加え、蛍光定量PCRキットプロトコルに従って増幅が行われました。アニーリング温度は60°Cに設定され、増幅条件は以下の通りです:前変性:95°Cで30秒、1サイクル;PCR反応:95°Cで3秒、60°Cで30秒、40サイクル;解離曲線解析は以下の通り行われました:95°Cで5秒、60°Cで30秒、その後60°Cから95°Cへ徐々に上昇し、連続蛍光シグナル取得が行われました。Ct値はBio-Radのコンピュータソフトウェアで測定・計算され、相対mRNAレベルは2-ΔΔCt法で測定されました。

安全および取り扱いガイドライン

パラホルムアルデヒド固定: パラホルマルデヒドは換気の良い排気フードでのみ使用してください。マスク、手袋、白衣、安全ゴーグルなど、適切な個人用防護具(PPE)を必ず着用してください。パラホルマルデヒド溶液は、直射日光や熱源から離れた密閉容器に保管してください。昆明医科大学の実験室安全ガイドラインに従い、有害廃棄物容器に処分する。

DMSOの解決策: DMSOは皮膚を通じて体内に吸収されます。取り扱い時には、手袋や安全ゴーグルなどの適切なPPEを着用してください。DMSOは密閉容器で室温で保管し、強い酸化剤から離れた場所で保管してください。昆明医科大学の検査室安全ガイドラインに従い、DMSO廃棄物は有害廃棄物容器に処分してください。

ペントバルビタール麻酔: ペントバルビタールは規制薬物であり、許可された専門家のみが取り扱うべきです。取り扱い中の誤って接触を防ぎ、使用時には適切な換気をしてください。適切な防護具を着用してください。ペントバルビタールは、許可された担当者の監督のもと、室温の施錠キャビネットに保管してください。ペントバルビタール廃棄物は昆明医科大学の規制薬物ガイドラインに従い、適切な使用許可および廃棄物処理手順を確保してください。

一般的な廃棄物処理: すべての有害化学物質および試薬は、昆明医科大学の検査管理ガイドラインに従って処分されなければなりません。すべての廃棄物は適切にラベルを貼り、安全な処分のために適切な容器に入れてください。

統計解析

すべての実験は三倍以上にわたって行われました。標的タンパク質のバンド密度値は対照群のそれに正規化され、グループ間の比較を容易にしました。データは中央値(四分位範囲)または平均±標準偏差として示され、nはラットの数を表します。正規分布データでは、一方向分散分析(ANOVA)を用いてグループ間の有意差を評価しました。正規分布でないデータについては、グループ比較のためにKruskal-Wallis H検定を適用しました。統計的有意は p < 0.05に設定されました。

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結果

H&E染色およびBBBスコアリングは、EAがSCIラットに対する保護効果を示しています

H&E染色法を用いて脊髄後角細胞の形態と構造を調べました(図2D)。H&Eの結果は、グループSにおいて後角細胞がきれいに配置され、明確な細胞輪郭と中央に核が配置されていることを明らかにしました。対照的に、M群では後角細胞の数が減少し、細胞配列が乱れ、液胞、グリア細胞過形成、脊髄腔の形成が見られました。後角の損傷および空洞形成は、M+EAおよびM + EA + D群でM群と比べて有意に緩和されました。しかし、M + EA + PD群では、M + EA群と比較して後角の損傷後のキャビテーションに有意な改善は認められず、形態的損傷はM群と同様のものでした。

SCI後のラットにおける尿貯留の回復は、自然排尿時間に基づいて評価されました。SCI後、ラットでは重度の尿怨込みが観察されました。M...

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ディスカッション

本研究は、EA治療が脊髄損傷後の脊髄空洞化および脱髄を緩和し、MBPタンパク質発現のアップレギュレーションを通じて再髄形成を促進し、結果としてラットの後肢運動機能を改善することを示しています。さらに、NRG-1/ErbB4シグナル伝達経路が神経細胞再髄鞘化の重要な媒介者であり、EAが脊髄損傷ラットにおける後肢運動機能の再髄化と回復を促進する治療メカニズムの可能性を特定しました。

脊髄損傷の神経伝導は様々な要因によって妨げられ、損傷部位の神経機能障害を引き起こします。脊髄損傷後の主要な病理学的変化、例えば神経壊死、脱髄、再髄鞘化、炎症が神経学的欠損に寄与しています29,30。再髄鞘化はSCI後期の神経機能回復に重要な要因であり、ラットの後肢運動機能スコアと密接に関連しています31。研究により、SCIラットモ...

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開示事項

著者たちは競合する金銭的利害関係がないと宣言しています。

謝辞

本研究への貢献に感謝いたします。本研究は中国国家自然科学基金(NSFC 81960817、82260387)および雲南省科学技術部科学技術計画基礎研究特別プログラム(202301AS070020)の資金支援を受けました。四川北医科大学科学研究開発プロジェクト(CBY22-QNA20)

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
BCAタンパク質検出キット ビヨタイム・バイオテクノロジーP0012S定量的タンパク質解析
電気鍼治療器具華陀電気鍼灸器具、SDZ-V、蘇州—治療用機器
FITC標識ヤギ抗ヒトIgGビヨタイムA0556蛍光二次抗体
FITC標識ヤギ抗マウスIgGビヨタイムA0568蛍光二次抗体
FITC標識ヤギ抗ウサギIgGビヨタイムA0562蛍光二次抗体
蛍光顕微鏡オリンポス——
ヒトモノクローナルMBPアブカムab209328特異的抗体
LFBミエリン染色溶液ソーラービオG3240ミエリン鞘の染色
ミリポールECLミリポールWBKLS0100検出試薬
マウスモノクローナルNRG-1 サンタクルーズSC-57384特異的抗体
ナノドロップ ND-1000ラボテック—
NRG1-1ベータノボプロテイン・テクノロジー社C753組換えヒトNRG1-1ベータ
PD158780GlpBioテクノロジーGC15925表皮成長因子受容体(EGFR)チロシンキナーゼ阻害剤
PE-10導管ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー427401鞘内注射
注射用のペニシリンナトリウムハルビン中京バイオテクノロジー株式会社80451182術後抗感染療法
ウサギモノクローナルErb4アブカムAB109273特異的抗体
RNAisoプラスキット宝9109RT-PCR試薬
RT試薬キット宝RR037ART-PCR試薬
二次抗体ビヨタイム・バイオテクノロジー—特異的抗体
ペントバルビタールナトリウムシグマ・オルドリッチ69020100動物麻酔
ヤサルギル動脈瘤クリップレブストック・インストゥルメンツ GmbH—ラット脊髄損傷モデルの構築

参考文献

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