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方法論記事

血栓プロファイリングアッセイ:生体力学的血栓形成を包括的に特徴づけるためのマイクロ流体ベースのプラットフォーム

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DOI:

10.3791/69555

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2026年1月9日

 ,  ,  , 
1Department of Biochemistry and Molecular Biology and Department of Pathology, University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

本研究は、せん断応力を用いて血液中の血栓形成を誘発し、多次元読み取りによって血栓を特徴付けるマイクロ流体アッセイを記述しています。このアッセイは血液サンプルの血栓促進傾向を測定できるため、疾患診断、薬剤開発、さらには血栓症に関連する基本的なメカニズム研究に役立ちます。

要約

血栓症は、血管内に血小板や凝固因子が異常に蓄積することを記述する病理学的状態です。多くの研究が血栓症の基礎的なメカニズムとして可溶性作動薬による血小板活性化に焦点を当てていますが、血流が血栓形成を促進することもしばしば見落とされがちです。特に動脈では血栓症は動脈狭窄と関連しており、これにより血流のせん断応力が上昇し、血栓形成の過程が促進されます。この現象は生体力学的血栓形成と呼ばれます。長い間、生体力学的血栓形成の過程について包括的かつ詳細な洞察を提供するバイオアッセイは存在しませんでした。これに対処するため、マイクロフルイディクスと多色蛍光イメージングを組み合わせた血栓プロファイリングアッセイが開発され、血栓の大きさや組成、血小板活性化レベルをカバーする7つの読み取り結果により生体力学的血栓形成の包括的な特徴付けが可能となりました。この血栓プロファイリングアッセイは、ヒトにおける血栓促進傾向や抗血栓薬の有効性を評価するために用いられ、動脈血栓症のメカニズムの理解を深めるためにも有用です。

概要

血栓症は心血管疾患の主な原因であり、毎年世界中で何百万人もの死亡の原因となっています。現在、血栓症リスクを評価する標準的な臨床現場でのバイオアッセイは利用されていません。市販化された検査室および現場での血液機能測定法の中で、従来の凝固検査や凝集測定法は血栓症や重大な心血管有害事象の予測に信頼性がないことが証明されています(2,3,4)。全局血栓症検査5、PFA-100/2006、および全局凝固試験7、8、9、10、11も、その性能を裏付けるデータは限定的です。

現在の理解に基づき、血栓形成の過程は主に3つのメカニズムによって寄与しています。従来認められている生化学的血小板凝集と凝固の2つのメカニズムに加え、3つ目のメカニズムとして、せん断駆動の血小板凝集(「生体力学的血小板凝集」とも呼ばれた)があります12,13。生体力学的血小板凝集において、高いせん断応力とせん断勾配が、GPIbα-フォン・ヴィレブランド因子(VWF)、インテグリンαIIbβ 3-VWF、インテグリン αIIbβ3-フィブリノーゲン相互作用による血小板架橋の主な駆動力となります。動脈血栓症において、生体力学的血小板凝集は最も重要なメカニズムであると考えられます。動脈狭窄による高いせん断流によって大きく強化されているためです。したがって、生体力学的血小板凝集による血栓形成は「生体力学的血栓形成」と呼ばれました12,14。

過去の研究では、生体力学的血小板凝集を実験的に観察する一般的な手法としてマイクロ流体狭窄アッセイがあり、重度の狭窄部位を直線的なチャネルに埋め込む方法である。生理的な壁せん断応力の下で血流がチャネルに灌流されると、狭窄部位周辺に病理的に高いせん断応力が発生し、血小板の蓄積を促して血栓を形成します。しかし、以前の研究では血小板に対して血栓の大きさを反映した15,16,17,18,19、最大でも1つ(血小板用と別のバイオマーカー用)13,20のみを使用しており、血栓の包括的な特徴解析はできませんでした。

最近開発された血栓プロファイリングアッセイは、マイクロ流体狭窄アッセイに多色蛍光イメージングを取り入れ、7つのバイオマーカー(血小板、フィブリノーゲンレベル、フォン・ヴィレブランド因子レベル、P-セレチン発現レベル、ホスファチジルセリン曝露レベル、拡張インテグリンαIIbβ 3発現レベル、完全活性インテグリンαIIbβ3)をリアルタイムで追跡します発現レベル)を形成し、生体力学的血栓形成を包括的に特徴づける基盤となります。本研究では、血栓プロファイリングアッセイの調製と実施、および関連するデータ解析に関する詳細なプロトコルが提供されています。アッセイに必要なハードウェアには、逆さまの多色蛍光顕微鏡とマイクロ流体システムが含まれます。このアッセイは比較的少量のヒト全血(2 mL未満)を使用し、コスト効率が高く(サンプルあたり約12ドル)、30分以内に結果を導き出します。このアッセイは、個人の多次元的な血栓前異常を正確に検出し、血栓の大きさ、組成、血小板活性化状態を変化させる抗血栓薬の効果を評価することができ、将来的に研究および臨床目的での広範な応用を支持します。このアッセイは新たに採取したヘパリン化血液を使用する必要がある点は注目に値します。血液を4°Cで保存するか、6時間以上保管するか、ヘパリン以外の抗凝固剤を使用すると、血栓形成を防ぐか、結果が誤りとなります。

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プロトコル

このプロトコルはテキサス大学医学部の人間研究倫理委員会のガイドラインに従い、承認されています。実験用ハードウェア構成は、マイクロ流体装置、灌流部品(コネクター、チューブ、シリンジ、シリンジポンプ)、そして明視野および多色蛍光イメージングを可能にする光学部品を備えた倒立顕微鏡で構成されています。顕微鏡ではマルチLED灯台とマルチパスフィルターキューブを用いて、相互に漏れを最小限に抑える4つの蛍光チャンネルを分割します:励起度:391/32、479/33、554/24、638/31、そして放射:435/30、519/25、594/32、695/58です。すべての実験処置では、手袋、目保護具、実験用ジャケットなどの個人用防護具を着用してください。試薬および使用機器は 材料表に記載されています。

1. マイクロ流体デバイス準備

  1. マスターモールドは、長方形のチャネル(幅200μm×高さ50μm)を含み、80%の光の狭窄部分を組み込むように設計します。各チャンネルにはチューブ接続用の専用のインレットとアウトレットがあります(図1;元の設計ファイルは 補足ファイル1 を参照)。
  2. 設計に基づき、シリコンウェハーを用いて標準的なフォトリソグラフィー で SU-8フォトレジストマスターモールドを製造します。型を15cmのペトリ皿の底にテープで貼り付けます(図2A参照)。
  3. PDMS混合物は、シリコーンエラストマーキット内でプレポリマーベースと硬化剤を10:1の重量比で混合して調製します。混合物をマスターモールド(図2B)に注ぎます。
  4. PDMS混合物を含む板を真空乾燥器に入れて脱ガスし、閉じ込められた気泡を除去します。
    注意:気泡が完全に除去されるまで、プレートは最低2時間真空で保温してください。
  5. PDMS混合物は75°Cで2時間培養して熱硬化します。
  6. マスターモールドから硬化したPDMSを慎重に切り出し(図2C,D)、個々のチップユニットに区切ってください。
  7. プローブニードルを使って指定された場所に穴を開けて、入口と出口を作ります(図2E)。
    注意:パンチした穴に残ったゴミを取り除くには圧縮空気ダスターを使用してください。表面汚染を最小限に抑えるために、接着前にPDMSデバイスを接着テープで洗浄してください。
  8. 化学フードで75%エタノールをタスクワイプにスプレーし、濡らしたタスクワイプでガラススライドを拭き掃除します。ガラススライドは乾かすまで放置してください。
  9. 化学フード内では、ガラススライドとPDMSチップをそれぞれ高周波発生器で30秒と20秒処理し、その後各チップをガラススライドで整列させます。チップをガラススライドの表面に優しく押し付けて、バインドできるようにします。
    注意:この工程は化学フード内で行う必要があります。なぜなら、高周波発生装置は使用中にオゾンを発生させ、健康に有害だからです。
  10. 150°Cで15分間培養して熱接着します。冷却後、デバイスは使用可能になります(図2F)。
  11. デバイスを室温のホコリのない環境で保管してください。
  12. ピンサーでプローブ針のプラスチック部分を取り除き、金属管を90度に曲げます。これらの曲げ管はマイクロ流体デバイスのコネクターとして使用されます。

2. 蛍光センサーの準備

注:この実験は合計7つの蛍光センサーを使用します:SZ22-FITC、フィブリノーゲン-Alexa Fluor 405、2.2.9-Alexa Fluor 555、AK4-Alexa Fluor 647、Annexin V-Pacific Blue、MBC 370.2-Alexa Fluor 555、PAC-1-Alexa Fluor 647。その中でも、フィブリノーゲン、2.2.9、MBC 370.2は市販されている非共役形態のみであり、実験室で蛍光共役する必要があります。

  1. アレクサフルオ405とフィブリノーゲンの共役を組み合わせる方法:
    1. 新たに0.1Mの重炭酸ナトリウムバッファー、pH8.5を作ります。
    2. フィブリノーゲンストックをリン酸塩緩衝塩水(PBS;137 mM NaCl、2.7 mM KCl、10 mM Na2HPO4、1.8 mM KH2PO4、pH 7.4)に希釈して1 mg/mLにします。
    3. フィブリノーゲン溶液に炭酸水素ナトリウムバッファーを1/10の量に加えます。
    4. 1 mLのフィブリノーゲンと1 mgのAlexa Fluor 405 NHS-エステルを混合し、室温で回転子に1時間培養します。光から守る。
    5. 1,100 × g で2分間遠心分離してカラムを分離し、フロースルーを廃棄します。反応溶液をカラムに装填し、カラムを適合する収集バイアルに取り付け、1,100 × g で遠心分離機をかけて5分間、フィブリノーゲン-Alexa Fluor 405を収穫します。
    6. 分光光度計を使って、280 nm(A280; タンパク質信号)および405 nm(A405; 染料信号)波長の吸光度を測定します。タンパク質濃度とF/P比(蛍光:タンパク質モル比)を計算します。
      注意:F/P比率は8〜10の範囲に置くべきです。
    7. フィブリノーゲン-Alexaフルオ405は暗闇で4°Cで保存してください。
  2. Alexa Fluor 555と2.2.9抗体およびMBC 370.2抗体の共役抗体:
    1. 新たに0.1Mの重炭酸ナトリウムバッファー、pH8.5を作ります。
    2. 抗体ストックをアミンフリーバッファーで1 mg/mLに希釈します。
    3. 抗体溶液に炭酸水素ナトリウムバッファーを1/10の体積に加えます。
    4. 100μL抗体とAlexa Fluor 555 NHS-エステル1バイアル(100μg)を混合し、室温でローテーター上で1時間培養します。光から守る。
    5. 1,100 × g で2分間遠心分離して、精製カラムから貯蔵バッファを取り出し、フロースルーを廃棄します。反応溶液をカラムに搭載し、カラムを対応する収集バイアルに取り付け、1,100 × g で5分間遠心分離して2.2.9またはMBC 370.2-Alexa Fluor 555を収穫します。
    6. 分光光度計を使って、280 nm(A280、タンパク質信号)および555 nm(A555:染料信号)波長での吸収を測定します。抗体濃度とF/P比(蛍光:抗体モル比)を計算します。
      注意:F/P比率は1〜1.5の範囲であるべきです。
    7. 2.2.9とMBC 370.2-Alexa Fluor 555を暗闇で4°Cの温度で保存してください。
      注意:過剰表示は避けてください。高いF/P比は生物学的機能を損なう可能性があります。

3. ヒト被験者からの血液採取

注意:この処置は資格を持つ医療従事者(例:有資格看護師、認定採血技師)によって実施されなければなりません。また、研究参加者から書面によるインフォームドコンセントを取得してください。

  1. 注射器を準備するには、10 mLの血液10 mLあたり0.32 U/mLヘパリンを含む500 μLのタイロド緩衝液(12 mM NaHCO3、10 mM Hepes、137 mM NaCl、2.7 mM KCl、5.5 mM D-グルコース、0.5%牛血清アルブミン、pH 7.4)を吸引します。
  2. 静脈穿刺 で 血液を集める。空の注射器を使って最初の2mLの血液を採取し、捨てます。その後、ヘパリン入りの注射器に切り替えて血液サンプルを採取します。注射器をゆっくり引き抜いて血小板の活性化を最小限にしてください。
  3. 採取した血液を15mLの遠心分離機チューブに移し、37°C以下に保ちます。
    注意:血液サンプルは採血後6時間以内に実験に使用してください。

4. 血栓プロファイリングアッセイ

注意:血液の取り扱いに関するすべての処置は、可能な限りバイオセーフティキャビネット内で行うことが推奨されており、被験者への血液のこぼれを防ぐためです。それが難しい場合は、ベンチトップのスプラッシュシールドを使いましょう。

  1. VWFモノマーをPBS中で2 μg/mLに希釈します。マイクロ流体デバイスにVWFモノマーをプリコーティングし、室温で1時間インキュベーションします。
  2. 蛍光センサーセット1または2を室温で10分間培養します:
    1. セット1:SZ22-FITC(0.5 μg/mL)、フィブリノゲン-Alexa フルオリ405(60 μg/mL)、2.2.9-Alexa フルオリウム555(1 μg/mL)、AK4-Alexa フルオナ647(1 μg/mL)。
    2. セット2:SZ22-FITC(0.5 μg/mL)、Annexin V-Pacific Blue(1 μg/mL)、MBC 370.2-Alexa フルオナ55(1 μg/mL)、PAC-1-Alexa Fluor 647(1 μg/mL)。
      注:2つのセンサーセットを別々に使用する必要があるため、各血液サンプルは少なくとも2回(センサーセット1とセンサーセット2で1回)検査し、完全なデータセットを取得する必要があります。
  3. マイクロ流体装置をインレットとアウトレットのコネクターとチューブで接続します。インレットコネクターのもう一方の端にはPBSが入ったチューブを、もう一方の端を注射器で接続します。注射器を注射器ポンプに取り付けます。マイクロ流体装置を倒立顕微鏡に取り付け、手動でステージを操作して顕微鏡下の狭窄部位を見つけます(図3A)。
  4. マイクロフルイディックチャネルとチューブにPBSをシリンジポンプで0.5 mL/minの流量で充填します。狭窄部位の周囲に気泡がないか確認してください。
  5. 入口チューブと血液サンプルを接続し、シリンジポンプを使ってマイクロ流体チャネルに血液サンプルを0.018 mL/minの流量で灌流します(図3A)。
  6. 各蛍光チャネルの露光時間とゲインを設定します。4つのチャネルを交互に切り替え、1種類の蛍光分子を励起させることでリアルタイムの多色蛍光イメージングを行います。その間に血栓の焦点面を見つけ、狭窄部位で通常15〜30分の信号を記録します(図4)。
    注意:各チャンネルの露光時間を調整し、蛍光信号を容易に識別しつつ飽和を避ける必要があります(図4)。現在のシステムでは、健康な被験者の血液サンプルは通常、形成された血栓内で以下の信号強度範囲を示します:SZ22-FITC、70-110;線維原-アレクサ・フルオリウム 405, 60-100;2.2.9-Alexa Fluor 555, 70-110;AK4-Alexa フルア 647, 45-75;付属書V-パシフィックブルー、35-65;MBC 370.2-Alexa フルー 555, 45-85;PAC-1-アレクサ・フルー647、10-30。しかし注目すべきは、健康な被験者のごく一部が非典型的な数値を出すことです。したがって、各チャネルの曝露時間が適切に選ばれるかを確認するために、少なくとも5人の健康な被験者の血液サンプルを検査することが推奨されます。

5. データ分析

  1. ImageJ 1.53(フィジー国立衛生研究所)を使ってデータファイルを開きます。
    注意:各ファイルには4つの異なるチャンネルから合計4本の動画が含まれている必要があります。以下の手順は、ユーザーが分析したい任意の時間点に一般的に適用されます。
  2. SZ22-FITCチャネルを使って血栓の輪郭を特定し、「ポリゴン選択」を使って血栓の大まかな領域を選びます(図5A,B)。
  3. 各チャンネルでは、 画像-> 調整->閾値 を使って背景を除去し(図5C)、次に 「分析->測定 」を使って血栓内の信号の面積と平均強度を測定します。
    注:SZ22-FITは血小板を染色するため、血栓の大きさを反映します。セット1では、フィブリノーゲン-Alexaフルオ405はフィブリノーゲン濃縮レベルを反映し、2.2.9-Alexaフルオフル555はフォン・ヴィレブランド因子(VWF)濃縮レベルを、AK4-Alexaフルオフル647はP選択発現を反映しています。セット2では、アネクシンV-Pacific Blueはホスファチジルセリン(PS)曝露を反映し、MBC 370.2-Alexa Fluor 555は拡張構造(E+ αIIbβ3)へのインテグリンαIIbβ3の活性化を反映し、PAC-1-Alexa Fluor 647はインテグリンαIIbβ3の完全活性化を反映します(Act. αIIbβ3)21。

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結果

血栓プロファイリングアッセイは、狭窄チャネルを通じて血液を灌流し、せん断駆動の血栓形成を可能にし、形成された血栓に関する多次元情報をリアルタイムで多色蛍光画像で収集します。セット1とセット2の両方のセンサーを用いて実験を行うことで、血栓の大きさ、架橋タンパク質の濃縮(フォン・ヴィレブランド因子、フィブリノーゲン)、さらに血小板活性化レベル(P選択発現、PS曝露、インテグリンαIIbβ3 活性化に反映)などの側面で血栓を特徴付けることができるはずです21。

各実験から収集されたデータは、信号と「信号 」をレンダリングするために徹底的に分析できます。時間曲線(図 6参照)。しかし、これは時間がかかります。あるいは、単一の時間点、つまり各チャンネルに1枚の画像を選んでデータ解析を行うこともできます。例えば、血栓発生から7.5分後は通常、健康な血液の血栓が...

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ディスカッション

マイクロ流体狭窄アッセイと多色蛍光イメージングを組み合わせることで、血栓プロファイリングアッセイは生体力学的な血栓形成および血小板メカノバイオロジーの研究に便利かつ強力なアプローチを提供します。一方で、このアッセイは幅広い用途で有用です。例えば、生体力学的血小板凝集を特異的に阻害する抗血栓薬のスクリーニングに用いられ、分子標的と作用機序は効果バーコード21から推測できます。また、特定の集団における血栓促進傾向を研究し、心血管疾患のリスク因子の影響を特定し特徴づけ、個人の血栓促進傾向を評価するためにも利用できます。血栓プロファイリングアッセイは、個人の血栓促進傾向を評価し、患者に対する個別化抗血栓治療レジメンの開発を支援する臨床翻訳において有望であると考えています。

血栓プロファイリングアッセイは多用途です。分子センサーはカスタマイズに応じて自由に変更・取り外し可能です。例えば、実験者が血栓の大きさとE+ αIIbβ...

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開示事項

著者には開示すべき利益相反はありません。

謝辞

本論文に関連する研究およびチェン研究室での血栓プロファイリングアッセイの開発は、国立心臓肺血液研究所助成金R00HL153678(Y.C.)、国立老化研究所、クロード・D・ペッパー・オールダー・アメリカンズ・インディペンデンス・センター賞 #P30-AG024832(Y.C.)、UTMBチームサイエンスパイロット研究賞(Y.C.)、アメリカ心臓協会ポスドクフェローシップ20POST35080023(Y.C.)によって支援されました。 およびアメリカ心臓協会変革プロジェクト賞25TPA1471420(Y.C.)です。この研究は、国立科学財団(Grant ECCS-2025752)が支援する国立ナノテクノロジー調整インフラ(National Nanotechnology Coordinated Infrastructure)のメンバーであるUCSDのサンディエゴ・ナノテクノロジー・インフラストラクチャー(SDNI)で一部実施されました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
10mLシリンジヘンケ・サス・ウルフ5100-X00V0血液サンプルの採取
15mLファルコンチューブジェネシー・サイエンティフィック28-101血液サンプルの保管
1mL ガス密閉ガラスシリンジハミルトン81331ハードウェアアセンブリ
2.2.9MERU VasImmune血栓染色
20本×1/2プローブ針マクマスター・カーM919PDMSデバイスの製作
20mLシリンジヘンケ・サス・ウルフ5200-X00V0血液サンプルの採取
70%エタノールシグマ・オルドリッチEX0281-1ガス密閉注射器の消毒とガラススライドの洗浄
AK4-アレクサ・フルー 647バイオレジェンド304918血栓染色
アレクサ・フルア・フルー 405 NHS エステルインビトロジェンA30000フィブリノーゲン標識
Alexa fluor 555抗体標識キットインビトロジェンA88065MBC 370.2および2.2.9のラベル表示
アネクシンV-パシフィックブルーインビトロジェン501121505血栓染色
クリーニングダスターオフィスデポ911245PDMSデバイスの製作
木箱付きクラフトホビーナイフセットエクセルブレード44282PDMSデバイスの製作
脱イオン水とnbsp;サーモフィッシャー・サイエンティフィック 751-628気密注射器の洗浄
乾燥器ベルアートF420270000PDMSの脱ガス
使い捨て多目的実験用スパチュラLevGo17211シリコーンエラストマーベースと硬化剤の混合 
染料・ビオチン除去スピンカラムゼバA44296Sフィブリノーゲン標識
フィブリノーゲン革新的な研究IHUFBG25MG血栓染色
フュージョン200-Xシリンジポンプケミックス社0720Xハードウェアアセンブリ
ヘパリン シグマ・オルドリッチH3149血液検査の抗凝固
高周波発生器エレクトロテクニック製品株式会社BD-20PDMSデバイスの製作
ヒトVWFモノマーシノバイオカル株式会社10973-H08Cマイクロフュイディックデバイスコーティング
Image J v1.53ソフトウェアフィジー国立衛生研究所データ分析
逆立顕微鏡ライカDM ILがリードし、フィルターキューブ:ライカDFT51010;灯台:LED5ハードウェアアセンブリ
キムワイプズキンバリー - クラーク・プロフェッショナル34120ガラススライドの清掃
ルアーロックキャップインターナショナル・メディカル・インダストリーズ社57100B血液サンプルの採取
MBC 370.2ケラファストEBW104血栓染色
顕微鏡カバーグラスポール・マリエンフェルト有限会社 &KG中隊ES0107222PDMSデバイスの製作
ミニカミソリブレードスクレーパースタンリー28-100PDMSデバイスの製作
NanoDrop 2000 UV-Vis分光光度計サーモ・サイエンティフィックND-2000タンパク質濃度とF/P比の測定
オーブンラボライン・インストゥルメンツ3512PDMSデバイスの製作
PAC-1-アレクサ・フルー647バイオレジェンド362806血栓染色
プラスチックカップサーモフィッシャー・サイエンティフィック S04589シリコーンエラストマーベースと硬化剤の混合 
SU-8フォトレジストマスター カビUCサンディエゴ ナノ3ナノファブリケーションクリーンルーム施設PDMSデバイスの製作
シルガード184シリコーンエラストマーキットクレイデン・ダウDC4019862PDMS
SZ22-FITC ベックマン・カウルターIM 1756U血栓染色
チュービングコール - パーマー・インストゥルメント社06422-01ハードウェアアセンブリ

参考文献

  1. Lindstrom, M., et al. Global burden of cardiovascular diseases and risks collaboration, 1990-2021. J Am Coll Cardiol. 80 (25), 2372-2425 (2022).
  2. Lim, H. Y., O'malley, C., Donnan, G., Nandurkar, H., Ho, P. A review of global coagulation assays - is there a role in thrombosis risk prediction. Thromb Res. 179, 45-55 (2019).
  3. Paniccia, R., Priora, R., Liotta, A. A., Abbate, R. Platelet function tests: A comparative review. Vasc Health Risk Manag. 11, 133-148 (2015).
  4. Zhang, Y., Jiang, F., Chen, Y., Ju, L. A. Platelet mechanobiology inspired microdevices: From hematological function tests to disease and drug screening. Front Pharmacol. 12, 779753(2021).
  5. Gorog, D. A., et al. First direct comparison of platelet reactivity and thrombolytic status between Japanese and Western volunteers: Possible relationship to the "Japanese paradox". Int J Cardiol. 152 (1), 43-48 (2011).
  6. Gorog, D. A., Becker, R. C. Point-of-care platelet function tests: Relevance to arterial thrombosis and opportunities for improvement. J Thromb Thrombolysis. 51 (1), 1-11 (2021).
  7. Lopez-Jaime, F. J., et al. Clot stiffness measured by seer sonorheometry as a marker of poor prognosis in hospitalized COVID-19 patients. Clin Appl Thromb Hemost. 28, 10760296221112085(2022).
  8. Bochsen, L., Wiinberg, B., Kjelgaard-Hansen, M., Steinbruchel, D. A., Johansson, P. I. Evaluation of the TEG platelet mapping assay in blood donors. Thromb J. 5, 3(2007).
  9. Lipets, E. N., Ataullakhanov, F. I. Global assays of hemostasis in the diagnostics of hypercoagulation and evaluation of thrombosis risk. Thromb J. 13 (1), 4(2015).
  10. Thromboelastography loinc code 67790-6. , LOINC Committee. (2022).
  11. Volod, O., Viola, F. The quantra system: System description and protocols for measurements. Methods Mol Biol. 2663, 743-761 (2023).
  12. Nesbitt, W. S., et al. A shear gradient-dependent platelet aggregation mechanism drives thrombus formation. Nature Medicine. 15 (6), 665-673 (2009).
  13. Chen, Y., et al. An integrin alphaiibbeta3 intermediate affinity state mediates biomechanical platelet aggregation. Nat Mater. 18 (7), 760-769 (2019).
  14. Li, M., Hotaling, N. A., Ku, D. N., Forest, C. R. Microfluidic thrombosis under multiple shear rates and antiplatelet therapy doses. PLoS One. 9 (1), e82493(2014).
  15. Colace, T. V., Diamond, S. L. Direct observation of von Willebrand factor elongation and fiber formation on collagen during acute whole blood exposure to pathological flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (1), 105-113 (2013).
  16. Westein, E., et al. Atherosclerotic geometries exacerbate pathological thrombus formation poststenosis in a von Willebrand factor-dependent manner. Proc Natl Acad Sci USA. 110 (4), 1357-1362 (2013).
  17. Brazilek, R. J., et al. Application of a strain rate gradient microfluidic device to von Willebrand's disease screening. Lab Chip. 17 (15), 2595-2608 (2017).
  18. Tovar-Lopez, F. J., et al. A microfluidics device to monitor platelet aggregation dynamics in response to strain rate micro-gradients in flowing blood. Lab Chip. 10 (3), 291-302 (2010).
  19. Kim, D. A., Ku, D. N. Structure of shear-induced platelet aggregated clot formed in an in vitro arterial thrombosis model. Blood Adv. 6 (9), 2872-2883 (2022).
  20. Receveur, N., et al. Shear rate gradients promote a bi-phasic thrombus formation on weak adhesive proteins, such as fibrinogen, in a vwf-dependent manner. Haematologica. 105 (10), 2471-2483 (2020).
  21. Din, M., et al. Multi-parametric thrombus profiling microfluidics detects intensified biomechanical thrombogenesis associated with hypertension and aging. Nat Commun. 15, 9067(2024).
  22. Stein, P. D., Sabbah, H. N. Measured turbulence and its effect on thrombus formation. Circ Res. 35 (4), 608-614 (1974).
  23. Mahalingam, A., et al. Numerical analysis of the effect of turbulence transition on the hemodynamic parameters in human coronary arteries. Cardiovasc Diagn Ther. 6 (3), 208-220 (2016).
  24. Thomson, E. E., et al. Gigapixel imaging with a novel multi-camera array microscope. Elife. 11, e74988(2022).

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