このプロトコルは、シ ロイヌズナ の葉から細胞外小胞(EV)を分離し、下流の分子および機能解析を支援する最適化方法を説明しています。
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この記事について
サマリー
要約
細胞外小胞(EV)は、多様な生物や細胞タイプによって分泌される膜に結合されたナノ粒子であり、細胞間および界を超えたコミュニケーションの重要な媒介者としてますます認識されています。哺乳類システムではEV生物学が確立されていますが、植物EV研究は比較的最近で急速に拡大しています。これは、植物EVが免疫や植物と微生物の相互作用に関与する小さなRNA、mRNA、タンパク質、その他の貨物を運搬できることの証拠に部分的に支えられています。しかし、高純度の植物EVの単離は、硬い細胞壁、豊富な二次代謝物、そして網膜液収集時の細胞質汚染リスクのため、技術的には依然として困難です。このプロトコルは、 シロイナナズナ の葉組織から植物EVを分離・精製するための効率的なワークフローを示しています。細胞損傷や細胞質漏れを最小限に抑えるために穏やかな注射器を用いた浸透ステップが用いられ、葉柄や血管組織を含まない個々の葉片を使用することで、血管関連および細胞内内容物からの汚染を減らすのに役立ちます。EVは最初、差動遠心分離で濃縮され、さらにスロース密度勾配分画またはサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)を用いて精製されます。このプロトコルは、ナノ粒子追跡解析および透過電子顕微鏡による評価により、細胞損傷や細胞質液の収集時に細胞損傷や細胞質漏れを最小限に抑えることで、構造的な完全性を保ち、細胞汚染を最小限に抑えるEVを実現します。これらのEVサンプルは、RNAプロファイリング、プロテオミクス、植物と微生物の相互作用研究のための機能的アッセイなどの後継用途に適しています。全体として、この方法は高品質なプラントEVを再現可能かつ適応性のある方法で実現します。
概要
細胞外小胞(EV)は、細菌から人間に至るまで幅広い生物によって分泌される脂質二重層結合膜粒子です1,2。動物系では、EVは生合成経路とサイズ3に基づいてエクソソーム、微小胞、アポトーシス体に分類されることが多いです。エクソソーム(直径約30〜150 nm)は多胞体(MVB)が細胞膜と融合し、体内小胞4が放出されることから発生し、微小小胞(直径約100〜1000 nm)が細胞膜から直接芽生えます。エクソソームや微小胞に加え、哺乳類の細胞はプログラムされた細胞死の際に放出されるアポトーシス体も産生します。これらの小胞は免疫調節、腫瘍の進行、治療的投与に関与していることが示されており、活発な生物医学研究の対象となっています7,8。植物では、EVの分類は動物よりも明確に定義されていません。シロイナドプシス・タリアナの研究では、タンパク質マーカー、サイズ、推定される生物生成経路の違いに基づき、複数の植物のEVサブタイプが特定されています。これには、多胞体由来のエクソソーム様小胞と考えられるテトラスパニン(TET)陽性のEV9,10、シンタキシンタンパク質Penetration 1(PEN1)陽性EV11、エキソシスト陽性オルガネラ(EXPO)由来のEV12,13、そしてオートファジー関連EV14や花粉体15などの他のEV集団が含まれます。
増え続ける証拠は、植物が病原体に対する防御戦略の一環としてEVを分泌していることを示唆しています。植物のEVは、小さなRNA、mRNA、その他の調節分子を含む多様な分子貨物を届け、真菌や卵菌類病原体の病原性を抑制します(10,16,17,18,19)。これらの発見は、EVが「RNA戦争」の手段として機能し、植物が病原体遺伝子発現を直接抑制するメカニズムであることを強調しています。このメカニズムは作物保護に深い影響を持ちます。免疫だけでなく、植物のEVは細胞壁の再構築、ストレス応答、発生シグナル伝達にも寄与する可能性があります21。動物EV研究とは異なり、標準化された分離および特性評価プロトコルが広く確立されていますが、植物EV分野はまだ形成段階にあります。これにより、研究間の再現性と比較性が制限され、これらの小胞を分離・研究するための堅牢で標準化された方法論が緊急に求められています。
植物用EVを隔離することは、動物システムでは経験されない独特の技術的課題を伴います。損傷した植物組織には豊富な二次代謝物、細胞壁の残片、細胞門断片が含まれており、これらはEVと共純化できるため、下流の特性評価を複雑にします。さらに、工場のEV分離および精製の起始材料として一般的に用いられるアポプラスティック洗浄液(AWF)は、しばしば不均一な小胞と汚染物質の混合物を生み出します。差動遠心分離は依然として広く使われている基礎的手法ですが、異なるEVサブ集団を完全に分離したり、共分離された高分子複合体からEVを分離したりすることはできません。最近のレビューと方法論的研究は、植物EVの分離と特性評価に関する重要な指針とベストプラクティスの考慮事項を提供しています(27,28,29,30,31)。それでもなお、これらの手法の実践的な実装と統合は依然として困難であり、EVの純度や再現性を向上させるためには、密度勾配遠心分離やサイズ除外クロマトグラフィーなどの追加の精製工程がしばしば必要とされています。
ここでは、多段階精製戦略を用いて シロイナズナ の外膜洗浄液からEVを分離するための簡潔なプロトコルを紹介します。一般的に用いられている植物EV分離法が真空ポンプによる全植物浸透に依存するのに対し、このプロトコルは葉柄や維管束組織の含有を避けており、これにより維管束構造からの汚染が増加することがあります。代わりに、分離された葉片と穏やかな注射器を用いた浸透法が用いられ、組織の破壊を最小限に抑えつアポクラストの収集を改善します。葉の取り扱い、向き付け、遠心分離の慎重な条件により、細胞内成分からの汚染をさらに減らし、EVの隔離に向けたよりクリーンな出発材料を提供します。差分遠心分離後、EVはショ糖密度勾配分画またはサイズ排除クロマトグラフィーを用いてさらに精製され、より高い小胞純度と分解能を実現できます。得られるEV製剤は、RNAシーケンス、プロテオムプロファイリング、病原体相互作用やEV取り込み研究などの機能的アッセイなどの下流応用に適しており、植物EV研究における再現性と解釈性を高めています。
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プロトコル
注意:EVの完全性を保つために、冷蔵遠心分離機で4°Cの遠心分離工程を実施してください。滅菌チューブの使用が推奨されます。すべてのサンプル取り扱いステップは迅速かつ効率的に行われるべきであり、理想的には複数の人が同時に作業することで組織損傷を最小限に抑え、EVの品質を損なう汚染を防ぐことができます。
1. 葉の準備と浸透
- 20 mM MESハイドレート、2 mM CaCl2、0.1 M NaCl、pH 6 からなる1Lの小胞分離バッファー(VIB)を準備します。
- 葉の根元を切って葉柄を取り除き、葉片の遠位部分を収穫します。
注意:十分なEV収量を確保するために、処理または遺伝子型ごとに少なくとも100株の4週間齢植物を推奨します。シロイナナズナは8時間の光と16時間の暗いサイクルで育てられました。葉の白化や萎縮など、ストレスの目に見える葉は使わないでください。 - 葉を逆浸透(RO)水で3回洗います。紙タオルの上に置き、優しく叩いて乾かします。
- 約50mLの葉を120mLの注射器に詰めます。シリンジを軽く叩いて葉を落ち着かせます。
- 葉が完全に浸かるまで約60mLのVIBを注射器に加えます。プランジャーを優しく押して閉じ込められた空気を排出します。注射器の先端にパラフィルムを4回折りたたんで、漏れを防ぎます。
注意:注射器を用いた真空浸透を行う際は、真空をかける前に注射器とプランジャーがしっかり組み立てられていることを確認してください。力を徐々に加え、急なプランジャーの動きやコントロールの喪失を防ぐために、注射器をしっかり握り続けてください。 - プランジャーをゆっくりと外側に引っ張って真空を作り出し、葉に浸透させます。プランジャーを伸ばしたまま5秒ほど保持し、ゆっくりと離します。この浸透サイクルを2〜3回繰り返し、葉がより濃く半透明になるまで繰り返します。これは浸透が成功したことを示します。
- 注意:プランジャーを引くには真空抵抗のため中程度の力が必要です。プランジャーをゆっくり引き抜く間、シリンジはしっかりと保持して浸透を制御する必要があります。
- 葉が染み込んだら、プランジャーを抜いてください。余ったバッファーをシンクに流し込みます。
- 収穫した葉がすべて浸透するまで、ステップ1.4から1.7を繰り返します(図1A)。
2. 離胞洗浄液(AWF)の収集
- 1~12インチのスコッチテープを切り取り、粘着面を上にして貼ります。テープの片端を、幅広のすぐ下にある空の不要な1mL注射器に巻きつけて固定します。浸透した葉を約50〜70枚の粘着性のある表面に沿って重ねて丁寧に配置し、各刃の根元が下部注射器に向かい、先端が上向きになるように配置します(図1B)。
注意:1枚のテープに複数の葉を重ねるとダメージを防ぐことができます。すべての葉をブレードの片端を向け、収集チューブの底部に向かって整列させ、遠心分離中に効率的な網膜液回収を可能にします。 - テープで包んだ葉を注射器にしっかりと巻きつけ、束の上部を2本のスコッチテープで留めます。包まれた注射器を50mLのチューブに挿入し、葉の切り口と注射器の底をチューブの底に向けて配置します。葉はしっかりとテープで固定してください。緩く巻くと葉が損傷し、破損した細胞が放出されてアポプラスト洗浄液を汚染することがあります(図1B)。
- 浸透した葉を含んだ包まれた注射器を、固定角度ローターを備えた冷蔵遠心分離機で900× g で4°Cで10分間遠心分離します。新しい15mLの円錐形チューブにアポプラスティック洗浄液を採取し、サンプルを氷の上に保管してください。すべての葉がAWFの回収に使われるまで、ステップ2.1-2.3を繰り返します。
注意:AWFはクリアで、緑色や薄緑色ではありません。緑色のAWFは葉緑体/クロロフィルの存在を示し、細胞汚染を示すこともあります。葉のダメージを最小限に抑えるために、固定角度のローターを使いましょう。
3. 差動遠心分離によるAWFからのシロイヌスEV分離
- スイングバケットローターを備えた冷蔵遠心分離機を用いて、2,000gで4°Cで20分間収集したアポプラスティック洗浄液を遠心分離し、標準的な加速・減速設定が設定されています。遠心分離後、0.45μmのナイロンセルフィルターを使って上清液から大きな細胞ゴミを除去します。ペレットは捨てる。ろ過した上清液を新しい遠心分離機チューブに移します(図2)。
- 固定角度ローターを備えた冷蔵遠心機を用いて、4°Cで10,000 ×g のフィルター済み上清液を30分間遠心分離し、標準的な加速・減速設定を備えています。ペレットは捨て、超遠心分離のために上清液を残します。この工程により、大きな細胞残渣や大きな小胞も除去されます(図2)。
- 上清液を17 mLの超遠心分離機管に移し、スイングバケットローターを備えた超遠心分離機を用いて100,000 × g で4°Cで1時間、標準的な加速・減速設定で遠心分離機に移します。遠心分離後、上清液を捨て、約16 mLのVIBバッファーに再懸浮して洗浄します。超遠心分離ラウンドを繰り返してEVを回収します(図2)。
注:100,000 x g での遠心分離は、エクソソームなどの小さな小胞の沈降のために行われます。その後の洗浄工程では、ペレットをバッファー内に再懸浮させることで非EVタンパク質を除去します。超遠心分離機管は、遠心分離前にメーカーの仕様に従って質量で慎重にバランスを取る必要があります。使用前にチューブやローターの欠陥を点検し、走行開始前にローターが適切に固定されていることを確認してください。 - 上澄液を捨てて、ペレットをVIBで再懸濁させます。ピペットの先端でチューブの底を優しくこすり、EVペレットの完全な回収を促進します(図2)。
注意:EVペレットはしばしば半透明で、再懸浮後は目視で検出されないことがあります。チューブの底を優しくこすり取ることで、EVのリサスペンション作業が容易になります。望ましいEV濃度を達成するためにリサスペンションの容積を調整してください。リサスペンション量が小さいほど、一般的にEVの準備がより集中します。通常、EVを50μLで再懸濁すると、タンパク質濃度は約1〜1.5μg/μL、粒子濃度は10〜10μg/mLに近づきます。 - リサスペンドされたEVは即時使用時は4°C、長期保存時は液体窒素での急凍を防ぐために-80°Cで保管してください。
注意:長期蓄電はEVの健全性を低下させる可能性があります。可能な限り新しく準備されたEVを使用してください。
4. ショ糖密度勾配分画を用いたEV精製
注:超遠心分離だけでは複数の種類の小胞が共に沈殿します。より細かい分解能を得るために、密度勾配分画を用い、浮力密度や浮力特性に応じて小胞を分離します。このアプローチでは、ショ糖勾配を用いて定義されたEVサブ集団を濃集します。または、ヨジキサノール勾配を用いることもできます。
- EVのトップロードショ糖勾配分離
- 10%から90%のショ糖勾配株を準備し、以下の濃度からなります:10%、16%、22%、28%、34%、40%、46%。VIB使用率は52%、58%、64%、70%、90%でした。70%と90%のストックを溶かすために60°Cの水浴を使いましょう。
- 17 mLの超遠心分離機チューブに各ショ糖溶液1 mLを層状に積み、最も濃縮度の高い溶液から始めて、最も濃度の低いものへ順に積み重ねて不連続勾配を準備します。勾配を組み立てる際は10%ショ糖層を除外してください。
注意:隣接する層間の混ざりを最小限に抑えるため、チューブの内壁に沿って各密度層を慎重に分散してください。連続的かつ制御された流量を提供し、勾配安定性を向上させるために、低速に設定した自動ピペットが推奨されます。通常の手動ピペットを使用する場合は、ピペットの先端を前層の界面のすぐ上に位置させ、気泡の発生を防ぐためにゆっくりと一定に行うべきです。 - 再懸濁したEVペレット(約100μgのEVタンパク質)を10%ショ糖溶液1mLと混ぜます。そして、この混合物を不連続層の最終層として重ねます。総体積は~12.1 mLとなります。
- 遠心分離機で100,000g、4°Cで16時間使用。
注意:長時間の超遠心分離運転では、チューブ、キャップ、ローターが長時間の高速運転に耐えられていること、そしてメーカー推奨のバランス手順が守られているかを確認してください。 - 1サンプルあたり、上からピペットで6つの2 mL分画を採取します。各分画を新しい17 mLの超遠心分離機チューブに移します。
- 収集した分画を~16 mLのVIBバッファーに再懸浮させ、遠心分離機で100,000gで4°Cで1時間間投与します。
- 上清液を捨て、各ペレットを50μLのVIBで再懸浮させます。
注意:EVペレットは見えません。ピペットの先端でチューブの底を優しくこすり、再懸浮させます。バッファーの容積は必要に応じて調整してください(例:高濃度の場合は10μL)。
- EVのボトムロードショ糖勾配分離
- VIBバッファーを使用して、10%から90%のスクロース勾配を10%から90%の濃度から準備します:10%、16%、22%、28%、40%、46%、52%、58%、64%、70%、90%。70%と90%のストックを溶かすために60°Cの水浴を使いましょう。
- 再懸濁したEVペレット(約100μgのEVタンパク質)を1mLの90%ショ糖溶液と混ぜます。次に、この混合物を不連続層の最初の層として重ねます。
- 残りの不連続ショ糖勾配は、70%ショ糖から段階的に低濃度(64%、58%、52%、46%、40%、28%、22%、16%、10%)に各ショ糖溶液を逐次重ねて、EV-90%のショ糖混合物の上に重ねて準備します。ピペットを使ってチューブの壁に沿って各層を慎重に分散させ、隣接する層間の混ざりを最小限に抑えましょう。総体積は~12.1 mLとなります。
- 遠心分離機で100,000g、4 °Cで72時間。
注意:長時間の超遠心分離運転では、チューブ、キャップ、ローターが長時間の高速運転に耐えられていること、そしてメーカー推奨のバランス手順が守られているかを確認してください。 - 1サンプルあたり、上からピペットで6つの2 mL分画を採取します。各分画を新しい17 mLの超遠心分離機チューブに移します。
- 収集した分画を1~16 mLのVIBバッファーに再懸浮させ、遠心分離機で100,000gで4°Cで1時間かけて保存します。
- 上清液を廃棄し、各ペレットを50μLのVIBバッファーに再懸浮させます。
注意:EVペレットは見えません。ピペットの先端でチューブの底を優しくこすり、再懸浮させます。バッファーの容積は必要に応じて調整してください(例:高濃度の場合は10μL)。
5. EVを精製するためのサイズ排除クロマトグラフィー(35nmカラム)の使用
- バッファー調製とカラム平衡
- VIBと追加のバッファーはすべて新鮮に準備してください。使用前にすべてのバッファーを0.22μmの膜でろ過し、真空下で脱ガスして気泡の形成や孔の詰まりを防ぎます。
注意:脱ガス不完全や未ろ過バッファの使用は、樹脂床内に気泡や粒子状物質を導入し、流れの乱れやEV分離効率の低下につながる可能性があります。カラム内で気泡が観察された場合は、ランを止めてカラムを再び平衡させるべきです。 - カラムとバッファーを室温(18〜24°C)に平衡させてから、カラムキャップを外してください。
注意:キャップを外す前に、カラムとバッファーは室温に完全に平衡されている必要があります。室温バッファーを冷たいカラムに適用すると樹脂内に気泡が発生し、洗脱プロファイルが歪み、再現性が低下することがあります。 - 柱を立て直立させ、慎重に柱の上部キャップを外します。
- 下のキャップを外し、バッファーが完全にカラムから排出されるのを待ちます。
注意:平衡前に貯蔵バッファがカラムから完全に排水されていることを確認してください。 - カラムを3つのカラム容量(25.5 mL)の脱ガス済み0.22 μm VIBバッファーでフラッシュして平衡させます。
- VIBと追加のバッファーはすべて新鮮に準備してください。使用前にすべてのバッファーを0.22μmの膜でろ過し、真空下で脱ガスして気泡の形成や孔の詰まりを防ぎます。
- EVの装填とサンプル採取
- SEC精製ごとに総EVタンパク質100μgを使用します。SECカラムにロードする前に、VIBを使ってEVサンプルを最終体積500μLに調整します。
- 500μLのEVサスペンションをカラム上部のローディングフリットに直接適用します。
- VIBバッファーを加える前に、サンプルが樹脂ベッドに完全に入るまで待ちます。分離中は連続したカラムフローを維持し、正確なサイズベースの溶出を実現します。
注意:分離中ずっとカラムフローは連続的に保たれるべきです。カラムを空にしたり流れを長時間停止したりすると、サイズに基づく分離が乱れ、分画の重なりやEV濃縮の減少につながる可能性があります。 - EVサンプル(500 μL)が樹脂床に完全に入ったら、VIBを2 mL加えて完全に洗脱させます。この溶出液は列の死体積に対応し、廃棄すべきです。その後、EV分画を400μLのVIBを順次添加し、エリュートを採取し、このプロセスを繰り返して1.5mLマイクロ遠心分離機管内で1〜6の分画を得ました。
注意:デッドボリュームにはEVは含めてはいけません。35nmカラムを用いた検証に基づき、EVは通常1〜3の分数で回収されます。必要に応じて、死体積はナノ粒子追跡解析(NTA)やEVマーカーの免疫ブロットで評価され、EVの存在を確認できます。
- カラムの清掃と保管
- 分画採取直後、0.5 M NaOHの1カラム(8.5 mL)でカラムを洗浄し、樹脂を消毒します。その後、17mLのVIBでカラムをフラッシュし、中性pHを回復させます。その後、カラムは次のサンプルのロード準備が整います。
注:バッファーだけでは残留タンパク質や小胞を除去するには不十分です。NaOH洗浄工程は、特に下流の核酸やRNA分析において、サンプル間の持ち越しを防ぐために不可欠です。 - 長期保存の場合は、洗浄後に2カラムの脱イオン水でカラムを洗浄し、その後20%エタノールのカラムを2カラムで洗浄して保管します。列をリキャップして直立して保管してください。
注:エタノール貯蔵前に脱イオン水でカラムをすすぐことで、樹脂床内の塩分結晶を防ぎ、カラムの性能を保ちます。
- 分画採取直後、0.5 M NaOHの1カラム(8.5 mL)でカラムを洗浄し、樹脂を消毒します。その後、17mLのVIBでカラムをフラッシュし、中性pHを回復させます。その後、カラムは次のサンプルのロード準備が整います。
6. EVの検証、定量化、サイズ/形態評価
- ナノ粒子追跡解析(NTA)
- EVのサイズ分布と粒子濃度をNTAで測定してください。
- EVサンプルを無菌の0.2μmろ過VIBで1:100で希釈し、最適な検出範囲(約10⁷〜10⁹粒子/mL)内の粒子濃度にします。
- 希釈した試料を優しく混ぜて気泡の発生を防ぎ、532nmレーザーと高感度sCMOSカメラを搭載した装置に搭載します。
- NS Xplorerソフトウェアを使用して、検出閾値10 nm(最大1,000 nm)でデータ取得と解析を行い、動的観測体積ベースの集中アルゴリズムを適用します。
- EVマーカーのウェスタンブロット解析
- ウェスタンブロット解析では、ショ糖勾配分離後に得られたEV分画を50μLのVIBで洗浄・再懸濁します。各フラットから10μLのアリコートをSDSローディングバッファーと混合し、変性させて12%トリスグリシンゲル上で分離し、EVマーカーTET8抗体で免疫ブロットを行います。
- SEC由来のEV分画については、まず100 kDa分子量カットオフ遠心フィルターを用いて各分画400μLを50μLまで濃縮します。その後、上記のように10μLの濃縮サンプルをウェスタンブロット分析に用いてください。
- 透過電子顕微鏡(TEM)
- VIBで5μLのEVをグロー放電の炭素-フォームバー300メッシュグリッドに浸透させます。その後、フィルターペーパーで余分なサンプルを除去します。
- その後、3μLの電子顕微鏡染色でグリッドをネガティブに染色し、フィルターペーパーでウィッキングを落とし、300 kV TEMでイメージングする前に自然乾燥させます。
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結果
最適化されたAWF採取プロトコルが組織損傷および細胞質汚染を軽減するかどうかを評価するため、我々の方法(方法1)で得られたAWFを、全植物のバキュームポンプ浸透に基づく代替方法(方法2)と直接比較しました。浸透後の細胞損傷はTrypan Blue染色で評価され、方法1で処理した葉の染色が著しく減少し、細胞破裂のレベルが低いことが示されました(図3A)。収集されたAWFの細胞質汚染をさらに評価するため、クロロフィル含有量および葉緑体マーカータンパク質であるRBCLが調査されました。方法1で採取したAWFは、代替方法と比べてクロロフィルレベルが大幅に低く、RBCL信号も低下しました(図3B,C)。これらの結果を総合すると、最適化されたAWF採取プロトコルが細胞損傷と細胞質漏れを最小限に抑え、下流の細胞外小胞分離のためのよりクリーンな出発材料を提供することが示されています。
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ディスカッション
植物のEVは植物免疫の重要な役割を果たしており、特に菌類病原体との王国間コミュニケーションの媒介において活用されています32。増え続ける証拠は、植物がアポプラストにEVを分泌し、そこで小さなRNA(sRNA)、mRNA、そしてBotrytis cinerea、Rhizoctonia solani、卵菌病原体Phytophthora capsici10,18,33などの侵入病原体の病原性を抑制するタンパク質を伝達する機能があることを示しています.しかし、高純度植物EVの再現性のある分離は、植物組織の構造的複雑さや細胞壁の破片やタンパク質集合体などの豊富な汚染物質の存在により技術的に依然として困難である31。したがって、植物と微生物の相互作用...
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開示事項
著者たちは利益相反を一切開示していません。
謝辞
B.D.はテキサスA&M大学のPathways to the Doctorateフェローシップの支援を受けています。B.H.はテキサスA&M大学および米国農務省HATCHのスタートアップ資金の支援を受けており、プロジェクト番号7009138 TEX08074。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 0.45 & micro;Mナイロンフィルター | VWR | 76479-032 | |
| 1mlの不要注射器 | BDバイオサイエンス | 309659 | |
| 100 kDa 超遠心フィルター | アミコン | UFC 910008 | |
| 100mlの不要注射器 | BDバイオサイエンス | 551721050 | |
| 15ml円錐管 | VWR | 89039-664 | |
| 50ml円錐管 | VWR | 89039-656 | |
| Arabidopsis thaliana (Col-0) | 研究所管理のライン | 該当しません | |
| カーボン・フォームバー300メッシュグリッド | テッド・ペラ | 01753-F | |
| クリアテープ | スコッチ・マジックテープ | S-9783 | |
| パラフィルム | フィッシャー・サイエンティフィック | 13-374-12 | |
| PBSバッファ | 自社製 | 該当しません | |
| qEV オリジナルカラム Gen2 35 nm | アイゾンサイエンス | ICO-35 | |
| 冷蔵遠心分離機 | エッペンドルフ | 5810R | |
| 冷蔵遠心機固定角度ローター | エッペンドルフ | F-34-6-38 | |
| 冷蔵遠心分離機スイングバケットローター | エッペンドルフ | A-4-62 | |
| ショ糖 | VWR | 470302-810 | |
| 超遠心分離機 | ベックマン・カウルター | XPN-100 | |
| 超遠心分離管 | ベックマン・カウルター | 337986 | |
| UranyLessステイン | 電子顕微鏡科学 | 250218-01 |
参考文献
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