方法論記事

in vitro 細胞の伸縮および画像診断のための新しいプラットフォーム

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DOI：

10.3791/69779

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2026年3月10日

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1Department of Bioengineering, Northeastern University

* These authors contributed equally

この記事について

サマリー

ここでは、細胞に対して等方的および一軸のひずみ波形を適用しつつ、基質上で培養を支持し、剛性を調整可能かつタンパク質行列をカスタマイズ可能な新しい装置として紹介します。このシンプルで経済的なプラットフォームにより、研究者は基礎研究から疾患関連の文脈において、機械的な手がかりがどのように細胞機能を調節するかを調査できます。

要約

細胞は環境からの機械的サイン、例えば細胞外マトリックス(ECM)の剛性の変化や周期的ひずみの変化に反応し、これらは細胞の運命決定、細胞間コミュニケーション、発生などの細胞プロセスを調節します。これらの力の変化は喘息、高血圧、がんなどの疾患の進行に寄与または促進します。既存の体外内伸縮装置は単軸または等方的なひずみを課すことができますが、生理学的でない剛性を用いたり、ライブイメージングを制限したり、生理的・病理的条件に関連する高いひずみ振幅を達成できないことが多いです。ここでは、エラストマー培養皿上の接着細胞に制御された等方性または一軸のストレッチャーを適用するコンパクトで顕微鏡対応のストレッチャー装置を紹介します。これらのアンテナは調整可能なヤング率を備え、細胞接着のためのさまざまなマトリックスタンパク質コーティングと互換性があり、基質剛性とECM組成の独立調整が可能です。重要なのは、ステッピングモーター駆動設計によって動作の容易さが高まり、プログラム可能な循環波形の生成をサポートすることです。機械的伸縮下で、一次気道平滑筋細胞における細胞内のカルシウム動態と細胞牽引力を定量化することで、この装置の能力を実証します。このプラットフォームは、健康な状況と疾患に関連する文脈の両方で、機械的な手がかりが細胞機能に与える影響を調査するための多用途なツールを提供します。

概要

細胞は周囲環境からの機械的な力を受け、細胞の運命1,2、細胞間コミュニケーション3,4、健康成長の決定など、細胞機能の多くの側面を調節する重要な役割を果たします。さらに、これらの機械的な力の変化は、細胞外マトリックス(ECM)の再構築6や腫瘍の成長を含む疾患の進行や発症の増加を引き起こすことがあります。細胞はこれらの機械的手がかりを感知し反応できます。これにはECMの剛性の変化や、心臓、肺、筋肉などの臓器の周期的負荷が含まれます(11,12)。in vitro研究では、ECMの剛性と組成が、安静時および収縮性作動薬曝露後の細胞骨格の剛性に影響を与えることが示されています13。多数のin vitroおよびin situ研究で、一時的、静的、周期的株が細胞や組織にどのように影響するかが調査されており、反応は株の種類、速度、振幅によって異なることが示されています。例えば、最近の研究では、一時的な伸ばしは加えられたひずみに比例して接着細胞の剛性を減少させ、持続的なひずみの増加は最初は急激に剛性が上がり、その後徐々に緩和が進むことがわかっています15。さらに、力生成の主要な分子調節因子であるカルシウムシグナル伝達は、伸びやその他の機械的力(4,16,17,18,19,20)によって影響を受けます。剛性とひずみが機械生物学的経路にどのように影響するかを研究するには、細胞反応を監視しながら両方の要因を調整する必要があります。そのため、私たちは等方性または一軸伸縮のいずれかを誘導でき、基質剛性、マトリックスタンパク質コーティング、多様なプログラム可能な波形を独立制御できる、顕微鏡互換の細胞ストレッチャーを開発しました。

過去には、研究者たちも細胞培養や組織に特定の動きや機械的伸縮を課す装置を作ってきました21,22。最も単純な場合、一軸運動は単一次元に機械的に伸びるものです。例えば、組織ストリップ23とコラーゲン線維24に機械的な伸縮とひずみをかけたり、細胞の配位を整列させて細胞移動を誘導したりするために開発された装置もあります。等方性伸縮とは、ゲルや基板に全方向から等しい力を加え、材料全体に均一なひずみが生じる伸縮の一種を指します。この伸縮は、肺胞のような特定の生理的環境で細胞が呼吸過程中に放射状の膨張と収縮を受ける際に感じる均一な力の分布をシミュレートしています26,27。

既存のストレッチャー装置には、機械生物学関連の研究での利用を制限するいくつかの制約があります。多くの設計では、機械的ひずみに耐え細胞培養培地の重量を支えるために、典型的な生理学的範囲を超える基質剛性値が用いられています。しかし、このような非生理的な剛性の使用は細胞の挙動にも影響を及ぼす可能性があり、モデルの自然組織環境への関連性を制限する可能性があります。さらに、一部のストレッチャー設計は対物レンズや光の経路を遮り、イメージングを妨げる場合もありますが、他の設計では膜が厚すぎてはクリアに観察できません。ストレッチャーが顕微鏡と互換性があり、薄い基材を使っていても、膜のたるみや焦点合わせの欠如などの問題はよく見られます。Flexcellのような商用プラットフォームでは、真空変形を用いて柔軟な膜を伸ばしています。この方法は安定的で均質なひずみ場を生成することができますが、生細胞顕微鏡には最適化されておらず、顕微鏡対応の構成には高価な追加アクセサリーが必要です。さらに、これらのプラットフォームは最大21.8%の株しか達成できませんが、深層吸気型では30%を超える株が生成され、喘息やCOPDのような疾患ではさらに高い株が観察されます。

そこで、基質剛性とECM組成の正確な材料制御を可能にする新しい細胞伸縮装置を設計し、接着細胞に対して可変の等方性および一軸のひずみを適用できるようにしました。このプラットフォームは、生理学的に重要な剛性を持つ基質を用いた機械刺激時にライブイメージングを必要とする機械生物学的問題を調査する研究者に適しています。この装置は、2次元のホーバーマン球の幾何学に触発された機械駆動のアプローチを採用しており、ハサミのような継ぎ目で膨張・収縮します(図1、 補足図1)。単一のステッピングモーターが16本の放射状に配置されたアームをリンク機構で駆動し、8本のアタッチメントポストの協調的な膨張と収縮を実現します。この構成は、すべての柱に均等な放射変位を同時に適用することで均質な面内ひずみを生み出します。この装置の独自の設計とコンパクトなスペースにより、逆蛍光顕微鏡による平面内等方性および一軸伸縮時のライブセルイメージングを可能にし、市販の代替品のごく一部で済みます。リニアステッピングモーターはカスタムArduinoコードで制御されており、周期や振幅を調整可能なプログラム可能な周期波形が可能です。本研究では、この装置が1%未満から15%までの精度と再現性のあるストレインを供給し、幾何学的容量は200%を超えることを示しました。さらに、機械的伸縮が細胞内のカルシウム動態や一次気道平滑筋細胞の細胞牽引力に与える影響を定量化します。

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プロトコル

本研究で使用された一次ヒト気道平滑筋細胞(ASMC)はバージニア州のATCCから取得され、NIHのガイドラインに従ってドナー情報は匿名化されました。この研究は実験前にノースイースタン大学のバイオセーフティ委員会によって承認されました。

注意:デバイスの製造方法や寸法については、GitHubリポジトリのCADファイル( https://github.com/Breathe-Lab/A-Novel-Platform-for-In-Vitro-Cellular-Stretching-and-Imaging)をご覧ください。

1. 3Dプリント型の設計

  1. 等方型の寸法
    1. 型の外径は37mmです。
    2. 型の外側の高さは4.1mmです。
    3. 外壁の厚さは2.1mmです。
    4. 型の基底厚さは2mmです。
    5. 取り付け穴は端から2mmの位置にあります。
    6. 内側の細胞培養ウェルの面積は直径20mm、深さは1.9mmです。
      注:完成したPDMS型の細胞培養面積厚さは200μmであるべきです。
  2. 一軸型の寸法
    1. 金型の外寸法は41 mm x 12 mm x 4 mm(L x W x H)です。
    2. 取り付け穴は幅端から3mm、長さ端から4mm、柱の深さは1mmです。
    3. 外壁の厚さは幅の端で1.5mm、長さの端が2mmです。
    4. 内側の培養井戸の寸法は26 mm x 5.5 mm x 1 mm(L x W x H)です。
    5. 基底の厚さは2mmです。
      注:金型はSolidWorksで設計され、FormLabsの液体グレー樹脂システムを使って3Dプリントされ、ノースイースタン大学のメイカースペースで製造されました。
  3. 型の初回使用に関する説明のみ
    1. 型のプリントの粗い部分を研磨してください。
    2. 硬化後にPDMS型を除去しやすくするために、ネガ型に透明なマニキュアを塗り替えます。カビを24時間自然乾燥させます。

2. 細胞培養用の光学的に透明で弾性のある基質剛性調整ゲルの製造

注意:PDMSおよびNuSilを扱う際は、適切なPPE(手袋、白衣、目の保護具)を着用してください。

  1. Sylgard 184のベースと乾燥剤を重量比10:1の比率でプラスチック製の皿に加えます。
  2. 舌圧子(または類似の道具)で2〜3分間強く混ぜます。
  3. 混合物を1時間ほど脱ガスします。
  4. PDMS混合物をカスタムのネガモールドに注ぎます(図2A,B)。
    1. 等方型に1.3gを加えます。
    2. 一軸型に0.5gを加えます。
      注意:ジェルを型全体に均等に塗るように注意してください。
  5. 型を1時間ほど脱ガスします。
  6. 型の中のジェルは室温の平らな面に2時間沈着させます。
  7. 60°Cで一晩硬化させてください。
  8. NuSil Gel-8100のパートAとBを1:1の割合で15分間タンブルミックスします。
    1. シルガード184架橋剤と総体積の0.36%で混合すると、剛性13 kPa 32の基質が得られます。
    2. 架橋剤を添加せずに、剛性0.3 kPaの基質を生成します。
  9. 混合物を30分間ガス抜きで処理します。
  10. カスタム型からPDMSジェルを慎重に取り出してください。ジェルを40mmのカバースリップに塗ります。
    注意:ジェルは壊れやすいので破らないように注意してください。
  11. NuSil混合物をPDMSゲルの負の部分に注ぎます。
    1. 等方ゲル:100 μL。
    2. 単軸ゲル:50 μL。
  12. スピンコーターを用いて50秒、7 x g の圧力でNuSil混合物を塗布し、基質厚さを均一に100 μmにします。
  13. ゲルは室温の平らな面に2時間沈殿させ、その後60°Cで一晩硬化させます。
    注意:すべての硬化工程は平坦な面で行うよう注意してください。ゲルの不均一さは、関心のある領域全体を顕微鏡のイメージング面に残すことはできません。画像検査で視野全体での焦点の変動が明らかになる場合、ゲルは不均一な表面で硬化している可能性があり、再製造が必要です。
  14. 完成した細胞培養皿は、使用まで蓋付きのペトリ皿に保管してください(図2D-E)。

3. マトリックスタンパク質コーティング

  1. 各基質にポリLリジン(PLL、500 μg/mL)を500 μL加えます。
  2. 室温で1時間孵化します。
  3. 基質を3 mLのPBSで洗浄し、その後3×× 10 mM HEPES バッファー(pH 8.0)を1 mLで洗浄します。
  4. 各基質に500μLのmPEG-SVA(50 mg/mL)を加えます。
  5. 室温で1時間孵化します。
  6. 3×の基質に1mLのPBSを洗います。
  7. PBSを500μLのPLPP(14.5 mg/mL)に置き換えます。
  8. PRIMOマイクロパターニングシステムとレオナルドソフトウェアを用いて、あらかじめ定義されたパターンをUV光で基板表面に30秒投影します。
  9. 基質を3× 1 mLのPBSで洗浄し、UV下に15分間置いて滅菌します。
  10. 各基質に0.1%フルオレセイン共役ゼラチン500 μLを加えます。
  11. 室温で1時間孵化します。
  12. 3 × 1 mLのPBSで洗います。
    注:パターンを可視化するために、0.1%フルオレセイン共役ゼラチンを室温で1時間培養してください。
  13. 画像検査を進めてください。

4. 弾性皿におけるヒト気道平滑筋細胞培養

注意:すべての細胞培養手順は、標準的な無菌技術を用いたバイオセーフティフード内で実施してください。

  1. バージニア州のATCCから一次ヒト気道平滑筋細胞(ASMC)を取得し、NIHのガイドラインに従ってドナー情報の匿名化を確実にしてください。実験前に機関バイオセーフティ委員会の承認を確認してください。
  2. 喘息や疾患の既往がない、性別や年齢の異なる3人の健康なヒトドナーの細胞を使用します。例:女性1名(18歳)と男性2名(34歳と59歳)。
  3. 標準条件下(37°C、5% CO₂)で培養し、すべての実験で6番目の細胞を使用。
  4. 以下の完全な培養培地で細胞を培養します:
    1. DMEM/F12(500 mL)
    2. 10%胎児用牛血清(FBS)(50 mL)
    3. ペニシリン/ストレプトマイシン1×(5mL)
    4. 1× MEM非必須アミノ酸(5 mL)
    5. アンホテリシンB(0.5 mL)
  5. 測定の少なくとも24時間前には血清フリー培地に細胞を切り替えてください。以下でセラムフリー培地を準備します:
    1. ハムのF-12ミディウム(500 mL)
    2. ペニシリン/ストレプトマイシン×1錠(5mL)
    3. アンフォテリシンB(50 μg/L)
    4. 1× MEM非必須アミノ酸(5 mL)
  6. 伸縮性細胞培養皿をUVで15分間滅菌してください。
  7. 滅菌された皿は0.1%ゼラチンで室温で1時間培養し、その後まきまき(図2F)。
    1. パターン付き基材の場合:
      1. 弾性細胞培養中の種子細胞は密度104 cells/cm²でウェルします。
      2. 10%血清培地で10分間培養し、模様のある部位への付着を促進します。
      3. PBSで洗浄して未結合細胞を除去します。
      4. ウェルに10%の血清培地を充填し、24時間培養します。
      5. 血清不使用培地に交換し、測定前に24時間培養します。
    2. パターンのない基材の場合:
      1. 所定の密度の種子細胞:分離細胞の場合、102 cells/cm²。103 セル/cm、稀なセルは2104cells/cm、2 Confluent Cells。
      2. 10%血清培地で24時間培養します。
      3. 血清不使用培地に交換し、測定前に24時間培養します。

5. 蛍光カルシウムイメージングと解析

  1. 24時間の気道ASMCを血清不足で過ごします。
  2. メーカーの指示に従ってFLIPR Ca2+ 6染料を準備してください。
  3. FLIPR Ca2+ 6染料とセラムフリーの培地を1:1の比率で混ぜます。
  4. FLIPRのCa ²⁺ ⁺ 6溶液を37°C、CO₂5%で2時間培養します。

6. イメージングセットアップ

  1. 以下を装備したライカDMi8倒立顕微鏡を使用してください:
    1. ライカDFC6000カメラ
    2. ライカ LED8 ライトエンジン
    3. 5×/0.12 ドライオブジェクト
  2. 励起を480/40nm、発光を527/50nmに設定します。
  3. ストレッチ実験中に2Hzのフレームレートで16ビット画像を取得します。

7. データ分析

  1. フィジー(ImageJ) 33に画像シーケンスをインポートしてください。
  2. 各細胞の細胞質内で関心領域(ROI)を手動で定義します。
  3. 各ROIの平均グレースケール強度値を時間経過で抽出します。
  4. 蛍光強度データはカスタムMATLABスクリプトで処理します。
    注:蛍光強度は細胞質[Ca2+]に比例します。

8. 牽引力の測定と解析

注:画像解析、牽引力顕微鏡、運動制御を含むすべてのコードは、当社のGitHubリポジトリで利用可能です:https://github.com/Breathe-Lab/A-Novel-Platform-for-In-Vitro-Cellular-Stretching-and-Imaging

  1. PDMS-NuSilゲル基板に蛍光ビーズの層を塗り、牽引力顕微鏡のフィデューシアルマーカーとして使います。
  2. HBSSで直径1μmの赤色蛍光カルボキシレート修飾微小球を0.025%溶液で1:4000の比率に希釈して製製します。
  3. 10秒の間、ビーズ溶液を渦巻きます。
  4. ビーズ溶液をジェルに加えます。
    1. 880 μLから等方性ゲルまで。
    2. 420μLから単軸ゲルまで。
  5. ビーズが付着するまで室温で1時間培養します。
  6. 1時間後に慎重に溶液を取り除きます。
    注意:ビーズ溶液をソフトジェルに優しく注ぎます。不適切な除去はビーズの適切な分布を妨げます。
  7. 残った溶液は綿棒やKimwipeで優しく拭き取ってください。
  8. 10x/0.32ドライ対物レンズを搭載したライカDMi8顕微鏡でビーズを撮影してください。
  9. ストレッチ前の状態で画像を撮影し、ストレッチプロトコル中は継続的に撮影します。
    注意:すべての画像はひずみ均一性が最も高い基板中心部で行ってください。必要に応じて、画像を撮影する前に伸ばした位置に顕微鏡を再焦点合わせてください。
  10. フーリエ牽引力顕微鏡に基づくカスタムMATLABコードを用いて画像を解析し、変位ベクトルと対応する平面応ずみ場を計算します。 34。
  11. N件の試行の平均としてデータを表現します。

9. セル伸縮装置の校正

  1. ウェルに500μLのH₂Oを加え、細胞培養培地の重量を模擬し、タンパク質パターンを湿らせます。
  2. 特定のタンパク質パターンの作成に関するプロトコルについては、「マトリックスタンパク質コーティング」というセクション3を参照してください。
  3. モーター変位400μmごとに画像蛍光パターンが現れ、最大2800μmまで増加し、逆400μmの刻みでゼロに戻ります。
  4. 伸縮時の弾性基質上の蛍光タンパク質パターン文字「BREATHE」の面積と離心率の変化を測定し、ステッパーモーターからの直線変位と伸縮可能な細胞培養皿の等方変形の関係を、マクロおよび局所スケールの両方で特徴づけます。すべての文字を囲む長方形の境界ボックスを使って、単語全体の面積と離心率を計算します。
  5. MATLABで画像分割を適用し、各文字ごとにこれらのパラメータを定量化します。
  6. 細胞培養皿の無伸縮寸法によるゼロ置換を定義します。
  7. 再現性を確保するために、2〜3つの独立に準備された伸縮可能な細胞培養ウェルで各実験を繰り返します。

10. データ提示と統計的検証

  1. ストレッチャーの校正実験では、試験をサイクル数で定義します。
  2. 各試行を一つの曲線にまとめるのではなく、個別に示してシステムの再現性を示す。
  3. 誤差バーを標準偏差として示してください。
  4. 一方行ANOVAを用いて、1つの独立した要因に影響を受ける3つ以上のグループを持つデータセットの有意な違いを検定します。
  5. 二方向ANOVAを用いて、事後ペアワイズ比較を用いて、2つの独立した要因に影響を受けたデータセットの有意な差を検証します。
  6. データが正規分布の場合、ペアズ比較にはt検定を適用します。
  7. データが正規分布でない場合、マン・ホイットニー順位和検定を適用して中央値を比較します。
  8. 使用した具体的な検査、サンプル数、対応するP値、そして結果を報告してください。
  9. P値の閾値0.05を用いて、データセット間の統計的に有意な差を判断します。
  10. SigmaStatで統計検定を行う。
  11. グラフパッドプリズムとMATLABのプロット図。

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結果

セルストレッチャーは局所的な変形を反映した巨視的な面積変化を誘発します。等方性の挙動を評価するために、伸縮可能な細胞培養ウェル上で「BREATHE」という単語を形成する蛍光ゼラチンタンパク質パターンの面積変化と、その個々の文字を等方性基質上で測定しました。結果は、単語と個々の文字の両方が面積に同等の変化を示すことを示しました(図3A,B)。図3Bでは、青い丸と誤差バーが、400μmの変位刻みで測定された7文字の面積の平均と標準偏差を表しています。オレンジ色の四角は、「BREATHE」という単語の総面積を基質が伸ばして解放された際の個別の測定値に対応しています。測定領域(文字対単語)と線形変位を独立因子とした二方向ANOVAでは、両者の間に有意な相互作用は認められませんでした(P = 0.743)。

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ディスカッション

本プロトコルでは、等方性および単軸株を模倣しながら同時に生細胞をイメージできる新しい顕微鏡対応の細胞ストレッチャーの設計、開発、検証、実装について説明します。この装置はコンパクトで、ライカDMi8顕微鏡ステージに収まることができ、すべての可動部品を単一の平面に集中させ、基質と基底の細胞に焦点を合わせながらライブイメージングを可能にします。これは、二次元のホーバーマン球の幾何学に触発された斜めのアームを用いて行われました。この2次元構成は運動を単一の平面に制限し、ライブセルイメージング時に顕微鏡の焦点を維持するために不可欠です。この形状により大きなひずみが可能となり、回転運動を線形運動に簡単に変換できます。8本の柱の中央配置により、装置が適用できる機械的ひずみの種類に柔軟性が与えられます。8本の柱はすべて対称的に動くが、特定の柱を基質に選択的に接続することで、同じプラットフォームで等方的および一軸的なひずみを伝達できる。

プロトコルのいくつかのステップは、実験の成功に不可欠です。硬化したPDMSゲルを型から取り出す際...

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開示事項

著者たちの誰も、主張すべき利害関係はありません。

謝辞

著者たちは、型の製作に協力してくれたノア・ジョセフ氏に感謝しています。著者らは、装置の加工に協力してくれたボストン大学科学機器施設のヘイトール・モウラート氏とグレン・セイヤー氏に感謝しています。この研究は、ハリクリシュナン・パラメシュワランに授与された全米科学財団(NSF)キャリア助成金#2047207によって支援されました。H.P.はこの研究を考案しました。S.E.S.とS.R.P.が装置の全体設計を開発し、S.E.S.とH.P.が等方性実験を設計しました。S.E.Sは等方型の実験を実施し、実験データを解析し、結果をH.P.と共に解釈しました。V.C.は単軸型を設計し、ゲルの準備とビーディングを最適化しました。B.M.Gは単軸ゲル実験を実施し、実験データを解析し、結果を解釈しました。S.E.S.とB.M.G.は図を作成しました。B.M.G、S.E.S、V.C.、H.P.が原稿の起草と編集に貢献しました。H.P.は原稿の最終版を承認しました。

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材料

この記事で使用された材料の一覧
名前会社カタログ番号コメント
 ダルベッコ改良型イーグル」sミディアム/F12フィッシャー・サイエンティフィック12634010500 mL  
(4-ベンゾイルベンジル)トリメチルアンモニウム塩化物(PLPP)アルヴ&エアキューテ;オレ該当なし14.5mg/mL
0.1%蛍光共役ゼラチン インビトロジェンG13187
0.1%ゼラチン溶液シグマ・オルドリッチES-006500 mL  
1 & mu;直径mの赤色蛍光カルボキシレート修飾マイクロスフィアフルオスフィアF8816
1×MEM非必須アミノ酸溶液シグマ・オルドリッチM7145100 mL
1×ペニシリン/ストレプトマイシンフィッシャー・サイエンティフィック15-140-122100 mL
10%胎児用牛血清サーモサイエンティエンティエンスA5256701500 mL  
15 mLチューブフィッシャー・サイエンティフィック14-959-53A
グルタミン1回、nbsp;フィッシャー・サイエンティフィックMT10010CM
1xインスリン・トランスフェリン・セレン成長サプリメントコーニング・ライフサイエンス25-800-CR
アンフォテリシンBシグマ・オルドリッチA294225 & mu;g/liter
ボールベアリングマクマスター・カー 該当なし
塩化カルシウム二水和物シグマ・オルドリッチ223506
キャリッジレールマクマスター・カー 該当なし
FLIPR Ca2+ 6分子デバイスR8190
GraphPad プリズムドットマティックス該当なし
ハムSのF-12中型およびnbsp;シグマ・オルドリッチN8641500 mL  
ハンクスのバランスソルトソリューション サーモサイエンティエンティエンス14025092500 mL  
HEPESバッファ サーモサイエンティエンティエンス15630080100 mL
レオナルド・ソフトウェアアルヴ&エアキューテ;オレ該当なし
Matlab数学作品該当なし
メトキシポリエチレングリコール–スクシニミジルバレレート(mPEG-SVA)レイサン・バイオ株式会社該当なし50mg/mL
ヌシル・ゲル-8100Nusil 該当なし
ペトリ皿サーモサイエンティエンティエンス26399190mm 
リン酸緩衝塩水 シグマ・オルドリッチ10010023500 mL  
ポリLリジン(PLL)シグマ・オルドリッチP8920500μg/mL
一次ヒト気道平滑筋細胞およびnbsp;ATCCPCS-130-011
PRIMO光学モジュール アルヴ&エアキューテ;オレ該当なし
ネジマクマスター・カー 該当なし
シグマスタットSystatソフトウェア該当なし
スピンコーターローレルモデルWS-650MZ-23NPPB
ストレッチャーおよびステージアタッチメント部品 ボストン大学科学機器施設該当なしステンレス鋼
シルガード184ベースエラストマーおよび硬化剤キットダウH047J8Q026
T-25組織培養フラスコ - ベントキャップ、滅菌セルトリート229331
舌圧子 サーモサイエンティエンティエンス22-363-154

参考文献

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