この実験プロトコルは、頭部からのリンパ管排出を直接的かつ定量的に評価できる深部頸管リンパ管カニューレッドモデルを示しています。このモデルは、中枢神経系(CNS)由来の溶質、免疫細胞集団、そしてCNS標的治療薬の分布とクリアランスの詳細な解析を促進します。
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この記事について
サマリー
要約
リンパは中枢神経系(CNS)から一連のリンパ管(LV)とリンパ節を経て、頸部リンパ管で収束します。これらのリンパ管は体液バランスの維持に加え、内因性代謝物、シグナル分子、免疫細胞、小分子および高分子薬物など、多様な物質の輸送において重要な役割を果たしています。これは頭蓋内(例:脳)および頭蓋外領域(例:鼻腔や口腔)の両方における生理的恒常性と免疫機能にとって極めて重要です。脳からのリンパ管排出障害は、さまざまな神経疾患や神経変性疾患とますます関連しています。頸部リンパ管カニキュレーションは、頭部と脳を排出するリンパを収集し、リンパ系を通じた様々な物質の濃度と輸送速度を測定することを可能にします。これらの要因が異なる課題(例:薬物、ストレス、外傷)や疾患(例:脳卒中、感染症、アルツハイマー病)に反応して変化することも決定できます。ここでは、手術後数時間にわたりリンパ採取を可能にする麻酔下の深部頸管リンパ管カニューレラットモデルについて説明します。この方法は、リンパにおける関心のある幅広いパラメータの測定のために、画像診断やマルチオミクス技術と組み合わせることが可能です。これにより、頭頸部の基礎的な生理学的および病態生理学的研究、さらに特に中枢神経系疾患の治療のための薬物動態・薬力学的研究が可能となります。
概要
リンパ系は体全体に分布しており、液体の恒常性維持、免疫反応の調節、栄養素やシグナル伝達分子の輸送を促進するために不可欠です。末梢リンパ管はリンパ毛細血管から始まり、間質液や溶質を収集し、周囲の平滑筋層を持つより大きな集水リンパ管(LV)に流れ込みます。これらの血管はリンパを局所リンパ節に送り、免疫処理を行います。頭部を排水するリンパネットワークは、頭蓋内(例:脳)および頭蓋外(例:鼻腔や口腔)の臓器の恒常性維持に重要です。頭蓋外リンパネットワークの構造と組織は、全身の末梢リンパに似ていると考えられている一方で、頭蓋内リンパ系は独特の解剖学的および機能的特徴を示します(ラットモデルの詳細な図式図参照)4,5。脳実質内には典型的なLVは存在しませんが、リンパ様機能は脳脊髄液(CSF)と間質液(ISF)の交換を促進する特殊なグリリアル依存リンパ輸送系(グリパ系)によって媒介されます6。グリリンパ系は脳実質内のISFとCSFの混合を可能にしますが、髄膜、血管周囲、鼻咽頭のLVはCSFからの溶質を頭蓋腔から遠ざけて運びます。具体的には、髄膜リンパ経路はくも膜下腔から髄膜低垂室へ脳脊髄液を導き、頭蓋内液体動態と末梢リンパクリアランスを結びつけます7。同時に、神経周囲経路は、鼻咽頭リンパ神経叢5,8に最も顕著な嗅神経を通じて脳蓋神経鞘および関連する溶質の排出を可能にします。これらのシステムの同時進行研究は脳内の流体恒常性を維持します。中枢神経系を排出するリンパ系の理解における最近の進展は、脳生理学および病態生理学に関する新たな知見をもたらしました。これらの発見は、中枢神経系疾患に対する治療的介入の新たな道筋を提供する可能性があります。
図1:中枢神経系リンパクリアランス経路の概略的表現。これらの経路は、(A) 血管周囲空間を通るグリパ経路、(B) 鼻咽リンパ経路、(C) 髄膜のLVs。 この図の拡大版はこちらをクリックしてください。
頭部と中枢神経系から排出されるリンパネットワークは頸部にある頸部リンパ管に収束し、リンパは頸部リンパ節を通過して全身循環に入ります。頸部リンパ節は、頸部内の解剖学的部位に基づいて表層リンパ節(sCLN)と深部頸部リンパ節(dCLN)に分類されます。頸部リンパ管内のリンパ液の組成の変化は、脳の病態生理学的変異を反映していると考えられており、アルツハイマー病(AD)、パーキンソン病(PD)、外傷性脳損傷(TBI)、脳卒中後認知障害(PSCI)が代表的な例です(9,10,11,12,13)。.特に、ADでは、これらのリンパ経路を通じたアミロイドβ(Aβ)およびリン酸化タウタンパク質(P-tau)の排出障害が疾患進行の寄与因子として示唆されています。リンパ管を隣接する静脈に直接接続し、リンパ管の排出を迂回させることで、リンパ静脈吻合(LVA)は、中枢神経系からのリンパ流出を促進し、脳からのAβ除去を促進し、AD 6,15,16の進行を遅らせる治療戦略として動物および人間の両方で研究されています.この経路の重要性は、頸部リンパ節の外科的摘出(リンパ節摘出術)を受けたマウスの観察によっても示されており、その結果、頸部リンパのクリアランスが減少しました。クリアランスの障害はAβおよびP-タウの毒性蓄積を引き起こし、その後に病理的キナーゼシグナル伝達経路の活性化を引き起こします。これらの変化は、AD様タウオパチの進行性悪化および不安・うつ様行動のリスク増加と関連しています(14,16)。さらに、脳脊髄液に基づく研究では、脳リンパ腫などの中枢神経系腫瘍が、頸椎深部リンパ管を通じたリンパ管のクリアランスを物理的に妨げる一方で、CSF 9,17,18のオンコタンパク質濃度を同時に上昇させることが示唆されています。中枢神経系炎症に基づく研究の証拠は、髄膜由来の細胞が髄膜の左腰を経て頸部リンパ節に移動できることを示しています8,19。これらの細胞は主にリンパ球で構成され、樹状細胞、マクロファージ、内皮細胞の集団は少なめです19,20。炎症中や中枢神経系損傷・手術後には、リンパ系免疫細胞輸送が明らかに促進され、サイトカイン、ケモカイン、その他の炎症メディエーターなどの免疫バイオマーカーのレベルが上昇します。
病理生理学的役割に加え、頸部リンパネットワークは薬物処理の重要な経路としてますます認識されています。これまでの動物実験では、CNS投与用に設計された複数の薬剤が、頸部リンパ管やリンパ節を経由して脳から除去されることが示されており(その程度は様々)、脳内投与のナノ粒子系薬剤(例:ラモトリギン、タラゾパリブ)や生物製剤(例:モノクローナル抗体、放射性標識トレーサータンパク質)に例えられています22,23,24,25.人間では、MRI画像研究により、ガドブトロールのような特定の分子がグリパ系から頸部リンパ管への能動的な輸送を行うことが示されています26。
前述の通り、頸部リンパ節(sCLN)およびdCLNは頭部の異なる領域からリンパを排出します。しかし、各節が排出する具体的な頭蓋領域は不明のままです27,28。排水領域の重複、個体間の解剖学的多様性、そして種間構造の違いの可能性が、動物および人間の頸部リンパ排水パターンの記述をさらに複雑にしています。複雑な頸部リンパ管ネットワークの中で、深部頸部リンパ管は鼻咽頭および髄膜のLV8の下流に位置する主要な脳脊髄液の流出経路として特定されています。皮下組織内で細かく変動するネットワークを形成し、個体間で大きな分岐や分岐が大きい浅い頸部リンパ管と比較して、深部頸部リンパ管は小動物モデルでCNS由来リンパを採取するよりアクセスしやすく実用的なルートを提供します。したがって、現在のプロトコルは深部頸部リンパ管からリンパを確実に採取する方法の確立に焦点を当てています。
過去10年間で行われた研究は限られており、CNS疾患の研究や薬物分布の分析のために子宮頸部リンパ液の採取を記述しています。以前の研究では、単離組織切片(例えば単一のdCLNに隣接する切片)から液体をフラッシュまたは絞り出して子宮頸リンパ液中の薬物濃度を測定することが報告されています31。しかし、特にラットを中心とした小型実験動物の頸部リンパ管からのリンパを継続的に採取するための実験プロトコルは未発達です。このプロトコルは、(ラットの)頸部リンパ管をカヌレーションし、継続的なリンパ採取を可能にする方法と、中枢神経系リンパ輸送、免疫応答、薬物動態学の調査を可能にする、容易にアクセスできて再現可能な方法を確立します。その主な利点は、定められた時間間隔でリンパ流と組成を定量化できることにあり、これにより薬物、脂質、脂肪酸、細胞成分の定量的測定が可能となります。特に、このモデルは血漿/脳脊髄液サンプリングや画像診断では十分に表現できないリンパ輸送過程を捉え、CNS薬物の反応、脂質および栄養素輸送、免疫シグナル伝達に関する新たな洞察を提供します。
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プロトコル
本プロトコルで記述された手順は大学動物倫理委員会の承認を受けており、中国薬科大学の実験倫理ガイドラインに従って実施されました。動物関連の処置を開始する前に、関連する機関または組織の倫理委員会から必要な承認を得てください。実験動物としては、体重220〜250gのオスのスプラグ・ドーリー(SD)ラットが使用されます。動物は認可された実験動物の供給者から調達され(材料 表を参照)、実験開始までは専用のケージに収容され、食事と水は自由に提供されます。このプロトコルでは、左頸部深部リンパ管のカニュレーションが代表的な例として説明されています。現在、左と右の深部頸部リンパ管の解剖学的差異についての証拠は限られています。これまでの実験の観察に基づき、両者間でリンパ流量を含め有意な違いは認められていません。
1. 安全対策と手順
- すべての手順は機関のバイオセーフティガイドラインに従って実施し、すべての職員はこのプロトコル実施前に顕微外科技術、実験動物の取り扱い、化学物質安全に関する十分な訓練を受けるべきです。
- 検査中は、実験用コート、手術用手袋、保護ゴーグルなどの適切な個人用防護具(PPE)を着用してください。揮発性麻酔薬(イソフルラン)が使用され、長時間曝露後に中枢神経系の抑制や心血管毒性を引き起こす可能性があるため、換気の良い環境で手術を行うことが重要です。食品や飲み物は実験室に持ち込んではならず、常に流れる水が容易に取り出せるようにしてください。
- 注射器、カミソリの刃、マイクロハサミなど鋭利な物品は注意深く取り扱い、使用後は指定された鋭利器容器にすぐに処分してください。いかなる場合も使い捨て鋭利品は再利用してはいけません。
- すべての生物学的サンプル(例:採取したリンパ液)および動物の体液(例:血液)を潜在的に危険なものとみなし、採取機器は手術部位から離して慎重に取り扱いましょう。誤って針刺しや有害物質との皮膚接触があった場合は、直ちに石鹸と水で影響を受けた部分を洗浄し、施設の安全プロトコルに従って報告してください。
2. 手術前日の準備
- 実験の要件に応じてラットを速食するか与えてください。このプロトコルは特定の断食や食事状態を義務付けるものではありません。
- ヘパリンまたはエチレンジアミネテトラ酢酸(EDTA)を希釈して最終濃度10 IU/mLにして抗凝固液を準備します。この混合物(約0.7 mL)を1 mLの無菌インスリン注射器に事前に装填し、30 Gの針を装着してポリエチレン(PE)カニューレ(リンパ管カニュレーション用)の内側をあらかじめコーティングします。この準備済みの混合物は使用まで滅菌状態で保存してください。
- リンパサンプル採取用のカニューレを準備するには、PEカニューレを頭から尾への構成で組み立てます。両末端部は外径0.5mm、内径0.3mm(ID)、中間部は外径0.6mm、内径0.5mmのチューブを使用します。
- 注射針に接続する近位部はカニューレのセグメントを2cm、中央部は40cm、カニュレーション用の遠位部は8cmの長さにカットします。
- カニューレの遠位端を約45°の角度で切断・面取りし、頸部リンパ管へのスムーズな挿入を促します。カニューレアセンブリの詳細な図は 図2 を参照してください。
注:このベベルはリンパ管への挿入を滑らかにし、有効断面積を増やすことで閉塞のリスクを減らします。カニュレーションが成功した後、近位(2 cm)切片を切断し、中央切片の露出した近位端から直接リンパを採取します(詳細はステップ4.9および4.10で説明)。
図2:カニューレアセンブリの回路図(縮尺ではない)。図は、カニューレを構成するために使われたPEチューブの各部品の寸法を示しています。左から右へ、組み立てられたカニューレはそれぞれ近位端、中間端、遠位端と呼ばれます。この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。
- 麻酔吸入システムを準備し、液体イソフルランを蒸気化器付きの加圧容器に事前に充填します。使用前に、気密性を確認し、安定かつ一定のガス流量を確保するために蒸発器のテストラン(プライミング)を行います。
- 必要に応じて、適切な車両で試験薬候補を準備してください。保存中および投与期間中の配合の完全性を確認するため、安定性試験を実施します。該当する場合は、追加の薬剤(例:エバンスブルーなどの生物学的染料)も含めてください。
- リンパ採取用の容器を準備するため、無菌マイクロ遠心分離機チューブをあらかじめ計量し、初期重量を記録してください。各チューブには計画された採取時間点(例:1時間単位)に従って順番にラベルを貼ります。各チューブに濃縮ヘパリン(またはEDTA)を加え、窒素の吹き落とし蒸発で溶媒を除去します。これにより、1チューブあたり2〜5 IUの乾燥ヘパリン(EDTA)が残され、集まったリンパの不均一な希釈を防ぎます。
3. 手術直前の準備
- 各カニューレの通透性は、準備済みの抗凝固液で洗浄して確認します。組み立てたカニューレの近位端に注射器を接続し、少量の溶液を優しく放出します。溶液が遠位端から漏れの痕跡なくスムーズに排出されるようにしてください。漏れが検出された場合、通常は接続点で流体が漏れていることを示し、カニューレアセンブリ全体を廃棄し、ステップ2.3に従って新しいものを再構築します。
注意:この工程は同時にカニューレの内側表面に抗凝固剤をあらかじめコーティングします(手術前日にも行うため、カニューレは一晩中プレコートされます)。 - 手術開始の約5分前から鼻のコーンマスクを通して吸入したイソフルランの投与を開始します。手技中は麻酔を0.4〜0.6 L/minの投与速度で維持し、圧力101.3 kPa、20°Cで投与してください。 麻酔の深さを確かめ、つま先のつまみ反応を評価する。
- 麻酔の深さを継続的に監視してください。ラットに苦痛や生理的不安定の兆候が見られた場合は、すぐに安楽死させてください。
- ラットを37°Cで温められた手術用パッドの上に仰向けに置きます。 頭を傾けて首を伸ばし、必要に応じて小さなサポート(枕)を使って頸部の露出を最大化します。頭部を麻酔マスクで固定し、イソフルランの継続的な投与を確保し、前肢は輪ゴムや手術用テープで優しく拘束して、手術中の動きを最小限に抑えてください。
- 頸部の毛は無菌生理食塩水で洗い流し、剃りやすくします。切開前に手術部位全体を徹底的に剃り(両刃の安全カミソリの刃を使い)、通常は首と鎖骨部分を徹底的に剃り、毛を完全に除去してください(剃られた首の部分の例は 図3A を参照)。
- ヨウ素を含む消毒剤で剃った部分全体を洗浄してください。
- 手術部位に2.5cmの点線を引いて、最初の切開の長さを確認します。線をラットの体の中央線よりやや右に位置させます。切開部の上部は下唇から約1〜1.5cm下に置きます(切開部位の例は 図3B を参照し、定規で測定します)。
図3:手術部位の準備。 (A) 切開の準備として首の部分を剃る;(B) 切開部のおおよその長さと位置(2.5cmの点線で示す)。 この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。
4. 頸部リンパ管のカニュレーション
- ネズミの頭を操作者の方に向けて位置づけます。頸部リンパ管の直径が比較的小さいため、この工程は顕微鏡を使ってください。
- 滅菌メスを用いて、前述の2.5cmのマークに沿って頸筋の表層を慎重に切開し、ほぼ正中線に平行に配置します(開いた浅層皮膚層については 図4A を参照)。
- 残りの筋肉層、主に浅い頸筋膜を優しく切り離し、赤色で識別できる頸動脈を露出させます。
- 胸骨突起筋と下顎下腺を引っ込め、手術範囲から慎重に傾けて頸部リンパ管の特定を容易にします。手術期間を維持するために組織拡張器を使用し、綿棒で一時的に筋肉組織を保持しながらリンパ節と関連するリンパ管を位置づけます。組織拡張器はカニュレーションの全過程で確実に装着されていることを確認してください(組織拡張器が設置された状態で開いた手術ウィンドウは 図4B を参照)。
- 頸部リンパ管の位置を特定してください(できれば顕微鏡で確認してください):リンパ管は直径約0.2〜0.5mmの不透明で無色の血管のように見え、頸動脈にほぼ平行に走っています。頸部リンパ管の経路に沿って、1つ以上の隣接する肉色のdCLNがしばしば観察されます(露出した深部頸リンパ管と隣接するdCLNの顕微鏡的図 4C を参照)。
注:頸部リンパ管は通常、周囲の組織と非常に似た色をしており、特に脂肪組織が多いラットでは、その識別には慎重な検査が必要です。外科的実践目的(ただし薬物や内因性物質のリンパ輸送の研究には使用されません)には、手術開始時に首の下に皮下注射することで、造影剤がリンパ管を通じて排出される際に頸管リンパ管をより明確に見分けることができます。 - 鈍い鉗子を使い、分離した結合組織を優しく通過させ、鉗子を位置に保ち、頸部リンパ管が手術視野内ではっきり見えるようにします。
- 頸部リンパ管を周囲の結合組織や脂肪組織から鈍器解剖で慎重に隔離し、血管が非常に脆弱であるため損傷を避けるよう特に注意してください。
- マイクロシザーを使って露出した乳管の上半分に小さな切開を入れます。ダクトを完全に外さないでください。この二つの半分はそのまま残されなければなりません。
- 抗凝固剤溶液であらかじめコーティングされた準備されたカニューレ(ステップ2.3で説明されている通り)に気泡がないか、優しくフラッシュして確認してください。挿入直前には、鉗子でカニューレの遠位端を慎重に掴み、面取り面が上方を向くように向きを調整します。その後、切開部を約2mmほど優しくカニューレを管内に差し込み、頭部に向かって方向に向けます(成功したカニュレーションの図は 図4Dを参照してください)。挿入の深さは個体によって異なります。
注意:この処置ではカニューレ挿入が比較的浅いため、周囲への追加の固定点を設けると役立ちます。これは、手術窓から約1.5cm離れた場所にハサミで小さな二次皮膚の穴(穴)を開けることで実現されます。この開口部は、縫合や接着剤などでさらに安定化されます。図4Eは組織接着剤の使用文脈でこのステップを示しています。カニューレは穴を通して位置を固定するのを助けます。 - インスリン注射器とカニューレの近位部(2cm)をカニューレの他の部分から切り離します。その後、リンパは直径の大きい中間節の露出した近位端から直接採取できます。この採取部位の遠位端を1〜2分間観察してください。カニューレされた管から目に見え、ゆっくりと、そして一定にリンパ液が流出することで成功したカニュレーションを確認しましょう。
- カニュレーションが成功することが確認されたら、ピペットでシアノアクリレート組織接着剤の少量をリンパ管切開部と二次固定穴の両方に塗布してカニューレを固定します(カニュラ固定のデモンストレーションは 図4E を参照)。血管を塞いだりリンパの流れを妨げたりしないよう、特に注意してください。
- リンパ流を数分間観察し、安定した流出を確認します(通常、カニューレの先端に1分以内に目に見える水滴が形成されます)。確認が完了したら、手術窓から組織拡張器を慎重に取り外し、下顎下腺を元の位置に戻します。
- カニューレの遠位端にあらかじめラベルが貼られた抗凝固剤被覆マイクロ遠心分離機チューブ(ステップ2.6参照)を取り付け、自由に流れるリンパ液を採取します。
図4:頸部リンパ管のカニュレーション。 (A) 首部の切開部位;(B) 手術用ウィンドウを開けて組織拡張器を装着し、顎下腺が右に後退した;(C)頸部リンパ管および顕微鏡で確認したdCLN1件。(D) 成功したカニュレーション(緑の点線で示す顕微鏡図)。(E) 切開部に組織接着剤を塗布し、ピペットを用いて二次皮膚穿刺を行いました。 この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。
5. 術後期間と薬物投与
- 頸部リンパ管カニュレーションが完了したら、すべての筋肉層を元の位置に戻します。その後、皮膚切開部を縫合糸や組織接着剤で閉じます。通常、長さ2.5cmの切開部は8針で適切に閉じることができます(縫合で閉じた手術窓については 図5A を参照)。このステップが終わったら、前肢の拘束ゴムや手術用テープを外してください。
- 適切な経路で脳脊髄液に薬剤を投与します。例えば、大水槽内注射(ICM)、脳室内注射(ICV)、腰椎鞘内注射(LIT)などです。ICM投与を例に挙げると、頭蓋骨の基部に位置し、背側表面で唯一の柔らかい凹みとして見えるシスターナ・マグナの注射部位を特定します。周囲の毛皮は必要に応じて剃り、視認しやすくします(ICM注射に適した部分は 図5B を参照してください)。
注:ICM注射中に頭蓋内圧(ICP)を維持するために、薬剤投与前に同量のCSFを抽出することが多いです。注射には新しいプリミッシュシリンジの使用が推奨されます。注射器の針を曲げることで投与が容易になります(曲げた注射器針を用いたICM注射のデモンストレーションは 図5C を参照)。 - ラットは、注射後およびサンプル採取期間中ずっと、体温を保つために温められた手術用パッド(37°Cで維持)に仰向けに置いておきます。
図5:術後の管理。 (A) シルク縫合による閉鎖切開部位。(B) 周囲の毛皮を剃った大池のおおよその位置。(C) 曲がった針のインスリン注射器を用いた薬剤候補のICM投与。 この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。
6. リンパ検体の採取と分析
- リンパを抗凝固剤被覆のマイクロ遠心分離機チューブに継続的に集め、あらかじめ決められた間隔(通常は1時間ごと)にチューブを交換します。採取したサンプルは冷蔵庫を使って氷嚢と一緒に保管してください。マイクロ遠心分離機管内で採取された子宮頸部リンパ検体については 図6 を参照してください。
- リンパ採取が完了したら、適切なプロトコルに従って人道的に安楽死させてください。
- 各計画区間(1時間単位)に収集されたリンパの量を測定して、リンパ流量を決定します。
- 適切な分析手法(HPLC、HPLC-MS、または市販のアッセイキットなど)を用いてリンパ中の薬物(または関心物質)濃度を測定し、リンパ系を経由してCNSからのクリアランス動態を特徴づけます。
- 測定された薬物濃度に対応するリンパ体積を掛けて、リンパ薬物質量輸送を計算します。
図6:リンパ検体採取。 マイクロ遠心分離機チューブ内で採取した約100μLのサンプルの写真。 この図の拡大版はこちらをクリックしてご覧ください。
7. 処置後の取り扱いおよび廃棄物処理
- 安楽死したラットは、専用の冷蔵エリア(例:冷蔵庫)内の指定された医療廃棄物容器に一時的に保管し、専門の医療廃棄物処理チームによる回収・処分が完了します。
- 廃棄された鋭利品はすべて、他の廃棄物とは別に指定されたシャープ容器に集めてください。
- 実験で使用された他の非鋭利な物品(例:綿棒、輪ゴム、PEカニューレ)は医療廃棄物袋にまとめて処分し、家庭ごみや一般廃棄物と一緒に処分しないでください。この袋に鋭利なものを入れないように注意してください。
- 残った再利用可能な工具はすべて、検査室の手順に従って清掃・消毒してください。
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結果
頸部リンパカニレーションモデルを用いて、1時間あたりのリンパ流量(mL/h)の代表的なデータセットが得られました(対応する 図 7を参照)。この実験では、3匹(n=3匹)の研究用ラットを対象に、リンパをマイクロ遠心分離機管に継続的に収集し、6時間かけて毎時間交換しました。
図7:経過による子宮頸部リンパ流。子宮頸リンパ流量(mL/h)の代表的なデータを示すチャート。示されているデータは、6時間経過期間の3回の成功した実験(閉円、●)の平均測定値です。
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ディスカッション
このプロトコルは、ラットの頸部リンパ管をカニュールする再現可能な方法を確立し、長期間にわたる連続的なリンパ収集を可能にします。十分な顕微外科訓練があれば、この処置は効率的に実施でき、安定した生理的条件下で安定したリンパサンプルが得られ、連続麻酔によって維持されるため、日常的な実験使用に適しています。習得が完了すると、手術は通常約40〜50分で完了し、1回の実験セッションで複数の動物を処理することが可能です。さらに、単一時点サンプリングではなく、長期間にわたる連続的な採取により、CNS由来物質(タンパク質、薬物、免疫マーカー、脂質など)のリンパ輸送をより詳細に定量化することが可能になります。深部頸部リンパ管は一般的にCNS由来のリンパ液の主な輸送経路と考えられていますが、表層と深部の排膿経路の相対的な寄与は病態生理的条件によって異なる場合があります(27,28,29)。現時点では、CNS...
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開示事項
著者らは、本記事で報告された研究に影響を与えた可能性のある競合する財政的利害関係や個人的な関係は知られていないと述べています。
謝辞
著者らは、中国薬科大学動物実験センターの郝正林氏と趙潔氏のご支援に心より感謝申し上げます。
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材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 30ゲージの針 | 玉寿健康 | カニューレの近位端(0503)とヘパリン注射器を接続するために使用 | |
| 麻酔ディスペンサー(ヴェポライザー付き) | YYUN計器会社 | ||
| 鈍器鉗子 | RWDライフサイエンス | F22002-10 | |
| 綿棒 | 青島シュルツ・バイオテクノロジー | MQ-02 | 筋肉組織を一時的に固定するために使われます |
| 加熱手術用パッド | 上海一衡インスツルメンツ | 次元 15 & 倍;20 cm | |
| ヘパリンナトリウム | 上海アラジン生化学技術 | H123383 | 使用前に希釈が必要です |
| インスリン注射器(1 mL) | 玉寿健康 | U100-1ML | ヘパリンの前塗りのみに使用されます |
| 吸入用のイソフルラン溶液 | RWDライフサイエンス | R510-22-10 | ヴェポライザーによる麻酔に使用 |
| マーカーペン | どのブランドでも | 該当なし | |
| マイクロ遠心分離機チューブ(1.5 mL) | 南通海瑞実験機器 | HR10003 | リンパの採取に使用 |
| マイクロシザーズ | RWDライフサイエンス | GD234BA0007925 | |
| ナイロン外科用縫合糸および | 上海一衡インスツルメンツ | 4-0 35CM | |
| ピペット(容量調整可能、測定範囲5〜50 & mu;L) | ドラゴン・ラボラトリー・インスツルメンツ・リミテッド | 7030301006 | 組織接着剤の測定のみに使用されます |
| ピペットの先端など; | バイオシャープ・ライフサイエンス | BS-10-T | 組織接着剤の転移のみに使用され、特定の量は必要ありません |
| ポリエイヒレン(PE)カニューレ 外径0.5mm、内径0.3mm(0503) | AniLab科学機器(寧波) | PE-0503 | |
| ポリエイヒレン(PE)カニューレ 外径0.6mm、内径0.5mm(0605) | AniLab科学機器(寧波) | PE-0605 | |
| カミソリの刃 | ジレット上海 | Q31/0115000301C004 | 毛皮の剃り込み専用 |
| ラバーバンド | どのブランドでも | 該当なし | ネズミの前肢を拘束するために使われる |
| 支配者 | どのブランドでも | 該当なし | |
| スケーペルブレード(#23) | RWDライフサイエンス | S31010-01 | |
| 注入用の塩化ナトリウム(0.9%)溶液 | 石家荘第4製薬 | H20066533(承認番号) | 毛皮のすすいだけで使われます |
| スプラグ・ドーリー・ラッツ | 北京ビタル川実験動物技術 | 101 | 体重は220〜250グラム、年齢制限なし |
| サージカルライト | 北京ホ・バイオテック | XHA011-1 | |
| 外科用顕微鏡 | 上海策威光電子技術 | SMZ755T | 機械式ステージを持たない解剖顕微鏡には、格納式スタンドを装備することができます |
| 組織接着剤 | 3Mベットボンド | 1469SB | 主成分はシアノアクリレート |
| 組織拡張器(Colibri) | RWDライフサイエンス | R22029-04 | 拡張範囲 20mm/4cm |
参考文献
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