本研究は、経カテーテル腎動脈塞栓術および急速心房ペーシングを用いて慢性中等度腎機能不全と心房細動を組み合わせた新しいin vivoビーグルモデルを確立し、この組み合わせが左心房内皮の機能を大幅に損ない、凝固促進活性を高め、炎症およびRAAS介在経路を通じて血栓症リスクを増加させることを示しました。
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研究記事
* These authors contributed equally
本研究は、経カテーテル腎動脈塞栓術および急速心房ペーシングを用いて慢性中等度腎機能不全と心房細動を組み合わせた新しいin vivoビーグルモデルを確立し、この組み合わせが左心房内皮の機能を大幅に損ない、凝固促進活性を高め、炎症およびRAAS介在経路を通じて血栓症リスクを増加させることを示しました。
心房細動(AF)と腎不全(RI)の同時出現は、臨床的に複雑な現象であり、高い有病率を示しています。本研究は、ビーグルの左心房内皮機能に対する慢性中等度RIとAFの併用が与える影響を調査しました。慢性RIは、左腎動脈主枝のゼラチンスポンジ顆粒を用いた経カテーテル塞栓術によって誘発され、動物は慢性腎実質損傷の発生を待つために3か月間維持されました。その後、連続的な急速心房ペーシング(基本周期長60ms、電圧、拡張期ペーシング閾値の4倍、180分)によって心房細動が誘発されました。組織学的変化はヘマトキシリンおよびエオシン染色を用いて評価されました。血漿および心臓組織における内皮機能、凝固、線維溶離、炎症、レニン–アンジオテンシン–アルドステロン系(RAAS)活性に関連するパラメータを、酵素結合免疫吸着アッセイ、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応、ウェスタンブロッティングを用いて調査しました。結果は、中等度のRIを伴う慢性腎損傷モデルの確立に成功し、血漿クレアチニン、尿素窒素の有意な上昇、クレアチニンクリアランスの低下によって確認されました。左心房内皮機能は、RIおよびAFの併用を伴うビーグルで有意に障害され、凝固促進効果の強化と線維溶解の減少が伴いました。炎症マーカーはRI手技またはAF誘導後に上昇し、RI+AF複合群ではさらに増加しました。さらに、RI後にレニンおよびアルドステロン値の増加を示すRAAS活性が上昇し、AFとの併用時にはさらに増加しました。まとめると、本研究はビーグルにおける慢性中等度のRIとAFを組み合わせた 生体内 動物モデルを確立し、この組み合わせが左心房内皮の機能を著しく乱し血栓リスクを高めることを示しました。
持続性心律不整脈の中で最も一般的な形態である心房細動(AF)は、不利な臨床結果と密接に関連しています。AFの全身的な病態生理的特徴により、この不整脈は認知機能低下、うつ病、全身塞栓症など、さまざまな併存疾患と複雑な病態生理学的クロストークを頻繁に呈します。慢性腎疾患(CKD)は、AFの発症および血栓塞栓症の発生において独立したリスク因子として特定されています。慢性腎腎臓病と診断された患者の約15%から20%が心房細動に影響を受けており、腎置換療法を受けている患者のうち心房細動を発症する割合は15%から40%の範囲です2。一方で、AFと診断された患者の約30%から60%が軽度から中等度の腎不全(RI)を同時に呈しています3。したがって、AFとRIの同時出現は複雑な臨床現象となり、患者集団で高い有病率となっています。AFとRIの双方向関係はAFの発症リスクを著しく高め、腎障害の進行を悪化させ、最終的には臨床転帰の悪化に寄与します。
過去の研究では、ラットを用いてRIモデルを確立することが多かったです。しかし、心臓の大きさが小さいため、心臓の電気生理学的実験には適していません。一方、犬は中大型動物モデルの腎不全に頻繁に用いられ、腎摘出術が主なモデル化方法となります5。しかしながら、このアプローチはモデリング成功率が限定的であることが伴います。さらに重要なのは、腎摘出術が直接的に腎実質損傷を誘発しないため、腎不全の病理過程を効果的にシミュレートできないことです。したがって、RIおよびAFを用いた適切な動物モデルの確立が不可欠です。注目すべきは、Liang Zらが左腎臓の腎動脈の小枝をゼラチンスポンジ顆粒を用いて2週間塞栓することで、ビーグルにおける軽度のRIモデルを確立することに成功したことです。これはAF6と関連していました。しかし、慢性腎症の特徴である糸球体硬化症や細管間質性線維症は、動物モデルで完全に発症するには長期間の腎実質損傷を必要とするため、2週間の観察期間は臨床CKDのシミュレーションには一般的に不十分と考えられています7,8。これは、臨床的なCKDの進行性をより忠実に再現し、より長い観察期間を持つ慢性モデルの必要性を強調しています。
したがって本研究は、ビーグルの左腎動脈主幹に経カテーテル塞栓術を行い、3か月間維持して確立された慢性腎疾患の発達を促すことで、慢性中等度RIと心房細動を併用した動物モデルを確立することを目的とした。さらに、これらの病的条件下での左心房内皮機能障害の病因を調査し、慢性中等度のRIとAFの組み合わせが炎症の強化とRAAS活性化を通じて左心房内皮機能を相乗的に損なうという仮説を検証し、これによりいずれの疾患だけでなく血栓症リスクも増加させるという仮説を検証しました。これらの発見は、AFと慢性RIの併存についての理解を深め、AFおよびRI患者における抗凝固療法の利点に関するさらなる研究の基盤となる可能性があります。
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本研究は、米国国立衛生研究所(NIH)の『実験動物のケアと利用に関するガイド』(出版物番号85-23、1996年改訂)の推奨事項に厳密に従って実施されました。この研究プロトコルは北京安鎮病院の施設動物ケア・利用委員会(承認番号81700293)によって承認されました。研究プロトコルは当院の施設動物ケア・利用委員会によって審査・承認されました。動物の苦しみを最小限に抑え、研究で使用される動物の数を減らすためにあらゆる努力がなされました。試薬および使用機器は 材料表に記載されています。
1. 動物モデルと実験設計
2. 慢性中等度RIの誘発のための腎動脈塞栓術
5F多目的カテーテルが動脈鞘から挿入され、C腕透視指導のもと腹部大動脈に進出しました。選択的左腎動脈カニュレーションが行われ、基礎的な腎動脈造影検査は、非イオン性ヨウ素化造影培地を3 mL/sの速度で5〜8 mL注入して腎動脈樹状図を可視化しました。カテーテルの位置が良好であることは、血管造影画像上で左腎動脈全体とその枝の実演によって確認されました。
その後、左腎動脈主支部への経カテーテル塞栓術により、吸収性ゼラチンスポンジ顆粒(直径50mg)を用いてRIを誘発しました。ゼラチンスポンジ顆粒は、約50 mgの顆粒と造影剤培地および生理食塩水の1:1混合液を混合し、合計体積は約2〜3 mLにしてスラリーとして準備されました。塞栓スラリーは、連続的な透視モニタリングのもと、約2〜3分間、カテーテルから手動注射でゆっくりと注入されました。塞栓術は左腎動脈血管造影の再検査により確認され、塞栓枝に遠位動脈の不透明化が認められませんでした。血管造影検査の確認後、カテーテルと鞘が抜かれ、大腿動脈は6-0ポリプロピレン縫合糸で修復されました。手術傷は層状に閉じられ、動物たちは厳重な監視のもとで回復を許されました。
対照群およびAF群(偽処置)では、同一のカテーテル注入プロセスが行われ、腎動脈血管造影後に多目的カテーテルを通じて同量(2〜3 mL)の生理食塩水を左腎動脈に注入しました。
3. 急促心房ペーシングによる心房細動誘導
RI手技(または偽手技)から3か月後、AF群とRI+AF群で心房細動が誘発されました。AFは合計12頭のビーグルで誘発されました(AF群でn=6匹、RI+AF群でn=6匹)。前述の再麻酔および血管アクセスの後、右大腿静脈にカテーテル挿入のためにカニューレされました。6Fの四極電極カテーテル(材料表参照)が透視指導のもとで前方に設置され、右心房の側壁に設置されました。 カテーテルの正しい位置は、心内チャネルに特徴的な心房電図の記録により確認され、明確で鋭い心房偏向を示しました。 拡張期ペーシング閾値は、5Vから0.1Vずつ段階的に刺激器の出力電圧を下げて、心房捕捉喪失が観察されるまで決定しました。最低電圧が安定した1:1の心房捕捉を達成したものが拡張期ペーシング閾値として記録されました。急速心房ペーシング(基本サイクル長60ms、ペーシング速度は毎分1000拍、出力パルス幅は2ms、電圧は拡張期ペーシング閾値の4倍、通常は2〜4Vに相当)が、心臓刺激装置を用いて180分間連続して心房拍動を誘発し、前述の通り9。 心房誘導の成功は、表面心電図に持続的な不規則なR-R間隔の出現と、ペーシングの一時停止後少なくとも1分間持続する心内電図上の急速かつ混乱した心房電位によって確認されました。ペースシングプロトコル完了後、12頭のビーグル(100%)全員が持続AFを達成しました。ペース停止後の持続心房細動の平均時間は、自発性洞調律への心房変律の3〜8分前の範囲でした。
AF感受性を評価するために用いられるバーストペーシングプロトコル(通常3〜10秒のバースト)とは異なり、本研究で用いられた180分連続速度心房ペーシングアプローチは、持続的なAFのモデル化と早期分子リモデリングを誘発するために特別に設計されていることに注意が必要です。このプロトコルは犬のAF研究で広く確立され、検証されています。
4. 実験設計とグループ割り当て
実験動物は4つのグループ(n=6群)にランダムに割り当てられました:対照群、RI群、AF群、そしてAF(RI+AF)群と共にRI組み。RI群およびRI+AF群のビーグルはベースラインでRI塞栓術を受け、対照群およびAF群のビーグルは腎動脈に偽の生理食塩水注射を受けました。3か月後、前述のAF群およびRI+AF群でAFが誘発されました。実験設計全体とタイムラインの概観は 図1に示されています。
5. クレアチニンクリアランスの決定
クレアチニンクリアランス(CCr)は、30分内因性クレアチニンクリアランス法11を用いて測定されました。麻酔後、無菌条件下でフォーリーカテーテルを尿嚢に挿入し、膀胱を完全に空にしました。その後、30分間の尿採取期間が開始され、すべての尿排出物はカテーテル を通じて 校正された収集容器に収集されました。30分の採血期間終了時に再び膀胱を空にし、完全な尿回収を確保しました。同時に、血漿クレアチニンの測定のために頸静脈から中間点の血液サンプルを採取しました。CCrは標準的な式で計算されました:CCr(mL/min/kg) = (尿クレアチニン濃度×尿体積) / (血漿クレアチニン濃度×採取時間)、体重に正規化。
6. 組織および血液サンプルの採取
血液サンプルは基線から頸静脈から採取され、EDTA抗凝固管および単純血清分離管への献血前に採取されました11。最終的に、すべてのビーグルは麻酔回復前に致死量のペントバルビタールナトリウムを静脈注射で安楽死させられました。腎臓は組織学的検査のために採取されました。 心臓は摘出され、左心房付属肢(LAA)は慎重に剥離され、切除から5分以内に液体窒素で速凍され、分子分析まで−80°Cで保存されました。LAAは、AF患者における血栓形成の最も一般的な部位であり、内皮機能および血栓リスクの評価において臨床的に最も関連性の高い解剖学的部位であるため、組織解析に選ばれました。
7. 組織学的観察
腎組織は10%中性バッファーのパラホルマルデヒドに24時間固定され、70%、80%、90%、95%、100%エタノールの段階的なエタノール系列で脱水され、キシレンでクリアリング(2回、各30分)、パラフィンに埋め込み、ロータリーマイクロトームで厚さ5μmのスライスに切断されました。その後、切片をHE染色して組織病理学的変化を観察しました。 具体的には、切片をキシレンで脱硫(2回、各10分)に交換し、降下エタノール系列で再水和し、ヘマトキシリン溶液で5分間染色、1%塩酸・エタノールで30秒分異化、流水道水で10分間洗浄、エオシン溶液で2分間カウンターステイン、脱水、透明化、中性バルサムで埋め込みました。切片は100×および400×の光学顕微鏡で検査されました。
8. 酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)
血液サンプルは3000 × g、4°Cで20分間遠心分離され、その後上清液(血漿)を採取して−80°Cで保存し、分析が行われます。クレアチニン、尿素窒素、フォン・ヴィルブランド因子(vWF)、トロンボモジュリン(TM)、非対称ジメチルルギニン(ADMA)、一酸化窒素(NO)、プラズミノゲン活性化剤阻害剤-1(PAI-1)、組織プラスミノゲン活性化剤(t-PA)、腫瘍壊死因子-α(TNF-α)、高感度C反応性タンパク質(hs-CRP)、インターロイキン-6(IL-6)、レニン、アルドステロン(ALD)のレベルを、製造元の指示に従い市販のELISAキットで検査しました。簡単に、抗体被覆された96ウェルマイクロプレートに100μLの血漿サンプルまたは標準サンプルを加え、37°Cで2時間培養、洗浄バッファーで4回洗浄、37°Cでビオチン化検出抗体で1時間培養、再び洗浄、37°Cでストレプタビジン-HRP共役物質で30分間培養、その後TMB基板を暗闇で15〜20分間培養しました。反応は50μLの停止液で停止し、マイクロプレートリーダーを用いて450nmで吸収を測定しました。すべてのサンプルは重複検査で行われました。
9. 定量的リアルタイムPCR(qRT-PCR)
TRIzol試薬を用いてLAA組織から全RNAを抽出し、その後、吸収比260/280 nm(許容範囲1.8–2.0)で分光光度計を用いてRNA純度と濃度を検出しました。 PrimeScriptのRT試薬キットを用いて、合計1μgのRNAを補完的なDNA(cDNA)に逆転写しました。逆転写反応は37°Cで15分間行われ、その後85°Cで5秒間不活化が行われました。その後、SYBRグリーンマスターミックスを用いてPCRシステム上で定量的リアルタイムPCRが実施されました。熱サイクルプログラムは、95°Cで5分間の初期変性、その後95°Cで10秒間の変性40サイクル、60°Cでのアニーリング/延長30秒で構成されていました。蛍光信号は各拡張ステップの最後にSYBRグリーンチャネルを用いて検出されました。閾値サイクル(Ct)値は計測ソフトウェアによって自動的に決定されました。mRNAレベルのフォールド変化は2−ΔΔCt法を用いて決定されました。βアクチンは内部統制を担当しました。 すべてのサンプルは三枚ずつ検査されました。
10. ウェスタンブロッティング
LAA組織から全タンパク質は、放射免疫沈殿アッセイ(RIPA)溶解バッファー(50 mM Tris-HCl、pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.5% デオキシコール酸ナトリウム、0.1% SDS、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤カクテルを補足したもの)を用いて抽出されました。詳細は材料表参照)。組織は氷の上で均質化され、12,000 × g、4°Cで15分間遠心分離し、上清液を採取しました。タンパク質濃度はBCAタンパク質アッセイキットを用いて定量化されました。その後、同量のタンパク質(1レーンあたり30μg)を12%のSDS-PAGEで80Vで30分間分離(スタッキングゲル)、その後120Vで約60分間分離(解消ゲル)、さらに300mAのポリフッ化ビニリデン膜(PVDF)膜に移管バッファー(25mMトリス、192mグリシン)に移しました。 20%メタノール。膜は、室温でTBST(0.1%Tween-20を含むトリス緩衝食塩水)に溶かした5%無脂肪ミルクで2時間ブロックし、その後4°Cで一次抗体(材料表参照)で1時間プローブしました(抗体源、カタログ番号、希釈量は材料表参照)。翌日、膜はTBSTで3回(各10分)洗浄し、対応するHRP結合二次抗体(材料表参照)と室温で2時間インキュベートしました。 さらに3回のTBST洗浄(各10分)を行った後、化学発光イメージングシステムを用いて強化化学発光(ECL)キットでブロットを可視化しました。 グリセラルデヒド-3-リン酸脱水素酵素(GAPDH)が内部対照として機能しました。 ImageJソフトウェアを用いてデンシトメトリック解析を行い、相対的なタンパク質発現レベルはGAPDHに正規化されました。検出されたタンパク質のおおよその分子量は以下の通りです:vWF(~260 kDa)、TM(~60 kDa)、内皮一酸化窒素シンターゼ(eNOS、~130 kDa)、誘導性一酸化窒素シンターゼ(iNOS、~130 kDa)、PAI-1(~45 kDa)、t-PA(~70 kDa)、およびGAPDH(~36 kDa)。全長でトリミングされていない西部の染点画像は補足図1および補足図2に提供されています。
11. 統計解析
すべての値は統計およびグラフソフトウェアを用いて解析され、平均±標準偏差(SD)として示されています。データ分布の正規性はパラメトリック解析前にシャピロ・ウィルク検定を用いて評価した。分散の均質性はレヴェーン検定を用いて評価されました。正規性および分散の均質性の仮定を満たすデータについては、一方向ANOVAを用いた差分比較を行い、その後、ダネットの事後検定を用いて対照群との複数比較を行いました。正規性仮定を満たさないデータには、ノンパラメトリックなクルスカル・ウォリス検定とダンの事後検定が適用されました。本研究では、すべての変数が正規性と分散の等しさを満たしました。そのため、全体的にパラメトリック分析が適用されました。解析ソフトウェアでは、データをグループ化されたデータテーブルに入力し、カラム解析メニューから一方向ANOVAを選択し、事後比較のためにDunnett検定を選択し、有意性閾値は p < 0.05に設定されました。
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慢性中等度RIおよびAFの動物モデル
実験設計とタイムラインの概観は図1に示されています。図2A,Bに示された左腎動脈血管造影の代表画像は、経カテーテル塞栓術後に小腎動脈枝が正常に閉塞され、繰り返し血管造影時に遠位動脈の不透明化が見られないことが示されました。RI手術から3か月後、ビーグルが生贄にされ、腎臓が摘出されて写真撮影されました。左腎臓は右腎に比べて多焦点で不規則な蒼白領域で著しく縮小していることが観察されました(図2C,D)。HE染色による組織学的検査により、RI群の球体が対照群と比べて著しく損傷しており、RI手技後に大多数のネフロンで機能喪失が見られたことを示しています(
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本研究では、中等度のRIとAFを組み合わせた 生体内 動物モデルを確立し、これらの病的条件下での左心房内皮機能障害の病因を探りました。本研究の主な成果は以下の通りです。まず、ビーグル犬における左大腎動脈の3か月間の塞栓術は中等度のRIを成功裏に誘導しました。次に、ビーグルにAFモデルが実質的に確立されました。第三に、RIおよびAFの両方を持つ動物では左心房内皮機能が有意に低下し、凝固促進効果の強化と線維溶解の低下が伴い、血栓症のリスク増加につながる可能性があります。第四に、慢性中等度のRIとAFの組み合わせは、炎症反応の有意な促進とRAAS活性の強化と関連していました。
RIとAFを併用した患者における血栓症および出血のリスク評価は臨床実践において重要なテーマです。最近の研究では、腎機能と心房細動の複雑な相互作用が血栓塞栓症に影響していることも強調されています12。適切なRI動物モデルの不足は、このテーマに関する基礎研究のボトルネックとなっています。...
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著者たちは競合する利害関係を一切認めていない。
この研究は、非感染性慢性疾患国家科学技術主要プロジェクト(No. 2024ZD052500、No. 2024ZD0521504)、中国国家自然科学基金(助成金番号81700293およびNo.81970272)、北京安鎮病院高水準研究資金(資金プロジェクト番号2025AZB5005)の支援を受けました。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 6-0 ポリプロピレン縫合糸 | Ethicon (Johnson & Johnson) | 8706H | 大腿動脈修復用 |
| 5F 多目的カテーテル | Cordis (Cardinal Health) | 521-550S | 腎動脈カニューレ挿入と塞栓術用 |
| 6F 四極電極カテーテル | St. Jude Medical | 401443 | 右心房ペーシング用 |
| 6F 血管導入鞘 | Terumo | RS*A60K10SQ | 大腿動脈アクセス用 |
| ABI 7500 リアルタイムPCRシステム | Applied Biosystems (Thermo Fisher Scientific) | 4351105 | qRT-PCR 熱サイクリングと蛍光検出用 |
| 吸収性ゼラチンスポンジ顆粒（直径50 mg） | Jinling Pharmaceutical | — | 経カテーテル腎動脈塞栓術用; 造影剤と生理食塩水(1:1)でスラリーとして調製 |
| ADMA ELISAキット（犬用） | Cusabio | CSB-E09297c | 血漿非対称ジメチルアルギニン測定用 |
| アルドステロンELISAキット（犬用） | Cusabio | CSB-E08014c | 血漿アルドステロン測定用 |
| BCA タンパク質アッセイキット | Thermo Fisher Scientific | 23225 | タンパク質濃度定量用 |
| ビーグル犬（オス、4–5歳、10–12 kg） | 上海交通大学農業実験動物農場有限公司 | — | 健康なオスのビーグル犬; 標準条件で個別に収容 |
| Cアーム蛍光撮影システム | GE Healthcare | OEC 9900 Elite | カテーテル挿入と血管造影中の蛍光撮影ガイダンス用 |
| 化学発光イメージングシステム | Bio-Rad | ChemiDoc XRS+ | ウェスタンブロットバンド可視化用 |
| クレアチニンELISAキット（犬用） | 南京建成生物工程研究所 | C011-2-1 | 血漿クレアチニン測定用 |
| カフ付き気管チューブ（ID 7.0–8.0 mm） | Covidien (Medtronic) | 86449 | 気管挿管と機械的人工呼吸用 |
| DF-5A 心臓刺激器 | 蘇州東方電子技術研究所 | DF-5A | 急速心房ペーシング用; 設定: BCL 60 ms、パルス幅 2 ms、電圧 4×閾値 |
| ECL ウェスタンブロット基質 | Thermo Fisher Scientific | 32106 | ブロット可視化用強化化学発光キット |
| EDTA 抗凝固チューブ | BD Vacutainer | 367835 | 血液採取（血漿分離）用 |
| eNOS 一次抗体（ウサギ） | Cell Signaling Technology | 32027 | 希釈 1:1000; ウェスタンブロッティング用(~130 kDa) |
| エオジンY溶液（水性） | Solarbio | G1100 | H&E 反染用（2分） |
| フォーリー尿道カテーテル（8 Fr） | C.R. Bard | 0165SI08 | CCr測定中の定時尿採取用 |
| GAPDH 一次抗体（ウサギ） | Cell Signaling Technology | 5174 | 希釈 1:1000; ウェスタンブロッティング用内部コントロール(~36 kDa) |
| GraphPad Prism（バージョン8.0） | GraphPad Software | — | https://www.graphpad.com; 統計分析用（単因子分散分析、Dunnettの検定） |
| ヘマトキシリン溶液（Harris） | Solarbio | G1140 | H&E 核染色用（5分） |
| ヘパリンナトリウム注射液（非分画） | 常州千紅バイオファーマ | H32022088 | カテーテル挿入中の抗凝固用; 10 mL の生理食塩水に4000 IUを希釈 |
| HRP結合ウシ抗マウスIgG二次抗体 | Cell Signaling Technology | 7076 | 希釈 1:5000; ウェスタンブロッティング用 |
| HRP結合ウシ抗ウサギIgG二次抗体 | Cell Signaling Technology | 7074 | 希釈 1:5000; ウェスタンブロッティング用 |
| hs-CRP ELISAキット（犬用） | Cusabio | CSB-E08557c | 血漿高感度C反応性蛋白測定用 |
| IL-6 ELISAキット（犬用） | R&D Systems | CA6000 | 血漿インターロイキン-6測定用 |
| ImageJ ソフトウェア（バージョン1.53） | 米国国立衛生研究所 | — | https://imagej.nih.gov/ij/; ウェスタンブロット密度分析用 |
| iNOS 一次抗体（ウサギ） | Abcam | ab178945 | 希釈 1:1000; ウェスタンブロッティング用(~130 kDa) |
| ラクテートリンガー溶液 | Baxter | 2B2324 | 静脈内液; 処置中は5–10 mL/kg/hで注入 |
| 光学顕微鏡 | オリンパス | BX53 | HE染色腎臓切片の組織学的検査用 |
| 機械式人工呼吸器（獣医用） | Midmark | Matrx Model 3000 | 一回換気量15 mL/kg; 呼吸数12–15回/分 |
| マイクロプレートリーダー | BioTek | Synergy HTX | 450 nmでのELISA吸光度測定用 |
| 中性緩衝パラホルムアルデヒド（10%） | Solarbio | P1110 | 腎臓組織固定用（24時間） |
| NO ELISAキット（犬用） | 南京建成生物工程研究所 | A012-1-2 | 血漿窒素酸化物測定用 |
| 非イオン性ヨウ素造影剤（イオヘキソール） | GE Healthcare | Omnipaque 350 | 腎動脈血管造影用; 注入量は3 mL/sで5–8 mL/注 |
| PAI-1 ELISAキット（犬用） | Cusabio | CSB-E13043c | 血漿プラスミノーゲン活性化阻害因子-1測定用 |
| PAI-1 一次抗体（ウサギ） | Abcam | ab66705 | 希釈 1:1000; ウェスタンブロッティング用(~45 kDa) |
| パラフィンワックス | ライカバイオシステムズ | 39601006 | 組織埋め込み用 |
| PrimeScript |