本研究では、喉頭がんにおけるHMGA1のレベルが上昇し、HAND1発現の低下が見られ、転移と臨床段階との逆相関および有意な関連が示され、両者が腫瘍進行に寄与していることが示唆されました。
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本研究では、喉頭がんにおけるHMGA1のレベルが上昇し、HAND1発現の低下が見られ、転移と臨床段階との逆相関および有意な関連が示され、両者が腫瘍進行に寄与していることが示唆されました。
本研究は、免疫組織化学およびRT-PCR手法を用いて、喉頭扁平上皮癌(LSCC)および隣接する正常な喉頭粘膜組織におけるHMGA1およびHAND1遺伝子の発現プロファイルを調査しました。目的は、LSCCの発症、進行、侵入、転移におけるこれらの役割を調査することでした。HMGA1とHAND1はがん組織および隣接する正常組織で検出されました。それにもかかわらず、HMGA1はLSCC組織で有意に高い発現を示し、HAND1は発現レベルが著しく低下しました。HMGA1発現の上昇はリンパ節転移(100.0%対50.0%)および進行臨床期(91.7%対44.4%)と正の関連があったが、腫瘍組織学的グレード、臨床型、患者年齢とは関連しなかった。対照的に、HAND1タンパク質発現の低下はリンパ節転移、臨床段階、病理学的グレードと関連しており、腫瘍の進行および転移に関与していることが示唆されました。さらに、HMGA1とHAND1の発現には線形負の相関があり、HMGA1がHAND1発現を抑制する可能性のある調節相互作用を示唆しました。これらの結果は、HMGA1とHAND1がLSCCの病因に相補的な機能を持ち、HMGA1が腫瘍の発生を促進し、HAND1が抑制因子として機能していることを示唆しています。これら2つの遺伝子間の相互作用は、LSCCの進行と転移を駆動する分子メカニズムに新たな視点をもたらす可能性があります。
喉頭がんは、鼻咽頭がんに次いで頭頸部で2番目に多い原発悪性腫瘍であり、世界中の頭頸部腫瘍の26%〜30%を占めています。喉頭がんの90%以上は喉頭扁平上皮癌(LSCC)に分類されます2。喉頭がんの主な治療法は手術と放射線療法です。局所再発とリンパ節転移は喉頭がん患者の主要な死因です。したがって、再発と転移の効果的な管理は依然として大きな臨床課題となっています。分子生物学の進歩により、喉頭がんで異常発現を示すさまざまな遺伝子が特定されています。しかし、喉頭がんにおける腫瘍の浸潤および転移のメカニズムは依然として不明であり、さらなる研究が必要です。
高可動性グループA(HMGA)タンパク質は、細胞核内に位置する非ヒストンクロマチン結合タンパク質です。HMGA1はDNAおよび関連タンパク質に結合し、遺伝子転写を調節するクロマチン構造変化を誘発します。クロマチン関連転写調節因子として、HMGA1は増殖および転移に関与する複数の腫瘍関連遺伝子の発現を調節します。過去の研究では、HMGA1が甲状腺がん、大腸がん、膵臓がん、頭頸部がん(4,5,6,7)および文献で報告されている他の上皮性および固形腫瘍を含む幅広いヒトがんで過剰発現していることが示されています。HMGA1は増殖および転移に関与する複数の下流標的遺伝子の発現を調節することで腫瘍形成を調節します8。
心臓および神経冠誘導遺伝子(HAND)遺伝子は、HAND1およびHAND2を含むbHLH(基本ヘリックス・ループ・ヘリックス)ファミリーのメンバーです。HAND1は転写因子として、栄養圏の分化や心臓の発達に関与します。しかし、胚外細胞層におけるHAND1の発現機構は依然として不明です。HMGA1はHAND1プロモーターに直接結合し、in vivoおよびinvitro 10の両方でHAND1活性を阻害することが確認されています。HAND1はリプレッサータンパク質として、細胞分化やがん形成の調節に関与していることが示されています。研究によると、ヒト胃がん11、膵臓がん12、卵巣がん13、甲状腺がん14でHAND1の発現がサイレンスされ、高メチル化されることがわかっています。しかし、私たちの知る限り、喉頭がん組織におけるHAND1発現に関する研究は限られています。
本研究では、免疫組織化学(2段階検出法)および逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT-PCR)を用いて、LSCCおよび隣接する正常な粘膜組織におけるHMGA1およびHAND1タンパク質およびmRNAの発現を検出しました。免疫組織化学は組織構造内のタンパク質局在を可視化し、一方RT-PCRは転写レベルでの遺伝子発現を感度に検出し、タンパク質およびmRNAの発現パターンに関する補完的な洞察を提供します。より高い感度と正確な定量を提供する定量的PCR(qPCR)、タンパク質レベルの検証を可能にするが空間的な文脈を欠くウェスタンブロット、高度な計算解析を必要とする包括的なトランスクリプトミックプロファイリングを提供するRNAシーケンシング(RNA-seq)と比較して、免疫組織化学とRT-PCRの組み合わせは、バイオマーカー調査において費用対効果が高く臨床的に応用可能な戦略を示しています。本研究は、LSCCの発生、発症、進行、転移におけるこれら二つの要因の役割と相関関係を探ることを目的としました。さらに、HMGA1およびHAND1の発現を評価することで、喉頭がんの診断や予後評価のためのバイオマーカーが得られ、リスクの階層化が改善され、臨床的意思決定が助けられる可能性があります。
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本研究は石家荘人民病院の研究倫理委員会によって審査され承認されました(承認番号:YKLS 2026 No. 041;2026年3月27日)。本研究は、ヒト被験者を含む生物医学研究の倫理審査規則、生命科学およびヒト被験者を含む医療研究の倫理審査規則、ヘルシンキ宣言、およびヒトを含む健康関連研究に関する国際倫理ガイドラインに従って実施されました。ヒト組織サンプルは、機関の倫理要件に従い、アーカイブされた外科標本から採取され、患者データの匿名性と機密性が確保されました。匿名化されたアーカイブ標本の使用に関しては、参加者から書面によるインフォームドコンセントが得られるか、倫理委員会から同意放棄が認められました。
実験材料
標本の供給源
2011年2月から2012年8月までに河北省耳鼻咽喉頭頸部外科の外科切除標本から、合計42例のLSCC組織と25例の正常な喉頭粘膜組織が採取されました。そのうち、がんの縁から1.0cm>部位から採取された隣接する正常粘膜の25例が病理学的に炎症性または正常性粘膜として確認されました。42点のLSCC標本はすべて病態的に扁平上皮癌と確認されました。すべての組織は-80°Cで保存されました。 42名の患者は男性で、女性患者はいませんでした。LSCCの症例のうち、15人が十分に分化し、18人が中等分化、9が分化が低かった。18例はリンパ節転移を認め、24例は転移しませんでした。臨床病期はTNM分類・病期システム(UICC, 2002)に基づいており、ステージIおよびIIに20例、ステージIIIおよびIVに22例が記載されました。声門型が30例、声門型が11例、声門下型が1例ありました。患者の年齢層は40歳から75歳で、中央値年齢は60歳でした。患者はいずれも手術前に放射線治療や化学療法を受けておらず、臨床データは完全であった。
実験的方法と手順
HE染色手順
スライド準備とヘマトキシリン・エオシン染色
免疫組織化学用のガラススライドは、まず濃酸に24時間浸け、その後、残留酸を除去するために流れる水道水で少なくとも10分間徹底的に洗浄し、蒸留水に30分間2回浸けて優しく攪拌して完全にすすいがいさせました。95%エタノールに2時間浸した後、60°Cのオーブンで乾燥させ、APESのアセトン(1:49、v/v)混合物に1分間浸し、均一なコーティングを確実にするために優しく振ってから純粋なアセトンで洗い流します。最後に、染色後の適切な組織接着を確保するため、室温(20〜25°C)で自然乾燥されました。
パラフィン埋め込み組織切片は、キレンIおよびキシレンIIにそれぞれ10分間浸漬してパラフィンを除去し、その後、グレーディングエタノール(100%、95%、80%)でそれぞれ5〜10分間再水和し、最後に蒸留水で2分間洗浄しました。切片はヘマトキシリン・エオシン(HE)染色を受け、以下の通りで行われました:ヘマトキシリン染色4分間、流れる水道水で3分間連続流して余分な染色を除去、1%塩酸をエタノールに30秒分異化し、分化を終えるために水道水で3回洗浄し、10秒間のエオシン染色を行いました。通常の段階的脱水は、70%エタノール、80%エタノール、95%エタノール、無水エタノールI、無水エタノールIIをそれぞれ5分間順に使用することで実施されました。乾燥後、スライドはニュートラルバルサムで取り付けられました。
免疫組織化学的手技
厚さ4μmのパラフィン断片を切断し、APESコーティングされたスライドに平らに置き、67°Cのオーブンで一晩置き、その後キシレンIおよびIIによる脱パラフィン処理をそれぞれ10分間行いました。100%、90%、70%アルコールをそれぞれ5分間ずつ徐々に脱水させ、その後水道水と蒸留水で3分間洗浄しました。内因性過酸化物酵素活性を阻害するため、スライドは新たに調製した3%のメタノール-過酸化水素溶液でインキュベートされ、室温(20–25°C)で組織切片を完全に被覆し、その後蒸留水で0.01 M PBSで5分間3回洗浄しました。
抗原回収は、シトレートバッファー(pH 6.0)にスライドを浸し、圧力鍋で圧力鍋で95〜100°CでHMGA1の場合は8分、HAND1の場合は10分間加熱し、蓋をしっかり閉じて一定の圧力を維持しました。その後、区画は室温(20〜25°C)で冷却され、0.01 M PBSで3回、各3分間、穏やかに攪拌されました。HMGA1およびHAND1に対する一次抗体は、それぞれ1:150と1:100の抗体希釈剤で希釈され、ピペットで優しく混合した後、均等に塗布して各組織断片を完全に覆いました。スライドは加湿チャンバーで4°Cで一晩培養されました。一晩の培養後、スライドは加湿チャンバーから取り出し、10分間室温に平衡させました。スライドは0.01 M PBS(1回の洗浄で5分)を3回洗浄し、穏やかな攪拌のもとで結合していない抗体を除去しました。余分な液体を除去し、二次抗体(HRP標識ポリマー抗ウサギ/マウス抗体)を追加して組織切片表面を完全に覆いました。さらに37°Cで35分間の潜伏が行われました。
DAB基質溶液をドロップ方向に塗布して組織を覆い、顕微鏡で1〜3分間色の発達を観察し、茶色の染色が現れるまで観察し、最適な染色強度が得られたら蒸留水で即座に消し去りました。ヘマトキシリン再染色、塩酸アルコール分化、青色逆転のためのアンモニア溶液が実施されました。その後、定期的な段階的なアルコール脱水、キシレン透明化、顕微鏡下観察用の中性バルサムのマウントが行われました。一次抗体の代わりにブランクコントロールとしてPBSが使用されました。さらに、染色の質と一貫性を確保するために、既に確認されたHMGA1陽性の頭頸部扁平がん組織切片およびHAND1陽性胎盤組織切片を陽性対照として用いました。
結果決定
この実験で使用されたクロモゲンはDAB-H2O2システムです。ヘマトキシリン再染色後、主に細胞核内でHMGA1およびHAND1陽性染色が観察され、一部細胞質染色も見られます。評価のために、低倍率(×40)で陽性染色細胞が最も高密度の領域を特定しました。×100倍率で、最も正のセル密度が高い5つのフィールドが選ばれ、各フィールドで100セルがカウントされました。各スライドの結果として、5つのフィールドから正のセルの割合の平均が用いられます。評価基準は以下の通りで、染色細胞なし(-)、陽性細胞<25%(+)、陽性細胞25%–50%(++)、陽性細胞>50%(+++)で、免疫組織化学分析で一般的に用いられる半定量的なパーセンテージスコアリング法に基づいています。評価は2名の有資格病理医によって二重盲検方式で独立して実施されました。意見が異なる場合は、議論して結論に達するべきです。
RT-PCR法
プライマー
プライマーはターゲット遺伝子配列に基づくプライマー設計ソフトウェアを用いて設計され、プライマー特異性、融点適合性、期待される生成物サイズに注意を払いました。詳細なプライマー配列、生成物サイズ、アニーリング温度は 表1にまとめられています。プライマーは2 OD濃度で合成され、2本のチューブに分けられ、DEPC処理水で10 pmol/μLに希釈され、-20°Cで保存されました。 焼きなまし温度は次の式で計算されました:Tm= 2(A + T) + 4(G + C)
実験材料および機器のRNase処理:
プラスチック製品(例:ピペットチップ、EPチューブ):プラスチック製品は滅菌されたワイドマウス試薬ボトルに入れられ、DEPC処理済みの水が完全に浸かるまで加えられ、室温(20〜25°C)のフルームフードで一晩培養されました。その後、120分間加圧下で滅菌され、65°Cで乾燥させられました。
ガラス製品:ガラス製品は酸に一晩浸し、十分にすすいで乾燥させ、アルミホイルで包み、200°Cのオーブンで6時間焼き、清潔な場所で保管して将来使用しました。
金属製品(例:ハサミ、ピンセット):金属製品は洗浄され、200°Cのオーブンで6時間焼かれ、将来の使用のために清潔な場所に保管されました。
解の準備
0.1%(v/v)DEPC溶液:1000mLの蒸留水に1mL DEPCを加え、最終濃度0.1%(v/v)にし、よく振って4°Cで一晩培養し、オートクレーブで滅菌し、4°Cで保存しました。
75%(v/v)エタノール溶液:75 mLの絶対エタノールを25 mLのDEPC処理水と混合し、最終濃度75%(v/v)にし、4°Cで保存しました。
組織からの総RNA抽出
RNA抽出後、逆転写および下流解析の前にRNAの完全性が評価されました。80mgの組織を電子天秤で計量し、小さく切り分けて、事前処理済みのガラスホモジナイザーに入れました。4°Cで1mLの予冷却RNA抽出試薬を加え、試料は氷上で繰り返し粉砕して均質化され、組織断片が目に見えない均一な溶解液が得られ、気泡の発生を防いでいました。均質化された混合物は1.5 mLのRNaseフリーEPチューブに移され、氷上で5分間インキュベートされました。各チューブに400 μLのクロロホルムを加え、10〜15秒間激しくボルテックスさせて完全な相混合を確保し、その後5分間氷上で培養しました。チューブは4°C、12,000 x g で15分間遠心分離されました。遠心分離後、上部水相はRNaseフリーピペットで慎重に吸引され、間相層を乱さずに新しいチューブに注入されました。同量のイソプロパノールを加え、チューブを優しく8〜10回反転させて層が消えるまで混合し、-20°Cで少なくとも10分間培養しました。混合物は4°C、12,000 x g で10分間遠心分離されました。上清層は廃棄され、75%氷冷エタノール400μLを加えてRNAペレットを懸濁させました。混合物は再び4°C、12,000 x g で5分間遠心分離されました。上清液層は廃棄され、RNAペレットはわずかに乾燥させました。RNAペレットはRNaseフリーの水に溶解され、将来の使用のために-80°Cで保存されました。
RNA完全性検出
RNA完全性検出のために、5μLのRNAサンプルと5μLのブロモフェノールブルーローディングバッファーを混合し、2%アガロースゲル上で電気泳動を行いました。RNAの完全性は、明らかな28S、18S、5Sバンドが明らかなにじみなく見える場合に許容範囲とされました。
逆転写(RT)によるcDNA合成
6 μLのRNAを70°Cで10分間予熱し、その後25 mM MgCl2 (4.0 μL)、dNTP(2.0 μL)、AMV(0.7 μL)、10× AMVバッファー(2.0 μL)、オリゴ(dT)(1.0 μL)、RNasin(0.5 μL)、脱イオン水を氷上に順次加え、最終反応量20 μLにし、その後穏やかに混合し短時間遠心分離を行った。反応条件は25°Cで1分、42°Cで60分、98°Cで5分間、そして4°Cで無期限に保存されました。反応が4°Cに達すると、生成物はPCRマシンから取り出され、次のPCR反応のcDNAテンプレートとして使用され、後で使用するために-20°Cで保存されました。
PCR増幅
各PCR反応に対して、混合物にはcDNAテンプレート(1 μL)、HMGA1、HAND1、またはGAPDH向けの前方プライマー(1 μL)、ターゲット遺伝子またはGAPDHのリバースプライマー(1 μL)、PCRマスターミックス(10 μL)、DEPC処理水(7 μL)が含まれ、合計20 μLの量となりました。各ターゲット遺伝子(HMGA1、 HAND1)および内部対照遺伝子(GAPDH)は、それぞれの反応がそれぞれの遺伝子特異的な順順および逆プライマー対を含んでいます。
総反応容積は20μLでした。反応成分を優しく混合し、低速で5〜10秒間遠心分離した後、チューブは予熱されたPCRマシンに入れられ、 表2の反応条件に従って増幅されました。
PCR増幅生成物の確認と解析
ジェルの調製
アガロース2gを計量し、三角形のフラスコに入れました。50×TAE電気泳動バッファー2 mLと蒸留水100 mL(2%アガロースゲルを準備)を加え、電子レンジで加熱し、15〜20秒間隔で断続的に旋回させてアガロースを完全に溶解させました。約55°Cまで冷却した後、10μLのEB溶液を加え、十分に混合しました。その後、ゲルは室温(20〜25°C)で清潔なゲルトレイに注ぎ、蒸留水で洗浄し、コームを挿入してサンプルウェルを作りました。ジェルの厚さは0.4cmでした。トレイは室温(20〜25°C)の平らな表面に30分間置かれ、ゲルが完全に固まるまで放置されました。櫛は慎重に取り除かれました。
サンプルの読み込み
各DNAサンプルのうち4μLをゲルのウェルに加え、最も左側のウェルにDNAマーカーを加えました。
電気泳動
装填されたゲルトレイは、TAE電気泳動バッファーで満たされた電気泳動タンクに入れられ、バッファーレベルがゲル表面から約1 mm上に保たれることを確認しました。ウェルの一端はカソード側にあり(DNAが陽極に移動できるようにするため)、電気泳動システムは電源に接続され、約45分間120V、60mAで動作し、ローディングバッファーがゲルの中央線を超えて移動した後、電源は切断されました。
結果観察と画像化
電気泳動後、ゲルは慎重に除去され、UVトランスイルミネーターで結果を観察し、DNAマーカーと比較して増幅断片の分子量が期待される位置に現れるかどうかを確認しました。ゲルイメージングシステムは画像を撮影し、結果をコンピュータに保存するために使用されました。
制御設定
陰性対照としてcDNAの代わりに蒸留水が使用されました。
半定量的分析
アガロースゲル電気泳動の結果は、ゲルイメージングシステムで解析・記録されました。画像解析ソフトウェアを使ってバンドの明るさを解析しました。標的遺伝子増幅バンドの絶対積分OD値と対応する内部対照遺伝子増幅バンドを測定しました。結果は、目標バンドの絶対積分OD値と対応する内部制御バンドの絶対積分OD値の比率として表されました。
すなわち、相対発現=ターゲット遺伝子OD値/内部制御遺伝子OD値です。
統計解析
すべてのデータはExcelで整理され、統計ソフトウェアで分析されました。連続変数は平均±標準偏差(SD)として表され、独立標本t検定を用いて2群間で比較しました。免疫組織化学的陽性発現率を含む名目カテゴリ変数はχ2 検定を用いて解析されました。病態グレードや臨床段階を含む序数カテゴリ変数は、ランク総和検定(該当する場合は2群比較にはMann-Whitney U検定)を用いて解析しました。HMGA1とHAND1発現の相関は線形相関解析を用いて評価されました。すべてのテストは両側制で、 P < 0.05は統計的に有意とされ、 P. < 0.01は非常に有意とされました。
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免疫組織化学的検出結果
隣接する正常な喉頭粘膜およびLSCCの組織学的形態を示す代表的なヘマトキシリン・エオシン(HE)染色画像を示し、分化度は様々(良好、中等度、不良)を示します。具体的には、 図1A は隣接する正常な喉頭粘膜を示し、 図1B は十分に分化したLSCC、 図1C は中程度の分化したLSCC、 図1D は分化が不十分なLSCCを示しています。
HMGA1およびHAND1の発現は、喉頭扁平上皮癌および隣接する正常な喉頭粘膜組織におけるものです
HMGA1免疫組織化学染色では、核内に茶黄色...
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頭頸部で最も一般的な腫瘍の一つである喉頭がんは、近年発生率が増加しており、環境や生活習慣に関連する要因と関連していると考えられています。他の悪性腫瘍と同様に、再発と転移が主な死因となっています。分子生物学の進歩により、喉頭がんの発症に関連する多くの要因が特定されましたが、発症と転移のメカニズムはまだ完全には解明されていません。HMGA1は転写調節因子として、腫瘍形成と進行に関与するため、近年研究の焦点となっています。複数のがんタイプで高発現が報告されており、腫瘍関連のバイオマーカーとして機能する可能性があります。HAND1も転写調節因子であり、主に栄養圏細胞や心臓の発達に関与し、さまざまな悪性腫瘍でサイレンスされ、高いメチル化が示されています。しかし、喉頭がんにおける発現はまだ十分に解明されていません。本研究では、標準化された実験条件下(プロトコルに記載された抗原回収条件、抗体希釈比率、RNA取り扱い手順を含む)を用いて、HMGA1およびHAND1の喉頭がんにおける発現と臨床パラメータとの相関を体系的に評価しました。
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著者らは、本研究に寄与されたすべての個人および所属機関のご支援に感謝申し上げます。
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| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| 自動組織埋め込み機械 | サクラファインテック、東京、日本 | ティッシュテックTEC 5 | パラフィン埋め込み |
| ミクロトーム | ライカ・マイクロシステムズ、ヴェッツラー、ドイツ | RM2135 | 区画(4 & mu;m) |
| スライドドライヤー | シャオガン紅葉医療機器有限公司、中国 | CS-VI | スライド乾燥 |
| 加熱インキュベーター | 上海陽光実験機器有限公司、中国 | 303-4A | 温度制御された孵化 |
| 光学顕微鏡 | オリンパス株式会社、東京、日本 | BX41 | 組織学的観察 |
| 画像キャプチャシステム | QImaging、カナダ | QCapture Pro 7 | 顕微鏡イメージング |
| クリーンベンチ | 北京西城半導体機器工場、中国 | SW-CJ-1FD | 無菌作業スペース |
| 冷蔵遠心分離機 | 北京医療機器修理工場、中国 | LXJ-64-01 | RNA分離 |
| 卓上遠心分離機 | 上海培清科技有限公司、中国 | PQ-1600A | RNA/DNA処理 |
| 磁気攪拌器 | 中国江蘇省金壇医療機器工場 | HJ-3 | 溶液調製 |
| ミニミキサー | 上海鵬s インダストリアル株式会社、中国 | H-1 | サンプルミキシング |
| 電子天秤 | メットラー・トレド、スイス | PB3002-S | サンプルの計量 |
| PCRアンプ | エッペンドルフAG、ドイツ | マスターサイクラー5333 | PCR増幅 |
| 電気泳動電源 | 北京六一計器工場、中国 | DYY-6C | 電圧制御 |
| 電気泳動タンク | 北京六一計器工場、中国 | DYCZ-24DN | ゲル電気泳動 |
| 電子レンジ | 上海中大医療応用研究所(中国) | WD800SL23 | アガロース調製 |
| UVトランスイルミネーター | 北京六一計器工場、中国 | WD-9403B | DNA可視化 |
| ジェルイメージングシステム | 安来有限公司、中国 | アルファイメージャーHP | ゲル文書化 |
| 冷蔵庫(4 & deg;C) | ハイアルバイオメディカル、中国 | BC-165D | サンプル保存 |
| 超低温冷凍庫 | ハイアルバイオメディカル、中国 | DW-86L388 | ストレージ(-80 & deg;C) |
| アイスボックス | 上海富志科技有限公司、中国 | FZ-IB-20L | 試料輸送 |
| 低温保存袋 | 上海一力科技有限公司、中国 | YL-ULT-50 | サンプル保存 |
| 研究用ピペット | エッペンドルフAG、ドイツ | リサーチプラス | 液体取り扱い |
| RNA抽出試薬(TRIzol) | インビトロジェン(サーモフィッシャー・サイエンティフィック)、アメリカ | 15596026 | RNA抽出 |
| 逆転写キット | タカラバイオ株式会社、日本 | RR037A | cDNA合成 |
| PCRマスターミックス | タカラバイオ株式会社、日本 | RR820A | PCR増幅 |
| dNTPミックス | タカラバイオ株式会社、日本 | 4030(典型的) | PCR成分 |
| RNase阻害剤(RNasin) | プロメガ、アメリカ | N2111 | RNA保護 |
| オリゴ(dT)プライマー | タカラバイオ株式会社、日本 | 3806(典型的) | cDNA合成プライマー |
| アガロース | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | A9539 | ジェルの調製 |
| TAEバッファ(50回) | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | TAE50X-1L(典型的) | 電気泳動バッファー |
| DNAマーカー(ラダー) | タカラバイオ株式会社、日本 | DL2000(3421A) | サイズ参照 |
| エチジウム臭化物(EtBr) | バイオ・ラッド、アメリカ | 1610433 | DNA可視化 |
| PBSバッファ | Gibco(サーモフィッシャー・サイエンティフィック)、アメリカ | 10010023 | 洗浄バッファー |
| DEPC処理水 | インビトロジェン、アメリカ合衆国 | AM9916 | RNA保護 |
| クロロホルム | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | C2432 | RNA抽出 |
| イソプロパノール | メルク、ドイツ | 109634 | RNA沈殿 |
| エタノール(絶対量) | メルク、ドイツ | 100983 | 脱水 |
| メタノール | メルク、ドイツ | 106009 | ペルオキシダーゼブロッキング |
| 過酸化水素(H2O2) | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | H1009 | 内因性ペルオキシダーゼ遮断 |
| キシレン | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | 534056 | 脱パラフィン化 |
| クエン酸抗原回収バッファー | アブカム、イギリス | AB93678 | 抗原回収 |
| 抗体希釈剤 | ダコ、デンマーク | S3022 | 抗体希釈 |
| HMGA1一次抗体 | アブカム、イギリス | ab129153 | 希釈 1:150 |
| HAND1一次抗体 | アブカム、イギリス | AB200040 | 希釈 1:100 |
| 二次抗体(HRP結合抗体) | ダコ、デンマーク | K5007 | 検知システム |
| DAB基板キット | ダコ、デンマーク | K3468 | 色原検出 |
| ヘマトキシリン染色 | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | H9627 | 核染色 |
| 魚新染み | シグマ・オルドリッチ、アメリカ | E4009 | 細胞質染色 |
| ニュートラルバルサムマウンティングメディウム | 中国 中硝薬化学試薬株式会社 | 10004160 | スライドマウント |
| HMGA1プライマー | カスタム合成(例:IDT/Sangon) | 該当なし | 遺伝子増幅 |
| HAND1プライマー | カスタム合成(例:IDT/Sangon) | 該当なし | 遺伝子増幅 |
| GAPDHプライマー(内部制御) | カスタム合成 | 該当なし | ハウスキーピング遺伝子 |
| APES(アミノプロピルトリチウムキシシラン) | シグマ・オルドリッチ | 該当なし | スライドコーティング |
| RNaseフリーマイクロ遠心分離管 | エッペンドルフ | 該当なし | RNA処理 |
| RNaseフリーのピペットチップ | エッペンドルフ | 該当なし | 液体取り扱い |
| アガロースジェルキャスティングトレイとコーム | ジェネリック | 該当なし | ジェルの調製 |
| プライマー設計ソフトウェア | インテグレーテッドDNAテクノロジーズ、アメリカ | PrimerQuestツール | プライマー設計 |
| 画像解析ソフトウェア | メディア・サイバネティクス、アメリカ | イメージプロプラス 6.0 | バンドの定量化 |
| 統計分析ソフトウェア | IBM社、アメリカ | SPSSバージョン13.0 | 統計解析 |