最小限の入力による乳児免疫マッピング:統合的単細胞および多組学プロファイリング

サマリー

このプロトコルは、新生児および小児患者の血液サンプルの採取と保存、そしてscRNA-seq、プロテオミクス、スペクトルフローサイトメトリーを用いてこれらのサンプルから免疫細胞集団を特徴付ける方法を記述します。

要約

生まれた瞬間、新生児の免疫システムは微生物や環境刺激に満ちた全く異なる環境に突然直面します。増え続ける証拠は、幼少期の免疫が単に未成熟であるだけでなく、この発達段階の特有の要求に特化して適応していることを示唆しています。この期間中、免疫系は非常にダイナミックで、変化する外部環境に対応するために急速に変化します。この複雑で進化する免疫環境を理解するには、新生児を直接研究する必要があります。しかし、このような研究における大きな制約は、新生児の総血量が少なく(~100 mL/kg)、特に極低出生体重(ELBW)や極めて早産児において、安全に採集できる血量を制限することです。最近の研究では、新生児の血液の微量を用いて高次元免疫プロファイリングが可能であることを示し、この制約に対応しています。私たちは、幼少期にわたる縦断的サンプリングのための最適化されたプロトコルを導入し、フローサイトメトリー、プロテオミクス、単細胞RNAシーケンシングなどの高度な技術を用いて、最小限の入力から得られる情報を最大化します。これらの手法を組み合わせることで、新生児の循環免疫細胞のトランスクリプトオムおよびプロテオムの特徴を包括的に把握でき、早期免疫の独自の経路に関する新たな知見がもたらされます。

概要

このプロトコルは、採取後12時間以内に100〜250μLの血液サンプルを処理し、クリオ保存または即時使用に最適化されています。出生時、新生児免疫系は、保護された子宮^{内環境では}存在しなかった微生物や環境刺激で強化された、まったく異なる環境に放り込まれます^1,2。この変化には免疫システムが多様な新しい抗原に適応し反応する必要があり、これは生存に不可欠であると同時に^{重大な課題}ももたらします ^1,2。増え続ける証拠は、幼少期の免疫が単なる未成熟や成人免疫システムの縮小版ではないことを示唆しています。むしろ、この重要な^発達期の特定のニーズに合わせた独自のもの^{となっています。}この新生児期のウィンドウの間に、免疫系の細胞構成要素(T細胞、B細胞、骨髄細胞など)は成熟し、初期生命に特有の特性と機能を発達させます5,6,7,8。その重要性にもかかわらず、新生児免疫は倫理的・実践的な制約のため、直接的に研究することは依然として困難です。大きな制限は新生児の血液量が小さく、平均約100 mL/kgである^9,10です。この課題は、妊娠30週未満で生まれた極めて早産児や、わずか40mLの血液で体重が400g程度のELBW乳児から血液を採取する際にさらに顕著になります。これにより安全に採取できる血液量が制限され、最小限のサンプルからデータ量を最大化するアプローチの必要性が浮き彫りになります。この課題に対処するため、我々の研究はELBW乳児から得られる微量血液量(100〜250μL)を用いた高次元免疫プロファイリングの最適化プロトコルを示しました。

近年の血液採取と処理の進歩により、従来のサンプル採取が困難な集団における免疫応答の研究が可能になりました。TassoやTouch Activated Phlebotomyシステムなどのマイクロニードルデバイスは、成人の自宅での血液採取を便利にするために最初に開発されました。その後、乳児用に適応され、主たる介護者や臨床チームが最小限の不快感でサンプルを採取できるようになりました。さらに、繰り返しの臨床訪問のストレスなしに自宅で使用^{できるため、コンプライアンス}やアクセスのしやすさを向上させます。装置にはエチレンジアミネテトラ酢酸(EDTA)マイクロチューブを使用し、適切なバイオハザードプロトコルを遵守して一晩で検査室に送るべきです。翌朝、サンプルが届くと、赤血球(RBC)溶解法で循環中の^{免疫細胞を}捕捉するために処理されます。注目すべきは、EDTAチューブは生細胞の分離を可能にしますが、時間の配慮も重要です。刺激を用いた機能的アッセイでは、サンプルの処理は採集から4時間以内、理想的には2時間以内に行う必要があります。以下に示す非機能的な表現型アッセイでは、細胞の生存率が時間とともに低下するため、12時間以内にサンプルを処理し、一晩送りながら回復を確保する^{必要があります。}Ficollを用いた従来の密度-勾配分離と比べて、溶解はより速く、労力が少なく、より高い回収率をもたらします¹³。しかし、末梢血の単核細胞を溶解法で分離すると、汚染された顆粒球が残り、純度が低下することがありますが、これらの細胞型に関心のある研究には有利です¹⁴。これらのトレードオフは、新生児のような希少または感度の高い臨床サンプルを研究する際、方法論的適応が実現可能性と正確さのバランスを取ることを示しています。分離細胞の下流処理も方法論的改良によって恩恵を受けています。胎児用牛血清(FBS)とジメチルスルホキシド(DMSO)による凍結保存は、特に胎児および新生児の血液において、細胞の生存性と回復が重要な免疫細胞にとって依然として堅牢なアプローチです。採血プロセスの最適化に加え、少量のサンプルから最大限の情報抽出を可能にする下流技術も採用しています。私たちは、早期の生活にわたりサンプリングを促進する最適化プロトコルのセットを導入し、免疫動態の詳細な検証を可能にします。私たちのアプローチは、スペクトルフローサイトメトリー、プロテオミクス、単一細胞RNAシーケンシングなどの先進技術を活用し、これらを総合的に活用することで、早期の循環免疫細胞のプロテオムおよび転写署名を比類なき視点で把握できます。さらに、スペクトルフローサイトメトリーは最小限の細胞入力で機能的な洞察を得る機会を提供します。

これまでに、血液由来免疫細胞の解析には全血球計数(CBC)などの技術が用いられてきました¹⁵、またDNAメチル化を用いて新生児全血中の免疫細胞比率を解析する技術^{もあります。}これらの技術は既知の免疫細胞の割合の把握に役立っていますが、マルチオミクスシステムがなければ細胞の詳細な洞察を得るには依然として限界があります。CBCは主要な血液細胞型の広範な指標に限られており、臨床現場での全体的な免疫状態の確立には有用ですが、サブタイプや機能状態の解消には限界があります。最近では、生後¹⁸週の乳児に血漿由来のトランスクリプトムおよび代謝変化を用いる研究が始まりました。質量分析に基づくプロテオミクスは、新生^{児サンプルの}免疫プロファイルの研究に応用されています。この手法は、幅広いタンパク質を偏りなく測定し、潜在的なバイオマーカーを特定するのに強力です。しかし、主な制約としては、比較的大きなタンパク質入力が必要であることや、可溶性・不溶性の両方を捉えているにもかかわらず、細胞の同一性に関する直接的な情報が不足していることが挙げられます。ターゲット多重プロテオミクスアッセイ(TMPA)は、低入力サンプルに対する代替手段を提供します。これらの手法は標的抗体検出を用い、限られた物質のサンプルに対して高感度のプロファイリングを提供します。特に、これらのうちの一つは、幼少期の免疫発達経路を縦方向に追跡するために用い^{られています。}

フローサイトメトリーは、蛍光標識細胞を集束レーザービームに通し、その結果得られる光散乱および蛍光信号を測定することで、単一細胞レベルで免疫細胞タンパク質の定量解析を可能にします。この技術では、蛍光標識抗体が特定の表面または細胞内タンパク質に結合します。これにより、蛍光プロファイルに基づく複数の免疫細胞サブタイプおよびそれらの特徴を同時に検出・定量することが可能になります。スペクトルフローサイトメトリーは、各フルオロクロームの全発光スペクトルを捉えることでこの手法を拡張し、単一のアッセイ21,22,23で35以上のマーカーを同時に検出し、スペクトルアンミクシングを行えます。これにより、従来のフローサイトメトリーパネルよりもはるかに多くのマーカーを解析できます。従来のフローサイトメトリーパネルは8~12個のマーカーに制限されています。これらの細胞計測技術を補完するとして、単一細胞RNAシーケンシング(scRNA-seq)は、最小限の^{入力物質から}高解像度かつ偏りのないトランスクリプトムプロファイリングを可能にすることで免疫学研究を変革しました。コストが高く細胞生存率に依存しているにもかかわらず、scRNA-seqはバルクシーケンシングと比較して初期免疫の異質性について比類なき洞察を提供します。これらの進展は、収集、保存、分析の革新が胎児および新生児免疫の研究に伴う独自の課題を克服するために適応されていることを示しています。

このプロトコルは、連続的な赤血球溶解によって分離された末梢免疫細胞の凍結保存解析に最適化されています。研究者は、特に縦断解析が重要な小量血液(100〜500 μL)からの高分解能免疫プロファイリングが必要な研究を行う場合、このプロトコルを検討すべきです。この方法は、期末および早産児の両方に広く適用可能であり、幅広い下流解析と互換性があるため、新生児および小児免疫学の多様な研究課題に適しています。

プロトコル

イェール大学の倫理審査委員会(IRB)に従い、親の十分な同意と関連する国家倫理規則の完全な遵守が保証されました。承認されたIRBプロトコルによれば、研究チームは乳児出生後最初の1週間に親に連絡を取り、登録前に同意を得ました。倫理承認が文書化される前に、人間由来の材料を用いた研究手続きは開始されませんでした。

1. サンプルの採取、処理、保管(図1)

1. 入院血液採取
   1. 乳児検体は受け取った後、4°Cで保管し、採取後12時間以内に処理してください。
   2. ~250μLの全血を採取し、抗凝固剤EDTA血液採取管に保存します。血液採取チューブを逆さに8回して抗凝固剤を混ぜます。
   3. 第1.3節(全血サンプル処理)に記載されている赤血溶解法で全血を処理します。
   4. 乾いた血痕を集めるには、滅菌ランセットで洗浄した足の指やかかとに穴を開けます。
      1. または、EDTAチューブから25〜30μLの血液をフィルターペーパーにピペットで移します。フィルターペーパーを血滴に軽く触れます。
   5. 少なくとも一つの円を自由に流れる血で満たし、各円に一滴ずつ注ぎます。血の部分を乾かしてください。フィルターペーパーは血の斑点がしっかり乾くまで開けたままにしてください。
   6. 採取時刻、処理日、時点、標本同定を適切にラベル付けしてください。
   7. 透明なプラスチック製のジッパー収納袋に入れてください。血液スポットカードは、プロテオーム解析の準備が整うまで安定性を延長するために−20°Cまたは−80°Cで保管します。
2. 外来採血
   注:イェール大学の機関審査委員会の承認を受け、外来参加者の保護者は自宅でマイクロニードル自己採取装置を使用して血液サンプルを採取する選択肢が与えられました。この装置は、ランセットを皮膚に貼り付けて毛細血管の血液を採取します。この方法を選択した親は、実演キットを用いたクリニック研修を受け、その後詳細な書面による指示書と自宅使用キットが提供されました。
   1. 使用前には必ず手を洗い、手袋を着用してください。必要なものはすべて集めてください。もし採血をする親が一人だけなら鏡も含めて。
   2. ツールキットから装置を取り出し、対応するチューブのキャップをねじって外します。
   3. チューブをデバイスに押し込み、フィルラインが外側を向くまでぴったりと押し込みます。
   4. 赤ちゃんのおむつを外し、赤ちゃんを起こすように支えます。
   5. ヒートパックの指示に従って作動してください。
      注意:パックがない場合は、手などの他の温め方を使ってください。
   6. ヒートパックをその部位(お尻)に2〜4分間当てて温め、血流を増やします。
   7. アルコールパッドでその部分を拭き、乾かしてください。
   8. 赤いボタンから透明カバーを外してください。装置からタブを外し、赤ちゃんのお尻の最もふっくらした部分にしっかりと貼り付け、赤ちゃんを起立させます。
      注意:適切な採血のためにチューブを完全に垂直に保つように、必要に応じて姿勢を調整してください。
   9. ボタンを一度まで押し込んで離します。タイマーを5分にセットしてください。必要に応じて鏡を使ってチューブの水が満たされる様子を見てください。
   10. 最初の1〜2分は血が出ないことがあります。合計5分以内に機器を取り外し、5分以内に血液が上位の指標線まで満たされた場合はそれより早く取り除いてください。
   11. チューブを少しひねって機器から外し、下に引っ張ります。キャップを素早くチューブに完全に閉じ込めます。チューブを少なくとも10回反転させ、逆さまのたびに血液がキャップに触れるようにして凝固を防ぎます。
   12. 採取後はサンプルを一晩送り出してください。
3. 全血液サンプル処理
   1. 生物学的安全キャビネットで血液サンプルを処理します。
   2. 250μLの血液を慎重に50mLの円錐形チューブに移し、そのチューブには10mLの1×赤血球溶解バッファーが入っています。血液採取チューブを10mLの赤血球溶解バッファーで空になるまですすぎます。細胞を室温(RT)で15分間溶解させます。
   3. 溶解が完了したら、RTで約30mLのPBSを加え、430× g で4°Cで5分間洗い、回転させます。 ペレットを乱さずに真空で上清液を吸引します。
   4. ステップ1.3.2で示された通り、細胞ペレットに赤血球が見えない状態になるまで、サンプルを移送・洗浄を続けます。430 × g で遠心分離機で5分間加熱し、その後ペレットを乱さずに上清液を慎重に除去します。
   5. 採集された血液250μLごとに、得られた細胞ペレットを2mLの冷凍培地(FBSにDMSO10%)で再懸濁し、保存のために2つのクライオバイアルに分割します。
   6. トリパンブルー排除を用いた血液サイトメーターで、充填培地に再懸濁した細胞を数えて細胞の生存率を確認します。
   7. ステップ1.3.5から各クライオビアルに1mLを移します。採取時刻、処理日、時刻、標本識別を適切にラベル付けしてください。
   8. クライオビアルは-80°Cの冷凍容器でイソプロパノールと一緒に中間保存します。24時間後、クライオビアルを液体窒素に移し、分析の準備が整うまで行います。

2. 乾燥血斑からのTMPA(DBS)(図2)

1. 処理当日、フィルターペーパーをRTに持っていきましょう。3mmの金属パンチを使って、血液が通るフィルターペーパーの中央に2〜3円を開けて、できるだけ中央に位置を開けます。
2. ピンセットでそれぞれ3mmのパンチを持ち、96ウェルプレートまたは低結合PCRチューブのウェルに20μLの洗脱バッファー(PBS1、プロテアーゼ阻害剤1、0.05%トゥイーン20)を加えます。パンチ部分が洗脱バッファーで覆われていることを確認してください。
3. チューブを閉じるか、プレートをプラスチックのスカートで覆い、デジタルボルテックスに600回転のRTで60分間置いてください。
4. インキュベーション終了時に、エリュートを新しい低結合チューブまたは96ウェルプレートに慎重に移します。フィルターパンチ付きのチューブやプレートは捨ててください。
5. BCAアッセイを用いてタンパク質含有量を定量します。
   1. 各サンプルまたはBSA標準を2μL取り、水中で1:10および1:100の連続希釈を行います。サンプルと標準物質を200μLの希釈サンプルに加え、1倍の作業液を200μLに加えて、サンプルと標準物質を二重に準備します。サンプルを37°Cで30分間培養します。
   2. プレートリーダーで562nmの信号を読み取りました。BSA標準の傾きと洗脱バッファーバックグラウンドに基づいて最終的なタンパク質濃度を計算します。
6. 30μLのアリコウトを、0.5〜1 mg/mLの低結合1.5 mLスクリューキャップマイクロチューブで作ります。サンプルを-80°Cで凍結し、後でTMPAサービスで処理します。

3. 赤血球溶解血液のスペクトルフローサイトメトリー(図3)

1. 実験当日、赤血球を溶かした細胞のバイアルを37°Cの水浴で素早く解凍し、氷の小さな一滴が残るまでします。
2. 細胞懸存液を15 mLの円錐形チューブに加え、10 mLの予温済み(37°C)完全RPMI(RPMI 1640 500 mL、FBS 50 mL、ペニシリン・ストレプトマイシン5.6 mL、グルタミンサプリメント5.6 mLを用いて調製)を含みます。室温で400× g で5分間遠心分離機にします。上澄液を慎重に取り除き捨てます。
3. ペレットを3mLの完全なRPMI液に優しく再懸浮させ、適切な方法で細胞数を測定します。
4. 再懸濁したセルを室温で400× g で5分間回します。吸引して上清液を捨てます。
5. 細胞濃度を1×10⁶ cells/mLに調整し、完全なRPMIで調整します。1ウェルあたり100μL(0.1 × 10⁶セル)を96ウェルのV型底板に供給します。遠心分離機で764×g、4° Cで2分間、上清液を除去します。
6. 未染色対照群を除くすべてのサンプルに、PBSに1:2,000希釈で100μLのライブ/デッド染料ストックを加えます。4°Cで15分間培養します。
7. 100μLのPBSで洗浄し、遠心分離機で764× g で4°Cで2分間洗浄します。 上澄液は慎重に捨てます。
   注意:抗体の非特異的結合を防ぐためには、Fcブロックと単球ブロックの使用が不可欠です。
8. FACSバッファーで希釈(1:200希釈)した表面カクテルを100μLに加えます(PBS500mL、牛血清アルブミン2.5g、2mMEDTA、pH8.5)を、染色されていない対照群を除くすべてのサンプルに加えます。4°Cで30分間培養します。
9. 100μLのFACSバッファーと遠心分離機で764× g で4°Cで2分間洗浄します。 上澄液は慎重に捨てます。
10. 各サンプルに4%パラホルムアルデヒドを100μL加えて細胞を固定します。暗闇の中でRTで15分間孵化させます。
11. 100μLのFACSバッファーで洗浄し、4°Cで764 × g で2分間遠心分離し、200 μLのFACSバッファーで再懸浮します。
12. ウルトラコンプビーズを単色コントロールとして準備します。サンプルと同じプロトコルで単色コントロールビーズを染色し、サンプルが固定されている場合は固定も含めて塗ります。
13. サンプルと同じ手順で蛍光マイナス1(FMO)コントロールを準備します。
    注意:単色コントロールとFMOはサンプルと同じように扱うことが重要です。例えば、染色後にサンプルが固定されている場合、FMOや単色コントロールも修正されるべきです。
14. サンプル、単色コントロール、無染色コントロール、FMOコントロールを従来型/スペクトルフローサイトメーターで実行します。ソフトウェアを使ってデータを分析してください。
15. 適切なアイソタイプとFMOコントロールに基づいてゲートを設定しましょう。まず、ゲートセルを設置して白血球集団を選択するために、前方散乱(FSC)対側散乱(SSC)プロットを用いて、破片を除外し、サイズや粒度に基づいて細胞を選びます。
16. 白血球選択後、ゲートセルは前方散乱面積(FSC-A)と前方散乱高(FSC-H)のプロットを用いて二重体を除外します。
    注:これにより単一セル(シングレット)が選択され、対角線上に落ちたセルはシングレットとみなされ、ダブルレットや塊は除外されます。
17. 生存可能性を示すゲート細胞は、死細胞を除外するために生存性の染料を使用し、その後の解析で生細胞のみを含むようにします。
18. これらの初期ゲートステップの後、特定の系統マーカーを生体単細胞にゲートし、異なる免疫細胞集団をサブカテゴリ化します。生きた単一細胞をCD33⁺ 骨髄細胞とCD33^リン パ球に分け、CD33発現に基づいています。
19. CD33⁺集団内でCD14⁺単核球を分化し、CD11c+樹状状細胞(DCs)をCD11cを発現するがCD14を発現しない細胞として特定します。
20. CD33^- リンパ球集団内で、CD3⁺ T細胞およびサブゲートを用いてCD4⁺ およびCD8⁺ T細胞のサブセットを識別します。
21. さらに、CD56⁺ ナチュラルキラー(NK)細胞はCD56発現で、CD19+B細胞はCD19発現によってゲート化します。

4. 紅血球溶解血液のscRNA-seq(図4)

1. 37°Cの水浴で凍結保存された赤血球溶解細胞1バイアルを解凍します。サンプルを15mLの円錐形チューブ内のT細胞培地10mLに加えます。遠心分離機で430 × g 、4°Cで5分間。 上清液は捨てる。
2. さらに1xPBSを10mL加えます。遠心分離機で430 × g 、4°Cで5分間。 上清液は捨てる。
3. トリパンブルーで細胞数を数え、生存可能性を評価してください。生存率が70%未満の場合は、Dead Cell Removal Kitを使った死細胞除去に進みましょう。
   1. 死んだ細胞の除去
      1. 20倍の結合バッファーストックを無菌の二重蒸留水で希釈し、1倍の作動溶液を得ます。
      2. 細胞ペレットを10×⁷細胞あたり100μLの死細胞除去マイクロビーズに懸浮させます。よく混ぜて室温(RT)で15分間孵育します。
      3. 磁気分離カラムを適切な磁気スタンドに挿入します。使用前に500μLの1倍結合バッファーでカラムをすすぎて平衡状態にします。
      4. 細胞体積を500μLに1倍の結合バッファーで確保します。細胞懸濁液をカラムに塗布し、新しい1.7 mLのマイクロ遠心分離機チューブでフロースルーを収集します。
      5. 500μLの結合バッファーで2回洗います。同じマイクロ遠心分離機管内で流れを集めます。
      6. 300× g でエリュートを遠心分離機で10分間加熱します。上清液は捨てる。
   2. 細胞数を数え、トリパンブルーでその生存可能性を評価してください。
   3. 20,000個の生存細胞を40μLのPBSに0.04%BSAを含み、新しい1.7mLマイクロ遠心分離機チューブで再懸浮させます。
   4. 細胞はすぐにゲノムコア施設に送り、ライブラリの生成と配列決定を行います。シーケンス結果をセルレンジャーの出力形式で収集してください。

結果

私たちは、10人の極度早産児から3つの時点でDBSカードを収集しました:1週(n = 12)、1か月(n = 7)、2ヶ月(n = 3)で、TMPAプロテオミクス解析⁶ (図2A)。これらのサンプルは、満期乳児臍帯血(TCB;n = 4)および健康な成人血液(AB; n = 5)と併用して分析されました。92の免疫関連タンパク質の正規化タンパク質発現(NPX)はTMPAプラットフォームを用いて定量化されました(図2B)。統計解析により、生後2か月時の末梢血におけるリンパ球活性化遺伝子3(LAG3)およびシグナル閾値調節膜貫通アダプター1(SIT1)の発現が2か月時までにTCBと比較して有意に高いことが示されました(図2C)。

私たちは、患者の赤血球溶解白血球サンプルから免疫細胞集団をプロファ...

ディスカッション

最小限の新生児および乳児血液から高品質な免疫学データを得るには、複数のステップにわたる方法論的適応が必要です。本プロトコルでは、以下の4つの補完的な戦略を述べています:(i) 生存可能な細胞を保存するための血液採取と凍結保存の最適化、(ii) 多パラメータ免疫表現型判定のためのスペクトルフローサイトメトリーの応用、(iii) 高解像度で免疫異質性を解消するためのscRNA-seq、および(iv) TMPA。これらの手法を組み合わせることで、データ収量を最大化しつつ、限られたサンプル量や脆弱な細胞集団という技術的課題にも対応できます。

血液の採取と保存は、その後の成功を決定づける重要な要素です。FBS中に10%DMSOを含む凍結培地は、赤血球溶解後にほとんどの免疫細胞で高い回復をもたらすことを発見し、DMSOの保護効果に関する既存の発見と一致しています²⁸。凍結中の適切な取り扱いが不可欠であり、DMSOはRTで毒性があり、遅延は細胞死のリスクを高めるため、細胞を迅速に制...

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
0.5 M EDTA、pH 8.0	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	15575-038
1x赤血球溶解バッファ	インビトロジェン	3177165
BCAタンパク質アッセイキットおよびnbsp;	アブカム	ab287853
BD マイクロテイナー MAP マイクロチューブ	フィッシャー・サイエンティフィック	22-253-270
ベルアート クライオセーフ -1°C フリーズコントローラー	ミリポーア・シグマ	41122800
牛血清アルブミン(BSA)	シグマ・オルドリッチ	A9647-100G
ブリリアント・ウルトラ・バイオレット496 アンチヒューマンCD3	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	364-0038-42
ブリリアント・ウルトラバイオレット661 反ヒトCD11c	BD バイオサイエンス	612968
ブリリアント・ヴィル750 反ヒューマン CD14	バイオレジェンド	367135
ブリリアント・ヴァイオレット570 反ヒューマン CD8a	バイオレジェンド	301038
ブリリアント・ヴァイオレット711 反ヒューマン CD56	バイオレジェンド	318336
cOmplete、Mini、EDTAフリープロテアーゼ阻害カクテル	ミリポーア・シグマ	11836170001
死細胞除去キット	ミルテニ・バイオテック	130-090-101
ジメチル硫酸(DMSO)およびnbsp;	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	BP231-100
ダルベッコリン酸塩緩衝食塩水(DPBS)、カルシウム、マグネシウムなし、nbsp;	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	14190144
胎児用牛血清(FBS)	Gibco	A5256801
フィッシャーブランド・デジタル・ボルテックスミキサー	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	02215418
固定バッファ	バイオレジェンド	420801
グルタMAXサプリメント	Gibco	35050061
MACS マルチスタンド	ミルテニ・バイオテック	130-042-303
MSカラム	ミルテニ・バイオテック	130-042-201
名称	会社	カタログ番号
OctoMACS セパレーター	ミルテニ・バイオテック	130-042-109
パシフィックブルーアンチヒューマン CD4	バイオレジェンド	344619
ペニシリン・ストレプトマイシン(10,000 U/mL)	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	15140-122
RB780 反ヒト CD33	BD バイオサイエンス	755606
リアッジ3mmメタルパンチャー	Rierdge	SDD231031PC-01
RPMI 1640 ミディアム	Gibco	11875-093
スパークUV 387 反ヒト CD19	バイオレジェンド	302289
タッソ・コレクション・キット	タッソ	該当なし
サーモサイエンティフィックスクリューキャップマイクロチューブ	サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック	14-755-287
ワットマン309プロテインセーバー	Cytiva	41111700
ゾンビNIR修正可能な実用性キット	バイオレジェンド	423105
ソフトウェアとパッケージ
Adobe Illustrator	2024
bbknn	1.5.1
フロージョ	10.8.1
GraphPad プリズム	9.4.0
名称	バージョン
スキャンピー	1.9.1
スラブレット	0.2.3
<強力>商業的アッセイ
クロム単一セル5'キット	10Xゲノミクス	PN-1000263
Olink 標的96炎症パネルを公開または標的	オリンク	https://olink.com/products/olink-target-96