前立腺炎治療におけるエルミャオパウダーのメカニズム:ネットワーク薬理学と実験的検証に基づく研究

サマリー

ネットワーク薬理学的アプローチを用いる本研究では、エルミャオパウダーが炎症因子および関連するシグナル伝達経路を抑制することで前立腺炎に対する治療効果を発揮することが明らかになりました。その後の in vitro 実験では、LPS誘導モデルの前立腺上皮細胞において、その水性抽出物が主要な炎症性サイトカインの発現を有意に抑制することがさらに示されました。

要約

本プロトコルは、前立腺炎治療におけるエルミオパウダー(EMP)の作用機序を調査するため、ネットワーク薬理学と実験的検証を組み合わせたアプローチを提示します。ワークフローは段階的に設計されています:(i) アクティブ化合物およびターゲットのデータベース駆動スクリーニング、(ii) 相互作用ネットワークの構築と解析、(iii) in vitro 実験検証。まず、EMPの有効成分およびそれに対応する標的をTCMSPデータベースから取得し、前立腺炎関連標的はGeneCardsデータベースから取得しました。EMPターゲットと疾患ターゲットの交差点を用いて主要な治療ターゲットを特定しました。次に、Cytoscapeを用いて「薬剤・有効成分・標的・疾患」ネットワークを構築しました。主要標的に対してタンパク質–タンパク質相互作用(PPI)解析および京都遺伝子・ゲノム百科事典(KEGG)経路濃縮が行われ、IL6やTNFなどの炎症因子がコアターゲットとして機能し、PI3K/AKTやMAPKなどの経路が有意に濃縮されていることが明らかになりました。最後に、LPS誘導炎症モデルを用いた前立腺上皮細胞のin vitro 検証が行われました。EMP治療はLPS治療群と比較して炎症促進因子IL-6およびTNF-αの放出を有意に減少させ(p < 0.05)、EMPの抗炎症効果を確認しました。この統合的アプローチは、他の多成分治療システムの調査に適応可能な再現可能な枠組みを提供します。結論として、本研究はEMPが多成分・多標的・多経路機構を通じて抗前立腺炎効果を発揮し、炎症反応の抑制と密接に関連していることを事前に明らかにし、臨床応用の科学的基盤を提供します。

概要

前立腺炎、特に慢性非細菌性前立腺炎は、複雑な病因と効果的な治療法の欠如を特徴とする一般的な泌尿器疾患であり、^{患者の生活の}質に大きな負担をかけています^1,2,3。現在の前立腺炎の臨床管理では、抗生物質、α受容体遮断薬、非ステロイド性抗炎症薬を含む統合的アプローチが用い^{られています。}主な課題は、病因特異的治療法の欠如と、心理的要因と身体的症状の複雑な相互作用であり、これらが総じて不満足な治療結果や頻繁な再発に寄与していること^です。近年では、鍼灸や漢方療法などの統合医療アプローチが前立腺炎の管理に広く応用され、有望な効果が示されています。これらの治療法の安全性と有効性は、高品質な研究証拠8,9,10,11,12によって裏付けられています。

この文脈で、抗炎症作用と解毒効果で知られる二苗粉(EMP)などの伝統中国医学(TCM)製剤は、有望な代替^{治療法を提供します。}しかし、EMPが前立腺炎に対して有効である正確な薬理学的メカニズムは、その多成分性のため、依然として完全には解明されていません。ネットワーク薬理学の登場は、TCM処方に特徴的な複雑な「多成分・多標的・多経路」作用機序を解読するための強力なツールを提供します^16,17。私たちの戦略は、EMPの能動成分とその潜在的なターゲットを特定し、その後ネットワーク分析を行い、主要なターゲットや経路を特定することでした。その後、抗炎症効果と核心メカニズムを生物学的に検証する実験が行われ、EMPの応用の科学的基盤を確立することを目指しました。本研究は、多成分療法のメカニズム的解釈を強化するネットワーク薬理学と実験的検証フレームワークを導入します

プロトコル

この研究は人間の参加者や臨床サンプルを含まなかったため、倫理的承認は必要ありませんでした。細胞株を対象としたすべての手技は、機関のバイオセーフティガイドラインおよび規制に従って実施されました。本研究で使用された前立腺上皮細胞株は、認定された商業供給者から入手しました。

注:本研究で使用されるすべての試薬、計測装置、ソフトウェアは 材料表に記載されています。この研究のフローチャートは 図1に示されています。

1. 有効成分のスクリーニング

1. TCMSPデータベースにアクセスしてください。
2. 検索ボックスで「ハーブ名」を選択し、「黄波」と入力して「検索」をクリックしてください。
3. 「OB」フィルターをクリックし、「≥30」を設定して適用してください。
4. 「DL」フィルターをクリックし、「≥0.18」を設定して適用してください。
5. フィルターされた結果をExcelのスプレッドシートにコピーします。
6. 同じ検査方法で「蒼竹」の有効成分を入手してください。
7. すべてのデータセットをMicrosoft Excel(バージョン2019)にインポートし、化合物リストをExcel形式で統合することで重複する有効成分を除去します。
8. 化合物名を標準化し、同一の項目を特定することで重複する有効成分を除去します。複数の記録が同じ複合施設に対応する場合、代表的な記録は1つだけが保持されていました。
9. 「黄波」「蒼竹」と有効成分の関連性を確立しましょう。

2. 有効成分に対応するターゲットを得る

1. TCMSPデータベースにアクセスしてください。
2. 検索ボックスで「化学物質名」を選択し、有効成分を入力して「検索」をクリックしてください。
3. 各有効成分に対応するターゲット名をコピーしてください。
4. 重複するターゲット名を削除し、有効成分とターゲット名の関連性を確立しましょう。
5. UniProtデータベース(https://www.uniprot.org/)¹⁸にアクセスし、各ターゲット名の公式遺伝子シンボルを取得し、体系的に置き換えます。

3. 病気標的の取得

1. GeneCardsデータベースにアクセスしてください(https://www.genecards.org)¹⁹。
2. 検索欄に「Prostatitis」と入力し、検索アイコンを押すと該当する遺伝子リストが表示されます。
3. 遺伝子を関連度スコアの降順に並べ替えてください。
4. 関連する遺伝子をExcel形式でエクスポートしてください。
5. スコア≥1のターゲットを前立腺炎関連ターゲットとして選定しました。

4. 薬剤-有効成分-標的-疾患規制ネットワーク構築の準備

1. 有効成分に関連する標的と前立腺炎関連標的の交点を取得し、前立腺炎治療のためのEMP標的と定義します。
2. 前立腺炎におけるEMPの有効成分と治療標的との関連を確立すること。
3. 「Network」という名前のExcelファイルを作成し、最初の3列に「Node1」「Node2」「Net」と名付けます。
4. EMPと薬物の関連を「Node1」と「Node2」の列に貼り付け、すべての行の「Net」列に「drug」と入力します。
5. 薬剤有効成分の関連付けを「Node1」と「Node2」の列に貼り付け、すべての行の「Net」列に「ingredient」を入力してください。
6. 「Node1」および「Node2」の列に、前立腺炎治療用のEMPターゲットの有効成分-ターゲット関連を記入し、「Net」欄に「ターゲット」を入力します。
7. 前立腺炎のEMP治療標的を「Node1」欄に貼り付け、すべての行で「Node2」欄に「prostatitis」、「net」欄に「disease」を入力してください。
8. Excelファイルの 「Network」をtxt形式のファイルとして保存してください。
9. 「Type」という名前のExcelファイルを作成し、最初の2列に「Node」と「Type」と名付けます。
10. 「Node」欄に「EMP」を、「Type」欄に「formula」を入力してください。
11. 「Huangbo」と「Cangzhu」を「Node」欄に入力すると、すべての行の「Type」欄に「drug」と入力してください。
12. 「ノード」欄に有効成分を入力し、対応するすべての行の「タイプ」欄に「ingredient」を入力してください。
13. 「Node」欄には前立腺炎のEMP治療標的を記入し、「Type」欄に「target」を入力します。
14. 前立腺炎関連の標的を「ノード」欄に入力し、対応するすべての行の「タイプ」欄に「疾患」と入力します。
15. Excelファイルの「Type」を.txtフォーマットのファイルとして保存してください。

5. Cytoscapeによる「薬剤・有効成分・標的・疾患」規制ネットワークの可視化

1. サイトスケープを起動。
2. 「File > Import > Network from File System」 に行き、「network.txt」ファイルを開きます。
3. 「スタイル」パネルを開きます。「Shape」を選択し、「Column」ドロップダウンから「Type」を選択し、「Mapping Type」を「Discrete Mapping」に設定します。
4. 以下のカテゴリに異なるノード形状を割り当てます:フォーミュラ、薬剤、成分、標的、疾患。
5. 「Fill Color」を選択し、「Column」ドロップダウンから「Type」を選択し、「Mapping Type」を「Discrete Mapping」に設定します。
6. 以下のカテゴリに異なるノードの色を割り当てます:フォーミュラ、薬剤、成分、ターゲット、疾患。
7. 「高さ」と「幅」を選択し、「列」ドロップダウンから「タイプ」を選び、「マッピングタイプ」を「離散マッピング」に設定してください。
8. 以下のカテゴリに異なるノードサイズを割り当てます:フォーミュラ、薬剤、成分、標的、疾患。
9. 「Label Font Size」を選択し、「Column」ドロップダウンから「Type」を選択し、「Mapping Type」を「Discrete Mapping」に設定します。
10. 以下のカテゴリーに異なるラベルフォントサイズを割り当てます:フォーミュラ、医薬品、成分、標的、疾患。
11. ネットワークレイアウトを最適化するためにノードの配置を手動で再配置しましょう。
12. 「ファイル>ネットワークイメージをファイルにエクスポート」>ネットワークを画像として保存してください。

6. PPIネットワーク解析と可視化

1. https://cn.string-db.org/ にアクセスして「マルチプルタン」モジュールに進みます。
2. 検索ボックスにターゲット遺伝子リストを入力し、「Homo sapiens」を生物として選び、「検索」をクリックします。
3. 結果が読み込まれた後、「続ける」をクリックしてください。
4. 「設定」パネルを開き、「最低必要インタラクションスコア」を「高い信頼度(0.700)」に設定し、「ネットワーク内の切断されたノードを非表示する」にチェックを入れます。
5. 「Update」をクリックし、PPI関連データをTSV形式でエクスポートし、「エクスポート」メニューから行います。
6. Cytoscapeを起動し、ファイルメニューに行き、「ファイルシステムからネットワークをインポート」を選択してTSVファイルを開きます。
7. 「ツール」メニューに移動し、「NetworkAnalyzer > Network Analysis > Network Interpretation > Treat the Network as undirected」を選択してください。
8. 「ファイル」メニューに移動し、「テーブルをファイルにエクスポートする」システムを選択し、ネットワークデータをエクスポートします。
9. 「スタイル」パネルに移動し、「シェイプ」「塗りつぶし色」「高さ」「幅」属性を設定してください。
10. ノードの配置を変更してPPIネットワークのレイアウトを調整してください。
11. 「ファイル」メニューに移動し、「ネットワーク画像をファイルにエクスポート」を選択し、可視化されたネットワークを画像としてエクスポートします。
12. エクスポートしたPPIネットワークデータをWPSで開き、「Degree」列で降順に並べ替えてください。
13. ソートされた上位20のターゲットを選び、棒グラフを作成し、チャートを画像として保存します。

7. KEGG経路濃縮解析

1. 端末やコマンドプロンプトを開き、Rと入力してEnterを押します。
2. Rコンソールでは、以下のコマンドを一つずつ実行します:
   install.packages(c("RSQLite", "colorspace", "stringi", "BiocManager"))
   BiocManager::install("org.Hs.eg.db"""DOSE"""clusterProfiler"""pathview"))
3. 前立腺炎治療用EMP標的の遺伝子シンボルをEntrez IDに変換する。Hs.eg.db。
4. Entrez IDを読み取り、clusterProfilerパッケージを用いてパラメータを含み、生物=「has」、pvalueCutoff = 0.05、qvalueCutoff = 0.05のパラメータでKEGG濃縮解析を行います。
5. 得られたKEGG濃縮解析結果からヒトの疾患および代謝関連経路を除去した後、残りの経路を濃縮遺伝子の数に基づいて分類します。
6. 上位15位のシグナル伝達経路とターゲットとの関連性を確立します。
7. 「pathway」と「target」の関連付けを持つ2列のファイルを準備し、「File > Import > Network from File」からCytoscapeにインポートします。
8. 「スタイル」パネルを使ってノードの形状や色を設定し、経路とターゲットを区別します。
9. レイアウトを手動で調整し、ネットワークを画像としてエクスポートしてください。

8. 医薬品製剤

注:EMPの製剤は、Phellodendri Chinensis Cortex(黄波)15gとAtractylodis Rhizoma(蒼珠)15gで構成されています。水抽出法とアルコール沈殿法が、その後の細胞実験のために抽出物を得るために用いられ^ました。

1. 薬を10倍の塊の水に1時間浸します。
2. 1時間ほど濾し、その後ガーゼを通して煮込みを得ます。
3. 再び10倍の水の塊を薬に加え、30分間デコロングし、ガーゼで濾過して煮込み液を得ます。
4. 再び10倍の水の塊を薬に加え、30分間煮詰めてからガーゼでろ過して煮込み液を得ます。
5. 3種類の濾過した煎じ液を混ぜ、その後フィルターペーパーで混合液を濾します。
6. 低圧で元の体積の10%まで濃縮します。
7. 濃縮液を冷やし、かき混ぜながらエタノールを75%までゆっくり加え、その後密封して4°Cで12時間保存します。
8. 混合物を遠心分離し、上清液を回収します。
9. 低圧で蒸留を続けます。
10. 最後に真空凍結乾燥機で製品を凍乾します。
    注:凍結乾燥粉末は-20ºCで最大3ヶ月間保存可能で、安全な一時停止点として機能します。続けて、必要に応じて適切な溶媒で粉末を再構成します。

9. 細胞の解凍と培養

注:購入した細胞はドライアイスで検査室に届けられました。実験開始前に、ケラチノサイト血清フリー培地(K-SFM)は、ヒト組換え表皮成長因子(rEGF)を最終濃度5 ng/mL、牛下垂体抽出物を最終濃度50 μg/mL、および1%ペニシリン・ストレプトマイシンを添加して事前に調製しました。

1. 水浴を起動し、温度を37°Cに調整してください。
2. ドライアイスから細胞を取り出し、すぐに水浴でかき混ぜて完全に解凍します。
3. 細胞に5 mLのK-SFMを加えます。優しく混ぜ、その後遠心分離機で混合物を4°C、500 g× 5分加熱します。
4. 上澄液を取り除き、ペレットを完全なK-SFMで再懸濁させます。
5. 細胞をT-25フラスコに移し、細胞培養インキュベーターに入れます。
   注:細胞培養インキュベーターの環境パラメータは37°C、5%のCO₂、相対湿度≥95%に維持されました。

10. 細胞亜培養

注:サブカルチャーは細胞が80〜90%のコンフルエンスに達した時点で行われ、サブカルチャー比率は1:2から1:3でした。

1. 培養培地の上清液を吸引し、その後カルシウムとマグネシウムなしのPBSで細胞を2回洗浄します。
2. トリプシン-EDTAを2mL投与し、細胞を3分間放置して酵素解離を行います。
   注意:このプロトコルには、リポ多糖(LPS)、クロロホルム、エタノール、TRIzol試薬などの有害試薬の使用が含まれます。有害化学物質を扱うすべての処置は、認定された化学煙処理フード内で、適切な個人用防護具(白衣、手袋、目の保護具)を着用して行うべきです。生物材料は機関のバイオセーフティガイドラインに従って取り扱うべきです。
3. 消化を終わらせるために、10%の胎児用牛血清を補足したK-SFM培地を加えます。
4. 細胞混合物を15 mL遠心分離機チューブに移し、遠心分離機(4°C、500 × g、5分)で上清液を除去します。
5. 細胞ペレットは完全なK-SFMに再懸濁され、その後新しい培養フラスコに移されました。

11. MTSアッセイによる最大薬剤治療濃度の決定

注:各薬物濃度は5回の技術的再現で試験されました。

1. 対数成長期のRWPE-1細胞を消化します。
2. 細胞を完全なK-SFM培地に再懸浮させ、数えて細胞濃度を測定します。
3. 完全なK-SFM培地で細胞懸濁液を1×10⁵ cells/mLの密度に調整します。
4. セル懸液を1ウェルあたり100μLの96ウェルプレートに分散します。
5. 96ウェルのプレートは培養のために細胞培養インキュベーターに置かれました。
6. 24時間後、細胞が完全に付着した後、培養培地を吸引して廃棄しました。
7. 培地を異なる濃度のEMP溶液を含む完全なK-SFM培地に置き換えます。
8. プレートを細胞培養インキュベーターに戻し、さらに24時間の培養を行います。
9. 培地を吸引し、その後PBSで細胞を2回洗い流します。
10. 各ウェルに100μLの完全なK-SFM培地を加え、その後細胞培養インキュベーターでさらに4時間培養します。
11. 各ウェルに10μLのMTS溶液を注入し、1時間のインキュベーション後に490 nmで外径を測定します。
12. ブランク対照群(LPS刺激や薬物治療なしの完全な培地で培養した細胞)を基準線に、各処理濃度下での細胞増殖を計算しました。
    注:細胞増殖に有意な影響を示さない最高濃度は高用量治療と定義され、その次を中用量治療として半濃度、低用量治療として4分の1濃度とされました。

12. 細胞介入

1. 対数成長期のRWPE-1細胞を消化します。
2. 細胞は完全なK-SFM培地に再懸浮させられ、細胞濃度は細胞計数によって決定されました。
3. 細胞懸濁液は完全なK-SFM培地を用いて5 ×^{10 5} cells/mLの密度に調整されました。
4. 細胞懸濁液は6ウェルプレートに2mLずつシードされました。
5. プレートは培養インキュベーターに入れられ、細胞接着を促すために12時間培養されました。
6. 細胞はそれぞれ低濃度(150μg/mL)、培地(300μg/mL)、高用量(600μg/mL)のEMP濃度で処理されました。
7. 1時間後、培地に10 μg/mLのLPS溶液を加えました。
8. 治療後24時間後、上清を採取してELISAを行い、細胞を採取してRT-PCR解析を行いました。
   注:LPSは前立腺上皮細胞における炎症促進シグナル伝達経路を活性化する確立された能力から炎症反応を誘導するために選ばれました。濃度(10 μg/mL)は、過去の研究で強靭なサイトカイン誘導を示したことに基づいて選ばれました。

13. 総RNAの単離

注:RNA分解を防ぐため、実験中は手袋とマスクを着用し、RNaseフリーのピペットチップと遠心分離チューブを使用しました。

1. 介入後は、細胞をPBSで2回洗い流します。
2. 細胞にトリゾール試薬1mLを加え、ピペットで繰り返し混ぜて均質化を確保します。
   注意:化学ファンムフード内でのすべての手順を適切な個人用防護具を着用して行うこと。
3. 溶解液を1.5mLのマイクロ遠心分離機チューブに移し、室温で15分間培養します。
4. その後、クロロホルム0.2mLを加え、試料を強く渦巻かせます。
5. 室温で5分間置いた後、10,000 × g で4°Cで15分間遠心分離します。
6. 遠心分離後、上部の無色水相を慎重に新しいマイクロ遠心分離機チューブに移します。
7. 同量の予備冷却済みイソプロパノールを混ぜ、よく混ぜて室温で10分間培養します。
8. 試料をもう一度遠心分離します(4°C、10,000 × g、10分)、その後液相を捨て、沈殿物を保持します。
9. ペレットを1mLの予備冷却済み75%エタノールですすいで洗浄し、ピペットで優しく再懸濁させます。
10. 最終遠心分離を4°C、7,500 × g で10分間行い、その後上清液を取り除き、RNAペレットをバイオセーフティキャビネット内で自然乾燥させます。
11. 精製RNAを50μLのDEPC処理水に溶かします。
12. ナノドロップ分光光度計を用いてRNA濃度、A260/A280比、A260/A230比を測定し、RNA純度を評価し、タンパク質および溶媒の汚染を最小限に抑えてから下流解析を行います。

14. RT-PCR

1. 総RNA1μgを用いて20μL逆転写反応系を準備します。
2. 反応系を42°Cで15分間インキュベーションし、その後95°Cで5分間、さらに4°Cまで冷却します。
3. 蒸留水で得られたcDNAを10倍に希釈します。
4. 希釈したcDNAを用いて20μLのPCR反応系を準備します。
5. サーマルサイクラーをプログラムし、初期保持を95°Cで60秒間設定し、その後95°Cで15秒、60°Cで60秒の40サイクルを行います。
6. メルティングカーブ解析を行い、完了後にすべてのターゲット遺伝子および参照遺伝子のCT値を記録します。
7. 2^(-ΔΔCT) 法を用いて標的遺伝子の正規化発現レベルを決定します。

15. ELISAアッセイ

注意:使用前にELISAキットを保管庫から取り出し、室温で30分間平衡させてください。

1. 製造元の指示に従って標準溶液を準備し、標準溶液、ビオチニル化抗体、酵素共役体、洗浄バッファーに対して適切な希釈を行います。
2. 収集した細胞培養上清液(4°C、10,000 × g、10分)を遠心分離し、上清液を採取します。
3. 標準希釈液と試験サンプルを100μLあらかじめコーティングされた井戸に移します。
4. 接着テープでウェルを密封し、37°Cで90分間培養します。
5. 井戸から液体を捨て、自動プレートワッシャーで皿を洗います。
   注意:自動洗浄機のパラメータを以下に設定してください:1井戸あたり350μLの洗浄バッファー、噴出から吸引までの浸水時間15秒、5サイクルの完了。
6. 各ウェルに100μLのビオチン化抗体作動液を注入します。37°Cで60分間孵化させます。
7. 溶液を捨て、15.5で説明した通りに皿を洗います。
8. 各ウェルごとに酵素共役液100 μLをピペットで抽出し、37°Cで60分間インキュベートします。
9. 溶液を捨て、15.5で説明した通りに皿を洗います。
10. 各井戸に100μLのクロモジェニック基質を加えます。光を避けながら37°Cで15分間維持してください。
11. ピペットで1ウェルあたり100μLの停止液を注入し、優しく混ぜます。
12. すぐに450 nmの光学密度(OD)を測定します。
13. Curve Expertソフトウェアを使って平均OD値を標準濃度とプロットし、標準曲線を確立します。
14. 標準曲線から外径値を用いて補間して各試料の濃度を決定します。

16. 統計分析

1. SPSSソフトウェア(バージョン20.0)を操作してください。
2. データセットをSPSS統計にインポートし、変数を適切に定義します。 Analyze > Descriptive Statistics> Explore を使って平均偏差と標準偏差(SD)を計算してください。
3. 複数グループ比較には、 Analyze > Compare Means>一方向ANOVA を用いましょう。
4. テスト出力表から直接p値を取得し、適切に報告してください。
5. すべての結果を平均±標準差として提示し、 p < 0.05の時点で統計的に有意な差を考慮します。

結果

有効化合物の同定と標的予測

これらの結果は、統合ネットワーク薬理学と in vitro アプローチが前立腺炎におけるEMPの治療標的の同定と検証において有効であることを示しています。TCMSPデータベースの検索により、EMPの構成ハーブから46種類の生物活性成分が特定され、178の潜在的な標的に対応しました。Genecardsデータベースから13,960件の前立腺炎関連標的が取得されました。両セットに共通する162の標的が前立腺炎治療におけるEMPの標的として定義されました。その後、Cytoscapeを用いて化合物と標的の相互作用ネットワークを構築し、可視化しました(図2)。包括的な「薬剤・有効成分・標的・疾患」規制ネットワークに参加する有効成分は 表1に記載されています。

PPIネットワークおよびハ...

ディスカッション

このプロトコルはネットワーク薬理学と実験的検証を統合し、多成分治療メカニズムの研究のための体系的な枠組みを提供します。重要なステップには、定義された閾値(OB≥30%、DL≥0.18)を用いた有効化合物の正確なスクリーニング、信頼性の高いネットワーク構築、適切な実験検証モデルの選択が含まれます。バイオインフォマティクス解析における慎重なパラメータ選択と実験条件の厳格な管理は、再現性を確保するために不可欠です。

前立腺炎は、病因が不明瞭で、従来の治療に対する反応が悪く、持続症状における心理的要因の複雑さから、臨床的に管理が難しい泌尿器疾患です。EMPやその他の中医学実践は、前立腺炎の症状や炎症に対する有望な有効性から補完療法として注目を集めています。この発見は、ネットワーク薬理学および in vitro 実験の両方を通じて検証されているEMPの多標的抗炎症効果に関する新たな視点を明らかにしています。しかし、ネットワーク薬理学予測におけるデータベースバイアスの可能性や、in vitro

材料

この記事で使用された材料の一覧

名前	会社	カタログ番号	コメント
ヒトIL-6 ELISAキット	4アビオ	CHE0009
ヒトTNF-&α;エリサ・キット	4アビオ	CHE0019
K-SFM補足資料	プロセル	CM-0200
リポ多糖	ソーラービオ	L8880
MTS	プロメガ	G1111
逆転記システム	プロメガ	A3500
RWPE-1	プロセル	CL-0200	リッド:CVCL_EQ24
RWPE-1細胞完全培地	プロセル	CM-0200
SYBR Green リアルタイムPCRマスターミックス	トヨボ	QPK-201
トリゾール試薬	サーモフィッシャー・サイエンティフィック(インビトロジェン)	15596026
トリプシン-EDTA	Gibco(サーモフィッシャー)	25200072